本發(fā)明涉及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物、及其使用方法或制造方法。另外，“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”即rheumaticarthritis(ra)，是一種以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鳎梢岳奂叭矶鄠€器官和組織的慢性自身免疫性疾病。該詞語是包括關(guān)節(jié)風(fēng)濕病、慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的含義。

背景技術(shù)：

關(guān)節(jié)的炎癥其本身不是致命的疾病，但是主要因為關(guān)節(jié)的炎癥及其他并發(fā)癥，使患者喪失勞動能力，降低生活的品質(zhì)。因為關(guān)節(jié)的炎癥導(dǎo)致的日常生活的活動范圍的限制、或者生活品質(zhì)的降低在老齡化社會中成為特別大的問題。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)炎癥或者疼痛的代表性疾病。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎一般認(rèn)為是和自身反應(yīng)性t細(xì)胞的活性有關(guān)的自身免疫性疾病(非專利文獻(xiàn)1)。雖然關(guān)節(jié)炎的治療方法在進(jìn)步，不過類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的健康問題依然非常嚴(yán)重。例如，因為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎而可能產(chǎn)生非常嚴(yán)重的疼痛，關(guān)節(jié)的活動性喪失，并且連簡單的工作都難以完成。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方法包括：甲氨蝶呤(methotrexate)的治療(非專利文獻(xiàn)2)、使用抗體的生物治療方法以及類固醇治療方法。另外，有報道在動物試驗中，通過在腹腔內(nèi)注射吡咯喹啉醌，對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的具有治療效果(非專利文獻(xiàn)3)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：harris,e.d.jr.,新英國醫(yī)學(xué)雜志(thenewenglandjournalofmedicine),322:1277-1289(1990)

非專利文獻(xiàn)2：日本風(fēng)濕學(xué)會，關(guān)節(jié)風(fēng)濕診療指南2014，medicalreviewco.,ltd.，2014

非專利文獻(xiàn)3：z.liu,etal.,炎癥(inflammation)2015,doi:10.10007/s10753-015-0245-7

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明想要解決的技術(shù)問題

甲氨蝶呤具有致畸的性能，并且還具有作為墮胎藥的效果，因此，不能用于妊娠、哺乳期的患者的預(yù)防和治療目的。另外，抗體藥物是高分子生物制劑，因此不能經(jīng)口服給藥，同時增加了結(jié)核菌的感染風(fēng)險；進(jìn)一步，由于昂貴，因此不適于預(yù)防使用。進(jìn)一步，在得出明確診斷之前，抗炎藥物、重金屬化合物、抗癌劑以及注射藥等現(xiàn)有的治療方法風(fēng)險大，普遍存在不適于預(yù)防使用。另外，在通過腹腔內(nèi)注射吡咯喹啉醌來進(jìn)行類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療中，尚有許多改善的余地，尤其是，腹腔內(nèi)注射存在患者依從性差、同樣不適用于預(yù)防的問題。另外，在非專利文獻(xiàn)3中使用的吡咯喹啉醌不是鹽，因此缺乏溶解性，不適合使用。

維生素d具有促進(jìn)鈣的吸收和免疫調(diào)節(jié)的作用，并且被用于有關(guān)骨骼形成的治療中。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是包括骨骼的變形和免疫紊亂的疾病，因此認(rèn)為維生素d是有效的。不過在動物實驗研究中，單獨使用活性維生素d的有效劑量過大(如此高的劑量在人類將導(dǎo)致高鈣血癥和其他副作用)，不適合單獨用于治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此有必要尋找其他物質(zhì)，聯(lián)合安全劑量的活性維生素d，通過協(xié)同效應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療。

如果能夠通過比較廉價的物質(zhì)的組合來改善和/或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，則能夠改善由關(guān)節(jié)的炎癥導(dǎo)致的日常生活的活動范圍的限制或生活品質(zhì)的降低。進(jìn)一步，如果能夠?qū)崿F(xiàn)經(jīng)口給藥等，則能夠降低對患者的給藥負(fù)擔(dān)，另外，在預(yù)防目的的用途中以及在治療目的的用途中都適合使用。

