本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種由鹽酸小檗堿和水蘇糖組成的藥物組合物及在防治2型糖尿病、高血脂癥和/或2型糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

糖尿病是嚴(yán)重威脅人類健康的內(nèi)分泌代謝紊亂疾病，以高血糖、高血脂為主要特征。其中2型糖尿病發(fā)病率占糖尿病患者90％以上，表現(xiàn)為胰島素抵抗，并伴有糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，繼發(fā)于糖尿病的心血管并發(fā)癥是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的首要原因。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者有70-80％死于心血管并發(fā)癥。糖尿病性心肌病是糖尿病患者的主要心臟并發(fā)癥，該病由代謝紊亂及微血管病變引發(fā)心肌廣泛灶性壞死及纖維化進(jìn)而導(dǎo)致心臟重構(gòu)，并最終發(fā)展為心功能異常和心力衰竭。

目前，2型糖尿病的治療方法主要包括降糖、降脂和改善胰島素抵抗；糖尿病性心肌病的治療則主要包括強(qiáng)心藥應(yīng)用和手術(shù)等對癥治療方法，普遍存在不良反應(yīng)較多，成本昂貴等弊端，從具有代謝調(diào)節(jié)潛力的天然產(chǎn)物中尋找能夠有效的改善2型糖尿病及其心臟并發(fā)癥，結(jié)構(gòu)明確且更為安全的單體或配伍成分，將為糖尿病性心肌病的臨床治療提供有效且嶄新的手段。

水蘇糖(英文名：stachyose，分子式C₂₄H₄₂O₂₁)，是一種天然的功能性寡糖，可以強(qiáng)效增殖人體腸道內(nèi)有益菌群(雙歧桿菌和乳酸菌等)，具有良好的生理功能。另外，水蘇糖是中藥鮮地黃中含量最高(含量高達(dá)50％，折干計(jì))的化學(xué)成分，在加工炮制過程中發(fā)生降解從而藥性發(fā)生改變。

鹽酸小檗堿(即黃連素，英文名：berberine，分子式C₂₀H₁₈ClNO₄)，為常用的抗菌藥物，臨床上用于治療腸道感染，例如胃腸炎等，也有用于治療糖尿病方面的報(bào)道。鹽酸小檗堿是中藥黃連的主要化學(xué)成分，含量約9％(干品計(jì))。

唐代醫(yī)家孫思邈所著的《備急千金要方》中有多種治療消渴的良方，例如：

一曰黃連丸，方載：黃連一斤，生地黃(即鮮地黃)一斤，右兩味，絞地黃取汁，浸黃連，出曝之燥，復(fù)納之，令汁盡干之，搗末，蜜丸如梧子。服二十丸，日三，食前后無在。亦可為散，以酒服方寸匕。此方治渴。

二曰地黃丸，方載：生地黃汁，生栝樓根汁，各二升，牛羊脂三升，白蜜四升，黃連一斤，末之。又五味，合煎令可丸。飲服如梧子大五丸，日二，加至二十丸。若苦冷而渴，渴瘥即別服溫藥也。此方治嶺南山瘴，風(fēng)熱毒氣入腎中，變寒熱腳弱，虛滿而渴。又治面黃，手足黃，咽中干燥，短氣，脈如連珠，除熱、止渴利、補(bǔ)養(yǎng)。

三曰茯神丸，方載：茯神，黃耆，栝樓根，麥門冬，人參，甘草，黃連知母各三兩，干地黃，石膏各六兩，菟絲子三合，蓯蓉四兩。右十二味，末之，以牛膽三合，和蜜丸如梧子，以茅根湯服三十丸，日二服，漸加至五十丸。治腎消渴，小便數(shù)者。

所查專利“一種治療糖尿病的藥物組合物及其應(yīng)用”(專利申請?zhí)?01210586831.2)分別對黃連和鮮地黃兩味藥材進(jìn)行乙醇回流提取，再把二者的提取物混合，以期說明此提取方法比傳統(tǒng)工藝的千金黃連丸在轉(zhuǎn)移率方面具有優(yōu)勢。上述專利與本發(fā)明提出的單體成分配伍不同。

