相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)要求2012年3月30日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)USSN 61/618,381、2012年7月20日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)USSN 61/674,060、2012年8月27日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)USSN 61/693,589、2012年8月27日遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)USSN 61/693,585和2013年3月14號(hào)遞交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)USSN 61/785,419的優(yōu)先權(quán)，這里提到的每個(gè)申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引證在此全部并入本文。

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明主要涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，再生性藥物和神經(jīng)外傷或者傷害。這里公開(kāi)的方法可以通過(guò)施用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白同型體或其功能性片段來(lái)預(yù)防、治療或者緩解外周神經(jīng)損傷的癥狀。這種方法的主體或者具有患上外周神經(jīng)損傷的風(fēng)險(xiǎn)或者已經(jīng)具有外周神經(jīng)損傷。

背景技術(shù)：

外周神經(jīng)通常由于外傷受損，所述外傷包括車禍、摩托車事故、外科手術(shù)、刀和發(fā)射物創(chuàng)口和生育對(duì)孩子和母親的創(chuàng)傷。神經(jīng)創(chuàng)傷常見(jiàn)的外科手術(shù)原因包括前列腺切除術(shù)和乳房切除術(shù)。神經(jīng)損傷之后，由受損傷的神經(jīng)支配身體區(qū)域會(huì)喪失感覺(jué)和/或功能。神經(jīng)損傷的常見(jiàn)外科手術(shù)原因包括前列腺切除術(shù)和根治手術(shù)。例如，在前列腺切除術(shù)中收到神經(jīng)創(chuàng)傷之后，通常會(huì)導(dǎo)致勃起功能失調(diào)。

這里對(duì)其他的外周神經(jīng)創(chuàng)傷治療法和治療劑存在需要。而且，在本領(lǐng)域中對(duì)既能夠預(yù)防也能夠限制神經(jīng)損傷后功能喪失程度的治療劑存在長(zhǎng)時(shí)間的需要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

在多種多樣的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷的動(dòng)物模型中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白已經(jīng)顯示出具有神經(jīng)保護(hù)作用和神經(jīng)恢復(fù)作用。本發(fā)明公開(kāi)的某些實(shí)施方案涉及通過(guò)對(duì)患有外周神經(jīng)損傷或者有患有外周神經(jīng)損傷風(fēng)險(xiǎn)的主體給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者它的一種功能性片段來(lái)治療或者改善外周神經(jīng)損傷的方法。這里公開(kāi)的方法優(yōu)選的實(shí)施方案涉及通過(guò)對(duì)所述主體給藥GGF2或其功能性片段來(lái)治療或者改善外周神經(jīng)損傷。

本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容表明，使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療外周神經(jīng)損傷能夠減少外周神經(jīng)功能的損傷，當(dāng)在收到神經(jīng)損傷之前或者之后給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白能夠改善或者減少外周神經(jīng)功能損傷，并且在某些情況下修復(fù)外周神經(jīng)功能。在某些實(shí)施方案中，外周神經(jīng)損傷被避免。在某些實(shí)施方案中，一種存在的外周神經(jīng)損傷被消除。在某些實(shí)施方案中，外周神經(jīng)損傷不能完全避免。在某些實(shí)施方案中，一種已經(jīng)存在的外周神經(jīng)損傷不能被完全消除。

這里公開(kāi)的某些實(shí)施方案涉及治療外周神經(jīng)損傷的方法，本方法包括對(duì)患有外周神經(jīng)損傷的主體或者對(duì)具有患上外周神經(jīng)損傷風(fēng)險(xiǎn)的主體給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。某些實(shí)施方案涉及propylaxing或者預(yù)防外周神經(jīng)損傷的方法，本方法包括對(duì)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。術(shù)語(yǔ)主體包括哺乳動(dòng)物，并且尤其是人類主體。

人體外周神經(jīng)損傷(PNI)可以通過(guò)物理創(chuàng)傷獲得或者是患病的結(jié)果。例如，外周神經(jīng)是由于外傷受損的結(jié)果，所述外傷包括車禍、摩托車事故、外科手術(shù)、刀和發(fā)射物傷口和分娩過(guò)程中對(duì)孩子和母親帶來(lái)的生產(chǎn)創(chuàng)傷。損傷之后的并發(fā)癥會(huì)導(dǎo)致感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能障礙和自主神經(jīng)失調(diào)。

這里公開(kāi)的內(nèi)容提供了用于預(yù)防髓鞘脫失現(xiàn)象和/或用于誘導(dǎo)損傷的外周神經(jīng)髓鞘再生的組合物和方法。雖然所有的外周神經(jīng)都被包含，但是在本發(fā)明中，本發(fā)明方法僅在隨后示例性的外周神經(jīng)中被應(yīng)用，所述示例性的外周神經(jīng)包括坐骨神經(jīng)和海綿神經(jīng)。

坐骨神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致肌肉量損失、肌肉弱化、目標(biāo)肌肉萎縮性改變、癱瘓和疼痛，通常降低復(fù)原程度，影響生活質(zhì)量。例如，對(duì)于坐骨神經(jīng)損傷，這里公開(kāi)的組合物能夠增加肌肉量、改善肌肉強(qiáng)度、減少肌肉萎縮癥、以及減少神經(jīng)性疼痛和提高感覺(jué)恢復(fù)。非侵入性三維(3D)超聲成像結(jié)果說(shuō)明，與假手術(shù)組的動(dòng)物相比，在受傷的肢體被擠壓和斷裂之后，隨著時(shí)間變化腓腸肌和比目魚(yú)肌體積顯著減少。例如，給藥GGF2能夠增加纖維肌的尺寸并減少外周神經(jīng)周圍的纖維化。而且，例如，給藥GGF2會(huì)增加纖維肌的大小并減少骨骼肌的纖維化。

外周神經(jīng)損傷可以是外科手術(shù)的結(jié)果，例如前列腺癌切除術(shù)。在任何手術(shù)干預(yù)的背景下，外周神經(jīng)損傷可能是組織解剖、組織切除的直接結(jié)果，和/活肢體定位和/或壓縮的次級(jí)結(jié)果。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白被用于治療或者預(yù)防會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙的外周神經(jīng)損傷。

使用小鼠勃起功能障礙模型作為體內(nèi)系統(tǒng)來(lái)說(shuō)明神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白在治療外周神經(jīng)損傷中的效果。在某些方面，這里公開(kāi)的內(nèi)容涉及治療由外周神經(jīng)損傷造成的勃起功能障礙，但是這里的公開(kāi)不局限于勃起功能障礙。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以有效作為單一治療劑用于治療任意一種外周神經(jīng)損傷，并且不需要與天然神經(jīng)管或者人造神經(jīng)管共同使用進(jìn)行治療，也不需要與其他細(xì)胞治療劑(例如，雪旺氏(Schwann)細(xì)胞)共同使用治療。通過(guò)在大鼠中進(jìn)行雙邊粉碎模型檢驗(yàn)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1肽(GGF2)，大鼠中的雙邊粉碎模型是一種廣泛接受的海綿體神經(jīng)創(chuàng)傷模型；這種模型已經(jīng)被用于檢驗(yàn)西地那非(sildenifil)及其他勃起功能失調(diào)(ED)藥物。如這里所闡述的，在創(chuàng)傷之后5周對(duì)神經(jīng)進(jìn)行電刺激得到GGF2改善的功能性結(jié)果，并且測(cè)定睪丸內(nèi)壓力(ICP)。

進(jìn)一步的實(shí)施方案涉及勃起功能失調(diào)的治療，所述勃起功能失調(diào)是由于外科手術(shù)對(duì)與勃起功能有關(guān)的外周神經(jīng)(例如，海綿體神經(jīng)和/或陰莖神經(jīng))創(chuàng)傷引起的。海綿體神經(jīng)創(chuàng)傷常常作為前列腺癌癥切除術(shù)的結(jié)果；這種創(chuàng)傷會(huì)產(chǎn)生勃起功能失調(diào)(ED)。

目前的藥物干預(yù)能夠治療創(chuàng)傷之后造成的功能性缺陷，所述創(chuàng)傷是由于向海綿體增加血液流動(dòng)促進(jìn)陰莖勃起而導(dǎo)致的創(chuàng)傷。目前存在的醫(yī)療器械干預(yù)能夠治療由創(chuàng)傷引起的功能性缺陷，所述創(chuàng)傷是由于增加陰莖體積導(dǎo)致一種類似于正常陰莖勃起的狀態(tài)而引起的。目前存在的用于治療勃起功能失調(diào)(ED)的所有干預(yù)都是由缺陷的。

這里公開(kāi)的內(nèi)容提供了一種組合物，該組合物包括在治療和/或預(yù)防與外周神經(jīng)損傷有關(guān)的疾病的方法中使用的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。一種優(yōu)選的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是NRG-1，并且一種優(yōu)選的同型體是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體中預(yù)防或者治療外周神經(jīng)損傷的組合物，該組合物包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。在優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體中改善肌肉功能的組合物，該組合物包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。肌肉功能的改善，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纖維大小)，增加肌肉強(qiáng)度，減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體中治療感覺(jué)和/或運(yùn)動(dòng)機(jī)能缺陷和/或過(guò)度敏感的組合物，這種組合物中包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。可以被這里所公開(kāi)的方法進(jìn)行治療的感覺(jué)缺陷和/或過(guò)度敏感的非限制性實(shí)施例包括，糖尿病性神經(jīng)病、外傷性神經(jīng)病和/或化療性神經(jīng)病(例如，在給藥順鉑或者紫杉醇之后)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體中治療自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的組合物，這種組合物中包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙包括交感神經(jīng)系統(tǒng)和/或副交感神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙?？梢员槐景l(fā)明公開(kāi)的方法治療的自主功能障礙的非限制性實(shí)施例包括，區(qū)域血流量功能障礙(例如，由于勃起功能障礙導(dǎo)致的海綿狀神經(jīng)損傷)、腸道動(dòng)力分泌物功能障礙、呼吸系統(tǒng)改變功能障礙、膀胱改變功能障礙和視覺(jué)改變功能障礙。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療或者預(yù)防外周神經(jīng)損傷。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。在優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)改善肌肉功能。肌肉功能的改善包括，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纖維大小)，增加肌肉強(qiáng)度，減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療感覺(jué)和/或運(yùn)動(dòng)機(jī)能缺陷和/或過(guò)度敏感?？梢员贿@里所公開(kāi)的方法治療的感覺(jué)缺陷和/或過(guò)度敏感的非限制性實(shí)施例包括，糖尿病性神經(jīng)病、外傷性神經(jīng)病和/或化療性神經(jīng)病(例如，在給藥順鉑或者紫杉醇之后)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患上外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙包括交感神經(jīng)系統(tǒng)和/或副交感神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙?？梢员槐景l(fā)明公開(kāi)的方法治療的自主功能障礙的非限制性實(shí)施例包括，區(qū)域血流量功能障礙(例如，由于勃起功能障礙導(dǎo)致的海綿狀神經(jīng)損傷)、腸道動(dòng)力分泌物功能障礙、呼吸系統(tǒng)改變功能障礙、膀胱改變功能障礙和視覺(jué)改變功能障礙。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于外科手術(shù)而具有患上外周神經(jīng)損傷的風(fēng)險(xiǎn)。示例性的外科手術(shù)過(guò)程包括但是不局限于組織解剖或者腫瘤切除術(shù)。作為選擇或者另外，示例性的外科手術(shù)過(guò)程包括，但是不局限于，骨盆手術(shù)、腹腔手術(shù)或者結(jié)腸直腸手術(shù)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，在手術(shù)過(guò)程中解剖或者除去的組織或者腫瘤可以是惡性的或者良性的。惡性組織或者腫瘤可以是癌癥的一種或者更多種。示例性的癌癥類型包括，但是不局限于，實(shí)體腫瘤、前列腺癌和乳腺癌。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，示例性的外周神經(jīng)損傷類型包括，但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于嬰兒的分娩而具有患上外周神經(jīng)損傷的風(fēng)險(xiǎn)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，分娩可能涉及醫(yī)學(xué)治療或者手術(shù)過(guò)程。示例性的醫(yī)學(xué)治療包括但是不局限于，給藥藥物治療、發(fā)力引導(dǎo)或者對(duì)主體胎兒的物理操作。示例性的手術(shù)過(guò)程包括但是不局限于，在主體身上開(kāi)一個(gè)切口并進(jìn)行刨婦產(chǎn)。在改實(shí)施方案的一個(gè)方面，示例性的外周神經(jīng)損傷類型包括但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于外傷事故而具有患上外周神經(jīng)損傷的風(fēng)險(xiǎn)。示例性的外傷事故包括但是不局限于摩托車意外、刀和放射性傷口以及四肢位置或者四肢擠壓之后進(jìn)行醫(yī)學(xué)或者手術(shù)過(guò)程造成的次生損傷。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)損傷的示例性類型包括但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中預(yù)防或者治療外周神經(jīng)損傷的組合物，該組合物包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。在優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中改善肌肉功能的組合物，該組合物包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。肌肉功能的改善，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纖維大小)，增加肌肉強(qiáng)度，減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中治療感覺(jué)和/或運(yùn)動(dòng)機(jī)能缺陷和/或過(guò)度敏感的組合物，這種組合物中包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白?？梢员贿@里所公開(kāi)的方法治療的感覺(jué)缺陷和/或過(guò)度敏感的非限制性實(shí)施例包括，糖尿病性神經(jīng)病、外傷性神經(jīng)病和/或化療性神經(jīng)病(例如，在給藥順鉑或者紫杉醇之后)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種能夠在已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中治療自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的組合物，這種組合物中包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙包括交感神經(jīng)系統(tǒng)和/或副交感神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙?？梢员槐景l(fā)明公開(kāi)的方法治療的自主功能障礙的非限制性實(shí)施例包括，區(qū)域血流量功能障礙(例如，由于勃起功能障礙導(dǎo)致的海綿狀神經(jīng)損傷)、腸道動(dòng)力分泌物功能障礙、呼吸系統(tǒng)改變功能障礙、膀胱改變功能障礙和視覺(jué)改變功能障礙。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療或者預(yù)防外周神經(jīng)損傷。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。在優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)改善肌肉功能。肌肉功能的改善包括，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纖維大小)，增加肌肉強(qiáng)度，減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療感覺(jué)和/或運(yùn)動(dòng)機(jī)能缺陷和/或過(guò)度敏感。可以被這里所公開(kāi)的方法治療的感覺(jué)缺陷和/或過(guò)度敏感的非限制性實(shí)施例包括，糖尿病性神經(jīng)病、外傷性神經(jīng)病和/或化療性神經(jīng)病(例如，在給藥順鉑或者紫杉醇之后)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的公開(kāi)提供了一種方法，該方法通過(guò)對(duì)已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥一種包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物來(lái)治療自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙包括交感神經(jīng)系統(tǒng)和/或副交感神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙?？梢员槐景l(fā)明公開(kāi)的方法治療的自主功能障礙的非限制性實(shí)施例包括，區(qū)域血流量功能障礙(例如，由于勃起功能障礙導(dǎo)致的海綿狀神經(jīng)損傷)、腸道動(dòng)力分泌物功能障礙、呼吸系統(tǒng)改變功能障礙、膀胱改變功能障礙和視覺(jué)改變功能障礙。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于外科手術(shù)而患上外周神經(jīng)損傷。示例性的外科手術(shù)過(guò)程包括但是不局限于組織解剖或者腫瘤切除術(shù)。作為選擇或者另外，示例性的外科手術(shù)過(guò)程包括，但是不局限于，骨盆手術(shù)、腹腔手術(shù)或者結(jié)腸直腸手術(shù)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，在手術(shù)過(guò)程中解剖或者除去的組織或者腫瘤可以是惡性的或者良性的。惡性組織或者腫瘤可以是癌癥的一種或者更多種。示例性的癌癥類型包括，但是不局限于，實(shí)體腫瘤、前列腺癌和乳腺癌。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，示例性的外周神經(jīng)損傷類型包括，但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述外周神經(jīng)損傷可能會(huì)導(dǎo)致勃起功能障礙。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于嬰兒的分娩而患上外周神經(jīng)損傷。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，分娩可能涉及醫(yī)學(xué)治療或者手術(shù)過(guò)程。示例性的醫(yī)學(xué)治療包括但是不局限于，給藥藥物治療、發(fā)力引導(dǎo)或者對(duì)主體胎兒的物理操作。示例性的手術(shù)過(guò)程包括但是不局限于，在主體身上開(kāi)一個(gè)切口并進(jìn)行剖腹產(chǎn)。在改實(shí)施方案的一個(gè)方面，示例性的外周神經(jīng)損傷類型包括但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。