本發(fā)明是鑒于上述技術(shù)問題完成的發(fā)明，其目的在于提供一種新型的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物、及其使用方法或制造方法。

本發(fā)明主要針對的適應(yīng)癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種系統(tǒng)性疾病，主要但不僅僅表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹、炎癥和關(guān)節(jié)破壞，還可能表現(xiàn)為肝臟、腎臟、心血管和皮膚等組織的損害。

解決技術(shù)問題的手段

本發(fā)明者們?yōu)榱私鉀Q上述技術(shù)問題進(jìn)行了專門研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過并用吡咯喹啉醌類和活性維生素d能夠解決上述技術(shù)問題。

即，本發(fā)明涉及如下技術(shù)方案。

<1>一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中含有吡咯喹啉醌類和活性型維生素d。

<2>如<1>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類包括吡咯喹啉醌二堿金屬鹽。

<3>如<1>或<2>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中上述類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物為經(jīng)口給藥的組合物。

<4>如<1>～<3>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為1000～150000質(zhì)量份。

<5>如<1>～<4>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中，進(jìn)一步含有水。

<6>如<1>～<5>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為20000質(zhì)量份。

<7>一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，含有吡咯喹啉醌類和活性型維生素d。

<8>如<7>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，上述喹啉醌類包括吡咯喹啉醌二堿金屬鹽。

<9>如<7>或<8>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，上述組合物為經(jīng)口給藥的組合物。

<10>如<7>～<9>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為1000～150000質(zhì)量份。

<11>如<7>～<10>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，進(jìn)一步含有水。

<12>如<7>～<11>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為20000質(zhì)量份。

<13>一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，含有吡咯喹啉醌類和活性型維生素d。

<14>如<13>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，上述吡咯喹啉醌類包括吡咯喹啉醌二堿金屬鹽。

<15>如<13>或<14>所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，上述組合物為經(jīng)口給藥的組合物。

<16>如<13>～<15>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，所述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為1000～150000質(zhì)量份。

<17>如<13>～<16>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，進(jìn)一步含有水。

<18>如<13>～<17>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物，其中，所述吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的上述活性型維生素d為20000質(zhì)量份。

<19>一種對患者給藥<1>～<6>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、<7>～<12>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者<13>～<18>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的方法。

<20>吡咯喹啉醌類和活性型維生素d在制造<1>～<6>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、<7>～<12>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者<13>～<18>中任一項所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物中的用途。

<21>如<20>中所述的用途，其中，活性型維生素d的用量為0.1微克/公斤/天，吡咯喹啉醌類的用量為2毫克/公斤/天。

發(fā)明的效果

通過本發(fā)明可以提供一種新型的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物、及其使用方法或制造方法。

附圖說明

<圖1>圖1是表示實施例1、比較例1～3中通過微型ct(micro-ct)進(jìn)行的骨骼的變形檢查的圖。

<圖2>圖2是記錄實施例2、比較例4～5的類風(fēng)濕指數(shù)的圖。

具體實施方式

下面，對用于實施本發(fā)明的方式(以下，簡稱“本實施方式”)進(jìn)行詳細(xì)說明，但是，本發(fā)明并不限于這些內(nèi)容，在不超過其宗旨的范圍內(nèi)可以做各種變形。

<組合物>

本實施方式的組合物含有吡咯喹啉醌類和活性型維生素d。本實施方式的組合物可以作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物使用。以下，針對組合物中所含的各成分進(jìn)行說明。

在本說明書中，“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕”表示“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎得到緩和”以及/或者“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎得到改善”的含義。

<吡咯喹啉醌類>

作為吡咯喹啉醌類沒有特別的限定，例如可以列舉吡咯喹啉醌以及吡咯喹啉醌類的鹽。吡咯喹啉醌為下述式(1)所表示的三羧酸化合物，并且羧基可以和陽離子形成鹽。將未形成鹽的吡咯喹啉醌稱為游離體。另外，吡咯喹啉醌的鹽是指游離體的羧基和陽離子形成鹽的化合物。在本實施方式中，優(yōu)選使用吡咯喹啉醌的鹽。