所查專利“鹽酸小檗堿用于制備抑制食欲的藥物”(專利申請?zhí)?01410286415.X)公開了鹽酸小檗堿用于制備抑制食欲的藥物，尤其是用于減少糖尿病或肥胖癥患者進(jìn)食量。上述專利采用的是鹽酸小檗堿單一成分，與本發(fā)明鹽酸小檗堿和水蘇糖配伍組合不同，針對的應(yīng)用是減少食欲，與本發(fā)明提出的應(yīng)用范圍也不同。

所查專利“一種組合物及其在醫(yī)藥中的用途”(專利申請?zhí)?01410260301.8)公開了一種由大黃酸、鹽酸小檗堿混合組成的組合物，用于預(yù)防和治療糖尿病、腎病。上述專利采用的是鹽酸小檗堿和大黃酸組合物，與本發(fā)明鹽酸小檗堿和水蘇糖組合物不同。

文獻(xiàn)“梓醇與鹽酸小檗堿及其配伍對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞的影響”考察了梓醇與鹽酸小檗堿及其配伍對地塞米松誘導(dǎo)的胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗、轉(zhuǎn)運(yùn)及這一過程中過氧化物體增殖物激活受體(PPAR-C)mRNA表達(dá)的影響。文獻(xiàn)中提出的梓醇與鹽酸小檗堿配伍與本發(fā)明提出的鹽酸小檗堿和水蘇糖配伍不同。

中國藥典(2010版)規(guī)定梓醇為生地黃藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)，因此學(xué)者多以梓醇為研究對象來開展地黃相關(guān)的研究和開發(fā)，與此不同，我們把地黃中的活性成分水蘇糖作為研發(fā)對象。

前期研究發(fā)現(xiàn)鮮地黃中的水蘇糖具有一定的降糖和降脂等作用并且細(xì)胞毒性低。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)水蘇糖和鹽酸小檗堿聯(lián)合用藥對高脂飲食加STZ誘導(dǎo)的ICR小鼠糖尿病模型有明顯的降糖、降脂和改善糖尿病心肌病相關(guān)指標(biāo)的作用，而且多數(shù)情況下兩者聯(lián)合用藥比分別單獨(dú)使用效果更佳，首次提出以水蘇糖和鹽酸小檗堿組合物進(jìn)行2型糖尿病及相關(guān)心臟并發(fā)癥的適藥性研究，所用原料來源豐富，化學(xué)結(jié)構(gòu)清楚，克服了中藥復(fù)方物質(zhì)復(fù)雜難以闡明的問題，以期通過符合現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)規(guī)律的研發(fā)使之成為一種創(chuàng)新性藥物。

參考文獻(xiàn)：

劉芳芳,楊明煒,王曉強(qiáng),等.梓醇與鹽酸小檗堿及其配伍對胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞的影響.中草藥,2007,38(10):1523-1526.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種由鹽酸小檗堿和水蘇糖組成的組合物、及其在制備預(yù)防和/或治療2型糖尿病、高血脂癥和/或2型糖尿病并發(fā)癥藥物、保健品或食品中的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案一方面提供了一種由鹽酸小檗堿和水蘇糖組成的組合物，鹽酸小檗堿和水蘇糖配方重量份數(shù)配比為1:0.1～50，優(yōu)選重量份數(shù)配比為1:0.2～25，最優(yōu)選重量份數(shù)配比為1:1。

本發(fā)明的技術(shù)方案第二方面提供了一種由鹽酸小檗堿和水蘇糖組成的組合物，其中所述組合物還包括藥學(xué)上可接受的鹽或賦形劑。

所述組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，可將本發(fā)明組合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型，如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑，口含片、口崩片、膠丸、軟膠囊、分散片、溶液劑、氣霧劑或噴霧劑等。所述組合物可以制成普通制劑，也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。此外，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面提供了一種由鹽酸小檗堿和水蘇糖組成的組合物在制備預(yù)防和/或治療2型糖尿病、高血脂癥和/或2型糖尿病并發(fā)癥藥物、保健品或食品中的應(yīng)用。所述的2型糖尿病表現(xiàn)為高血糖或胰島素抵抗；所述的2型糖尿病并發(fā)癥選自糖尿病心肌?。凰龅?型糖尿病心肌病為2型糖尿病引起的心室異常重構(gòu)，2型糖尿病引起的心力衰竭，2型糖尿病引起的心臟組織纖維化。

