本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的涉及一種化合物埃博霉素b(epothiloneb，epob)在制備修復(fù)角膜神經(jīng)創(chuàng)傷的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：自1830年sohlemm在角膜緣發(fā)現(xiàn)角膜神經(jīng)，角膜神經(jīng)的研究已有了巨大的進展。角膜組織沒有血管，卻含有豐富的神經(jīng)纖維，是人體內(nèi)神經(jīng)最密集的組織之一，在提供營養(yǎng)代謝、維持角膜的正常結(jié)構(gòu)和功能中起著重要作用。角膜感覺是角膜神經(jīng)最突出的特點,具有敏銳的感覺功能。角膜神經(jīng)屬于外周神經(jīng)，具有不完全的再生能力，雖然創(chuàng)傷后，角膜神經(jīng)可緩慢的再生，但很難能恢復(fù)正常神經(jīng)密度和功能。手術(shù)損傷，眼病以及長期眼部用藥都將引起角膜神經(jīng)異常。手術(shù)損傷是直接性的破壞角膜神經(jīng)。眼病大多為角膜炎，干眼癥，糖尿?。夯加薪悄ぱ椎慕悄ぶ醒牖|(zhì)層神經(jīng)的密度明顯低于正常角膜，存在明顯的角膜基質(zhì)神經(jīng)構(gòu)造異常；干眼癥患者的角膜神經(jīng)數(shù)量、彎曲度、神經(jīng)分支都增加；糖尿病是一種系統(tǒng)性代謝疾病，可累及全身各個器官，也可引起角膜神經(jīng)的異常，其患者的基質(zhì)神經(jīng)纖維束數(shù)量顯著降低，且角膜的敏感性也顯著下降。長期使用眼部藥物會造成角膜上皮下神經(jīng)數(shù)量和密度的減少?；颊咄纯嗖豢埃壳?，臨床尚無一種可加速角膜神經(jīng)修復(fù)且功能恢復(fù)效果良好的治療方法和措施?；衔飁pob的分子式為：c27h41no6s，分子量為507.68，epob作為一種微管蛋白穩(wěn)定劑，多集中于其抗癌作用的研究。目前沒有使用epob加速角膜神經(jīng)創(chuàng)傷修復(fù)及功能恢復(fù)的相關(guān)研究報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種化合物epob在制備修復(fù)角膜神經(jīng)創(chuàng)傷的藥物中的應(yīng)用。具體涉及化合物epob在制備加速由于屈光手術(shù)、角膜移植術(shù)、單純皰疹性角膜炎、干眼癥、糖尿病以及長期使用滴眼藥物等引起的角膜神經(jīng)病變和功能損傷修復(fù)的作用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：本發(fā)明提供化合物epob在制備修復(fù)角膜神經(jīng)創(chuàng)傷的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供含化合物epob的組合物在制備修復(fù)角膜神經(jīng)創(chuàng)傷的藥物中的應(yīng)用。所述的化合物epob的結(jié)構(gòu)式如下：所述的修復(fù)角膜神經(jīng)創(chuàng)傷的藥物為任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊、口服液、針劑、粉針劑、滴眼劑或眼膏(或凝膠)等，以及采用微納米技術(shù)制成的片劑、膠囊、口服液、針劑或粉針劑、滴眼劑或眼膏(或凝膠)等。所述的角膜神經(jīng)創(chuàng)傷包括由于屈光手術(shù)、角膜移植術(shù)、單純皰疹性角膜炎、干眼癥、糖尿病或長期使用滴眼藥物等引起的角膜神經(jīng)病變和功能損傷。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點及效果：(1)本發(fā)明以進行角膜創(chuàng)傷后的小鼠作為實驗對象，發(fā)現(xiàn)epob可以顯著增加小鼠角膜神經(jīng)的面積，并接近正常水平。(2)epob可穩(wěn)定角膜微管蛋白，使散亂的神經(jīng)聚合生長。(3)epob可使大鼠角膜知覺在受傷后6天就基本恢復(fù)，而對照組角膜知覺很難恢復(fù)。(4)將epob用于制備角膜神經(jīng)損傷修復(fù)藥物，在安全劑量范圍內(nèi)，可對手術(shù)損傷，眼病以及長期眼部用藥都將引起角膜神經(jīng)異常具有較好的治療作用，可以減輕患者眼部癥狀。(5)本發(fā)明化合物epob可通過穩(wěn)定微管蛋白結(jié)合，促進微管蛋白聚合并抑制微管的解聚，提升微管蛋白的濃度，促進神經(jīng)損傷的修復(fù)與重建，維持角膜正常結(jié)構(gòu)和功能。本發(fā)明epob對由于屈光手術(shù)、角膜移植術(shù)、單純皰疹性角膜炎、干眼癥、糖尿病以及長期使用滴眼藥物等引起的角膜神經(jīng)病變和功能損傷具有較好治療作用，可以減輕患者眼部癥狀；藥物毒性小，穩(wěn)定性好，具有重要的開發(fā)與應(yīng)用前景。附圖說明圖1是小鼠角膜創(chuàng)傷后角膜神經(jīng)總面積變化的結(jié)果圖。圖2是小鼠角膜創(chuàng)傷后角膜神經(jīng)修復(fù)情況。