作為吡咯喹啉醌的鹽，沒有特別的限定，例如可以列舉單鈉鹽、二鈉鹽、三鈉鹽、單鉀鹽、二鉀鹽、三鉀鹽、單鋰鹽、二鋰鹽、以及三鋰鹽等的堿金屬鹽；堿土金屬鹽；單銨鹽、二銨鹽、三銨鹽等的銨鹽等。其中，優(yōu)選吡咯喹啉醌堿金屬鹽，進(jìn)一步優(yōu)選二鈉鹽、二鉀鹽、以及二鋰鹽等的吡咯喹啉醌二堿金屬鹽，更加優(yōu)選吡咯喹啉醌二鈉鹽。這樣的吡咯喹啉醌的鹽對水的溶解性高，因此在將本實施方式的組合物作為飲劑使用的情況下適合，并且，在將本實施方式的組合物作為片劑使用的情況下也可以提高吸收性，所以適合經(jīng)口給藥。吡咯喹啉醌的鹽中，即便是混入了在其制造工序中的分離操作中使用的溶劑或鹽的情況下，只要在有效性和毒性上沒有問題，則都可以使用。另外，對于陽離子與3個羧基的哪一個形成鹽，則沒有特別限定。

關(guān)于在本實施方式中使用的吡咯喹啉醌或其鹽，可以購買市售的產(chǎn)品也可以通過公知的方法制造。關(guān)于吡咯喹啉醌的鹽的制造，可以通過將游離體與堿金屬化合物等的陽離子混合而形成鹽。

吡咯喹啉醌類的含量相對于1質(zhì)量份的活性型維生素d優(yōu)選為1000～150000質(zhì)量份，進(jìn)一步優(yōu)選為5000～125000質(zhì)量份，更加優(yōu)選為10000～100000質(zhì)量份，更加優(yōu)選為10000～75000質(zhì)量份，更加優(yōu)選為10000～50000質(zhì)量份，尤其優(yōu)選為10000～30000質(zhì)量份，更尤其優(yōu)選為5000～25000質(zhì)量份，最優(yōu)選為20000質(zhì)量份。通過吡咯喹啉醌的含量在上述范圍內(nèi)，從而降低活性型維生素d的攝取，抑制其副作用，并且有進(jìn)一步提高本實施方式的組合物的有效性的傾向。

<活性型維生素d>

作為活性型維生素d，沒有特別的限定，例如可以列舉活性型維生素d2以及活性型維生素d3等。其中，優(yōu)選活性型維生素d3。對人的活性上，維生素d2和d3沒有差別，因此可以同樣地使用。通 過使用活性型維生素d，能在比較短時間內(nèi)發(fā)揮本組合物的有效性。

<水>

本實施方式的組合物可以含有水，例如可以做成飲劑或者點滴等的形態(tài)。

<其它制劑原料>

本實施方式的組合物可以是通過常用方法適當(dāng)添加混合了藥劑學(xué)上允許的其它制劑原材料的組合物。作為能夠添加的制劑原材料，沒有特別的限定，例如可以列舉乳化劑、張度劑(tonicityagent)、緩沖劑、溶解輔助劑、矯味劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑等。另外，在做成經(jīng)口給藥用的組合物的情況下，可以含有公知的增量劑、穩(wěn)定劑、液體。

<用途>

本實施方式包括吡咯喹啉醌類以及活性型維生素d在制造類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物中的用途；對患者給藥類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的方法。

(在制造中的用途)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物可以作為人或動物用的食品、功能性食品、醫(yī)藥品或者準(zhǔn)醫(yī)藥品使用。在此所說的“功能性食品”是指健康食品、營養(yǎng)輔助食品、營養(yǎng)功能食品、營養(yǎng)保證食品等、以健康的維持或者替代食物進(jìn)行營養(yǎng)補(bǔ)給的目的來攝取的食品。

作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的具體的形態(tài)，可以是固體或者液體的任一種形態(tài)，可以是膠囊劑、藥片、咀嚼片、片劑、飲劑等，不過不限定于這些。其中，優(yōu)選為經(jīng)口給藥用的形態(tài)。