有益技術(shù)效果：

本發(fā)明將鹽酸小檗堿和水蘇糖以一定比例進(jìn)行配伍能夠不同程度治療2型糖尿病的血糖或胰島素抵抗，以及血脂代謝紊亂、并可明顯改善和治療2型糖尿病并發(fā)癥，尤其是2型糖尿病心肌病的心臟重構(gòu)與失能，同時(shí)可提高2型糖尿病模型小鼠生存率。尤其是鹽酸小檗堿和水蘇糖重量份數(shù)配比為1:1的組合物在提高2型糖尿病模型小鼠生存率、降低血糖、降低甘油三酯和總膽固醇、改善胰島素抵抗，改善心肌功能等多方面相對于分別單獨(dú)給藥效果更佳，證明鹽酸小檗堿和水蘇糖配伍有一定程度的協(xié)同作用。

附圖說明

圖1：鏈脲菌素(streptozocin，STZ)加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠模型制備、動(dòng)物分組、鹽酸小檗堿和水蘇糖按各1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1進(jìn)行配伍給藥安排。

圖2：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物(分別為1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1)對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠生存率的影響。

圖3：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠糖耐量的影響。

圖4：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗評價(jià)指數(shù)的影響。

圖5：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠血清甘油三酯的影響。

圖6：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠血清總膽固醇的影響。

圖7：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠血清高密度脂蛋白的影響。

圖8：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠血清低密度脂蛋白的影響。

圖9：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠心室壁厚度和心功能的影響。從左到右，從上到下依次為對照組、模型組、1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1配伍組合物給藥組小鼠的典型超聲心動(dòng)圖。

圖10：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠舒張期左心室前壁(LVAWd)的影響。

圖11：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠舒張期左心室后壁(LVPWd)的影響。

圖12：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)(EF)的影響。

圖13：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠心臟短軸縮短率(FS)的影響。

圖14：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠心臟組織纖維化的影響。從左到右，從上到下依次為對照組、模型組、1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1配伍組合物給藥組小鼠心臟組織膠原經(jīng)Masson三色染色后的代表性圖片。

圖15：鹽酸小檗堿和水蘇糖各種配伍組合物對STZ加高脂飲食誘導(dǎo)2型糖尿病小鼠心臟組織膠原面積影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。

下述實(shí)施例中，鹽酸小檗堿和水蘇糖均由黃連和地黃中人工分離提取。

下述實(shí)施例中，部分物質(zhì)的全稱或相應(yīng)的中文名稱如下：

STZ：鏈脲菌素

PBS：磷酸鹽緩沖液

下述實(shí)施例中所述室溫如本領(lǐng)域常規(guī)所述，一般指15～25℃。

實(shí)施例1鹽酸小檗堿和水蘇糖不同比例的配伍對STZ和高脂飲食誘導(dǎo)的ICR小鼠糖尿病模型的影響

(一)模型制備、實(shí)驗(yàn)分組及給藥方案

SPF級ICR小鼠(雌雄各半，3-4周齡)購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，恒溫恒濕，自由飲食。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，按性別和體重隨機(jī)分為2組：①對照組10只，持續(xù)給予基礎(chǔ)飼料直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束；②高脂+STZ組90只，給予高脂高糖飼料(含有35％脂肪，18％蛋白質(zhì)，47％碳水化合物)，持續(xù)4周后腹腔注射鏈脲菌素STZ 100mg/kg(溶于0.1M檸檬酸緩沖液，PH 4.5)，并繼續(xù)給予高脂高糖飼料；對照組腹腔注射溶劑0.1M檸檬酸緩沖液。持續(xù)8周后尾靜脈取血檢測血糖(BG)，將高脂+STZ組動(dòng)物按血糖>11.1mM的小鼠隨機(jī)分為9組并持續(xù)給予高脂高糖飼料：模型組(糖尿病)和給藥組(鹽酸小檗堿和水蘇糖配伍比例分別為1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1的組合物)。