在本發(fā)明公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，主體由于外傷事故而患上外周神經(jīng)損傷。示例性的外傷事故包括但是不局限于摩托車意外、刀和放射性傷口以及四肢位置或者四肢擠壓之后進(jìn)行醫(yī)學(xué)或者手術(shù)過(guò)程造成的次生損傷。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)損傷的示例性類型包括但是不局限于神經(jīng)切斷，神經(jīng)損傷和神經(jīng)脫髓鞘作用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，外周神經(jīng)可以是坐骨神經(jīng)。作為選擇或者另外，所述外周神經(jīng)可以是海綿體神經(jīng)。

在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之前給藥。在該實(shí)施方案的方面中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之前而不是之后給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物可以一直非連續(xù)的給藥方案給藥。優(yōu)選的，所述非連續(xù)的給藥方案包括以指定的時(shí)間間隔給藥。示例性的指定的時(shí)間間隔可以包括，但是不局限于，每隔24小時(shí)給藥、每隔48小時(shí)給藥和每隔72小時(shí)給藥。作為選擇，指定的時(shí)間間隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小時(shí)給藥、每隔至少48小時(shí)給藥和每隔至少72小時(shí)給藥。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述非連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1周，大約2周，大約3周，大約4周，大約5周，大約6周，大約7周，大約8周，大約9周，大約10周，大約11周，和大約12周所組成的組中。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定的時(shí)間間隔可以是至少每周一次。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定的時(shí)間間隔可以是至少每周一次，并且不連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1個(gè)月、大約2個(gè)月和大約3個(gè)月所組成的組中。

在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷的過(guò)程中給藥。在該實(shí)施方案的方面中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷的過(guò)程中但不是之后給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物可以一直非連續(xù)的給藥方案給藥。優(yōu)選的，所述非連續(xù)的給藥方案包括以指定的時(shí)間間隔給藥。示例性的指定的時(shí)間間隔可以包括，但是不局限于，每隔24小時(shí)給藥、每隔48小時(shí)給藥和每隔72小時(shí)給藥。作為選擇，指定的時(shí)間間隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小時(shí)給藥、每隔至少48小時(shí)給藥和每隔至少72小時(shí)給藥。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述非連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1周，大約2周，大約3周，大約4周，大約5周，大約6周，大約7周，大約8周，大約9周，大約10周，大約11周，和大約12周所組成的組中。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定的時(shí)間間隔可以是至少每周一次。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定的時(shí)間間隔可以是至少每周一次，并且不連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1個(gè)月、大約2個(gè)月和大約3個(gè)月所組成的組中。

在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之前或者在造成外周神經(jīng)損傷過(guò)程中給藥。在該實(shí)施方案的方面中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之前、在造成外周神經(jīng)損傷的過(guò)程中但不是之后給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物可以一直非連續(xù)的給藥方案給藥。優(yōu)選的，所述非連續(xù)的給藥方案包括以指定的時(shí)間間隔給藥。示例性的指定時(shí)間間隔可以包括，但是不局限于，每隔24小時(shí)給藥、每隔48小時(shí)給藥和每隔72小時(shí)給藥。作為選擇，指定時(shí)間間隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小時(shí)給藥、每隔至少48小時(shí)給藥和每隔至少72小時(shí)給藥。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述非連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1周，大約2周，大約3周，大約4周，大約5周，大約6周，大約7周，大約8周，大約9周，大約10周，大約11周，和大約12周所組成的組中。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次，并且不連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1個(gè)月、大約2個(gè)月和大約3個(gè)月所組成的組中。

在這里所公開(kāi)的組合物，方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之前或者在造成外周神經(jīng)損傷過(guò)程中和之后給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物可以一直非連續(xù)的給藥方案給藥。優(yōu)選的，所述非連續(xù)的給藥方案包括以指定的時(shí)間間隔給藥。示例性的指定時(shí)間間隔可以包括，但是不局限于，每隔24小時(shí)給藥、每隔48小時(shí)給藥和每隔72小時(shí)給藥。作為選擇，指定時(shí)間間隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小時(shí)給藥、每隔至少48小時(shí)給藥和每隔至少72小時(shí)給藥。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述非連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1周，大約2周，大約3周，大約4周，大約5周，大約6周，大約7周，大約8周，大約9周，大約10周，大約11周，和大約12周所組成的組中。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次，并且不連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1個(gè)月、大約2個(gè)月和大約3個(gè)月所組成的組中。

在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物適用于在造成外周神經(jīng)損傷之后給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物可以一直非連續(xù)的給藥方案給藥。優(yōu)選的，所述非連續(xù)的給藥方案包括以指定的時(shí)間間隔給藥。示例性的指定時(shí)間間隔可以包括，但是不局限于，每隔24小時(shí)給藥、每隔48小時(shí)給藥和每隔72小時(shí)給藥。作為選擇，指定時(shí)間間隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小時(shí)給藥、每隔至少48小時(shí)給藥和每隔至少72小時(shí)給藥。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述非連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1周，大約2周，大約3周，大約4周，大約5周，大約6周，大約7周，大約8周，大約9周，大約10周，大約11周，和大約12周所組成的組中。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述給藥的指定時(shí)間間隔可以是至少每周一次，并且不連續(xù)的給藥方案可以持續(xù)一段時(shí)間，所述時(shí)間選自由大約1個(gè)月、大約2個(gè)月和大約3個(gè)月所組成的組中。

在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)實(shí)施方案中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約5毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約2.5毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約1.5毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.7毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.5毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.3毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.1毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.05毫克/千克體重之間。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的組合物的有效劑量可以在大約0.001毫克/千克體重到大約0.02毫克/千克體重之間。

對(duì)主體給藥的本發(fā)明組合物的實(shí)際劑量可以通過(guò)物理和生理因素來(lái)確定，所述物理和生理因素例如體重、情況的嚴(yán)重程度、被處理的疾病類型、之前的或者并行的治療介入、病人的自發(fā)性疾病和給藥途徑。無(wú)論如何，負(fù)責(zé)給藥的醫(yī)生可以確定組合物中活性成分的濃度以及用于個(gè)別主體的適當(dāng)劑量。

這里公開(kāi)的方法的某些方面包括，根據(jù)使用的具體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白活性、給藥途徑、給藥方法和醫(yī)學(xué)情況給藥大約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1-10,1-20,10-20,1-30,1-40,1-50,10-20,10-30,10,15,20,25,30,35,40,50,15-25,15-40,15-35,15-50,20-50,20-40,20-40,25-35,30-50,30-60,50-75,50-100,100,1-100,100-150,150-200,200,1-200微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽。某些方面包括在損傷之前和/或之后給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之前12、24、48或者72小時(shí)給藥、在受損傷期間給藥和/或在受傷之后指定的或者相等的時(shí)間間隔給藥。在某些環(huán)境下，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受損傷前24小時(shí)或者48小時(shí)給藥，并且在受損傷后每天(例如，24小時(shí))或者每星期給藥一次。在損傷之前給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷期間給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷之后給藥可以是全身性的和/或局部的。

這里所公開(kāi)的方法的某些方面包括根據(jù)所使用的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白活性、給藥途徑、給藥方法和醫(yī)學(xué)環(huán)境給藥大約0.005微克或者毫克、0.1微克或者毫克、0.2微克或者毫克、0.3微克或者毫克、0.4微克或者毫克、0.5微克或者毫克、0.6微克或者毫克、0.7微克或者毫克、0.8微克或者毫克、0.9微克或者毫克、1微克或者毫克、2微克或者毫克、3微克或者毫克、4微克或者毫克、5微克或者毫克、6微克或者毫克、7微克或者毫克、8微克或者毫克、9微克或者毫克、10微克或者毫克、11微克或者毫克、12微克或者毫克、13微克或者毫克、14微克或者毫克或者15微克或者毫克、或者任何中間值的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽。例如，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者NRG-1同型體包括但不限于，GGF2以0.5、2.5、5、7.5、10、12.5或者15微克/千克或者毫克/千克的劑量給藥?？梢允褂萌魏芜m當(dāng)?shù)慕o藥途徑，包括但不限于，腸胃外給藥，皮下給藥，肌肉內(nèi)給藥，神經(jīng)周給藥，顱內(nèi)給藥，眶內(nèi)給藥，眼部給藥，心室內(nèi)給藥，囊內(nèi)給藥，脊柱內(nèi)給藥，腦池內(nèi)給藥，腹膜內(nèi)給藥，產(chǎn)期內(nèi)給藥，煙霧劑給藥，口服給藥，或者透皮給藥的或者局部給藥(例如，通過(guò)應(yīng)用一種裝置或者粘性貼片傳遞能夠穿過(guò)真皮進(jìn)入血液的制劑)。

在本公開(kāi)的一個(gè)方面，GGF2劑量水平在從大約0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者從大約0.001毫克/千克到15毫克/千克的范圍內(nèi)。在一種具體的實(shí)施方案中，GGF2劑量水平在從大約0.001毫克/千克到大約0.02毫克/千克、從大約0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、從大約0.06毫克/千克到大約0.1毫克/千克、從大約0.1毫克/千克到大約0.3毫克/千克、從大約0.3毫克/千克到大約0.5毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約0.7毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約0.7毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約1.0毫克/千克到大約1.5毫克/千克、從大約1.5毫克/千克到大約2毫克/千克、從大約2毫克/千克到大約2.5毫克/千克、從大約2.5毫克/千克到大約3毫克/千克、從大約3毫克/千克到大約3.5毫克/千克、從大約3.5毫克/千克到大約4毫克/千克、從大約4毫克/千克到大約4.5毫克/千克、從大約4.5毫克/千克到大約5毫克/千克、從大約毫克/千克到大約1.5毫克/千克，或者從大約毫克/千克到大約5.0毫克/千克的范圍內(nèi)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，GGF2劑量水平為從大約1毫克/千克到大約15毫克/千克。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，GGF2的劑量水平在大約0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者從大約0.001毫克/千克到15毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。在一種具體的實(shí)施方案中，GGF2劑量水平在從大約0.001毫克/千克到大約0.02毫克/千克、從大約0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、從大約0.06毫克/千克到大約0.1毫克/千克、從大約0.1毫克/千克到大約0.3毫克/千克、從大約0.3毫克/千克到大約0.5毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約0.7毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約0.7毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約1.0毫克/千克到大約1.5毫克/千克、從大約1.5毫克/千克到大約2毫克/千克、從大約2毫克/千克到大約2.5毫克/千克、從大約2.5毫克/千克到大約3毫克/千克、從大約3毫克/千克到大約3.5毫克/千克、從大約3.5毫克/千克到大約4毫克/千克、從大約4毫克/千克到大約4.5毫克/千克、從大約4.5毫克/千克到大約5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到大約1.5毫克/千克，或者從大約0.001毫克/千克到大約5.0毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥1次(或者每天一次)、至少24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥1次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天給藥一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，持續(xù)大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周，或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2的劑量水平在大約0.001毫克/千克到15毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。

在本公開(kāi)的另一個(gè)方面，劑量范圍在5毫克/千克到15毫克/千克之間，包括端點(diǎn)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者NRG-1同型體被全身性或者局部對(duì)主體給藥。例如，當(dāng)NRG1多肽或者肽，包括但不限于GGF2，以5毫克/千克到15毫克/千克的劑量(包括端點(diǎn))給藥時(shí)，優(yōu)選的給藥途徑是靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥、透皮給藥或者局部給藥。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之前給藥、在受損傷期間給藥和/或在受傷之后指定的或者相等的時(shí)間間隔給藥。在一種非限制性實(shí)施例中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，在受傷之前進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，在受傷之前持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。作為選擇，或者另外，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之后每24小時(shí)給藥一次或者每周給藥一次。在損傷之前給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷期間給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷之后給藥可以是全身性的和/或局部的。一些劑量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(例如劑量范圍在5毫克/千克到15毫克/千克之間，包括端點(diǎn))可以一種非全身性局部方法給藥，包括但不局限于皮下注射或者植入或者透皮傳遞方法。

“局部”、“定位”或者“靶向”傳遞方法向損傷位點(diǎn)提供了治療有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而改善外周神經(jīng)的恢復(fù)狀態(tài)或者功能，同時(shí)基本上不增加神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的血液水平或者基本上不穿過(guò)血腦屏障，因此增加了中樞神經(jīng)系統(tǒng)的大腦脊髓液中神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的水平。

這里公開(kāi)的組合物和方法中的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是NRGl、2、3或者4基因編碼的任意全長(zhǎng)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。在一種進(jìn)一步的方面，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽的任一功能性片段。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的功能性片段可以含有EGF-樣區(qū)域。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是任一NRGl、2、3或者4基因編碼的肽，這種肽能夠結(jié)合并活化erbB受體。作為選擇，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以是任何一種由NRGl、2、3或者4基因編碼的野生型肽修飾所得的肽，所述修飾所得的肽結(jié)合并活化ErbB受體。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白和含有神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白EGF-樣區(qū)域的多肽可以與一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體、或者賦形劑一起，以單位劑量形式對(duì)主體給藥。常用的藥物習(xí)慣可以被利用從而提供適當(dāng)?shù)闹苿┗蛘呓M合物，并對(duì)病人或者試驗(yàn)動(dòng)物給藥這種組合物。

