發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及單獨使用性甾體前體或以新的聯(lián)合療法在包括人在內(nèi)的易感溫血動物中治療或降低獲得影響陰道固有層或肌層的問題的可能性的方法。特別是，聯(lián)合治療包括給予選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)和提高患者的性甾體前體的水平，所述前體選自脫氫表雄甾酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)、和雄甾-5-烯-3β,17β-二醇(5-二醇)。也可給予雌激素以抵消(conteract)一些SERMs對熱潮紅和其它絕經(jīng)期癥狀的潛在作用。還可給予5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑來改善性功能。本發(fā)明還涉及實施前述聯(lián)合的藥盒和藥物組合物。在US5,843,932中，報導(dǎo)了在卵巢切除的大鼠背部皮膚的2cm2面積上以50％乙醇-50％丙二醇溶液形式以每天兩次30mg的劑量用DHEA治療1、3或6個月對陰道萎縮的影響。病理組織學(xué)檢查顯示，用DHEA治療的大鼠陰道上皮增生和粘液化，并且陰道粘膜萎縮逆轉(zhuǎn)。用大鼠進(jìn)行的研究，當(dāng)將DHEA應(yīng)用到背部皮膚1、3和6個月僅檢查了對陰道上皮的作用(SourIa等人，1998，J.SteroidBiochemMoIBiol.，66(3)：137-149)，而沒有檢查另外兩層，即固有層和肌層。然后觀察到DHEA在陰道上皮局部應(yīng)用的效果是在遠(yuǎn)離陰道的部位皮膚上施用效果的大約10倍，因此需要全身吸收以發(fā)揮其作用。在先前以10％DHEA乳膏在絕經(jīng)后女性皮膚上給藥12個月對DHEA作用的研究中，僅僅評價了DHEA的雌激素活性(Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505)。其中指出(第3500頁)"陰道細(xì)胞學(xué)作為DHEA的雌激素作用的特定參數(shù)檢查"。這是由于評價的方法，即限于淺表和易移動的上皮細(xì)胞的陰道涂片。本發(fā)明描述了DHEA和其它成分對陰道的三個層的作用，即肌層、固有層和上皮層，在這三個水平上都具有新的益處。認(rèn)為DHEA對固有層和肌層的有益效果對于5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑的積極作用來說是極其重要的，所述5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑例如是萬艾可和其它化合物或前列腺素E1。相關(guān)技術(shù)的背景陰道干燥影響大約50％的50到60歲的絕經(jīng)后女性和72％的70歲以上的絕經(jīng)后女性(Rossin-Amar，2000，GynecolObstetFertil，28(3)：245-249)。在這些女性當(dāng)中，大約80％經(jīng)歷過泌尿生殖器病癥，尤其是陰道炎和性交困難(PanditandOuslander，1997，AmJMedSci，314(4)：228-31)。因為這些問題被認(rèn)為至少部分與性甾體喪失相關(guān)，因此在絕經(jīng)期要考慮進(jìn)行適當(dāng)?shù)木植考に靥娲煼ā＝鼇硪呀?jīng)認(rèn)識到絕經(jīng)后女性不僅喪失所有的卵巢雌激素而且她們還逐漸喪失雄激素，這些雄激素源自于外周胞分泌脫氫表雄甾酮(DHEA)轉(zhuǎn)變的雄激素和雌激素(Labrie等人，1991，MoICellEndocrinol，'78：C113-C118；Labrie等人，1995，AnnNYAcadSd，774：16-28；Labrie等人，2003，EndRev，24(2)：152-182)。事實上，從30歲到40歲血清DHEA和DHEA-S日益減少(Labrie等人，2003，EndRev，24(2)：152-182；Orentreich等人，1984，JCKnEndocrinolMetab，59：551-555；Labrie等人，1997，JClinEndocrinolMetab，82：2396-2402)。