作為醫(yī)藥品用途，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物可以以經(jīng)口給 藥、注射、皮膚吸收等的方法使用。在經(jīng)口給藥的情況下，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物可以以硬膠囊、軟膠囊、片劑的形式和其它物質(zhì)混合來使用。另外，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物可以利用其高水溶性，作為飲料、點滴液、注射液予以使用。

另外，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物可以和乳化物混合并配合于化妝用乳霜、粉餅中，或者因為容易和米、麥的粉混合而能夠用于利用其的食品中。

(對患者的給藥方法)

本實施方式的組合物可以作為對在關(guān)節(jié)處產(chǎn)生的炎癥的減輕有效的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療有效的類風(fēng)關(guān)節(jié)炎濕治療用組合物、以及對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防有效的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物來對患者給藥。

在對患者使用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的情況下，其給藥量根據(jù)對象而發(fā)生變化。在對象是人的情況下，其給藥量根據(jù)適用疾病、患者的年齡、性別或者體重、癥狀的嚴(yán)重度、給藥途徑等各種因素而發(fā)生變化。

在對象動物是人的情況下，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的給藥次數(shù)典型的是每天優(yōu)選為0.5～10次，進(jìn)一步優(yōu)選為0.5～8次，更加優(yōu)選為0.5～5次。通過給藥次數(shù)在上述范圍內(nèi)，本實施方式的組合物的有效性有進(jìn)一步提高的傾向。另外，“每天0.5次”表示例如每兩天給藥1次的情況。

另外，在對象動物為人的情況下，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的給藥量典型的為，按吡咯喹啉醌類的量換算，優(yōu)選為0.01～20mg/kg/天，進(jìn)一步優(yōu)選為0.05～15mg/kg/天，更加優(yōu)選為0.1～10mg/kg/天。 通過給藥量在上述范圍內(nèi)，本實施方式的組合物的有效性有進(jìn)一步提高的傾向。另外，在本申請說明書中，“mg/kg/天”是指“給藥量(mg)/患者的體重/1天”。

另外，以活性型維生素d的量換算時，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的給藥量優(yōu)選為0.1～1000ng/kg/天，進(jìn)一步優(yōu)選為1～750ng/kg/天，更加優(yōu)選為2.5～500ng/kg/天。通過給藥量在上述范圍內(nèi)，本實施方式的組合物的有效性有進(jìn)一步提高的傾向。另外，在本申請說明書中，“ng/kg/天”是指“給藥量(ng)/患者的體重/1天”。

另外，在作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物而給藥的情況下，優(yōu)選連續(xù)給藥48小時以上。

另外，在本說明書中，“患者”是鳥類、魚類、包括人在內(nèi)的哺乳類等的脊椎動物。另外，在本實施方式的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療用組合物、或者類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物的使用方法為治療方法的情況下，從患者中除去人。

作為本說明書中的“治療”或者“處置”，可以列舉以下情況，但不特別限制。

(a)預(yù)防患者產(chǎn)生病態(tài)的步驟，具體而言這樣的患者容易罹患病態(tài)，但尚沒有被診斷為已經(jīng)罹患的情況；

(b)抑制病態(tài)的步驟，例如中止其發(fā)展的步驟；以及/或者，

(c)減輕病態(tài)的步驟，例如包括使病態(tài)的減退進(jìn)展至所期望的終點的步驟的患者中的病態(tài)的處置。治療也包括疾病的癥狀的恢復(fù)(例如疼痛或者不愉快感的緩和)。

本實施方式的組合物的效果可以用被膠原蛋白(collagen)誘導(dǎo)的大鼠的關(guān)節(jié)炎癥的治療以及預(yù)防的模型來確認(rèn)。本實施方式的組合物的作用原理不是特別清楚，不過預(yù)料如下。吡咯喹啉醌類通過抑制白細(xì)胞介素(interleukin)而發(fā)揮抑制炎癥的信號的作用。認(rèn)為活性型維生素d能夠抑制異常的免疫活動。因此認(rèn)為通過吡咯喹啉醌以及活性型維生素d的協(xié)同可以達(dá)到炎癥信號的減少和調(diào)控免疫的作用。