靜脈內(nèi)給藥在某些情況下是優(yōu)選的，盡管如此，也可以使用其他任何適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，包括但是不局限于，非腸道給藥、皮下給藥、肌肉注射給藥、顱內(nèi)給藥、眶內(nèi)給藥、眼藥、心室內(nèi)給藥、中央囊內(nèi)給藥、脊柱內(nèi)給藥、腦池內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、產(chǎn)期內(nèi)給藥、煙霧劑、口服給藥或者透皮給藥或者局部給藥(例如，通過(guò)使用一種裝置或者粘性貼片，其中攜帶能夠穿過(guò)真皮進(jìn)入血流的制劑)。治療性制劑可以處于液體溶液或者懸浮液的形式；為了進(jìn)行口服，制劑可以處于片劑或者膠囊劑的形式；并且對(duì)于經(jīng)鼻給藥制劑，可以處于粉末、滴鼻劑或者煙霧劑的形式。

“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1”、“NRG-1”、“heregulin”指的是一種多肽，這種多肽能夠結(jié)合ErbB受體1、ErbB受體3或者ErbB受體4，并且通過(guò)受體配對(duì)作用(二聚作用)還結(jié)合ErbB受體2。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)美國(guó)專利第5,530,109號(hào)、美國(guó)專利第5,716,930號(hào)、和美國(guó)專利第7,037,888號(hào)中提到的pl85erbB2配位體基因編碼神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，這里提到的每個(gè)申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引證在此全部并入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2或者其任何一種子序列、或者任何一種分子，包括GGF2整個(gè)序列或者GGF2序列的活性部分。

這里所公開(kāi)的組合物和方法的某些實(shí)施方案中，藥物組合物可以包括，例如，至少大約0.1％的活性化合物。在其他實(shí)施方案中，活性化合物可以占單位重量的大約2％到大約75％，或者占大約25％到大約60％，例如，以及任何在其中可推導(dǎo)出的范圍。在其他非限制性實(shí)施例中，每次給藥的劑量還可以包括從大約1微克(微克)/千克/體重，大約5微克/千克/體重，大約10微克/千克體重，大約50微克/千克體重，大約100微克/千克體重，大約200微克/千克體重，大約350微克/千克體重，大約500微克/千克體重，大約1毫克/千克體重，大約5毫克/千克體重，大約10毫克/千克體重，大約50毫克/千克體重，大約100毫克/千克體重，大約200毫克/千克體重，大約350毫克/千克體重，大約500毫克/千克體重，到大約1000毫克/千克體重或更多，并且任何范圍其中可推導(dǎo)出的范圍。在這里所里出的數(shù)值范圍內(nèi)可推導(dǎo)出的范圍的非限制性實(shí)施例包括，大約5毫克/千克體重到大約100毫克/千克體重，大約5微克/千克體重到大約500毫克/千克體重等等，可以根據(jù)上述所列出的數(shù)值給藥其中可推導(dǎo)出的范圍。

術(shù)語(yǔ)“治療有效量”或者“有效量”指的是能夠引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人類發(fā)生科研工作者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其他臨床醫(yī)師尋找的生物反應(yīng)或者醫(yī)藥反應(yīng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的量。

治療性改變是指在測(cè)量的生物化學(xué)特性或者生理特性方面向著減輕疾病(例如，外周神經(jīng)損傷)或者解決問(wèn)題的方向發(fā)生的改變。更為具體的，“有效量”是足夠減少與醫(yī)學(xué)條件或者虛弱有關(guān)的癥狀的量，從而使在疾病或者紊亂中導(dǎo)致某些身體功能損傷的身體功能正?；蛘邚亩纳萍膊』蛘卟r的一種或者一種以上的臨床測(cè)量參數(shù)。這里所公開(kāi)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的治療有效量或者劑量可以是足以使功能測(cè)量值恢復(fù)至主體受傷前或者正常狀態(tài)的量。作為選擇或者另外，這里所公開(kāi)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的治療有效量或者劑量可以是足以保持、恢復(fù)或者誘導(dǎo)受損傷的或者有受損傷風(fēng)險(xiǎn)的坐骨神經(jīng)存活、連接、信號(hào)傳導(dǎo)、或者功能的量。這里所公開(kāi)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的治療有效量或者劑量可以是足以保持、恢復(fù)或者誘導(dǎo)目標(biāo)細(xì)胞或者細(xì)胞群功能的量，所述目標(biāo)細(xì)胞或者細(xì)胞群是由受損傷的或者有受損傷風(fēng)險(xiǎn)的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)、控制或者支配的。

除非明確表明其指的是其他選項(xiàng)，或者當(dāng)選項(xiàng)是相互排斥的時(shí)，在權(quán)利要求書(shū)中使用術(shù)語(yǔ)“或者”指的是“和/或”。還可以預(yù)計(jì)的是，任意列出的使用術(shù)語(yǔ)“或”的地方還可以專門與所闡述的其他選項(xiàng)相獨(dú)立。

在本申請(qǐng)上下文中使用的術(shù)語(yǔ)“大約”指的是所使用的裝置或者方法產(chǎn)生的數(shù)值與確定的數(shù)值相比在85％、90％、95％>或者誤差標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)。

按照長(zhǎng)期存在的專利法，在權(quán)利要求書(shū)或者說(shuō)明書(shū)中使用的單詞“一種(a)”和“一種(an)”表示一種或者一種以上，除非另有明確指出。

在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明，預(yù)防性的使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白從而預(yù)防或者減輕潛在的損傷。作為選擇或者另外，預(yù)后應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而表明主體的未來(lái)狀態(tài)。作為選擇或者進(jìn)一步的另外，診斷性的應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而確定一種情況或者狀態(tài)的存在或者可能存在。治療性的應(yīng)用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而以某些減少或者除去被治療的病況或者疾病的癥狀或者病癥的方式影響一種病況。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白在成人的外周神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用。例如，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，具體地說(shuō)神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子2(GGF2)能夠影響雪旺氏細(xì)胞分化的多個(gè)方面，包括雪旺氏細(xì)胞前體的存活、雪旺氏細(xì)胞增殖、軸突入鞘和髓鞘形成。另外，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白還在調(diào)節(jié)肌肉神經(jīng)接點(diǎn)處乙酰膽堿受體方面發(fā)揮作用。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白還能影響外周神經(jīng)中的雪旺氏細(xì)胞功能，和骨骼肌中的肌源性作用和新陳代謝效應(yīng)。因此，這里介紹的研究的目的是評(píng)價(jià)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1同型體神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子2(GGF2)在骨骼肌和坐骨神經(jīng)功能微觀變化方面的作用和其在坐骨神經(jīng)擠壓傷之后恢復(fù)過(guò)程中的作用。

這里顯示的數(shù)據(jù)說(shuō)明GGF2對(duì)外周神經(jīng)損傷之后(例如，坐骨神經(jīng)損傷之后)外周神經(jīng)髓鞘形成、目標(biāo)肌肉功能和神經(jīng)的感覺(jué)功能有好處。具體地說(shuō)，如這里所述，腓腸肌的組織學(xué)評(píng)價(jià)說(shuō)明，與假損傷相比，在損傷后第2、4、6周，擠壓傷動(dòng)物中的纖維化增加；然而GGF2療法能夠顯著減少損傷誘導(dǎo)的纖維化，使其在損傷6周之后接近正常水平。而且，在損傷第2、4、6周之后可以發(fā)現(xiàn)肌纖維面積明顯減少；然而GGF2治療能在損傷4-6周后促進(jìn)肌纖維面積向更大的面積變化(即，與假參照很像)。損傷之后，與假損傷動(dòng)物參照相比可以觀察到各種各樣的具有不同嚴(yán)重程度的病變；然而GGF2與媒介物治療的動(dòng)物相比能夠定性的減少病變坐骨神經(jīng)中脫髓鞘作用程度。GGF2減輕擠壓傷后機(jī)械超敏性和冷超敏性病癥，因此在橫切導(dǎo)致的坐骨神經(jīng)傳入神經(jīng)阻滯之后增加機(jī)械和冷感覺(jué)功能。

通過(guò)下面的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其他目標(biāo)、特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)會(huì)變得顯而易見(jiàn)。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，下面的詳細(xì)說(shuō)明和具體的實(shí)施例中盡管表明了本發(fā)明具體的實(shí)施方案，但只是以起到示意的作用而給出，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過(guò)這里的詳細(xì)說(shuō)明可以理解，在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，各種各樣的改變和變化會(huì)變得顯而易見(jiàn)。

附圖說(shuō)明

下面的附圖形成了本發(fā)明說(shuō)明書(shū)的一部分，并且被包括用于說(shuō)明本發(fā)明所公開(kāi)的某些非限制性方面。通過(guò)這些附圖中的一個(gè)與這里所描述的具體實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明可以被更好的理解。

圖1是一種示意圖，顯示了坐骨神經(jīng)分叉處附近8-10毫米處的坐骨神經(jīng)擠壓傷。

圖2是一種圖，顯示了在假損傷、擠壓傷后使用媒介物治療或者擠壓傷后使用GGF2治療的情況下，在腓腸肌后部作為時(shí)間(2、4或者6周)函數(shù)觀察到的纖維化改變百分比。

圖3是一系列顯微照片(Trichrome 100X)，顯示了損傷后2和6周假[A]、媒介物治療的[B]和GGF-2治療的動(dòng)物[C]代表性的肌肉切片。

圖4A、4B和4C是一系列圖，顯示了在假損傷、擠壓傷后使用媒介物治療或者擠壓傷后使用GGF2治療的情況下，作為時(shí)間(2、4或者6周)函數(shù)觀察到的纖維化百分比。

圖5是一種圖，顯示了在假損傷、擠壓傷后使用媒介物治療或者擠壓傷后使用GGF2治療的情況下，在第2、4和6周，進(jìn)行的坐骨神經(jīng)蛋白脂質(zhì)蛋白斑(PLP)中的髓鞘蛋白評(píng)估。

圖6是一種圖，顯示了作為實(shí)驗(yàn)條件函數(shù)的平均海綿體內(nèi)壓(ICP)從基線的變化?！暗蛣┝俊盙GF2＝0.5毫克/千克，“高劑量”0.54GGF2＝5毫克/千克“高劑量”。32只3個(gè)月大的雄性Sprague-Dawley大鼠被分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)條件：組1-假手術(shù)、組2-擠壓傷+沒(méi)有GGF2、組3-擠壓傷+低劑量GGF2(0.5毫克/千克)、組4:-擠壓傷+高劑量GGF2(5毫克/千克)。在擠壓傷前24小時(shí)給藥GGF2、擠壓后24小時(shí)給藥GGF2和手術(shù)后每7天給藥1次GGF2直至研究結(jié)束。手術(shù)在下正中切口使前列腺，海綿體神經(jīng)和主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)暴露出來(lái)，并制造2分鐘的擠壓傷(針以90度角驅(qū)動(dòng)和“一點(diǎn)”壓力)。

圖7是一種圖，顯示了作為實(shí)驗(yàn)條件函數(shù)的與平均主動(dòng)脈壓(MAP)均一化的平均海綿體內(nèi)壓(ICP)。ICP/MAP是0.81(正常)、0.15(損傷未治療)和0.4(當(dāng)GGF2為0.5毫克/千克(“低劑量”))和0.54(GGF2為5mg/kg(“高劑量”)(所有值的p<0.05)。32只3個(gè)月大的雄性Sprague-Dawley大鼠被分為4種實(shí)驗(yàn)條件：組1-假手術(shù)、組2-擠壓傷+沒(méi)有GGF2、組3-擠壓傷+低劑量GGF2(0.5毫克/千克)、組4:-擠壓傷+高劑量GGF2(5毫克/千克)。在擠壓傷前24小時(shí)給藥GGF2、擠壓后24小時(shí)給藥GGF2和手術(shù)后每7天給藥1次GGF2直至研究結(jié)束。手術(shù)在下正中切口使前列腺，海綿體神經(jīng)和主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)暴露出來(lái)，并制造2分鐘的擠壓傷(針以90度角驅(qū)動(dòng)和“一點(diǎn)”壓力)。

圖8A-C是一系列照片，代表性的顯示了每個(gè)治療組((組A)正常、(組B)擠壓傷、(組C)擠壓傷+GGF2)三個(gè)動(dòng)物中主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)的氟金標(biāo)記。注射入陰莖組織的氟金被向后逆行運(yùn)輸通過(guò)整個(gè)神經(jīng)到達(dá)MPG中的細(xì)胞體。組A：正常動(dòng)物，顯示了在沒(méi)有神經(jīng)損傷情況下觀察到的逆行標(biāo)記的量。組B：擠壓傷動(dòng)物，由于氟金標(biāo)記不能被傳遞回MPG，顯示了受傷后完整神經(jīng)纖維的急劇減少。組C：擠壓傷+GGF2動(dòng)物，顯示了增加量的氟-金標(biāo)記的MPG細(xì)胞，說(shuō)明在受傷后使用GGF2治療能夠保留更多的神經(jīng)纖維。

圖9是一種圖，顯示了MPG中的氟金標(biāo)記的量。結(jié)果顯示，正常動(dòng)物在MPG中具有大量細(xì)胞體標(biāo)記。在擠壓傷之后，被標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量急劇減少，這是神經(jīng)纖維被破壞因此無(wú)法逆行運(yùn)輸標(biāo)記回到MPG的結(jié)果。但是，GGF2治療法能夠提高完整的神經(jīng)纖維數(shù)量，完整的神經(jīng)纖維能夠?qū)⒎饛年幥o逆行運(yùn)輸會(huì)MPG，從而產(chǎn)生大量標(biāo)記的細(xì)胞體。

圖10A-C是一系列照片，描述了代表性的nNos水平染色。海綿體nNOS是一種已知的海綿體神經(jīng)保護(hù)標(biāo)記物。該工作的結(jié)果包括正常組織染色(組A)。相比較可知，在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷之后(組B)，nNOS染色具有明顯的損失。保存在陰莖海綿體末端海綿體神經(jīng)的nNOS染色說(shuō)明在擠壓傷后使用GGF2治療(組C)能夠增加海綿體神經(jīng)的存活率。染色強(qiáng)度說(shuō)明了使用GGF2治療的nNOS染色保存量。

圖11A-C是一系列照片，顯示了代表性的酪氨酸氫化酶(TH)染色水平。組A顯示了正常組織染色，組B顯示在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷之后TH染色顯著損失。組C顯示了在陰莖海綿體的海綿體神經(jīng)末端保留的TH染色；這一發(fā)現(xiàn)與擠壓傷后使用GGF2治療所產(chǎn)生的陰莖神經(jīng)支配的整體保存和重建相一致。因此，染色強(qiáng)度說(shuō)明了使用GGF2治療的TH染色保存量。

圖12A-C是一系列照片，顯示了代表性的囊狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VaChT)染色。結(jié)果顯示正常組織染色(組A)和在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷后VaChT的顯著損失(組B)。相反，組C中顯示的在陰莖海綿體海綿狀神經(jīng)末端保留的VaChT染色說(shuō)明在擠壓傷之后使用GGF2治療能夠獲得增加的海綿狀神經(jīng)的存活率(C)。染色強(qiáng)度顯示使用GGF2治療具有保留VaChT染色的趨勢(shì)。

