本發(fā)明涉及奎寧酸類化合物的應用。

背景技術(shù)：

尿酸是人類嘌呤化合物的最終代謝產(chǎn)物，嘌呤代謝紊亂會導致高尿酸血癥。高尿酸血癥(hua)是指在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/l，女性高于360μmol/l。高尿酸血癥是由于體內(nèi)尿酸生成增加或排出減少引起。高尿酸血癥是痛風的發(fā)病基礎(chǔ)，當尿酸濃度過飽和形成結(jié)晶，沉積在關(guān)節(jié)滑膜，軟組織，軟骨和腎臟等處就會引發(fā)″痛風″，從而觸發(fā)機體固有免疫反應，導致關(guān)節(jié)及其周圍組織炎癥反應和腎功能損害。高尿酸血癥患者，體內(nèi)糖和脂肪的代謝功能會明顯降低，容易引發(fā)各種嚴重的疾病，主要有糖尿病，高血壓、高血脂、冠心病、心肌梗塞，動脈粥樣硬化等，嚴重威脅人體健康。

隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的改變，在我國高尿酸血癥人群已呈現(xiàn)逐年上升趨勢。臨床降尿酸藥物需求量將逐年增大。

黃嘌呤氧化酶是參與高尿酸血癥、痛風等代謝綜合癥發(fā)生與發(fā)展的關(guān)鍵酶，主要通過催化嘌呤代謝的最后兩步，即次黃嘌呤氧化為黃嘌呤再經(jīng)氧化為尿酸，使體內(nèi)尿酸水平升高。因此，黃嘌呤氧化酶成為開發(fā)抗高尿酸血癥及痛風等疾病藥物的重要靶標之一。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了奎寧酸類化合物的應用。本發(fā)明涉及的奎寧酸類化合物具有較強的黃嘌呤氧化酶抑制活性。

發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，藥食同源植物鼠麹草(gnaphaliumaffine)的提取物具有很好的黃嘌呤氧化酶抑制作用，經(jīng)過化合物分離，體外活性篩選， 以及結(jié)構(gòu)鑒定。發(fā)現(xiàn)化合物1，4，5-三咖啡?？鼘幩?1，4，5-tri-o-caffeoylquinicacid，簡寫1，4，5-tricqa)具有很好的黃嘌呤氧化酶抑制活性。目前，尚未見這個化合物有關(guān)該活性以及相關(guān)疾病治療作用的報道?？梢灶A期開發(fā)成為用于治療和/或預防與尿酸水平異常相關(guān)病癥(如高尿酸血癥、痛風等)藥物的用途。

本發(fā)明提供了如式i所示的奎寧酸類化合物在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應用，

其中，r¹為r²為h、r³為r⁴為

本發(fā)明還提供了上述式i化合物在制備用于治療和/或預防由尿酸水平高引起的相關(guān)病癥藥物中的應用，或在制備用于調(diào)節(jié)尿酸水平功能食品中的應用。

本發(fā)明所述的“由尿酸水平高引起的相關(guān)病癥”可為高尿酸血癥和/或痛風。所述的調(diào)節(jié)尿酸水平功能食品一般指降低尿酸水平的功能食品。

在不違背本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進步效果在于：式i化合物具有較高的黃嘌呤氧化酶抑制活性；且其來源于鼠麹草，鼠麹草野生資源豐富，藥材成本低廉，開發(fā)潛力 巨大。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。

實施例1

陰干后鼠麹草(水分的質(zhì)量含量約為4％的鼠麹草)切段，稱取5kg，與60％(v/v)乙醇水溶液75l(1∶15，kg/l)比例混合，加熱回流提取4次，每次2h，合并提取液。提取液減壓濃縮(60℃)至5l(藥材：濃縮液體積1∶1，kg/l)，得提取濃縮液。

提取濃縮液加入60～90℃石油醚萃取3次，每次濃縮液與石油醚體積比1∶1(v/v)，棄掉石油醚相，得水相。水相加入乙酸乙酯，萃取3次，每次水相與乙酸乙酯體積比1∶1(v/v)，萃取之后合并乙酸乙酯相，減壓至干，得鼠麹草提取物102.3g。