圖3是小鼠角膜創(chuàng)傷后角膜神經(jīng)微管蛋白表達量的結(jié)果圖。具體實施方式下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件。實施例1、epob加速小鼠角膜神經(jīng)創(chuàng)傷修復(fù)1.實驗動物8周的c57/bl6雌性小鼠，體重15～20g，購于廣東省實驗動物中心。實驗前24小鼠對動物的雙眼進行檢查，確保實驗小鼠無眼疾、角膜缺損及結(jié)膜損傷。2.實驗藥物將epob溶解于dmso(二甲基亞砜)中，配成濃度為5mg/ml的溶液，待用。epob儲備液以1:200加入生理鹽水稀釋，小鼠腹腔注射0.1mg/ml的epob，對照組小鼠腹腔注射等量的空白溶劑。3.實驗方法篩選20只正常無眼疾小鼠，隨機分為創(chuàng)傷對照組和epob給藥組。各組小鼠進行相應(yīng)給藥操作后，用直徑為2mm的環(huán)鉆標記角膜中央?yún)^(qū)域，高爾夫樣刀機械性刮傷角膜上皮細胞層，使小鼠角膜中央造成創(chuàng)傷，呈現(xiàn)一個直徑為2mm的圓形區(qū)域。創(chuàng)傷后每隔24小時進行取材觀察角膜神經(jīng)的修復(fù)情況(以角膜神經(jīng)相對密度為指標)，并作統(tǒng)計分析，進行埃博霉素b(epob)的藥效學(xué)評價。并采用western-blotting法測定角膜神經(jīng)微管蛋白表達量。4.實驗結(jié)果epob對小鼠角膜創(chuàng)傷后加速角膜神經(jīng)修復(fù)作用見圖1和2：圖1顯示，小鼠角膜創(chuàng)傷后24h，給予epob治療的小鼠角膜神經(jīng)相對密度開始高于創(chuàng)傷對照組小鼠，且角膜神經(jīng)密度持續(xù)增加5天。雖然創(chuàng)傷對照組小鼠角膜神經(jīng)密度雖然也有增加，但恢復(fù)速度遠遠低于epob給藥組。圖2結(jié)果顯示，角膜神經(jīng)創(chuàng)傷后第5天，epob給藥組角膜神經(jīng)密度顯著高于對照組，且基本恢復(fù)到正常水平，對照組角膜中心處神經(jīng)恢復(fù)不明顯。圖3結(jié)果顯示，角膜神經(jīng)中微管蛋白在角膜神經(jīng)損傷后明顯減少，epob腹腔給藥后，微管蛋白表達量明顯增多。以上結(jié)果表明，epob可顯著提高角膜神經(jīng)微管蛋白表達量，增加受損角膜神經(jīng)面積，加速角膜神經(jīng)創(chuàng)傷修復(fù)。實施例2、epob加速大鼠受創(chuàng)角膜神經(jīng)功能恢復(fù)1.實驗動物健康雄性8周齡sd大鼠30只，體重約250±20g，購于廣東省實驗動物中心。實驗前24小時內(nèi)對動物的雙眼進行檢查，實驗用無眼睛刺激性癥狀、角膜缺陷或結(jié)膜損傷的動物。2.實驗藥物將sr8278(購于美國sigma公司)溶解于適量的dmso中，加入注射用大豆油，配置成含藥量為0.2％的sr8278油性滴眼劑。3.大鼠角膜神經(jīng)損傷動物模型建立大鼠用速眠新(購自吉林省華牧動物保健品有限公司)麻醉，在顯微鏡下用直徑為3mm的帶芯角膜環(huán)鉆在角膜中心鉆取一直徑為3mm、深度為0.5mm的環(huán)行切口，注意避免損傷其下的后彈力層和內(nèi)皮層，即制成大鼠角膜神經(jīng)損傷動物模型。采用角膜熒光素染色顯示損傷的區(qū)域，眼前節(jié)分析系統(tǒng)照相并分析損傷區(qū)域的大小。4.大鼠角膜神經(jīng)損傷后的治療20只正常無眼疾大鼠，隨機分為創(chuàng)傷對照組和epob給藥組。epob給藥組采用epob油性滴眼劑(epob油性滴眼劑為含0.2％epob的大豆油劑)滴眼，每日3次；創(chuàng)傷對照組，采用等計量空白溶劑滴眼，每日3次。5.大鼠角膜神經(jīng)敏感度測定造模后第2、4、6、8天采用自制的尼龍絲角膜知覺測定計測量大鼠麻醉后的角膜知覺。將角膜知覺測定計的尼龍絲從150mm開始輕輕觸及受檢眼的角膜中央。角膜知覺正常者，尼龍絲彎曲并可立即出現(xiàn)反射性瞬目或有感知。若不發(fā)生瞬目反射或無感知，為角膜知覺消失。如瞬目反射遲鈍或感知不敏感，將尼龍絲從150mm依次逐量(間隔10mm)減少直至10mm，通過標準曲線計算出尼龍絲的作用力，以作用力的大小來反映大鼠角膜知覺敏感度，記錄結(jié)果。角膜知覺測定計標準曲線測定：尼龍絲從150mm依次逐量(間隔10mm)減少直至10mm，將尼龍絲輕觸分析天平，測出不同長度尼龍絲彎曲所需的力，以長度為橫坐標，作用力為縱坐標，繪制標準曲線。6.實驗結(jié)果epob給藥組第2天、4天、6天的作用力均顯著高于創(chuàng)傷對照組，結(jié)果見表1。epob給藥組角膜知覺差不多在受傷后6天就基本恢復(fù)，而創(chuàng)傷對照組角膜知覺恢復(fù)緩慢。表1大鼠角膜知覺測定(n)時間創(chuàng)傷對照組epob給藥組2天0.1137±0.01520.0864±0.0131*4天0.0986±0.02150.0465±0.0312***6天0.0725±0.01320.0059±0.0033***8天0.0558±0.01580.0062±0.0048****p<0.1，***p<0.005上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12