圖13是一種圖，顯示了研究主體的體重作為增加的GGF2的量或者媒介物的量的函數(shù)變化(參見(jiàn)實(shí)施例6)。

圖14A是一種圖，顯示了隨著不同水平的海綿體神經(jīng)電刺激作用產(chǎn)生的海綿體內(nèi)壓力變化(與平均動(dòng)脈壓(MAP)均一化的最大ICP)(參見(jiàn)實(shí)施例6)。ICP反應(yīng)在組C和組B中明顯更高。組A：假+媒介物。組B：假+GGF2。組C：BCI+GGF2(5毫克/千克，sc)。組D：BCI+GGF2(15毫克/千克，sc)。組E:BCI+媒介物。

圖14B是一種圖，顯示了顯示了隨著不同水平的海綿體神經(jīng)電刺激作用產(chǎn)生的海綿體內(nèi)壓力變化(ICPare/MAP)(參見(jiàn)實(shí)施例6)。ICP反應(yīng)在組C和組B中明顯更高。組A：假+媒介物。組B：假+GGF2。組C：BCI+GGF2(5毫克/千克，sc)。組D：BCI+GGF2(15毫克/千克，sc)。組E:BCI+媒介物。

圖15是一種圖，顯示了治療組A、E和C中，每海綿體神經(jīng)的雪旺氏細(xì)胞中位數(shù)作為無(wú)髓化的纖維數(shù)的函數(shù)(參見(jiàn)實(shí)施例6)。

圖16A-B是一對(duì)圖，顯示了在假損傷、擠壓傷(組A)或者割傷(組B)后使用GGF2媒介物治療的情況下，von Frey機(jī)械(觸覺(jué))域在6周內(nèi)的時(shí)間過(guò)程。

圖17A-B是一對(duì)圖，顯示了在假損傷、擠壓傷(組A)或者割傷(組B)后使用GGF2媒介物治療的情況下，在六周內(nèi)對(duì)丙酮蒸汽冷卻的行為反應(yīng)時(shí)間過(guò)程。

具體實(shí)施方式

外周神經(jīng)創(chuàng)傷是許多不同情況、擠壓、挫傷、相互碰撞、壓扁或者抻傷的常見(jiàn)結(jié)果，例如，由外傷、事故或者外科手術(shù)產(chǎn)生的。盡管外部因素導(dǎo)致的神經(jīng)創(chuàng)傷是變化的，但是在神經(jīng)水平上的表現(xiàn)具有共同的特癥(參見(jiàn)，例如，Lee and Wolfe,J Am Acad Orthop Surg,8(4),p.243,2008)。在各個(gè)病理學(xué)中，外傷性損傷常常造成髓鞘形成損傷、神經(jīng)外膜損傷、神經(jīng)束膜損傷、神經(jīng)內(nèi)膜損傷及軸損傷。在最溫和的病例中，損傷主要是針對(duì)髓鞘質(zhì)和神經(jīng)外膜，然后在幾天或者幾周之后自然完全恢復(fù)。

然而，許多神經(jīng)創(chuàng)傷會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)膜破環(huán)和軸破環(huán)，并因此導(dǎo)致不能完全恢復(fù)或者需要持續(xù)很長(zhǎng)一段時(shí)間才能恢復(fù)的機(jī)能破環(huán)。

此外，在包括軸突損傷的外周神經(jīng)損傷中，在損傷后幾個(gè)小時(shí)時(shí)間內(nèi)，軸突發(fā)生局部退化。在隨后幾天的時(shí)間內(nèi)，最接近的神經(jīng)元細(xì)胞體和軸突經(jīng)歷一種過(guò)程，這種過(guò)程叫做華勒氏變性。在軸突退化之后，髓鞘質(zhì)產(chǎn)生的雪旺氏(Schwann)細(xì)胞死亡，留下碎片并發(fā)炎。雪旺氏(Schwann)細(xì)胞的細(xì)胞死亡和相關(guān)發(fā)炎加重神經(jīng)損傷。

與中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同，在外周神經(jīng)中可以發(fā)生顯著數(shù)量的再生。軸突沿著神經(jīng)束膜管生長(zhǎng)并重新刺激末梢的靶分子，并且雪旺氏(Schwann)細(xì)胞修復(fù)軸突。雖然外周神經(jīng)可以再生，但是，身體調(diào)節(jié)的自然再生過(guò)程不能提供全面的復(fù)原，而且許多經(jīng)歷了退化的神經(jīng)元不在重新生成或者不能識(shí)別它們?cè)械陌蟹肿硬⒃斐捎谰玫臋C(jī)能失調(diào)的結(jié)果。這些機(jī)能失調(diào)可以包括運(yùn)動(dòng)機(jī)能損失、感覺(jué)功能損失、癱瘓、反應(yīng)能力損失、僵硬、攣縮或者關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍減少。

疼痛通常與感覺(jué)神經(jīng)損傷或者破壞有關(guān)，并且會(huì)導(dǎo)致受影響部位的戒備和固定。因此，傷害感受(神經(jīng)元信號(hào)屈服于痛覺(jué))伴隨著促進(jìn)快速愈合的機(jī)制，即使會(huì)引起使人不愉快的感覺(jué)和情緒。然而，在許多病態(tài)情況中，傷害感受的輸入可以導(dǎo)致對(duì)有機(jī)體非常有害的功能性變化。

神經(jīng)損傷會(huì)使初級(jí)傳入神經(jīng)元的許多性質(zhì)發(fā)生改變，并改變他們?cè)诩顾柚械闹袠行躁P(guān)系，導(dǎo)致異常性疼痛(通常無(wú)害的刺激所造成的疼痛感覺(jué))、痛覺(jué)過(guò)敏(對(duì)任何給定疼痛刺激的過(guò)度反應(yīng))和感受域(即當(dāng)使用刺激時(shí)感到“疼痛”的區(qū)域)擴(kuò)大。大多數(shù)慢性疼痛情況來(lái)自于中樞性神經(jīng)組織或者外周神經(jīng)組織的破壞。

大量文獻(xiàn)顯示，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白能夠增加神經(jīng)元通過(guò)人造管再生的能力，并且可以增加其作為細(xì)胞治療劑(例如雪旺氏(Schwann)細(xì)胞移植物)的附屬治療法的作用。在本發(fā)明之前，人們并不知道神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以單獨(dú)被使用，例如，用于保護(hù)和/或修復(fù)外周神經(jīng)創(chuàng)傷功能。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白組合物

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以被預(yù)防性使用，從而預(yù)防或者最小化潛在的損傷。作為選擇，或者另外，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可能用來(lái)治療損傷。術(shù)語(yǔ)“治療”可能包括，但是不局限于，預(yù)防進(jìn)一步的損傷、抑制進(jìn)一步或者不間斷的損傷、改善損傷病癥或者癥狀、和/或在損傷后改善/修復(fù)功能。

可以對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患有外周神經(jīng)損傷或者已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而改善肌肉功能，例如，舉例來(lái)說(shuō)，而不是限制性的，骨骼肌功能。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉塊(例如，增加肌纖維大小)、增加肌肉力量、減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在這里所公開(kāi)的組合物和方法的一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

可以對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患有外周神經(jīng)損傷或者已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而治療感覺(jué)和/或動(dòng)力缺陷和/或高敏感性。還可以被這里公開(kāi)的方法治療的感覺(jué)缺陷和/或高敏感性的非限制性實(shí)施例包括，糖尿病性神經(jīng)病變、外傷神經(jīng)病和/或化學(xué)治療神經(jīng)病(例如，在給藥順式鉑氨或者紫杉醇之后)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

可以對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)患有外周神經(jīng)損傷或者已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，從而治療已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中的自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。示范性的自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙包括交感神經(jīng)系統(tǒng)和/或副交感神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙?？梢员槐景l(fā)明公開(kāi)的方法治療的自主功能障礙的非限制性實(shí)施例包括，區(qū)域血流量功能障礙(例如，由于勃起功能障礙導(dǎo)致的海綿狀神經(jīng)損傷)、腸道動(dòng)力分泌物功能障礙、呼吸系統(tǒng)改變功能障礙、膀胱改變功能障礙和視覺(jué)改變功能障礙。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

示范性的組合物包括，但是不局限于，一種神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白、NRG-1或者GGF2核酸或者肽分子。被這里公開(kāi)的方法治療的示范性的外周神經(jīng)包括但是不局限于，坐骨神經(jīng)和/或海綿狀神經(jīng)。

對(duì)主體給藥的本發(fā)明組合物的實(shí)際劑量可以通過(guò)物理和生理因素來(lái)確定，所述物理和生理因素例如體重、情況的嚴(yán)重程度、被處理的疾病類型、之前的或者并行的治療介入、病人的自發(fā)性疾病和給藥途徑。無(wú)論如何，負(fù)責(zé)給藥的一生可以確定組合物中活性成分的濃度以及用于個(gè)別主體的適當(dāng)劑量。

這里公開(kāi)的方法的某些方面包括，根據(jù)使用的具體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白活性、給藥途徑、給藥方法和醫(yī)學(xué)情況給藥大約1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1-10,1-20,10-20,1-30,1-40,1-50,10-20,10-30,10,15,20,25,30,35,40,50,15-25,15-40,15-35,15-50,20-50,20-40,20-40,25-35,30-50,30-60,50-75,50-100,100,1-100,100-150,150-200,200,1-200微克或者毫克的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽。某些方面包括在損傷之前和/或之后給藥神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之前給藥、在受損傷期間給藥和/或在受傷之后指定的或者相等的時(shí)間間隔給藥。在一種非限制性實(shí)施例中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，在受傷之前進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，在受傷之前持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。作為選擇，或者另外，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之后每24小時(shí)給藥一次或者每周給藥一次。在損傷之前給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷期間給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷之后給藥可以是全身性的和/或局部的。

這里所公開(kāi)的方法的某些方面包括根據(jù)所使用的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白活性、給藥途徑、給藥方法和醫(yī)學(xué)環(huán)境給藥大約0.005微克或者毫克、0.1微克或者毫克、0.2微克或者毫克、0.3微克或者毫克、0.4微克或者毫克、0.5微克或者毫克、0.6微克或者毫克、0.7微克或者毫克、0.8微克或者毫克、0.9微克或者毫克、1微克或者毫克、2微克或者毫克、3微克或者毫克、4微克或者毫克、5微克或者毫克、6微克或者毫克、7微克或者毫克、8微克或者毫克、9微克或者毫克、10微克或者毫克、11微克或者毫克、12微克或者毫克、13微克或者毫克、14微克或者毫克或者15微克或者毫克、或者任何中間值的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽。例如，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者NRG-1同型體包括但不限于，GGF2以0.5、2.5、5、7.5、10、12.5或者15微克/千克或者毫克/千克的劑量給藥。可以使用任何適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，包括但不限于，腸胃外給藥，皮下給藥，肌肉內(nèi)給藥，神經(jīng)周給藥，顱內(nèi)給藥，眶內(nèi)給藥，眼部給藥，心室內(nèi)給藥，囊內(nèi)給藥，脊柱內(nèi)給藥，腦池內(nèi)給藥，腹膜內(nèi)給藥，產(chǎn)期內(nèi)給藥，煙霧劑給藥，口服給藥，或者透皮給藥的或者局部給藥(例如，通過(guò)應(yīng)用一種裝置或者粘性貼片傳遞能夠穿過(guò)真皮進(jìn)入血液的制劑)。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，GGF2的劑量水平在大約0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者從大約0.001毫克/千克到15毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。在一種具體的實(shí)施方案中，GGF2劑量水平在從大約0.001毫克/千克到大約0.02毫克/千克、從大約0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、從大約0.06毫克/千克到大約0.1毫克/千克、從大約0.1毫克/千克到大約0.3毫克/千克、從大約0.3毫克/千克到大約0.5毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約0.7毫克/千克、從大約0.5毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約0.7毫克/千克到大約1.0毫克/千克、從大約1.0毫克/千克到大約1.5毫克/千克、從大約1.5毫克/千克到大約2毫克/千克、從大約2毫克/千克到大約2.5毫克/千克、從大約2.5毫克/千克到大約3毫克/千克、從大約3毫克/千克到大約3.5毫克/千克、從大約3.5毫克/千克到大約4毫克/千克、從大約4毫克/千克到大約4.5毫克/千克、從大約4.5毫克/千克到大約5毫克/千克、從大約0.001毫克/千克到大約1.5毫克/千克，或者從大約0.001毫克/千克到大約5.0毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥1次(或者每天一次)、至少24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥1次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天給藥一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，持續(xù)大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周，或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2的劑量水平在大約0.001毫克/千克到15毫克/千克范圍內(nèi)，大約每24小時(shí)給藥一次(或者一天一次)、至少每24小時(shí)給藥一次、每48小時(shí)給藥一次、至少每48小時(shí)給藥1次、至少每隔一天一次、每72小時(shí)給藥一次、至少每72小時(shí)給藥一次，進(jìn)行大約1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，GGF2至少每周給藥1次，持續(xù)1個(gè)月、2個(gè)月或者3個(gè)月。

在本公開(kāi)的另一個(gè)方面，劑量范圍在5毫克/千克到15毫克/千克之間，包括端點(diǎn)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白或者NRG-1同型體被全身性或者局部對(duì)主體給藥。例如，當(dāng)NRG1多肽或者肽，包括但不限于GGF2，以5毫克/千克到15毫克/千克的劑量(包括端點(diǎn))給藥時(shí)，優(yōu)選的給藥途徑是靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥、透皮給藥或者局部給藥。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受傷之前給藥、在受損傷期間給藥和/或在受傷之后指定的或者相等的時(shí)間間隔給藥。在一個(gè)實(shí)施例中，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以在受損傷前24小時(shí)或者48小時(shí)給藥，并且在受損傷后每天(例如，24小時(shí))或者每星期給藥一次。在損傷之前給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷期間給藥可以是全身性的和/或局部的。在損傷之后給藥可以是全身性的和/或局部的。一些劑量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(例如劑量范圍在5毫克/千克到15毫克/千克之間，包括端點(diǎn))可以一種非全身性局部方法給藥，包括但不局限于皮下注射或者植入或者透皮傳遞方法。

這里所公開(kāi)的組合物和方法的某些實(shí)施方案中，藥物組合物可以包括，例如，至少大約0.1％的活性化合物。在其他實(shí)施方案中，活性化合物可以占單位重量的大約2％到大約75％，或者占大約25％到大約60％，例如，以及任何在其中可推導(dǎo)出的范圍。在其他非限制性實(shí)施例中，每次給藥的劑量還可以包括從大約1微克(微克)/千克/體重，大約5微克/千克/體重，大約10微克/千克體重，大約50微克/千克體重，大約100微克/千克體重，大約200微克/千克體重，大約350微克/千克體重，大約500微克/千克體重，大約1毫克/千克體重，大約5毫克/千克體重，大約10毫克/千克體重，大約50毫克/千克體重，大約100毫克/千克體重，大約200毫克/千克體重，大約350毫克/千克體重，大約500毫克/千克體重，到大約1000毫克/千克毫克/千克或更多，并且任何范圍其中可推導(dǎo)出的范圍。在這里所里出的數(shù)值范圍內(nèi)可推導(dǎo)出的范圍的非限制性實(shí)施例包括大約5毫克/千克體重到大約100毫克/千克體重，大約5微克/千克體重到大約500毫克/千克體重等等，可以根據(jù)上述所列出的數(shù)值給藥其中可推導(dǎo)出的范圍。