一系列研究表明低水平的DHEA和DHEA-S與一系列年齡相關(guān)的病態(tài)和疾病有關(guān)(Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505；Helzlsouer等人，1992，CancerRes，52(1)：1-4；Szathmari等人，1994，OsteoporosInt，4(2)：84-88；ThomanandWeigle，1989，AdvImmununol，46：221-261；Barrett-Connor等人，1999，JReprodMed，44(12)：1012-1020；Barrett-Connor等人，1999，JAmGeriatrSoc，47(6)：685-691)。減輕陰道干燥和其它絕經(jīng)期癥狀的有效途徑是使用激素替代療法(HRT)(GreendaleandJudd，1993，JAmGeriatrSoc，41(4)：426-436；Studd等人，1980，Pasetto，PaleottiandAmbrusEds，MTPress，Lancaster，p：127-139)。然而，近來的臨床研究表明聯(lián)合雌激素和孕激素增加了乳腺癌的發(fā)病率，并且對心血管疾病有潛在的消極影響(Colditz等人，1995，NEnglJMed，332：1589-1593；Ross等人，2000，JNatlCancerInst，92(4)：328-332；Rossouw等人，2002，JAMA，288(3)：321-333)。同時，雖然對聯(lián)合的雌激素-雄激素替代療法的可能性的興趣不斷增加(Rosenberg等人，1997，JReprodMed，42(7)：394-404；Burd等人，2001，CurrWomenHealthRep，1(3)：202-205)，但是雌激素成分的使用受到上述潛在并發(fā)癥的限制。根據(jù)近來我們對人性甾體生理學(xué)了解的進(jìn)展，尤其是在絕經(jīng)后女性中(Labrie等人，1991，MoICellEndocrinol，78：C113-C118；Labrie等人，2003，EndRev，24(2)：152-182)，DHEA的使用為絕經(jīng)后女性提供適當(dāng)水平的通過胞分泌機(jī)制在特定組織中合成的雄激素和雌激素成為可能，且沒有全身作用(Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505：16-28；Labrie等人，2003，EndRev，24(2)：152-182；Labrie，2001，RefGynObstet，8：317-322；Lasco等人，2002，145：457-461)。陰道功能雄激素-敏感原理的修復(fù)也應(yīng)當(dāng)有助于5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑或前列腺素El的作用。選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)Acolbifene(EM-652)是最初開發(fā)用于預(yù)防和治療乳腺癌的苯并吡喃衍生物(Gauthier等人，1997，JMedChem，40：2117-2122)。Acolbifene是所有已知化合物中對ER具有最高親和力的化合物(Gauthieretal，1997，JMedChem，40：2117-2122；Labrie等人，1999，JSteroidBiochemMoIBiol，69(1-6)：51-84；Tremblay等人，1997，MoI.Endocrinol.，11：353-365)，并且其在ERα和Erβ上都產(chǎn)生了活性(Tremblay等人，1998，Endocrinology，139：111-118)。該化合物至少在大鼠的乳腺和子宮內(nèi)膜顯示了純的和高效的抗雌激素活性，同時降低了血清膽固醇和甘油三酯并預(yù)防骨丟失(Labrie等人，1999，JSteroidBiochemMoIBiol，69(1-6)：51-84)。而且，已經(jīng)證明給予DHEA，不僅不妨礙，而且在裸小鼠中產(chǎn)生了與純抗雌激素Acolbifene對人乳房腫瘤生長相同的額外的抑制作用(Dauvois等人，1991，CancerRes，51：3131-3135；Luo等人，1997，Endocrinology，138：4435-4444)。DHEA和Acolbifene的聯(lián)合治療已經(jīng)被提出作為乳腺癌的有益化學(xué)預(yù)防和治療途徑(Labrie，2001，RefGynecolObstet，8：317-322)。