將制得的鼠麹草提取物(96g)經(jīng)200-300目硅膠柱層析(規(guī)格：7×60cm)分離，依次用二氯甲烷∶甲醇(體積比100∶0、50∶1、20∶1、10∶1、4∶1、2∶1以及0∶100)洗脫，每個梯度使用溶劑10l，蒸干溶劑，分別收集每個梯度的洗脫溶劑，蒸干。后將梯度二氯甲烷∶甲醇為4∶1的洗脫部分經(jīng)c18鍵合硅膠柱層析(規(guī)格：4×36cm)分離，分別經(jīng)20％、40％、60％、80％以及100％甲醇水溶液洗脫，洗脫體積各為1l，分別收集每個梯度的洗脫溶劑，蒸干。將收集到的40％甲醇水溶液洗脫部分經(jīng)羥丙基葡聚糖凝膠柱(sephadexlh20柱)(規(guī)格：3×90cm)分離，洗脫溶劑為甲醇，收集洗脫液后，再經(jīng)制備型高效液相色譜(島津lc20adxr雙泵，檢測器20a；色譜柱：kromasil，100-5-c18，10×250mm；色譜條件：50％甲醇水溶液(v/v)等度洗脫)純化得到式i化合物(20mg)。

式i化合物(即1，4，5-三咖啡?？鼘幩?的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：黃色粉末： esi-ms，m/z：701.02[m+na]⁺；676.95[m-h]^-；¹h-nmr(400mhz，cd3od)，threecaffeoylgroups：δh7.62，7.62，7.53(1heach，d，j＝15.8，h-7′，7″，7″′)，7.10，7.03，7.02(1heach，d，j＝2.0，h-2′，2″，2″′)，6.98，6.91，6.91(1heach，dd，j＝8.3，2.0，h-6′，6″，6″′)，6.81，6.76，6.76(1heach，d，j＝8.3，h-5′，5″，5″′)，6.36，6.30，6.21(1heach，d，j＝15.8，h-8′，8″，8″′)；咖啡酸片段：δh5.71(1h，m，h-5)，5.16(1h，dd，j＝9.5，3.3，h-4)，4.44(1h，m，h-3)，2.63-2.71(2h，m，h-2eq，6eq)，2.44(1h，m，h-2ax)，2.18(1h，m，h-6ax).¹³c-nmr(125mhz，cd3od)，threecaffeoylgroups：δc168.6，168.4，168.3(c-9′，9″，9″′)，149.5，149.5，149.4(c-4′，4″，4″′)，147.7，147.7，147.6(c-7′，7″，7″′)，146.7(c-3′，3″，3″′)，128.0，127.7，127.6(c-1′，1″，1″′)，123.1，123.1，123.0(c-6′，6″，6″′)，116.5(c-5′，5″，5″′)，115.2(c-2′，2″，2″′)，115.2，114.8，114.7(c-8′，8″，8″′)；奎寧酸片段：δc173.2(c-7)，82.4(c-1)，75.9(c-4)，68.8(c-5)，68.3(c-3)，36.3(c-2)，38.3(c-6).

效果實施例1

藥品與試劑：別嘌醇購自百靈威j&k；黃嘌呤購自百靈威j&k；黃嘌呤氧化酶購自sigmaaldrich，美國。

儀器：酶標儀-thermoscientificvarioskanflash，美國。

式i化合物用二甲亞砜(dmso)溶解，4℃保存，實驗前取出解凍，并用70mm磷酸鹽緩沖液稀釋，使最終反應體系終濃度為100、50、25、12.5、6.25、3.1、1.5μg/ml或μm。

96孔板孔內(nèi)加入30μl酶溶液(0.01u/ml，溶劑：70mm磷酸鹽緩沖液)，加入35μl70mm磷酸鹽緩沖液(ph＝7.5)，加入50μl受試樣品溶液(溶劑：70mm磷酸鹽緩沖液，其中dmso占反應體系總體積不高于0.25％，v/v)，25℃孵育15min，使受試樣品與酶充分接觸。反應開始：孔內(nèi)加入60μl黃嘌呤溶液(濃度：300μm，溶劑：70mm磷酸鹽緩沖液)，25℃孵育30min，使反應充分。反應終止：加入25μl1n鹽酸溶液。295nm下檢測od值。每個反應重復3次，取均值。

酶抑制率％＝(1-b/a)×100，其中b為既含有受試樣品又含酶和底物反應體系的od值，a為不含受試樣品只含酶和底物反應體系的od值。具體結(jié)果見表1。

表1.受試樣品黃嘌呤氧化酶抑制活性

實驗結(jié)果表明，式i化合物具有較強的黃嘌呤氧化酶抑制活性，可以作為先導化合物進行進一步的優(yōu)化。