在本申請(qǐng)上下文中使用的術(shù)語(yǔ)“大約”指的是所使用的裝置或者方法產(chǎn)生的數(shù)值與確定的數(shù)值相比在85％、90％、95％>或者誤差標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白和含有神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白EGF-樣區(qū)域的多肽可以與一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體、或者賦形劑一起，以單位劑量形式對(duì)主體給藥。常用的藥物習(xí)慣可以被利用從而提供適當(dāng)?shù)闹苿┗蛘呓M合物，并對(duì)病人或者試驗(yàn)動(dòng)物給藥這種組合物。靜脈內(nèi)給藥在某些情況下是優(yōu)選的，盡管如此，也可以使用其他任何適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，包括但是不局限于，非腸道給藥、皮下給藥、肌肉注射給藥、顱內(nèi)給藥、眶內(nèi)給藥、眼藥、心室內(nèi)給藥、中央囊內(nèi)給藥、脊柱內(nèi)給藥、腦池內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、產(chǎn)期內(nèi)給藥、煙霧劑、口服給藥或者透皮給藥或者局部給藥(例如，通過(guò)使用一種裝置或者粘性貼片，其中攜帶能夠穿過(guò)真皮進(jìn)入血流的制劑)。治療劑可以是液體溶液或者懸浮液。用于口服給藥，制劑可以以片劑或者膠囊劑的性質(zhì)存在。作為經(jīng)鼻制劑，所述制劑可以以粉末、滴鼻劑或者煙霧劑的形式存在。

“神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1”、“NRG-1”、“heregulin”指的是一種多肽，這種多肽能夠結(jié)合ErbB受體1、ErbB受體3或者ErbB受體4，并且通過(guò)受體配對(duì)作用(二聚作用)還結(jié)合ErbB受體2。所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2或者其任何一種子序列、或者任何一種分子，包括GGF2整個(gè)序列或者GGF2序列的活性部分。GGF2可以是一種野生型序列、一種子序列或者包括GGF2序列所有或者任意活性部分的變體。所述GGF2序列可以是人類序列的子序列或者包括該GGF2序列所有或者任意活性部分的變體。

這里公開(kāi)的GGF2氨基酸序列非限制性的實(shí)施例(具有包括其EGF-樣結(jié)構(gòu)域，帶下劃線)是：

MRWRRAPRRSGRPGPRAQRPGSAARSSPPLPLLPLLLLLGTAALAPGAAAGNEAAPAGASVCYSSPPSVGSVQELAQRAAVVIEGKVHPQRRQQGALDRKAAAAAGEAGAWGGDREPPAAGPRALGPPAEEPLLAANGTVPSWPTAPVPSAGEPGEEAPYLVKVHQVWAVKAGGLKKDSLLTVRLGTWGHPAFPSCGRLKEDSRYIFFMEPDANSTSRAPAAFRASFPPLETGRNLKKEVSRVLCKRCALPPQLKEMKSQESAAGSKLVLRCETSSEYSSLRFKWFKNGNELNRKNKPQNIKIQKKPGKSELRINKASLADSGEYMCKVISKLGNDSASANITIVESNATSTSTTGTSHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCPNEFTGDRCQNYVMASFYSTSTPFLSLPE(SEQ ID NO:1)(GenBank編目號(hào)AAB59622，通過(guò)引證在此并入本文)。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或其片段可能與GGF2的氨基酸序列具有75，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者100％的一致性或者同源性。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-樣多肽可能與GGF2的EGF-樣結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列具有75，80，85，86，97，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者100％的一致性或者同源性。

術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”或者“多肽”指的是包括至少十個(gè)氨基酸殘基的分子。所述蛋白質(zhì)可以包括GGF2多肽的全部或者部分。還可以使用野生版的蛋白質(zhì)或者多肽。作為選擇，或者另外，可以使用修飾的蛋白質(zhì)或者多肽治療外周神經(jīng)損傷。術(shù)語(yǔ)“肽”、“蛋白質(zhì)”或者“多肽”可以互換使用。術(shù)語(yǔ)“肽”用于指任意長(zhǎng)度的氨基酸序列。

"修飾的肽"指的是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)，尤其是其氨基酸序列相對(duì)于相應(yīng)的野生型肽被改變的肽。在一些實(shí)施方案中，修飾的肽至少具有一個(gè)修飾的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，修飾的肽至少具有一個(gè)D氨基酸。在一些實(shí)施方案中，修飾的肽至少具有一個(gè)非天然存在的氨基酸。

修飾的肽可以包括取代變體、插入變體或者刪除變體。刪除變體通常缺少一個(gè)或者更多個(gè)天然或者野生型分子的殘基。可以刪除單獨(dú)的殘基，或者可以刪除一些連續(xù)的氨基酸?？梢韵蚓幋a的核酸序列中引入終止密碼子(通過(guò)取代作用或者插入作用)從而產(chǎn)生截?cái)嗟鞍踪|(zhì)。插入的突變通常包括在肽的非末端加入材料。可以包括插入一個(gè)或者更多的殘基。也可以在末端加入，這通常叫做融合蛋白質(zhì)或者融合肽。取代的變體一般包括在肽的一個(gè)或者更多個(gè)位點(diǎn)上一個(gè)氨基酸與另一個(gè)氨基酸的交換，并且可以被設(shè)計(jì)從而調(diào)節(jié)肽的一個(gè)或者多個(gè)性質(zhì)，并且損失或者不損失其他功能或者性質(zhì)，例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體的結(jié)合和活化。取代作用可以是保守的，即，一個(gè)氨基酸被一個(gè)相似形狀和電荷的氨基酸所取代。作為選擇，取代作用可以是非保守的，從而影響肽的功能或者活性。.非保守性改變通常涉及使用一個(gè)化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的殘基取代，例如，用一種非極性的或者不帶電荷的氨基酸取代一種極性的或者帶電荷的氨基酸，反之亦然。

保存性取代可以包括，但是不局限于，例如如下變化：丙氨酸變化為絲氨酸；精氨酸變化為賴氨酸；天門冬酰胺變化為谷氨酸或者組氨酸；天冬氨酸變化為谷氨酸；胞嘧啶變化為絲氨酸；谷氨酰胺變化為精氨酸；谷氨酸變化為天冬氨酸；甘氨酸變化為脯氨酸；組氨酸變化為天門冬酰胺或者谷氨酰胺；異亮氨酸變化為亮氨酸或者纈氨酸；白氨酸變?yōu)槔i氨酸或者異亮氨酸；賴氨酸變化為精氨酸；甲硫氨酸變化為白氨酸或者異亮氨酸；苯基丙氨酸變化為酪氨酸或者白氨酸或者甲硫氨酸；絲氨酸變化為蘇氨酸；蘇氨酸變化為絲氨酸；色氨酸變化為酪氨酸；酪氨酸變化為色氨酸或者苯基丙氨酸；和纈氨酸變化為異亮氨酸或者白氨酸。

氨基酸和核酸序列可以包括其他的殘基，例如，額外的N-或者C-末端氨基酸，或者5'或者3'序列，只要所得序列能夠滿足這里所描述的功能性標(biāo)準(zhǔn)，例如，維持生物活性。加入末端序列尤其適用于核酸序列，所述核酸序列可以，例如，包括各種非編碼序列側(cè)基，所述側(cè)基可以在編碼區(qū)的5'或者3'部分。

術(shù)語(yǔ)“治療有效量”或者“有效量”指的是能夠引發(fā)組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人產(chǎn)生生物反應(yīng)或者醫(yī)學(xué)反應(yīng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的量，所述量可以由研究員、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或者其他臨床醫(yī)生來(lái)確定。

治療性變化可以是測(cè)量的生物化學(xué)或者生理特癥向著緩解待解決的疾病或者病況的方面變化，所述待解決的疾病或者病況例如外周神經(jīng)損傷、肌肉萎縮(增加肌肉量、改善肌肉力量、減少肌肉萎縮)、減少神經(jīng)性疼痛、增加感覺(jué)恢復(fù)、增加外周神經(jīng)髓鞘再生。更具體的，“有效量”是足夠減少與醫(yī)學(xué)病況或者虛弱有關(guān)的癥狀、使人身體患有能夠?qū)е履承┥眢w功能損傷的疾病或者失調(diào)時(shí)保持功能正?；⒒蛘吒纳萍膊』蛘卟r一種或者更多種臨床測(cè)量參數(shù)的量。

藥物制劑

這里公開(kāi)的藥物制劑包括溶解或者分散在藥學(xué)上可接受的載體中的有效量的肽。術(shù)語(yǔ)“藥物可接受的”或者“藥理學(xué)可接受的”指的是對(duì)主體(例如，人)酌情給藥時(shí)通常不會(huì)產(chǎn)生副作用、過(guò)敏作用或者其他不良反應(yīng)的組合物。根據(jù)這里的公開(kāi)，這種藥物組合物的制備方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員人員是已知的，如Mack出版公司1990年出版的雷明頓藥物科學(xué)第18版中所例證的，該文獻(xiàn)通過(guò)引證在此全部并入本文。而且，為了實(shí)現(xiàn)對(duì)人類給藥的目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解所述制劑應(yīng)該滿足無(wú)菌、無(wú)熱源、普遍安全的并且滿足例如美國(guó)食品藥物管理局生物標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的純度標(biāo)準(zhǔn)。

而且，如這里所使用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括如下材料，例如，溶劑、分散介質(zhì)、包覆層、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲試劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩(wěn)定劑、凝膠劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、甜味劑、增味劑、染料等等類似的材料及其結(jié)合，如本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)這里公開(kāi)的內(nèi)容已知的。除非與活性成分不相容的常用載體，其在治療劑或者藥物組合物中的應(yīng)用是可以預(yù)計(jì)的。

根據(jù)這里公開(kāi)的藥物是否需要以固體、液體或者煙霧劑的形式給藥，并且根據(jù)所述藥物是否需要是無(wú)菌的從而作為注射劑給藥，所述藥物可以包括不同類型的載體。這里公開(kāi)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽可以被靜脈給藥、皮內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、腹腔內(nèi)給藥、病灶內(nèi)給藥、顱內(nèi)給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)給藥、前列腺內(nèi)給藥、腹腔內(nèi)給藥、氣管內(nèi)給藥、經(jīng)鼻給藥、直腸給藥、陰道給藥、結(jié)腸內(nèi)給藥、腫瘤內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥、皮下給藥、結(jié)膜下給藥、囊內(nèi)給藥、粘膜給藥、心包內(nèi)給藥、臍帶內(nèi)給藥、眼內(nèi)給藥、口服給藥、局部給藥、定點(diǎn)給藥、吸入給藥(例如，煙霧劑)。而且，這里公開(kāi)的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白多肽或者肽可以被注射給藥、輸注、連續(xù)輸注、定點(diǎn)輸液直接進(jìn)入、通過(guò)導(dǎo)管、通過(guò)灌洗法或者本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其他方法或者任何前述方法的結(jié)合進(jìn)入恒溫的目標(biāo)細(xì)胞。

對(duì)主體給藥的本發(fā)明組合物的實(shí)際劑量可以通過(guò)物理和生理因素來(lái)確定，所述物理和生理因素例如體重、情況的嚴(yán)重程度、被處理的疾病類型、之前的或者并行的治療介入、病人的自發(fā)性疾病和給藥途徑。負(fù)責(zé)給藥的醫(yī)生可以確定組合物中活性成分的濃度以及用于個(gè)別主體的適當(dāng)劑量。

這里所公開(kāi)的組合物和方法的某些實(shí)施方案中，藥物組合物可以包括，例如，至少大約0.1％的活性化合物。在其他實(shí)施方案中，活性化合物可以占單位重量的大約2％到大約75％，或者占大約25％到大約60％，例如，以及任何在其中可推導(dǎo)出的范圍。在其他非限制性實(shí)施例中，每次給藥的劑量還可以包括從大約1微克(微克)/千克/體重，大約5微克/千克/體重，大約10微克/千克體重，大約50微克/千克體重，大約100微克/千克體重，大約200微克/千克體重，大約350微克/千克體重，大約500微克/千克體重，大約1毫克/千克體重，大約5毫克/千克體重，大約10毫克/千克體重，大約50毫克/千克體重，大約100毫克/千克體重，大約200毫克/千克體重，大約350毫克/千克體重，大約500毫克/千克體重，到大約1000毫克/千克毫克/千克或更多，并且任何范圍其中可推導(dǎo)出的范圍。在這里所里出的數(shù)值范圍內(nèi)可推導(dǎo)出的范圍的非限制性實(shí)施例包括大約5毫克/千克體重到大約100毫克/千克體重，大約5微克/千克體重到大約500毫克/千克體重等等，可以根據(jù)上述所列出的數(shù)值給藥其中可推導(dǎo)出的范圍。

在任何情況下，所述組合物可以包括各種抗氧化劑從而減緩一種或者更多成分的氧化。另外，通過(guò)加入防腐劑可以產(chǎn)生對(duì)微生物的預(yù)防作用，所述防腐劑例如抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，包括但是不局限于對(duì)羥苯甲酸(例如，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞或者其結(jié)合。

所述藥物可以游離堿性、中性或者鹽的形式被配制如一種組合物中。藥學(xué)上可接受的鹽包括，酸加成鹽，例如，與肽組合物的游離氨基形成的鹽、或者與無(wú)機(jī)酸形成的鹽，例如，與鹽酸或者磷酸形成的鹽，或者與有機(jī)酸(例如醋酸、草酸、酒石酸或者扁桃酸)形成的鹽。與游離羧基形成的鹽還可來(lái)源于無(wú)機(jī)堿(例如，比方說(shuō)鈉、鉀、銨、鈣或者氫氧化鐵)；或者有機(jī)堿(例如異丙胺、三甲胺組氨酸或者普魯卡因)。

在所述組合物處于液體狀態(tài)的實(shí)施方案中，所述載體可以是一種溶劑或者分散介質(zhì)，包括但是不限于，水、乙醇、多元醇(例如，甘油，丙二醇和液態(tài)的聚乙二醇等等)、脂類(例如三酸甘油酯、植物油、脂質(zhì)體)及其結(jié)合。通過(guò)例如使用包覆層(例如卵磷脂)；通過(guò)維持在載體分散體系(例如，液態(tài)多元醇或者脂類)中要求的顆粒尺寸；通過(guò)利用表面活性劑(例如，羥丙甲纖維素)或者這些方法的結(jié)合來(lái)維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。在許多情況下，優(yōu)選的包括等滲劑，例如，比方說(shuō)，糖、氯化鈉或其結(jié)合。