事實上，DHEA對人乳腺癌異種移植物在裸小鼠中生長的抑制作用支持了其用作激素替代療法(Dauvois等人，1991，CancerRes，51：3131-3135；Couillard等人，1998，JNatlCancerInst，90：772-778)。WO99/63974公開了選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑與性甾體前體聯(lián)合的醫(yī)療用途。發(fā)明概述因此，本發(fā)明的目的是提供治療可以導(dǎo)致性欲和性功能降低的陰道問題，更特別是陰道干燥、性交困難和性功能障礙同時使不希望的副作用最小化的有效方法。另一目的是提供降低患上述問題的風(fēng)險的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低患陰道干燥的風(fēng)險的方法，包括在需要所述治療或所屬甾體前體的個體或患者中增加選自脫氫表雄甾酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)和雄甾-5-烯-3β,17β-二醇(5-二醇)的性甾體前體的水平，且進(jìn)一步包括給予所屬患者治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)作為聯(lián)合治療的部分。在另一實施方案中，本發(fā)明包括另外給予雌激素以抵消SERMs對熱潮紅和其它絕經(jīng)期癥狀的作用。在另一實施方案中，本發(fā)明包括另外給予5型CGMP磷酸二酯酶抑制劑或前列腺素E1以改善性功能。用于本文時，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)是直接或通過其活性代謝物用作乳房組織中的雌激素受體拮抗劑("抗雌激素")的化合物，還提供了對骨組織和血清膽固醇水平的雌激素或雌激素-類似的作用(即通過減少血清膽固醇)。在體外或在人體或大鼠乳房組織中用作雌激素受體拮抗劑的非甾體化合物(尤其是如果該化合物用作人乳腺癌細(xì)胞的抗雌激素)可能用作SERM。相反，甾體抗雌激素不傾向于用作SERMs，因為它們對血清膽固醇并不易于顯示任何有益作用。我們已經(jīng)試驗和發(fā)現(xiàn)用作SERMs的非甾體抗雌激素包括EM-800、EM-01538、雷洛昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、艾多昔芬、TSE-424、ERA-923、拉索昔芬(CP336156)、阿佐昔芬(LY353381)和GW-5638。我們已經(jīng)試驗了甾體抗雌激素ICI182,780且發(fā)現(xiàn)不能用作SERM。根據(jù)本發(fā)明SERMs可以與這些化合物用作抗雌激素時本領(lǐng)域已知的相同劑量給予。不打算受理論的束縛，認(rèn)為SERMs，其中的許多，優(yōu)選，具有被1到2個碳原子連接的兩個芳環(huán)，被預(yù)期與雌激素受體相互影響，因為分子前面的部分被該受體最佳地識別。優(yōu)選的SERMs具有側(cè)鏈，其可選擇性在乳房組織中引起拮抗性質(zhì)而在其它組織中沒有顯著拮抗性質(zhì)。因此，這些SERMs可如愿地在乳房中用作抗雌激素，同時令人驚奇地和如愿地在骨組織和對血液成分(脂質(zhì)和/或膽固醇的濃度被有利的影響)用作雌激素(或提供雌激素樣作用)。對膽固醇和/或脂質(zhì)的有利作用有可能地轉(zhuǎn)變?yōu)閷用}粥樣硬化的有利作用，已知動脈粥樣硬化被膽固醇和脂質(zhì)的不正當(dāng)水平不利地影響。在另一實施方案中，本發(fā)明包括方法、藥物組合物和藥盒，其中的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有有下述特征的分子式：a)被1到2個1to2插入碳原子間隔的2個芳環(huán)，兩個芳環(huán)未被取代或者被羥基或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的基團(tuán)取代；b)具有芳環(huán)和叔胺官能團(tuán)或其鹽的側(cè)鏈。優(yōu)選側(cè)鏈選自：還優(yōu)選2個芳環(huán)都是苯基，且側(cè)鏈具有選自次甲基、亞甲基、-CO、-O-和-S-、芳環(huán)和叔胺官能團(tuán)或其鹽的部分。在另一實施方案中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自苯并噻吩衍生物、三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并吡喃衍生物、5,6,7,8-四氫萘和苯并二氫吡喃衍生物。