本發(fā)明涉及半邊蓮提取物的制備方法和新用途，特別涉及半邊蓮提取物在制備用于治療肺高血壓的藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域范疇。
背景技術(shù)：
：肺高血壓(pulmonaryhypertension，ph)是一大類以肺動(dòng)脈壓力增高，伴或不伴有小肺動(dòng)脈病變?yōu)樘卣鞯膼盒苑窝芗膊。鹩倚墓δ芩ソ呱踔了劳?。ph已成為一類嚴(yán)重威脅人類身心健康的常見疾病。診斷標(biāo)準(zhǔn)為：在海平面狀態(tài)下、靜息時(shí)、右心導(dǎo)管檢查肺動(dòng)脈平均壓（mpap）≥25mmhg。ph可呈現(xiàn)為肺動(dòng)脈高血壓(pah)形式，以其特發(fā)性(ipah)或遺傳性(hpah)形式并且還聯(lián)合其他疾病(apah)例如結(jié)締組織病、門靜脈高壓等發(fā)生。ph產(chǎn)生機(jī)制尚未完全清楚，目前認(rèn)為其發(fā)生機(jī)制同改變一氧化氮信號(hào)通路信號(hào)分子、肺血管炎癥損傷以及氧化-抗氧化系統(tǒng)平衡失衡等作用有關(guān)。目前用于治療ph的藥物包括使用鈣通道阻滯劑、利尿劑、內(nèi)皮素受體拮抗劑、前列環(huán)素、可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(guanalatecyclise)和磷酸二酯酶抑制劑。這些藥物對(duì)ph有一定的治療效果，但總體來說，ph的藥物治療效果未能讓人滿意，仍然有很多ph患者因右心衰竭而死亡；或者接受正規(guī)治療后仍有嚴(yán)重的癥狀，難以提高生活質(zhì)量，且這些化學(xué)藥物的副作用特性可導(dǎo)致進(jìn)一步降低生活質(zhì)量。因此，發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)，尋找安全、經(jīng)濟(jì)的治療ph的中藥，對(duì)改善ph患者的預(yù)后和提高其生活質(zhì)量具有重要意義。半邊蓮為桔?？瓢脒吷弻僦参锇脒吷弆obeliachinensislour.的干燥全草，具利尿消腫、清熱解毒之功效，常用于治療癰腫疔瘡、蛇蟲咬傷、臌脹水腫、濕熱黃疸、濕疹濕瘡等，是《中國藥典》2010年版收錄的常用中藥品種，其主要化學(xué)成分有黃酮、生物堿和香豆素類等。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)半邊蓮提取物可以降低pah大鼠的肺動(dòng)脈壓力作用和右心室肥大指數(shù)，可用于防治肺動(dòng)脈高壓及肺動(dòng)脈高壓引起的相關(guān)心血管疾病。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供可用于防治肺高血壓的半邊蓮提取物的制備方法，以及按本發(fā)明技術(shù)方案制備的半邊蓮提取物在用于防治肺動(dòng)脈高壓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的半邊蓮提取物，可通過以下方法制備：半邊蓮藥材，用10～90%（v/v）的乙醇溶液熱回流提取1～3次，每次提取時(shí)間一般為1～3h，每次溶劑體積用量為藥材重量的6～12倍，合并提取液，減壓濃縮，加水稀釋，加到已處理好的大孔吸附樹脂上，先后以水、有機(jī)溶劑洗脫，收集有機(jī)溶劑洗脫液濃縮，濃縮干燥，即得。所用的洗脫有機(jī)溶劑優(yōu)選乙醇、甲醇、丙酮；有機(jī)溶劑濃度為5～95%（v/v）的水溶液。大孔吸附樹脂優(yōu)選hpd100型或d101型。所制備的半邊蓮提取物適用于制備口服制劑，如膠囊劑、片劑、茶劑、顆粒劑等。具體方法是將有效量的半邊蓮提取物與醫(yī)藥上可接受的賦形劑或/和添加劑配合，制成適合于人體使用的不同劑型的藥物。本發(fā)明所述的半邊蓮提取物在用于防治肺動(dòng)脈高壓藥物中的應(yīng)用，其特征為口服，每日服用劑量為50~500mg。本發(fā)明所治療的肺高血壓包含肺動(dòng)脈高壓、慢性缺氧性疾病相關(guān)的肺高血壓、慢性血栓栓塞性肺高血壓、由多種未知因素導(dǎo)致的肺高血壓的任意一種或幾種病癥。本發(fā)明所治療的肺動(dòng)脈高壓包含特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、藥物和毒物相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓、危險(xiǎn)因素或疾病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓、肺靜脈閉塞病和(或)肺毛細(xì)血管瘤樣病所致的肺動(dòng)脈高壓、新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓中的任意一種或幾種病癥。本發(fā)明所治療的危險(xiǎn)因素或疾病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓，其中所述的危險(xiǎn)因素或疾病為結(jié)締組織病、hiv感染、門靜脈高壓、遺傳性心臟病、血吸蟲病、慢性溶血性貧血的一種或多種因素。本發(fā)明所治療的慢性缺氧性疾病相關(guān)的肺高血壓包含慢性阻塞性肺疾病、間質(zhì)性肺疾??；其他限制性或阻塞性肺疾病、呼吸睡眠暫停、肺泡低通氣疾病、慢性高原病、先天性膈疝、支氣管肺發(fā)育不良的任意一種或幾種病癥。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)該發(fā)明作進(jìn)一步的描述。實(shí)施例1：防治肺動(dòng)脈高壓的半邊蓮提取物的制備方法：取半邊蓮藥材500g，加入70%乙醇熱回流3次，每次回流2h，每次溶劑用量5l，合并提取液，減壓濃縮，加水?dāng)嚢柘♂?，加到已處理好?kghpd100型大孔吸附樹脂柱上，先用水洗至收集液無色，再用70%乙醇洗脫至無色或很淺，合并70%乙醇洗脫液濃縮干燥，得提取物。