在某些實(shí)施方案中，制備所述組合物用于例如口服吸收給藥。在這些實(shí)施方案中，所述固體組合物可以包括，例如，溶液、懸浮液、乳化液、片劑、藥丸、膠囊劑(例如，硬殼膠囊或者軟殼膠囊)、持續(xù)釋放制劑、口腔組合物、錠劑、酏劑、懸浮液、糖漿、壓片或其結(jié)合。口服組合物可以直接被整合入飲食的食物中。優(yōu)選的用于口服給藥的載體包括惰性稀釋劑，可吸收的可食載體或者其結(jié)合。所述口服組合物可以被制成糖漿或者酏劑。糖漿或者酏劑可以包括，例如，至少一個(gè)活化劑、甜味劑、防腐劑、增味劑、著色劑、防腐劑或者其結(jié)合。

在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，口服組合物可以包括一種或者一種以上粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、增味劑，及其結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，組合物可以包括以下一種或者更多種：粘合劑(例如，比方說(shuō)，黃芪膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠或者其結(jié)合)；賦形劑(例如，比方說(shuō)，磷酸二鈣鹽、甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂或者其結(jié)合)；崩解劑(例如，比方說(shuō)，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉藻朊酸或者其結(jié)合)；潤(rùn)滑劑(例如，比方說(shuō)，硬脂酸鎂)；甜味劑(例如，比方說(shuō)，蔗糖、乳糖、糖精或者其結(jié)合)；增味劑(例如，比方說(shuō)，胡椒薄荷、冬青油、櫻桃香料、橙香料，等等)；或者前述的結(jié)合。當(dāng)所述劑量單位形式是膠囊劑時(shí)，除了上述類型的材料之外還包括其他載體，例如液態(tài)載體。還可以存在各種其他材料，作為包覆層或者用于修飾劑量單位的外觀形態(tài)。例如，片劑、藥丸或者膠囊劑可以被蟲(chóng)膠、糖或者二者涂布。

通過(guò)將需要量的所述活性化合物整合入適當(dāng)?shù)娜軇┲?，根?jù)需要可以選擇性的包括上面列舉的其他成分，隨后過(guò)濾滅菌可以制備無(wú)菌可注射溶液。通常，通過(guò)將各種無(wú)菌的活性成分整合到包括堿性分散媒介物或其另一種其他成分的無(wú)菌媒介物中制備分散液。對(duì)于用于制備無(wú)菌可注射溶液、懸浮液或者乳化液的無(wú)菌粉末來(lái)講，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，這會(huì)產(chǎn)生活性成分與其他來(lái)自無(wú)菌過(guò)濾溶液的需要的組分的粉末。所述液體介質(zhì)應(yīng)該是根據(jù)需要適當(dāng)緩沖的，并且所述液體稀釋劑在用足夠的鹽水或者葡萄糖注射前首先賦與等滲性。本發(fā)明還包括制備用于直接注射的高濃度組合物，其中，通過(guò)使用二甲亞砜作為溶劑產(chǎn)生極快的滲透性，將高濃度活性試劑傳遞到小面積中去。

優(yōu)選的，這里公開(kāi)的組合物在其制備和儲(chǔ)存在標(biāo)準(zhǔn)大氣條件下是穩(wěn)定的，并且防止微生物(例如，細(xì)菌和真菌)的污染作用?？梢岳斫?，內(nèi)毒素污染應(yīng)該被維持在最低限度，作為安全水平，例如，少于0.5納克/毫克蛋白質(zhì)。

在具體的實(shí)施方案中，這里公開(kāi)的組合物可以包括延遲吸收試劑，從而實(shí)現(xiàn)可注射組合物的延遲吸收，所述延遲吸收試劑例如，舉例來(lái)說(shuō)，單硬脂酸鋁、明膠或者其結(jié)合。

外周神經(jīng)：坐骨神經(jīng)

關(guān)于坐骨神經(jīng)，本發(fā)明的組合物能夠增加肌肉量、改善肌肉強(qiáng)度并減少肌肉萎縮。尤其是，給藥GGF2能夠增加外周神經(jīng)包裹組織中的肌纖維大小并且減少纖維化。舉例來(lái)說(shuō)，給藥GGF2能夠增加骨骼肌的肌纖維大小并且減少纖維化。本發(fā)明還提供了用于預(yù)防脫髓鞘作用和/或誘導(dǎo)受損傷的外周神經(jīng)髓鞘再生的組合物和方法。在這里公開(kāi)的組合物和方法的某些實(shí)施方案中，所述組合物和方法用于預(yù)防脫髓鞘作用和/或誘導(dǎo)受損傷坐骨神經(jīng)的髓鞘再生，包括肌肉中受損傷的坐骨神經(jīng)。這里公開(kāi)的方法中的一種示例性的肌肉包括但不局限于骨骼肌。

在一個(gè)實(shí)施方案中，這里公開(kāi)的內(nèi)容提供了一種組合物，所述組合物包括有效量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，能夠改善有風(fēng)險(xiǎn)患有外周神經(jīng)損傷或者已經(jīng)患有外周神經(jīng)損傷的主體中的肌肉功能。改善的肌肉功能包括，舉例來(lái)說(shuō)，但不局限于骨骼肌功能。改善的肌肉功能的實(shí)施例包括，但是不局限于，增加肌肉塊(例如，增加肌纖維大小)、增加肌肉力量、減少肌肉萎縮和/或減少肌肉纖維化。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白是GGF2。

外周神經(jīng)：海綿狀神經(jīng)

大鼠勃起功能障礙模型是一種標(biāo)準(zhǔn)的、被接受的并廣泛公開(kāi)的外周神經(jīng)損傷模型。在這種具體的方法中，通過(guò)鉗子按壓使海綿狀神經(jīng)受傷。.在任意其他的外周神經(jīng)中可以使用相同的按壓或者擠壓傷作為模型。在海綿狀神經(jīng)損傷模型中，功能性缺陷是勃起功能障礙。由外傷神經(jīng)損傷的常見(jiàn)和持續(xù)的病理生理特征可見(jiàn)，這種海綿狀神經(jīng)損傷是前列腺切除術(shù)導(dǎo)致?lián)p傷的杰出模型，并且是外傷性外周神經(jīng)損傷的一般模式。

外周神經(jīng)損傷會(huì)誘導(dǎo)位于脊神經(jīng)后根神經(jīng)節(jié)(DRG)上的感覺(jué)神經(jīng)元細(xì)胞群發(fā)生變化；這些變化能夠促進(jìn)存活率和軸突再生。在適宜條件下，例如，在擠壓傷之后，最多量神經(jīng)纖維被成功再生。然而，在許多臨床相關(guān)的環(huán)境中，外傷或者疾病誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷會(huì)產(chǎn)生較差的后果，只能實(shí)現(xiàn)有限的功能恢復(fù)，并且可以想到該恢復(fù)常常延遲。在此情況下，神經(jīng)性疼痛或者慢性疼痛狀態(tài)會(huì)擴(kuò)大。

疼痛通常與感覺(jué)神經(jīng)損傷或者破壞有關(guān)，并且會(huì)導(dǎo)致受影響部位的戒備和固定。因此，傷害感受(神經(jīng)元信號(hào)屈服于痛覺(jué))伴隨著促進(jìn)快速愈合的機(jī)制，即使會(huì)引起使人不愉快的感覺(jué)和情緒。然而，在許多病態(tài)情況中，傷害感受的輸入可以導(dǎo)致對(duì)有機(jī)體非常有害的功能性變化。

神經(jīng)損傷會(huì)使初級(jí)傳入神經(jīng)元的許多性質(zhì)發(fā)生改變，并改變他們?cè)诩顾柚械闹袠行躁P(guān)系，導(dǎo)致異常性疼痛(通常無(wú)害的刺激所造成的疼痛感覺(jué))、痛覺(jué)過(guò)敏(對(duì)任何給定疼痛刺激的過(guò)度反應(yīng))和感受域(即當(dāng)使用刺激時(shí)感到"疼痛"的區(qū)域)擴(kuò)大。大多數(shù)慢性疼痛情況來(lái)自于中樞性神經(jīng)組織或者外周神經(jīng)組織的破壞。

陽(yáng)痿或者還被叫做勃起功能障礙(ED)是一種常見(jiàn)的問(wèn)題，單單在美國(guó)就影響了兩千萬(wàn)人。陰莖勃起是一種神經(jīng)血管現(xiàn)象，取決于神經(jīng)完整性和功能性血管。在性刺激的作用下，神經(jīng)傳導(dǎo)子(尤其是一氧化氮)從海綿狀神經(jīng)末端和內(nèi)皮細(xì)胞中釋放。作為結(jié)果，動(dòng)脈和小動(dòng)脈平滑肌松弛，增加了動(dòng)脈流動(dòng)。封閉在陰莖海綿主體中的血液使陰莖處于勃起狀態(tài)。

在本國(guó)內(nèi)，由于根治性骨盆手術(shù)(例如，前列腺、膀胱或者直腸癌)而造成的海綿狀神經(jīng)損傷是醫(yī)源性勃起功能失調(diào)(ED)最常見(jiàn)的原因。在根治性前列腺切除術(shù)之后，ED是主要病狀。例如，盡管引入了神經(jīng)保留手術(shù)技術(shù)，對(duì)于在器官限制的前列腺癌后經(jīng)過(guò)雙邊海綿體神經(jīng)恢復(fù)過(guò)程的男性來(lái)說(shuō)，手術(shù)后效率在30％到80％范圍內(nèi)(Wang,J Sex Med,4:1085-97,2007)。

到目前為止已經(jīng)調(diào)查了多種神經(jīng)調(diào)節(jié)策略；然而沒(méi)有任何一種療法能夠在海綿狀神經(jīng)受傷之前、受傷時(shí)、受傷后均起到神經(jīng)保護(hù)作用并誘導(dǎo)神經(jīng)再生(Michl et al.,J Urol 176:227-31,2006；Burnett and Lue,J Urol 176:882-7,2006).盡管對(duì)骨盆惡性腫瘤外科手術(shù)和放射性治療后同時(shí)進(jìn)行神經(jīng)修復(fù)手術(shù)，但是仍然需要一種新的在治療后保持并修復(fù)勃起功能的方法。

可以觀察到從末梢到損傷位點(diǎn)的明確定義的細(xì)胞變化模型，從軸突和髓鞘退化開(kāi)始、巨噬細(xì)胞入侵、吞噬作用到雪旺式細(xì)胞分化，形成賓格內(nèi)氏帶。這些變化改善受傷的神經(jīng)環(huán)境極其軸突再生能力。當(dāng)軸突從“傳達(dá)”模式轉(zhuǎn)變成生長(zhǎng)模式時(shí)，表達(dá)蛋白質(zhì)(GAP-43、微管蛋白、肌動(dòng)蛋白)、新的神經(jīng)肽和細(xì)胞因子時(shí)，營(yíng)養(yǎng)因子可以促進(jìn)神經(jīng)存活率。由于末梢神經(jīng)殘干支持和再生神經(jīng)容量是不確定的，因此需要新的增加生長(zhǎng)能力的方法(Fu and Gordon,Mol Neurobiol.14:67-116,1997).

實(shí)施例

實(shí)施例1：在外周神經(jīng)損傷后使用GGF2治療肌肉萎縮

這里描述的研究的整體設(shè)計(jì)如下表1所述。

表1.研究設(shè)計(jì)

在此研究中使用8-10周大的雄性Spraque Dawley(CD)大鼠。動(dòng)物根據(jù)其體重被隨機(jī)分配在不同的手術(shù)組中，并隨后在坐骨神經(jīng)分叉附近8-10毫米經(jīng)受坐骨神經(jīng)擠壓傷(圖1)或者在右后肢接收假手術(shù)。在受傷之后二十四小時(shí)，用單一劑量的GGF2(2.6毫克/千克，靜脈給藥)或者媒介物治療受到坐骨神經(jīng)擠壓傷的動(dòng)物，然后每周給藥2次，持續(xù)整個(gè)研究時(shí)間。受傷后，代表所有治療組的動(dòng)物在第2、4、6周被安樂(lè)死。使用開(kāi)他敏/甲苯噻嗪深度麻醉動(dòng)物，并通過(guò)穿心灌注磷酸質(zhì)緩沖鹽水隨后輸入4％多聚甲醛至安樂(lè)死。收集側(cè)面腓腸肌和末梢坐骨神經(jīng)，裝入并在受傷的側(cè)面切片。用蘇木精和曙紅色染料(H&E)、麥森三色染色、和甲苯胺藍(lán)對(duì)側(cè)面腓腸肌肌肉切片(3-5微米)染色，用于評(píng)價(jià)肌肉纖維化和肌纖維在橫切面的分布(圖2)。與假損傷動(dòng)物相比，在擠壓傷后可以觀察到顯著增加的纖維化。在損傷后4周和6周，與媒介物治療的動(dòng)物相比，使用GGF2-治療的動(dòng)物中能夠觀察到纖維化的顯著減少。在第6周，與媒介物治療相比，GGF2將損傷導(dǎo)致的纖維化減少至接近正常水平。

進(jìn)一步的，所述末梢坐骨神經(jīng)被裝入塑料中并切片。用H&E、luxol速藍(lán)和甲苯胺藍(lán)染色分離的切片，評(píng)價(jià)擠壓傷后的脫髓鞘程度。具體的說(shuō)，圖3是一系列顯微照片(Trichrome 100X)，顯示了損傷后2和6周假損傷動(dòng)物[A]、媒介物治療的動(dòng)物[B]和GGF-2治療的動(dòng)物[C]代表性的肌肉切片。在假損傷動(dòng)物中，所述肌纖維在損傷后2和6周處于正常限制內(nèi)。擠壓傷后，纖維化增加并且肌纖維大小減少。在損傷后第4和6周，GGF2療法能夠顯著的減少肌肉纖維化。另外，與媒介物治療的動(dòng)物相比，GGF2治療的動(dòng)物體內(nèi)的肌纖維大小也有改善。

在神經(jīng)擠壓傷之后，目標(biāo)肌肉纖維化隨著時(shí)間增加。進(jìn)一步的，與假損傷參照相比，在擠壓傷的動(dòng)物體內(nèi)，目標(biāo)肌肉內(nèi)的肌纖維大小分布向著較小橫截面區(qū)域傾斜。在損傷之后第4和6周，GGF2療法能夠顯著的減少肌肉纖維化。

除了其對(duì)纖維化的作用之外，GGF2療法能夠在損傷后第4周和第6周促進(jìn)肌纖維面積向著增加的大小變化(即，更像假損傷參照)(圖4A-4C)。具體地說(shuō)、圖4顯示了在損傷后第2、4或者6周觀察到的側(cè)面腓腸肌肉肌纖維面積分布。在損傷后第2周，兩個(gè)擠壓傷小組的分布(中位數(shù)＝1501-2000平方微米)明顯不同于假損傷組(中位數(shù)＝3001-3500平方微米)。在第4周和第6周，假損傷組顯示向右移動(dòng)，直到切片面積超過(guò)5000平方微米。媒介物治療組的中位數(shù)持續(xù)移向更小面積(2001-2500平方微米)。GGF2療法顯著改善肌纖維大小，在第4周(2501-3000平方微米)和第6周(3001-3500平方微米)。