在一個實施方案中，優(yōu)選的是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑為下式的苯并噻吩衍生的化合物：其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R3和R4獨立地選自：C1-C4烷基，或者其中的R3、R4和它們結(jié)合的氮，一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基(hexamethyleneimino)和嗎啉代的任何結(jié)構(gòu)；其中A選自-CO-、-CHOH和-CH2-；其中B選自次苯基、吡啶亞基(pyridylidene)和-環(huán)C4H2N2-。特別地，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自雷洛昔芬、阿佐昔芬(LY353381)和LY335563。在另一實施方案中，優(yōu)選的是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑為下式的三苯乙烯衍生的化合物：其中D是-OCH2CH2N(R3)R4或-CH＝CH-COOH(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或者R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷并、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基和嗎啉代的環(huán)狀結(jié)構(gòu))；其中E和K獨立地是氫或羥基；其中J是氫或鹵素。特別地，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是他莫昔芬、OH-他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene和GW5638。在另一實施方案中，優(yōu)選的是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑為下式的吲哚衍生的化合物：其中D選自-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CON(R7)R8、-CC-(CH2)n-N(R7)R8(R7和R8都獨立地選自C1-C6烷基、或R7、R8和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代、環(huán)的環(huán)狀結(jié)構(gòu))；其中X選自：氫和C1-C6烷基；其中R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自：氫、羥基、C1-C6烷基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分。特別地，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是TSE-424和ERA-923。在另一實施方案中，優(yōu)選的是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是下式的化合物：其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R5和R6獨立地是氫或C1-C6烷基；其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或者R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代的環(huán)狀結(jié)構(gòu))。其中X選自-O-和-CH2-。特別地，化合物選自：(-)-順式-(5R,6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基]-5,6,7,8-四氫萘-2-醇，D-(-)-酒石酸鹽(拉索昔芬)和(3,4-反式-2,2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧基色滿]。