給藥組的最大給藥劑量參考臨床和日常保健常用劑量確定，具體如下：鹽酸小檗堿(成人1.2g/日，折合為成人劑量為18mg/kg，再折合為小鼠的最大給藥劑量設(shè)為200mg/kg。水蘇糖(成人保健劑量為6g/日，折合為成人劑量為85mg/kg，再折合為小鼠最大給藥劑量設(shè)為1000mg/kg)。本實(shí)驗(yàn)給藥組共分為8組，具體各組給藥劑量設(shè)計(jì)表見表1。

具體給藥方案為：各給藥組分別按上述劑量將組合物溶于純水中，每天灌胃給藥1次；模型組給予對照溶劑PBS，每天灌胃給藥1次，圖1為具體造模及給藥時(shí)間安排。持續(xù)給藥8周。

表1

(二)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(1)鹽酸小檗堿和水蘇糖不同比例的配伍對2型糖尿病小鼠生存率的影響

圖2為鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25和0:1配伍比例治療后小鼠的生存率與對照組、模型組小鼠生存率進(jìn)行比較的結(jié)果。

結(jié)果表明，持續(xù)給藥八周后，模型組的小鼠有最大程度的死亡，而鹽酸小檗堿和水蘇糖分別單獨(dú)給藥及大部分不同配伍比例治療后也均有不同程度的死亡，但鹽酸小檗堿和水蘇糖1:1配伍比例的給藥組沒有死亡，生存率最高，在一定程度上說明二者以一定比例配伍的優(yōu)勢所在。

(2)鹽酸小檗堿和水蘇糖不同比例的配伍對2型糖尿病小鼠血糖、血脂、胰島素指標(biāo)的影響

小鼠禁食12h后，尾靜脈取血，使用血糖檢測儀測定空腹血糖，按2g/kg灌胃葡萄糖溶液，并與30、60、120min時(shí)間點(diǎn)尾靜脈取血測量血糖，依據(jù)公式AUC(mmol/L/h)＝(0min血糖值+30min血糖值)×0.5/2+(30min血糖值+60min血糖值)×0.5/2+(60min血糖值+120min血糖值)×1/2計(jì)算曲線下面積評價(jià)小鼠的糖耐量(圖3)。小鼠通過眼球取血1mL，室溫靜置30min，3000rpm離心，分離血清，按ELISA試劑盒說明書檢測胰島素含量(圖4)，按生化檢測試劑盒說明書使用日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀檢測甘油三酯(圖5)、總膽固醇(圖6)、高密度膽固醇(圖7)、低密度膽固醇(圖8)等血脂指標(biāo)，具體測定和統(tǒng)計(jì)數(shù)值見表2。

檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：STZ加高脂飲食誘導(dǎo)的糖尿病模型組小鼠出現(xiàn)明顯的血糖、總膽固醇、甘油三酯升高和胰島素抵抗增加。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5和1:10配伍比例均顯示顯著降低血糖作用，尤其二者按1:1配伍最佳。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10和1:25配伍比例均顯示顯著改善胰島素抵抗作用，尤其二者按1:1配伍最佳。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:0、5:1、1:1、1:5、1:10和1:25配伍比例均顯示顯著降低甘油三酯水平的作用。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5和1:10配伍比例均顯示顯著降低總膽固醇水平的作用，尤其二者按1:1配伍最佳。結(jié)果顯示二者以一定比例配伍有協(xié)同作用。