實(shí)施例2:在受傷后GGF2改善坐骨神經(jīng)的髓鞘再生

對(duì)受傷的末梢神經(jīng)殘端進(jìn)行初步分析表明，在受傷后第2、4、6周擠壓傷產(chǎn)生軸突的脫髓鞘作用。另外，在受傷之后軸突間還發(fā)生軸索腫脹、沃勒變性、輕度炎癥和纖維化?？梢宰⒁獾剑S索損傷超過(guò)橫截面神經(jīng)束的一半。在受傷的遠(yuǎn)端坐骨神經(jīng)處，與媒介物治療的參照相比，GGF2在第4周和第6周改善髓鞘再生。

具體的說(shuō)，圖5顯示了在坐骨神經(jīng)脂質(zhì)蛋白染色(PLP)中進(jìn)行髓鞘半定量評(píng)估。在第2、4、6周，假損傷動(dòng)物的坐骨神經(jīng)橫截面處于正常限制范圍內(nèi)。在媒介物和GGF2治療組中則存在各種各樣的嚴(yán)重程度不同的病變；然而，與媒介物治療的動(dòng)物相比，GGF2定性減少脫髓鞘程度。

實(shí)施例3:海綿狀神經(jīng)損傷的鼠模型

海綿狀神經(jīng)損傷的老鼠模型通常使用以下方法。用異氟醚麻醉老鼠。將動(dòng)物放置在加熱墊上維持體溫在37℃。腹部剃光并用防腐劑Clinidin溶液(聚維酮碘)擦洗。從下腹部中線打開(kāi)腹腔，露出海綿狀神經(jīng)和主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)。通過(guò)用止血鉗擠壓海綿狀神經(jīng)兩側(cè)2分鐘來(lái)造成海綿狀神經(jīng)損傷。在涉及神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的研究中，在受傷之前，兩個(gè)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白組已經(jīng)進(jìn)行過(guò)48小時(shí)的治療。

大鼠擠壓模型能提供簡(jiǎn)單的、可復(fù)制的且非常可靠的勃起功能減少。這一技術(shù)被廣泛應(yīng)用并且已經(jīng)有許多使用該技術(shù)的研究被報(bào)道。在擠壓傷之后不需要檢測(cè)勃起功能，其勃起功能的減少是可預(yù)計(jì)的，并且通常在擠壓傷后大約5周進(jìn)行功能性檢測(cè)。

在損傷海綿狀神經(jīng)之后，通過(guò)2-3次間斷縫合法將腹腔的腹部肌肉和筋膜層雙層閉合(使用可吸收縫合線)。使用無(wú)芯(PDS或者涂布的Vicryl)縫線材料進(jìn)行皮下(包埋的)連續(xù)縫合閉合皮膚。搶先給藥丁丙諾菲陣痛劑(手術(shù)結(jié)束前10分鐘)并且在手術(shù)后每6-12小時(shí)給藥一次進(jìn)行48小時(shí)，控制疼痛。

手術(shù)后大約5周，用氯胺酮(100毫克/千克，IP)和甲苯噻嗪(5毫克/千克)麻醉大鼠。從同一切口處暴露海綿體下部，然后用23G針插入左下部并連接專門設(shè)計(jì)來(lái)測(cè)定海綿體內(nèi)壓力的軟件，從而進(jìn)行功能性研究。在測(cè)量之前，用1.5毫安的電極刺激海綿狀神經(jīng)。測(cè)量時(shí)間大約為15分鐘。在麻醉恢復(fù)前，心包內(nèi)注射euthanyl致死大鼠，收集組織(海綿狀神經(jīng)、MPG、陰莖、前列腺)進(jìn)行光顯微鏡檢查和分子和組織學(xué)評(píng)價(jià)。

如圖6所顯示的海綿體內(nèi)壓力(ICP)數(shù)據(jù)所示，受傷后五周對(duì)海綿狀神經(jīng)進(jìn)行電刺激顯示，兩個(gè)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療組的神經(jīng)保存和末端器官功能有顯著提高，并且當(dāng)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白劑量更高時(shí)，這一提高更為顯著。首先用非重復(fù)測(cè)量ANOVA分析和Bonferroni t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，在p<0.05下考慮顯著性。所有的結(jié)果都表示為平均值±SEM。如圖7所示，當(dāng)與主動(dòng)脈壓均一化時(shí)，改變也被顯著改善了。

從組織學(xué)角度看，根據(jù)MPG中的氟金逆行運(yùn)輸?shù)臉?biāo)記數(shù)據(jù)顯示NRG治療增加了完整的神經(jīng)纖維數(shù)量，并且改善了神經(jīng)元一氧化氮聚合酶和VaChT在陰莖神經(jīng)和平滑及組織中的保存量。這說(shuō)明這里存在行為的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制和/或神經(jīng)再生性機(jī)制。同時(shí)，與沒(méi)有受到神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的擠壓傷動(dòng)物相比，還減少了平滑肌凋亡。

實(shí)施例4:氟金組織學(xué)方法

為了進(jìn)行該方法，肋內(nèi)注射4％的氟金，并且在一周后收集主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)并固定在4％的多聚甲醛、0.1M磷酸鹽緩沖液中，固定整夜，然后放入20％的蔗糖。低溫切片成厚度為20pm的薄片。使用超位數(shù)顯微鏡和成像系統(tǒng)照相，隨后進(jìn)行閃礦類研究，對(duì)氟金增加的細(xì)胞計(jì)數(shù)。此后，隨機(jī)選擇MPG樣品載玻片(每個(gè)動(dòng)物選擇10個(gè))進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)確定完整神經(jīng)的數(shù)目。(參見(jiàn)，例如，Dail,W.G.,Trujillo,D.,de la Rosa,D.and Walton,G.:Autonomic innervation of reproductive organs:analysis of the neurons whose axons project in the main penile nerve in the pelvic plexus of the rat.Anat Rec,224:94,1989；Laurikainen A,Hiltunen J 0,Vanhatalo S,Klinge E,Saarma M:Glial cell line-derived neurotrophic factor is expressed in penis of adult rat and retrogradely transported in penile parasympathetic and sensory nerves.(Cell Tissue Res 2000,302:321-9.)因此，使用氟金存在一種逆行性示蹤方案。該方法結(jié)果提供的信息顯示神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療方法協(xié)助這些海綿狀神經(jīng)再生并重新映射其目標(biāo)(陰莖的海綿主體)和/或協(xié)助海綿狀神經(jīng)的神經(jīng)保護(hù)作用。

因此，氟金被注入目標(biāo)器官，在此情況下目標(biāo)器官是陰莖的主體。此后，從末端器官神經(jīng)末梢吸收。該吸收顯示神經(jīng)纖維被保存和/或重新生長(zhǎng)進(jìn)入被注射的面積。一旦氟金被吸收，氟金以一種逆行方式在神經(jīng)軸突中運(yùn)輸并且標(biāo)記物聚集在MPG的初級(jí)神經(jīng)(主要盆腔神經(jīng)節(jié))中。

圖8顯示了代表性的顯示了每個(gè)治療組((組A)正常、(組B)擠壓傷、(組C)擠壓傷+GGF2)三個(gè)動(dòng)物中主要盆腔神經(jīng)節(jié)(MPG)的氟金標(biāo)記。正常動(dòng)物(組A)顯示了在不存在神經(jīng)損傷的情況下的退行性標(biāo)記物量。擠壓傷動(dòng)物(組B)顯示了由于氟金標(biāo)記不能被傳遞回MPG，受傷后完整神經(jīng)纖維的急劇減少。擠壓傷+GGF2動(dòng)物(組C)：顯示了增加量的氟-金標(biāo)記的MPG細(xì)胞，說(shuō)明在受傷后使用GGF2治療能夠保留更多的神經(jīng)纖維。

圖9提供了MPG中的氟金標(biāo)記的量。結(jié)果顯示，正常動(dòng)物在MPG中具有大量細(xì)胞體標(biāo)記。在擠壓傷之后，被標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量急劇減少，這是神經(jīng)纖維被破壞因此無(wú)法逆行運(yùn)輸標(biāo)記回到MPG的結(jié)果。但是，GGF2治療法能夠提高完整的神經(jīng)纖維數(shù)量，完整的神經(jīng)纖維能夠?qū)⒎饛年幥o逆行運(yùn)輸會(huì)MPG，從而產(chǎn)生大量標(biāo)記的細(xì)胞體。.

實(shí)施例5：免疫組織化學(xué)

用nNos、VaChT染色主體鄰近部分的縱向低溫切片。用包含1％Triton-X的三羥甲基氨基甲烷緩沖液洗滌。用5％的正常山羊血清封閉組織，然后在4℃下培養(yǎng)整夜：

nNOs(Sigma公司；1/1000)或者

VaChT(Abcam公司；1/150)或者

TH(Millipore公司；1/5000)。

在沖洗幾次之后，在山羊-抗-兔HRP和驢-抗-山羊(1/1000)中培養(yǎng)切片1小時(shí)，然后在包含0.2％硫酸銨鎳和0.03％過(guò)氧化氫的DAB溶液中培養(yǎng)10分鐘。在最后一次洗滌之后，使薄片脫水，在Permount(Fisher Scientific公司)的二甲苯和蓋玻片中變澄清。

nNos染色：

海綿體本體內(nèi)的海綿狀神經(jīng)軸突末端釋放一氧化氮(NO)，該NO與內(nèi)皮NO一起造成平滑肌松弛，引發(fā)陰莖勃起的血液動(dòng)力學(xué)改變并有效維持脹滿。按照目前的理解，損傷之后海綿狀神經(jīng)功能的恢復(fù)取決于，至少部分的取決于剩余神經(jīng)組織的軸突再生和末端神經(jīng)成功的功能性神經(jīng)再分布(允許神經(jīng)NO活化)。在海綿狀神經(jīng)損害后，陰莖動(dòng)物模型研究中可以觀察到明確定義的病理生理變化。這些病理生理變化可以是神經(jīng)失動(dòng)癥乃至致命的軸突損傷，并且還包括平滑肌的凋亡、內(nèi)皮凋亡、減少一氧化氮聚合酶(NOS)神經(jīng)密度、上調(diào)節(jié)纖維增殖性細(xì)胞因子，例如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、平滑肌纖維化或者損失、或者病理生理信號(hào)傳導(dǎo)反應(yīng)，例如，改變的聲音刺猬蛋白。

另外，在延長(zhǎng)的恢復(fù)階段，長(zhǎng)時(shí)間不能勃起、次級(jí)神經(jīng)至海綿狀神經(jīng)失動(dòng)癥被認(rèn)為能夠激發(fā)海綿狀平滑肌結(jié)構(gòu)進(jìn)一步破壞，這是由于海綿體不能在柔軟和勃起狀態(tài)正常循環(huán)的結(jié)果(Bella A J,Lin G,Fandel T M,Hickling D R,Morash C,Lue T F.Nerve growth factor modulation of the cavernous nerve response to injury.J Sex Med 6Suppl 3:347-352,2009)。

海綿狀nNOS是一種公認(rèn)的海綿狀神經(jīng)保存量標(biāo)記物(參見(jiàn)，例如onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1464-410X.2010.09364.x/full).該方案的結(jié)果顯示根據(jù)實(shí)施例3的方法造成的大鼠雙邊海綿狀神經(jīng)損傷之后的神經(jīng)保護(hù)性和/或神經(jīng)再生作用。

染色結(jié)果強(qiáng)度(代表性的鄰近主體薄片、5個(gè)隨機(jī)選擇的載玻片觀察閃爍，每組5個(gè)動(dòng)物)說(shuō)明了使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的主體中nNOS染色保存量。

圖10顯示了代表性的nNos染色水平。染色強(qiáng)度顯示存在nNOS。該工作的結(jié)果包括正常組織染色(組A)。比較而言，在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷之后nNos染色顯著損失(組B)。在擠壓傷后使用GGF2治療(組C)可以觀察到陰莖本體的海綿體神經(jīng)末端保留的nNOS染色，說(shuō)明海綿狀神經(jīng)的存活率和/或再生的比例增加。染色強(qiáng)度說(shuō)明了使用GGF2治療的nNOS染色保存量。

囊狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VaChT)染色：

支配陰莖的盆腔神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元能夠表達(dá)nNOS和膽堿能標(biāo)記物，而通過(guò)交感神經(jīng)干，陰莖交感神經(jīng)去甲腎上腺素激活的神經(jīng)分布大量上升并且不通過(guò)陰莖神經(jīng)或者盆腔神經(jīng)節(jié)。該方法結(jié)果提供的信息顯示，根據(jù)囊狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VaChT)的肋內(nèi)染色，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療方法協(xié)助這些海綿狀神經(jīng)再生并重新映射其目標(biāo)(陰莖的海綿主體)和/或協(xié)助海綿狀神經(jīng)的神經(jīng)保護(hù)作用。雖然手術(shù)后ED的初級(jí)病因是神經(jīng)原的，但對(duì)嚙齒動(dòng)物的研究表明在陰莖神經(jīng)損傷之后還發(fā)生形態(tài)學(xué)和功能變化(參見(jiàn)，例如，Keast J R.Plasticity of pelvic autonomic ganglia and urogenital innervation.Int Rev Cytol 2006；248:141-208；Andersson K E,Hedlund P,Alm P.Sympathetic pathways and adrenergic innervation of the penis.Int J Impot Res 2000；12:55-12；Mulhall J M,Bella A J,Briganti A,McCullough A,Brock G.Erectile Function Rehabilitation in the Radical Prostatectomy Patient.J Sex Med 7(4),1687-1698,2010)。

染色結(jié)果強(qiáng)度(代表性的鄰近主體薄片、5個(gè)隨機(jī)選擇的載玻片觀察閃爍，每組5個(gè)動(dòng)物)說(shuō)明了使用GGF2治療的大鼠中VaChT染色保存量。

圖12顯示了代表性的囊狀乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VaChT)免疫組織化學(xué)染色水平。染色強(qiáng)度顯示存在VaChT.該工作的結(jié)果包括正常組織染色(組A)和在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷之后VaChT染色顯著損失(組B)。相反，組C中可以觀察到陰莖本體的海綿體神經(jīng)末端保留的VaChT染色，說(shuō)明在擠壓傷后使用GGF2治療能夠增加海綿狀神經(jīng)的存活率和/或再生的比例(組C)。染色強(qiáng)度說(shuō)明了使用GGF2治療的VaChT染色保存量。

TH染色：

TH是一種腎上腺素神經(jīng)纖維的標(biāo)記物，用于在陰莖本體保持神經(jīng)。陰莖鄰近部分被縱向低溫切片并用一元抗體染色，所述一元抗體是抗兒茶酚胺合成標(biāo)記物，酪氨酸羥化酶產(chǎn)生的(Impaired Cavernous Reinnervation after Penile Nerve Injury in Rats with Features of the Metabolic Syndrome Matthew R.Nangle,BSc,PhD,Joseph Proietto,MBBS,PhD,and Janet R.Keast,BSc,PhD J Sex Med 2009；6:3032-3044)。