實施例

以下，使用實施例和比較例來進(jìn)一步具體地說明本發(fā)明。本發(fā)明不受以下實施例的任何限制。

在實施例中，作為吡咯喹啉醌二鈉鹽(以下，在實施例中記為“pqq”。)使用三菱瓦斯化學(xué)株式會社制造的biopqq。另外，作為其它試劑使用通常的試劑等級的試劑。

<類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作>

作為注射液，調(diào)制了在125μl的0.1m醋酸緩沖液中混合了250μg的來自牛的ii膠原蛋白和弗氏完全佐劑(freund'sadjuvantcomplete)的混合物。將得到的注射液注射到大鼠的皮下4處。進(jìn)一步在7天之后將注射液注射到大鼠的皮下4處以制作關(guān)節(jié)炎的模型大鼠。

<通過吡咯喹啉醌的鹽和活性型維生素d(簡稱vd)實現(xiàn)的炎癥預(yù)防>

<實施例1>

準(zhǔn)備10只類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠(體重150～170g)。另外，準(zhǔn)備混合了pqq和vd和水的水溶液，以至pqq的給藥量成為2mg/kg/天，并且活性型維生素d(以下，記為“vd”。)的給藥量成為100ng/kg/天。向10只正常的模型大鼠口服給藥該水溶液，從該時刻開始經(jīng)過72小時之后，進(jìn)行了上述類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作。

在制作類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠40天之后，確認(rèn)到大鼠的腳的腫脹的狀態(tài)。將腳的腫脹的程度按照“膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen-inducedarthritis)”.《自然實驗手冊》(natureprotocols)2,-1269-1275(2007)中記載的“風(fēng)濕指數(shù)”的評價方法進(jìn)行評價，并且分類為0、1、2、3、4的5個等級，并且評價了10只大鼠的20個后肢的腫脹程度。另外，分類的數(shù)字越大表示腳的腫脹越大。其結(jié)果，沒有腫脹的大鼠后肢(分類為0)為7肢，分類為2的后肢為5肢，分類為3的后肢為6肢，分類為4的后肢為2肢。將其結(jié)果示于表1中。由其結(jié)果確認(rèn)了通過聯(lián)合使用pqq和vd，能夠抑制腫脹的發(fā)生，并且確認(rèn)到類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防效果。

<比較例1>

作為混合了pqq和vd和水的水溶液的替代，僅僅將水(其中不含pqq和vd這兩者)對10只模型大鼠給藥，除此以外，其它都和實施例1進(jìn)行同樣的操作，將其結(jié)果示于表1中。

<比較例2>

作為混合了pqq和vd和水的水溶液的替代，調(diào)制混合了pqq和水的水溶液以使得pqq的給藥量為2mg/kg/天，并且將其對10只模型大鼠給藥，除此以外，其它都和實施例1進(jìn)行同樣的操作，將其結(jié)果示于表1中。

<比較例3>

作為混合了pqq和vd和水的水溶液的替代，調(diào)制混合了vd和水的水溶液以使得vd的給藥量為100ng/kg/天，并且將其對10只模型大鼠給藥，除此以外，其它都和實施例1進(jìn)行同樣的操作，將其結(jié)果示于表1中。

如表1所示，腫脹程度最厲害的分類為4的大鼠后肢在比較例1～3中分別存在6肢。相對于此，給藥混合了pqq和vd和與水的水溶液的實施例1中，腫脹程度最厲害的分類為4的大鼠僅為2肢。由此顯示：通過組合pqq和vd這2種藥劑，能夠抑制腫脹的發(fā)生，發(fā)揮類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防效果。另一方面，在給藥僅含pqq的水溶液(比較例2)以及僅含vd的水溶液(比較例3)的情況下，沒有確認(rèn)到類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防效果。