表2

(3)鹽酸小檗堿和水蘇糖不同比例的配伍對2型糖尿病小鼠心臟功能和形態(tài)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，小鼠按45mg/kg劑量腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后，對其胸腹部進(jìn)行脫毛處理，仰臥位固定于超聲檢測臺，使用VisualSonics Vevo 770(VisualSonics，加拿大)超聲系統(tǒng)進(jìn)行檢測：先用10M Hz超聲探頭對小鼠心臟長軸方向進(jìn)行B型超聲監(jiān)測，確定左心室乳頭肌位置后，再轉(zhuǎn)為心臟短軸方向進(jìn)行監(jiān)測，并記錄其10～20個(gè)心動(dòng)周期的M型超聲變化圖；用Vevo 770軟件分別測量舒張末期左室前壁厚度(LVAWd)、左室后壁厚度(LVPWd)、室間隔厚度(LVSd)、射血分?jǐn)?shù)(Ejection Fraction，EF)、短軸縮短率(Fractional Shortening，F(xiàn)S)等各項(xiàng)心臟結(jié)構(gòu)和心功能指標(biāo)。

心室異常重構(gòu)是糖尿病性心肌病重要的心臟結(jié)構(gòu)病理改變。VasualSonics超聲心動(dòng)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：STZ加高脂飲食誘導(dǎo)糖尿病性心肌病后第20周，模型組小鼠出現(xiàn)明顯的心室壁變厚和心功能降低等病理改變。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:1配伍可以顯著抑制LVAWd的增加。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:1和1:10配伍可以顯著抑制LVPWd的增加。鹽酸小檗堿和水蘇糖按1:1和1:10配伍可以顯著改善心臟的FS和EF指標(biāo)。結(jié)果進(jìn)一步顯示二者以一定比例配伍有協(xié)同性。圖9為代表性超聲心動(dòng)圖，圖10和圖11為心臟結(jié)構(gòu)指標(biāo)LVAWd和LVPWd統(tǒng)計(jì)結(jié)果，圖12、圖13為心功能指標(biāo)EF和FS統(tǒng)計(jì)結(jié)果，具體測定和統(tǒng)計(jì)數(shù)值見表2。

(4)鹽酸小檗堿和水蘇糖不同比例的配伍對2型糖尿病小鼠心臟組織纖維化的影響

由實(shí)施例實(shí)驗(yàn)結(jié)果(3)獲得的小鼠心臟經(jīng)4％多聚甲醛固定，石蠟包埋并進(jìn)行橫切，經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色，評價(jià)整體心臟結(jié)構(gòu)改變。組織切片經(jīng)Masson染色后在顯微鏡下觀察，確定心臟膠原沉積情況判斷纖維化程度，并應(yīng)用高清晰彩色病理圖文分析系統(tǒng)Spot Advanced 3.0獲得高清晰的Masson染色的病理圖片(400倍放大)。使用Image-Pro Plus 5.1測量每個(gè)視野膠原著色面積。每組分析6-8個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選取10個(gè)視野，取均值代表一個(gè)動(dòng)物膠原組織在心臟組織內(nèi)的含量和表達(dá)強(qiáng)度。通過非參數(shù)方差分析比較各組“膠原絕對面積”。

心臟組織纖維化是心臟病致死的重要原因之一。膠原絕對面積百分率是評價(jià)組織纖維化程度的可靠指標(biāo)，利用Masson染色檢測心臟組織膠原沉積可以在一定程度反映心肌纖維化的情況。正常組心肌組織膠原組織相對較少，STZ加高脂飲食誘導(dǎo)糖尿病性心肌病小鼠心肌組織膠原明顯增加，形成嚴(yán)重心肌纖維，膠原絕對面積百分率增至正常值的3倍，鹽酸小檗堿和水蘇糖按照1:0、5:1、1:1、1:2.5、1:5、1:10、1:25配伍比例均可以顯著降低STZ加高脂飲食誘導(dǎo)糖尿病性心肌病小鼠心肌組織膠原沉積，尤其二者按1:1配伍最佳。結(jié)果進(jìn)一步說明鹽酸小檗堿和水蘇糖以一定比例配伍有協(xié)同性。圖14為Masson染色代表圖片，圖15為各組膠原面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果，具體測定和統(tǒng)計(jì)數(shù)值見表2。