在另一實施方案中，優(yōu)選的是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下式結(jié)構(gòu)：其中R1和R2獨立地是氫、羥基或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中Z是二價封閉部分，特別地，Z選自-O-、-NH-、-S-和-CH2-；其中R100是通過4-10個插入原子將L隔離B環(huán)的二價部分；其中L是選自-SO-、-CON-、-N<和-SON<的二價或三價極性部分；其中G1選自氫、C1到C5的烴或連接G2和L以形成5-到7-元雜環(huán)的二價部分、和鹵素或前述基團(tuán)的不飽和衍生物。其中G2不存在或選自氫、C1到C5的烴或連接G1和L以形成5-到7-元雜環(huán)的二價部分、和鹵素或前述基團(tuán)的不飽和衍生物；其中G3選自氫、甲基和乙基。更特別的是，優(yōu)選下述通式結(jié)構(gòu)的苯并吡喃衍生物：其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代、環(huán)的環(huán)狀結(jié)構(gòu))。其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分。還優(yōu)選的是苯并吡喃衍生物是在碳2上具有絕對構(gòu)型S的旋光性化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，所述化合物具有下述分子結(jié)構(gòu)：其中R1和R2獨立地選自羥基和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R3是選自飽和的、不飽和的或取代的吡咯烷基，飽和的、不飽和的或取代的哌啶子基，飽和的、不飽和的或取代的哌啶基，飽和的、不飽和的或取代的嗎啉代，含氮環(huán)狀部分，含氮多環(huán)部分和NRaRb(Ra和Rb獨立地是氫、直連或支鏈C1-C6烷基、直連或支鏈C2-C6鏈烯基和直連或支鏈C2-C6炔基)。在一個實施方案中，苯并吡喃衍生物是選自乙酸、已二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、鹽酸、雙氫氯噻嗪酸、羥萘甲酸、乳酸、馬來酸、甲磺酸、甲基硫酸、1,5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、三甲基醋酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對苯二甲酸、對-甲苯磺酸和戊酸的酸的鹽。優(yōu)選的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是：Acolbifene雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene、GW5638、TSE-424、ERA-923和拉索昔芬。附圖的簡要說明圖1表示從外口(陰道口)(第1節(jié)段)到子宮水平(第7節(jié)段)(陰道部子宮)，沿著大鼠陰道的縱軸分成7個橫節(jié)段。圖2表示9組大鼠第5節(jié)段的陰道上皮組織形態(tài)學(xué)。Barin(J)，40μm。(A)作為雌激素作用的典型，動情期周期大鼠的復(fù)層鱗狀上皮由四個主要的層組成：1個細(xì)胞層的基底層(b)，6到7個細(xì)胞層的棘層(s)和5到6層顆粒層(g)覆蓋角質(zhì)層(c)形成緊密填充的扁平角質(zhì)化細(xì)胞。(B)用受雌激素-妊娠前影響的發(fā)情前期的周期大鼠舉例說明粘液化。在大多數(shù)第2到7節(jié)段，1層基底細(xì)胞層(b)被5到6個細(xì)胞層的棘層(s)覆蓋，底層粘液化(m)包括3-4層粘液細(xì)胞。(C)在OVX對照中，基底細(xì)胞層(b)被1層萎縮立方細(xì)胞(a)覆蓋。(D)用日口服劑量的Acolbifene治療OVX大鼠的陰道上皮，(2.5mg/kg)顯示萎縮，而外層低柱狀粘液細(xì)胞(m)覆蓋著基底細(xì)胞層(b)。(E)用日口服劑量的倍美力(0.5mg/kg)治療的OVX大鼠的陰道上皮。與動情期發(fā)現(xiàn)的相比，OVX-誘導(dǎo)的萎縮被雌激素模式代替。(F)在接受倍美力+Acolbifene的OVX動物中，盡管觀察到了較大的粘液細(xì)胞，與Acolbifene-治療的動物的形態(tài)學(xué)相似，萎縮占優(yōu)勢。(G)接著在2×2cm的背部皮膚上每日1次表皮應(yīng)用DHEA(80mg/kg)治療OVX動物，觀察到由3-5層的粘液細(xì)胞(m)構(gòu)成的肥大上皮覆蓋著基底層(b)。