<表1>

<通過微型ct掃描儀進(jìn)行的腳的骨骼的變形檢查>

使用微型ct掃描儀觀察了未進(jìn)行類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作的正常大鼠(a)和實施例1(e)以及比較例1～3的大鼠(b,c,d)的后肢的骨骼的狀態(tài)。將其結(jié)果示于圖1。另外，a～e表示以下的大鼠的后肢的骨骼。

a：未進(jìn)行類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作的正常模型大鼠

b：比較例1中，從類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作進(jìn)行后經(jīng)40天后的大鼠

c：比較例2中，從類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作進(jìn)行后經(jīng)40天后的大鼠

d：比較例3中，從類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作進(jìn)行后經(jīng)40天后的大鼠

e：實施例1中，從類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作操作進(jìn)行后經(jīng)40天后的大鼠

其中，b,c,d,e均來自腫脹分類為4的大鼠后肢。給藥混合了pqq和vd和水的水溶液的大鼠后肢(實施例1)的第一和第二關(guān)節(jié)的破壞沒有發(fā)生。因此，從圖1的結(jié)果也可知：通過組合pqq和vd這2種藥劑，即使在炎癥腫脹相似的情況下，依然能夠有效地預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎所導(dǎo)致的末端小關(guān)節(jié)的破壞，而末端小關(guān)節(jié)(如第一第二趾關(guān)節(jié))的破壞是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎典型特征。

<通過吡咯喹啉醌的鹽和活性化維生素d進(jìn)行的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療>

<實施例2>

按照上述的“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作”中記載的方法制作了10只關(guān)節(jié)炎模型大鼠。另外，準(zhǔn)備了混合了pqq和vd和水的水溶液以至pqq的給藥量成為2mg/kg/天，并且vd的給藥量成為100ng/kg/天。在上述“關(guān)節(jié)炎模型大鼠的制作”中記載的方法中，從最初對大鼠注射造模的那天開始計算的第9天起，對關(guān)節(jié)炎模型大鼠給藥水溶液。

<比較例4>

作為混合了pqq和vd和水的水溶液的替代，僅僅將水(其中不含pqq和vd這兩者)對關(guān)節(jié)炎模型大鼠給藥，除此以外，其它都和實施例2進(jìn)行同樣的操作。

<比較例5>

作為混合了pqq和vd和水的水溶液的替代，調(diào)制混合了pqq和水的水溶液以使得pqq的給藥量為2mg/kg/天，并且將其對關(guān)節(jié)炎模型大鼠給藥，除此以外，其它都和實施例2進(jìn)行同樣的操作。

按上述條件進(jìn)行給藥，按照“膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen-inducedarthritis)”.《自然實驗手冊》(natureprotocols)2,-1269-1275(2007)中記載的風(fēng)濕指數(shù)的評價方法評價腳的腫脹的程度，并且分類為0、1、2、3、4的5個等級。并且在實施例2、比較例4～5中得到的類風(fēng)濕指數(shù)為每只大鼠雙后肢評分之和。將其結(jié)果示于圖2中。另外，圖2中的“對照組”是，作為10只類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的替代，而使用10只不具有關(guān)節(jié)炎的正常的模型大鼠，除此以外，其它都和實施例2進(jìn)行同樣的操作，示出得到的結(jié)果。如圖2所示，可知：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎造模第11天、第13天、第15天(即給藥第3、5、7天，圖2中用**表示的那天)中，實施例2的實驗體系比比較例4和5的實驗體系其治療效果具有顯著提高。

<溶解性試驗(在水中的溶解)>

<實施例3>

向100g離子交換水中添加0.2g吡咯喹啉醌二鈉鹽(pqq)，并在室溫下攪拌30分鐘。其結(jié)果，吡咯喹啉醌二鈉鹽全部溶解。

<實施例4>

向100g離子交換水中添加0.05g的sigma-aldrich制的吡咯喹啉醌(pqq游離體)，并在室溫下攪拌30分鐘。其結(jié)果確認(rèn)了溶解殘留。

從上述內(nèi)容可知，吡咯喹啉醌鹽與作為游離體的sigma-aldrich制的吡咯喹啉醌相比具有適于經(jīng)口攝取的優(yōu)異的溶解度。

<產(chǎn)業(yè)上的利用可能性>

本發(fā)明作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎減輕用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療 用組合物、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎預(yù)防用組合物、以及它們的使用方法或者制造方法具有產(chǎn)業(yè)上的利用可能。