染色強(qiáng)度結(jié)果顯示TH的存在。實(shí)際實(shí)現(xiàn)的染色結(jié)果強(qiáng)度(代表性的鄰近主體薄片、5個(gè)隨機(jī)選擇的載玻片觀察閃爍，每組5個(gè)動(dòng)物)說(shuō)明了使用GGF2治療的主體中TH染色保存量。圖11提供了代表性的酪氨酸氫化酶(TH)水平染色。該工作的結(jié)果包括正常組織染色(組A)，以及在海綿體神經(jīng)受到擠壓傷之后TH染色顯著損失(組B)。組C顯示在擠壓傷后使用GGF2治療(組C)可以觀察到陰莖本體的海綿體神經(jīng)末端保留的TH染色，相當(dāng)于陰莖神經(jīng)分布的保存量普遍增加。染色強(qiáng)度顯示使用GGF2治療后TH染色的保存量具有增加的趨勢(shì)。

實(shí)施例6：GGF2在海綿狀神經(jīng)損傷導(dǎo)致的勃起功能障礙大鼠模型中起到神經(jīng)保護(hù)作用

勃起功能障礙(ED)是一種根治性前列腺切除術(shù)之后常見(jiàn)的并發(fā)癥。普遍成人這是由于陰莖神經(jīng)病，然而，沒(méi)有有效的療法。神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子2(GGF2)是生長(zhǎng)因子神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白族的成員，據(jù)顯示能夠保護(hù)神經(jīng)元不受損傷，并在大范圍神經(jīng)疾病的動(dòng)物模型中刺激生長(zhǎng)。我們之前的數(shù)據(jù)說(shuō)明皮下傳遞(SC)的GGF2是治療海綿狀神經(jīng)(CN)損傷的可行的療法。在該研究中，分析能夠恢復(fù)勃起功能(EF)的GGF2的有效劑量并檢驗(yàn)其在CN殘存方面的作用。

經(jīng)歷過(guò)雙邊海綿狀神經(jīng)(CN)擠壓傷(BCI)或者假外科(參照)手術(shù)的成年雄性大鼠(平均體重大約為325-350克)被分成如下的組(n＝10-12/組，雙盲藥物療法)：參照+媒介物(組A)；參照+GGF2(15毫克/千克)(組B)；BCI+媒介物(組E)；BCI+GGF2(5毫克/千克)(組C)；BCI+GGF2(15毫克/千克)(組D)。在手術(shù)前24小時(shí)皮下給藥(sc)GGF2(第一劑量)、手術(shù)后24小時(shí)皮下給藥(sc)GGF2(第二劑量)并每周給藥一次知道研究結(jié)束，BCI或者假外科手術(shù)后5周(第3劑量到第7劑量)。在該療法結(jié)束的時(shí)候，通過(guò)檢測(cè)海綿體內(nèi)壓力(ICP)對(duì)0.3、1和4伏特CN電刺激的反應(yīng)來(lái)監(jiān)視勃起功能(EF)。對(duì)CN進(jìn)行電子顯微鏡分析并定量無(wú)髓神經(jīng)纖維。

圖13顯示了各個(gè)實(shí)驗(yàn)組從GGF2或者媒介物第一劑量到最末次劑量所增加的體重。

與參照+媒介物相比，在0.3和1伏特時(shí)，BCI+媒介物和BCI+GGF2(15毫克/千克)組中EF顯著下降，在BCI+GGF2組(5毫克/千克)中則沒(méi)有(p>0.05)(圖14A和B)。在4伏特時(shí)，與BCI+媒介物相比，BCI+GGF2(5和15毫克/千克)組中EF顯著增加(p>0.05)，并且與參照+媒介物相同(p>0.05)(圖14A和B)。在BCI+GGF2(5毫克/千克)組中，與BCI+媒介物組相比，切除神經(jīng)但保持髓鞘纖維的雪旺式細(xì)胞數(shù)目顯著降低(p<0.05)，無(wú)髓神經(jīng)纖維直方圖顯示向右轉(zhuǎn)移，說(shuō)明每個(gè)雪旺式細(xì)胞無(wú)髓軸突數(shù)目的增加(圖15)。

CN擠壓傷之后，用5毫克/千克的GGF2皮下給藥治療可以有效的保存大鼠中的EF，并增加幸存的無(wú)髓神經(jīng)纖維的數(shù)目。這些結(jié)果顯示GGF2是一種有效的陰莖神經(jīng)分布的神經(jīng)保護(hù)劑，能夠提供前列腺手術(shù)后一種新的治療或者預(yù)防ED的治療方法。

實(shí)施例7：作為替換的實(shí)施方案

外周神經(jīng)損傷幾乎存在于所有的外科手術(shù)中。神經(jīng)損傷的可能性與外科手術(shù)中組織解剖的位置和程度有關(guān)。舉例來(lái)說(shuō)，由于外周神經(jīng)損傷，乳房切除術(shù)能引起頻繁的并發(fā)癥，包括腋下和手臂麻木(例如損傷肋間臂神經(jīng))、翼狀肩胛麻木(貝爾氏神經(jīng)損傷)、背闊肌麻痹(胸背神經(jīng)損傷)。(See Watt-Boolsen et al.,1988；Aitken and Minton,1983).

因此，在乳房切除術(shù)之前、之后或者之前和之后都使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，能夠限制神經(jīng)損傷和/或增加外周神經(jīng)功能的恢復(fù)。在手術(shù)前24小時(shí)用適當(dāng)劑量的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療計(jì)劃進(jìn)行乳房切除術(shù)的病人。選擇性地，還可以在手術(shù)后一段時(shí)間知道大約6周或者更長(zhǎng)的時(shí)間治療病人來(lái)增加神經(jīng)恢復(fù)。在作為替換的實(shí)施方案中，只在手術(shù)前或者只在手術(shù)后治療。如這里所示，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白用于預(yù)防腫瘤切除手術(shù)(前列腺切除術(shù)、乳房切除術(shù)、甲狀腺切除術(shù)，等等)后的神經(jīng)損傷。人們注意到神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白可以用作腫瘤細(xì)胞形成和生長(zhǎng)的啟動(dòng)子和抑制子(Atlas et al.,2003；Chua et al.,2009)。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白療法可以或者不可以與患有某些腫瘤的病人有禁忌。只有足夠安全研究證實(shí)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白不增加這種腫瘤的生長(zhǎng)時(shí)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白才可以用于患有erbB陽(yáng)性腫瘤的病人。

而且，被治療的神經(jīng)損傷來(lái)自外科手術(shù)，所述外科手術(shù)不局限于乳房切除術(shù)和前列腺切除術(shù)。在任何包括明顯解刨和/或切除術(shù)的外科手術(shù)中通常會(huì)存在神經(jīng)損傷。這些外科手術(shù)可能包括但是不局限于上肢手術(shù)、手部手術(shù)、膝蓋手術(shù)/置換、臀部手術(shù)/置換、肘手術(shù)/置換、頸部動(dòng)脈和靜脈解剖手術(shù)、甲狀腺手術(shù)、扁桃體切除術(shù)、手部和腳部手術(shù)。外周神經(jīng)損傷常見(jiàn)于骨盆、腹部手術(shù)和直腸結(jié)腸手術(shù)。在口部和臉部手術(shù)中還可能發(fā)生神經(jīng)損傷。

在手術(shù)中除了通過(guò)解剖和切除直接損傷神經(jīng)之外，神經(jīng)損傷還由手術(shù)期間病人位置的壓縮或者伸展、在連接位點(diǎn)處的壓縮，或者被單、阻尼器、夾子、帶子或者其他可能壓到組織的材料處獲得。這是手術(shù)或者不適當(dāng)?shù)募夹g(shù)不可避免的結(jié)果。無(wú)論外周神經(jīng)損傷的產(chǎn)生或者病因?qū)W是什么，據(jù)發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白均可以預(yù)防和/或治療這種損傷。

在人體內(nèi)，對(duì)使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的病人和使用安慰劑參照的病人受到影響的神經(jīng)區(qū)域進(jìn)行感覺(jué)和/或動(dòng)力評(píng)價(jià)，所得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明了NRG對(duì)于預(yù)防或者治療外周神經(jīng)損傷的效力。例如，可以通過(guò)感覺(jué)功能標(biāo)準(zhǔn)神經(jīng)學(xué)方法檢驗(yàn)腋下麻木，包括檢驗(yàn)異常性疼痛、痛覺(jué)過(guò)敏、感覺(jué)閾值或者敏銳度(二點(diǎn)辨別覺(jué))。在本領(lǐng)域內(nèi)這些方法是標(biāo)準(zhǔn)方法。手術(shù)后，跟蹤病人幾個(gè)月并統(tǒng)計(jì)使用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白治療的病人和使用參照治療的病人組之間的比較結(jié)果。按照這些跡象，在手術(shù)之前或者之后進(jìn)行的NRG療法被發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)損傷。

類似于之前所述的實(shí)驗(yàn)還可以以相似的方式評(píng)價(jià)動(dòng)力強(qiáng)度、關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍和協(xié)調(diào)性。根據(jù)這些實(shí)驗(yàn)，可以發(fā)現(xiàn)在手術(shù)之前和/或之后進(jìn)行NRG治療能夠預(yù)防和/或治療導(dǎo)致動(dòng)力強(qiáng)度、關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍或者協(xié)調(diào)性中一種或者更多種失調(diào)的外周神經(jīng)損傷。

實(shí)施例8:外周神經(jīng)損傷后使用GGF2減少神經(jīng)性疼痛和/或改善感覺(jué)機(jī)能

這里描述的研究的整體設(shè)計(jì)在下面表2中進(jìn)行了說(shuō)明。

表2.研究設(shè)計(jì)

在此研究中使用8-10周大的雄性Spraque Dawley(CD)大鼠。動(dòng)物根據(jù)其體重被隨機(jī)分配在不同的手術(shù)組中，并隨后在坐骨神經(jīng)分叉附近8-10毫米經(jīng)受坐骨神經(jīng)擠壓傷(圖1)或者在左后肢接收假手術(shù)。在受傷之后二十四小時(shí)，用單一劑量的GGF2(2.6毫克/千克，靜脈給藥)或者媒介物治療受到坐骨神經(jīng)擠壓傷的動(dòng)物，然后每周給藥2次，持續(xù)整個(gè)研究時(shí)間。在手術(shù)前評(píng)價(jià)所有治療組代表動(dòng)物群的初始勃起行為反應(yīng)，然后每周兩次，直到在受傷后第2周或者第6周致安樂(lè)死。使用von Frey絲狀體評(píng)價(jià)同側(cè)(神經(jīng)損害的)爪的機(jī)械靈敏度，其中，將絲狀體校準(zhǔn)為在指定的力下彎曲，然后使用此絲狀體對(duì)爪子底部施加一系列等級(jí)的觸覺(jué)刺激。通過(guò)記錄能夠影響爪子突然回縮的力來(lái)測(cè)量觸覺(jué)(機(jī)械)反應(yīng)閾值。獲得各個(gè)組在受傷后第2、4、6周獲得的機(jī)械閾值的平均值然后進(jìn)行比較。

在神經(jīng)損傷或者假手術(shù)之前或者手術(shù)之后每周兩次評(píng)價(jià)同側(cè)爪子的冷敏感性。為了選擇性的冷卻，大鼠單個(gè)反肢被分別放置在不同的空間中升高的有空地板表面，將丙酮(100微升)用在后爪上。對(duì)這種蒸發(fā)冷卻敏感的主體會(huì)表現(xiàn)出快速的抬后爪或者舔后爪的動(dòng)作。五次連續(xù)應(yīng)用丙酮(每次之間間隔至少10分鐘)得到陽(yáng)性反應(yīng)的百分比作為冷敏感性的測(cè)量值。獲得各個(gè)組在受傷后第2、4、6周獲得的冷敏感性值的平均值然后進(jìn)行比較。

受到部分坐骨神經(jīng)損傷的大鼠(例如，坐骨神經(jīng)擠壓)通常會(huì)發(fā)展出神經(jīng)性疼痛的癥狀。這一現(xiàn)象已經(jīng)在本研究中被例證，即，在擠壓病變的大鼠中觀察到機(jī)械閾值的急劇減少(圖16A)。據(jù)顯示，經(jīng)歷假手術(shù)的大鼠的機(jī)械閾值維持在15克或者更高，而媒介物治療的擠壓傷大鼠的機(jī)械敏感性被認(rèn)為處于異常疼痛的范圍?？梢杂^察到，用GGF2治療的擠壓傷大鼠稍微減輕了機(jī)械異常性疼痛的嚴(yán)重程度。在擠壓傷后對(duì)冷敏感性進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)可以觀察到相似的方式，其中，與媒介物治療相比，GGF2-治療的大鼠對(duì)丙酮蒸發(fā)冷卻顯示出減少的反應(yīng)百分比(圖17A)。

受到完全坐骨神經(jīng)損傷的大鼠(例如，橫切)顯示出傳入神經(jīng)阻滯癥狀，例如完全沒(méi)有機(jī)械敏感性和冷敏感性。另外，針對(duì)切除神經(jīng)的極端行為，缺少傳入感覺(jué)常常伴隨有外觀上的感覺(jué)遲鈍，偶爾會(huì)發(fā)生自殘行為(自割或者自吞噬)。在坐骨神經(jīng)被橫切的大鼠中，GGF2療法與媒介物療法相比更容易促進(jìn)機(jī)械感覺(jué)的再生，不產(chǎn)生異常性疼痛(圖16B)。在坐骨神經(jīng)橫切之后，使用GGF2療法與媒介物療法相比同樣能夠增加爪子的冷敏感性(圖17B)。最后，在GGF2治療6周后，只有少數(shù)大鼠顯示出橫切誘導(dǎo)的傳入神經(jīng)阻滯自割(6只鼠中只有1只出現(xiàn)此癥狀)，與媒介物治療6周后(6只鼠中有2只出現(xiàn)此癥狀)相比更少。

其他實(shí)施方案

盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但之前的描述只起到解釋作用并不能限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求書(shū)定義。其他的方面、優(yōu)勢(shì)和修飾也被包括在所附權(quán)利要求書(shū)記載的范圍內(nèi)。

這里所涉及的所有專利和科技文獻(xiàn)構(gòu)成了本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠獲得的知識(shí)。這里引用的所有美國(guó)專利和公開(kāi)的或者未公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)通過(guò)引證在此并入本文。這里引用的所有公開(kāi)的外國(guó)專利和專利申請(qǐng)?jiān)诖送ㄟ^(guò)引證全部并入本文。這里引用的其他出版的參考文獻(xiàn)、文件、原稿和科學(xué)文獻(xiàn)通過(guò)引證在此并入本文。

盡管本發(fā)明已經(jīng)參照其優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行了具體的顯示和表述，但是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，在不脫離本發(fā)明范圍的情況下，在形式和細(xì)節(jié)上可以存在各種各樣的變化，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求書(shū)概括。