一些內(nèi)陷成為該上皮的特征(箭頭)。(H)在用DHEA+Acolbifene-治療的動物的陰道上皮的大多數(shù)區(qū)域，粘液細(xì)胞(m)層停留在基底細(xì)胞層(b)，盡管在許多區(qū)域，許多層粘液細(xì)胞覆蓋著基底細(xì)胞層。一些內(nèi)陷成為該上皮的特征(箭頭)。(I)用DHEA+倍美力治療在3只動物中導(dǎo)致混合上皮，該混合上皮由被3-5層粘液細(xì)胞(m)覆蓋的3到7個細(xì)胞層-厚復(fù)層鱗狀上皮(s)組成。在2只動物中，復(fù)層鱗狀上皮的區(qū)域是主要的(插入)。Barininsert，30μm。(J)當(dāng)聯(lián)合DHEA、倍美力和Acolbifene時，上皮與DHEA+Acolbifene組的相似。圖3表示OVX動物的陰道粘膜，在(A)中，顯示了以伴隨上皮內(nèi)微膿腫(M)的病灶白細(xì)胞浸潤為特征的嚴(yán)重炎癥變換和，在(B)中，顯示了以上皮厚度減少和作為上皮完全消失顯現(xiàn)的潰瘍?yōu)樘卣鞯牟≡罡g。圖4顯示了Acolbifene對陰道上皮內(nèi)層第1節(jié)段(外部開放)的雌激素樣作用，相關(guān)組進(jìn)行比較。在動情期未受損大鼠(A)和倍美力-治療的動物(D)中，上皮為10-15層的厚度且角質(zhì)化，在OVX對照組(B)中，上皮厚度減少到4-6層，并且沒有角質(zhì)化(沒有看見顆粒層)，而在Acolbifene-治療的動物(C)中，厚度恢復(fù)到9-11層，且角質(zhì)化。圖5顯示了單獨或聯(lián)合用DHEA、倍美力和Acolbifene治療OVX動物36周厚，大鼠陰道第5節(jié)段水平上三個不同陰道間隔的厚度(μm)：a)上皮，b)固有層，c)肌層和d)總厚度。增加動情期和動情前期正常無傷動物作為參考對照。具有相同字母的組在p<0.05下沒有統(tǒng)計學(xué)差異。圖6顯示了第5節(jié)段圖解的固有層膠原纖維的緊密度，如低(A)，中(B)或高(C)。圖7顯示了三個陰道間隔的顯微照片：(E)上皮，(L)固有層和(M)肌層，在不同的組中，在大鼠陰道的第5節(jié)段水平強(qiáng)調(diào)相對肌層厚度。用條分開的3個陰道壁層表明最佳地評價了不同組的厚度分布。A)未受損的，B)OVX，和用C)Acolbifene治療的OVX，D)倍美力，E)倍美力+Acolbifene，F(xiàn))DHEA，G)DHEA+Acolbifene，H)DHEA+倍美力，I)DHEA+倍美力+Acolbifene。圖8顯示了36周后測量的OVX和單獨或聯(lián)合用Acolbifene、倍美力和DHEA治療的OVX動物的陰道重量。加入未受損動物作為對照。圖9顯示了不同組中在第5節(jié)段水平上AR、ERα和PR在(E)上皮、(L)固有層和(M)肌層中的免疫組織化學(xué)定位。這些條表示三個陰道間隔間的分離。圖10和11顯示了大鼠中不同SERMs間的比較：陰道上皮形態(tài)學(xué)。圖12顯示了載玻片的圖象，該圖象為了顯示8個陰道節(jié)段的定位(整個上排和右下角的部分)，接著相應(yīng)于最初解剖學(xué)位置的順序的4個子宮節(jié)段(1節(jié)段子宮頸和2個子宮角的3節(jié)段-每幾個角2個部分)。第8節(jié)段包括鄰近子宮頸開始初的側(cè)面陰道皺褶。圖13顯示了影響未受損大鼠動情期(左欄)，第4節(jié)段的陰道上皮12-18層厚，第6節(jié)段12-15層厚。動情后期(右欄)，第4節(jié)段的陰道上皮6到10細(xì)胞層，第6節(jié)段5到7層。圖14顯示了影響OVARIECTOMIZEDUNTOUCHED大鼠。在第4節(jié)段，陰道被2到6細(xì)胞層的鱗狀復(fù)層上皮排列。在第6節(jié)段，觀察到完全的萎縮，伴隨平坦的2到3個細(xì)胞層。通過整個陰道可以觀察到一些小圓柱狀粘液細(xì)胞的稀疏病灶。圖15顯示了安慰劑/栓劑的作用。與OVX未改變組相比，安慰劑組的陰道鱗狀復(fù)層上皮略微厚一些，第4節(jié)段顯示4到8個細(xì)胞層。在第6節(jié)段，觀察到了與OVX未改變組相同的形態(tài)學(xué)，具有2-3個上皮細(xì)胞層?？梢栽陉幍乐邪l(fā)現(xiàn)小圓柱狀粘液細(xì)胞病灶，與OVX未改變的動物相比略多。圖16顯示了DHEA0.33mg/栓劑的作用。在第4節(jié)段，陰道上皮被3到7個細(xì)胞層分層為磷狀。