實(shí)施例2：半邊蓮提取物對(duì)肺葉切除聯(lián)合野百合堿引起sd大鼠肺動(dòng)脈壓高壓的影響2.1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：sd大鼠，3月齡，雄性，200±20g，48只2.2實(shí)驗(yàn)藥物及器材：半邊蓮提取物、野百合堿（購自sigma公司）、水合氯醛、烏拉坦、壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統(tǒng)2.3采用肺葉切除聯(lián)合野百合堿（mct）注射建立重度pah模型：大鼠稱體重，12%烏拉坦經(jīng)腹腔注射（8ml/kg）麻醉后，16g動(dòng)靜脈留置針行氣管插管，連接harvard呼吸機(jī)(潮氣量2ml；頻率，80次/分；peep1.0cmh20。左側(cè)第四肋間進(jìn)胸，結(jié)扎并切除左側(cè)肺葉，大鼠肺葉為左側(cè)1葉，右側(cè)4葉，關(guān)胸。手術(shù)結(jié)束后脫離呼吸機(jī)，保暖、持續(xù)吸氧4小時(shí)。繼續(xù)飼養(yǎng)1周后，按60mg/kg單次腹腔注射mct，mct注射1周后開始給藥，給藥4周?？瞻讓?duì)照組：假手術(shù)+生理鹽水（等體積i.p.）1次+給予生理鹽水（i.g）模型組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予等體積生理鹽水（i.g）半邊蓮提取物低劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（100mg/kg/d，i.g）半邊蓮提取物中劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+受試藥（200mg/kg/d，i.g）半邊蓮提取物高劑量組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予受試藥（400mg/kg/d，i.g）陽性藥組：肺葉切除（1周后）+mct（60mg/kg，i.p.）1次+給予西地那非（7.5mg/kg/d）2.4血流動(dòng)力學(xué)測(cè)量和右心室肥厚檢測(cè)：mct注射后第4周，測(cè)量大鼠平均肺動(dòng)脈壓。大鼠以10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉后，從右頸外靜脈插管至肺動(dòng)脈干，接壓力換能器和powerlab生理信息采集與處理系統(tǒng)(adinstruments)，當(dāng)置入導(dǎo)管進(jìn)入右心室穩(wěn)定后記錄其右室收縮壓（rvsp），監(jiān)護(hù)儀出現(xiàn)肺動(dòng)脈波形時(shí)，待其穩(wěn)定后記錄平均肺動(dòng)脈壓(mpap)。測(cè)完rvsp后，完整切下大鼠心臟，沿房室交界處剪去左右心房及大血管，分離右心室(rv)和左心室+室間隔(lv+s)，用濾紙吸干水分后稱質(zhì)量，計(jì)算rv/(lv+s)值即右心室肥厚指數(shù)(rvhi)。2.5統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以mean±s.e表示，組間比較采用單因素方差分析。p<0.05為差異有顯著性意義。2.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.6.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況：本實(shí)驗(yàn)共用sd大鼠48只，死亡2只，mct組死亡2只，大鼠死亡前表現(xiàn)為呼吸困難、口鼻發(fā)紺。2.6.2半邊蓮提取物對(duì)pah大鼠rvsp的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，半邊蓮提取物低劑量(p<0.05)、中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.001)、西地那非組(p<0.01)能顯著降低rvsp，且呈劑量依賴性；與陽性藥比較，半邊蓮提取物高劑量組對(duì)pah大鼠rvsp的降低效果更好。2.6.3半邊蓮提取物對(duì)pah大鼠mpap的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，半邊蓮提取物中劑量(p<0.05)和高劑量(p<0.001)、西地那非(p<0.01)組能顯著降低mpap；與陽性藥比較，半邊蓮提取物各組對(duì)pah大鼠mpap的降低效果沒有顯著性差異。2.6.4半邊蓮提取物對(duì)pah大鼠rvhi的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組與各給藥組均有顯著性差異(p<0.001)；與模型組比較，半邊蓮提取物中劑量(p<0.01)和高劑量(p<0.001)能顯著降低rvhi；與陽性藥比較，半邊蓮提取物中劑量和高劑量組對(duì)pah大鼠rvhi的降低效果更好（見表1）。表1.半邊蓮提取物對(duì)pah大鼠rvsp、mpap、rvhi的影響組別nrvsp(mmhg)mpap(mmhg)rvhi(%)空白對(duì)照組820.73±0.3213.07±0.2722.33±0.42模型組643.23±0.79###34.62±0.92###52.17±1.19###半邊蓮提取物低劑量組838.16±0.73*###30.57±0.86###48.51±1.24###半邊蓮提取物中劑量組833.08±0.97**###27.54±1.23*###42.76±1.52**###半邊蓮提取物高劑量組831.77±1.12***##24.58±1.44***###37.81±1.58***###西地那非組836.54±1.09**###26.23±1.07**###48.33±1.85###注：與正常組比較###p﹤0.001，與模型組比較*p﹤0.05，**p﹤0.01，***p﹤0.001結(jié)論以上結(jié)果說明，半邊蓮提取物對(duì)肺葉切除聯(lián)合野百合堿引起sd大鼠肺動(dòng)脈壓高壓的平均肺動(dòng)脈壓(mpap)、右室收縮壓（rvsp），右心室肥厚指數(shù)(rvhi)有明顯減輕作用。半邊蓮提取物具有防治pah的作用。當(dāng)前第1頁12