大約20到60％的陰道內(nèi)層由對齊的粘液細(xì)胞和15到50％的肥大的粘液細(xì)胞交替組成，覆蓋1層或多層鱗狀復(fù)層上皮層，和非粘液化區(qū)域。在第6節(jié)段，上皮厚度減少到幾乎在OVX未改變的動物中發(fā)現(xiàn)的厚度：被圓柱狀粘液細(xì)胞覆蓋的的2-5個細(xì)胞層。在粘液細(xì)胞的發(fā)生中觀察到巨大的變化，這些細(xì)胞覆蓋著5到75％的陰道表面，與非粘液化區(qū)域交替。圖17顯示了DHEA0.66mg/栓劑的作用。在第4節(jié)段，復(fù)層鱗狀上皮3到6細(xì)胞層厚。大約5到20％的陰道內(nèi)層由對齊的粘液細(xì)胞和10到75％的肥大的粘液細(xì)胞交替組成，覆蓋著1或多層鱗狀復(fù)層上皮層。也存在非粘液化上皮區(qū)域。在第6節(jié)段，上皮厚度減少，且由2到4個細(xì)胞層的鱗狀復(fù)層上皮組成，被對齊的粘液細(xì)胞層超越。粘液化區(qū)域與非粘液化區(qū)域交替在20到80％的陰道表面變化。圖18顯示了DHEA1mg/栓劑的作用。在第4節(jié)段，復(fù)層鱗狀上皮顯示了3到9個細(xì)胞層。覆蓋3到4鱗狀細(xì)胞層的肥大粘液細(xì)胞覆蓋了50到70％的陰道表面，同時對齊的粘液細(xì)胞排列了5到30％的陰道表面。非粘液化區(qū)域插在粘液化細(xì)胞中間。在第6節(jié)段，上皮厚度也減小，且由2到4個細(xì)胞層組成。覆蓋1到3個鱗狀細(xì)胞層的肥大粘液細(xì)胞覆蓋了大約30到100％的陰道表面，而對齊的粘液細(xì)胞覆蓋了0到70％。還觀察到了一些散開的非粘液化區(qū)域。圖19是用DHEA(栓劑)在OVX大鼠陰道內(nèi)應(yīng)用14天治療對體重影響的圖表。與安慰劑組相比，以0.33mg和0.66mg劑量給予DHEA的組的體重輕微降低，而在1mg的組中增加較顯著。圖20是將0.33mg、0.66mg或1mg陰道內(nèi)應(yīng)用到OVX大鼠后DHEA的血清濃度的圖表。當(dāng)DHEA分別以0.33mg、0.66mg或1mg的劑量給予時，DHEA治療7小時后的曲線下面積(AUC)值是32+4ng.h/ml、50±7ng.h/ml和131±23ng.h/ml。發(fā)明的詳細(xì)描述在絕經(jīng)期卵巢分泌雌激素停止后，實際上所有的雄激素和雌激素都是通過胞分泌機(jī)制由腎上腺起源的脫氫表雄甾酮(DHEA)在外周靶組織中合成的。事實上，在卵巢雌激素的缺失中，血清DHEA的逐漸降低似乎在常與絕經(jīng)期相關(guān)的陰道干燥、炎癥、性交困難和性功能障礙中起重要作用。為了評價潛在的新的激素替代療法的特定的雌激素和/或雄激素作用，該激素替代療法在其它有益效果中可減輕陰道干燥，我們檢查了卵巢切除(OVX)8個月后大鼠陰道的生態(tài)學(xué)和以單獨給藥或聯(lián)合的形式用DHEA，結(jié)合雌激素(倍美力)和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑Acolbifene治療OVX動物。在動情期未受損動物和用倍美力治療的OVX大鼠中，典型的陰道雌激素模式是角質(zhì)化的復(fù)層鱗狀上皮。OVX導(dǎo)致了與炎癥相關(guān)的普遍萎縮，而Acolbifene降低了炎癥發(fā)病率且增加了陰道上皮中粘液細(xì)胞的數(shù)量和大小。在使用的劑量上，倍美力完全逆轉(zhuǎn)了OVX-誘導(dǎo)的上皮萎縮，而DHEA部分逆轉(zhuǎn)了萎縮。事實上，用DHEA治療的OVX動物的陰道上皮變成了增生3-5層柱狀粘液和杯狀細(xì)胞典型的雄激素作用。將倍美力加入到DHEA中導(dǎo)致了上皮厚于未受損動物。而且，DHEA增加了固有層中膠原纖維的緊密度。另一方面，單獨用Acolbifene治療顯示了增加固有層厚度的傾向，當(dāng)與DHEA聯(lián)合是達(dá)到了未受損動物的數(shù)值。OVX之后，陰道肌層減少了46％，通過DHEA和倍美力逆轉(zhuǎn)的作用分別是41％和100％。在另一方面，OVX后陰道壁厚度降低50％，通過DHEA和倍美力分別逆轉(zhuǎn)42％和93％，而DHEA和Acolbifene的聯(lián)合將總陰道壁厚度逆轉(zhuǎn)到了與未受損對照動物沒有顯著差異的值。免疫組織化學(xué)在所有DHEA治療組中顯示了強(qiáng)的雄激素受體(AR)標(biāo)記。在另一方面，在任何Acolbifene治療組中沒有檢測到雌激素受體α(ERα)和黃體酮受體(PR)標(biāo)記。因此，用DHEA或聯(lián)合DHEA和Acolbifene治療通過主要的雄激素作用部分或完全地阻止了在陰道壁的各層中觀察到的OVX-誘導(dǎo)的萎縮改變，如通過上皮粘液化和AR增量調(diào)節(jié)所顯示的。本發(fā)明的數(shù)據(jù)也顯示了DHEA對三層陰道壁特別令人關(guān)注的作用，即高度粘液化的上皮，固有層中膠原纖維緊密度的增加和肌層厚度的增加。因此，DHEA對陰道粘膜發(fā)揮了雄激素和雌激素作用，從而進(jìn)一步提供了生理學(xué)替代療法。雖然被檢查的每個化合物都具有對陰道功能的潛在有益效果，單獨的DHEA或與其聯(lián)合可緩解陰道干燥和恢復(fù)總體陰道生理學(xué)和幫助糾正與絕經(jīng)期相關(guān)的性功能障礙。DHEA和其它成分可局部或全身施用。本發(fā)明的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有有下述特征的分子式：a)被1到2個插入碳原子間隔的兩個芳環(huán)，兩個芳環(huán)都未被取代或者被羥基或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的基團(tuán)取代；和b)具有芳環(huán)和叔胺官能團(tuán)或其鹽的側(cè)鏈。本發(fā)明的一個優(yōu)選的SERM是PCT/CA96/00097(WO96/26201)中報導(dǎo)的EM-800。EM-800的分子結(jié)構(gòu)是：本發(fā)明另一優(yōu)選的SERM是US6,710,059B1中報導(dǎo)的acolbifene(EM-1538，也稱為EM-652.HC1)是有效的抗雌激素EM-652的鹽酸鹽。與EM-800相比，EM-1538合成更加安全、簡單和容易。給予EM-800或EM-1538，被認(rèn)為在體內(nèi)產(chǎn)生相同的活性化合物。另一優(yōu)選的SERM是拉索昔芬(CP-336,156；(-)-順式-(5R,6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基]-5,6,7,8-四氫萘-2-醇，D-(-)-酒石酸鹽)(可從PfizerInc.，USA獲得)。本發(fā)明其它優(yōu)選的SERMs包括他莫昔芬((Z)-2-[4-(1,2-二苯基-1-丁烯基)]-N,N-二甲基乙胺)(可從Zeneca，UK獲得)、托瑞米芬(可從Orion-FarmosPharmaceutica，F(xiàn)inland，orSchering-Plough獲得)、屈洛昔芬和雷洛昔芬(EliLillyandCo.，USA)、阿佐昔芬(LY335563)和LY353381(EliLillyandCo.，USA)、Ospemifene(FC1271)(可從Orion-FarmosPharmaceutica，F(xiàn)inland獲得)、Iodoxifene(SrnithKlineBeecham，USA)、左美洛昔芬(3,4-反式-2,2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧基色滿](NovoNordisk，A/S，Denmark)，其公開于Shalmi等人WO97/25034，WO97/25035，WO97/25037，WO97/25038；和Korsgaard等人WO97/25036中)、GW-5638(被Willson等人，1997，Endocrinol，138(9)：3901-3911公開)、由Aventis(France)開發(fā)的SERM3339和吲哚衍生物(Miller等人EP0802183A1公開)和TSE-424和由WyethAyers(USA)開發(fā)，公開于JP10036347中的ERA-923(Americanhomeproductscorporation)和公開于WO97/32837中的非甾體雌激素衍生物。當(dāng)需要效能時使用的任何SERM都可以使用，如制造者推薦的那些。合適的劑量在本領(lǐng)域中是已知的。任何商業(yè)上可獲得的其它非甾體抗雌激素都可根據(jù)本發(fā)明使用?？梢允褂萌魏尉哂信cSERMs相似活性的化合物(例如：雷洛昔芬)。當(dāng)口服給藥時，根據(jù)本發(fā)明施用的SERMs優(yōu)選以0.01到10mg/kg體重每天(優(yōu)選0.05到1.0mg/kg)的劑量范圍給藥，對于平均體重的人來說每天10mg，尤其是每天20mg，優(yōu)選以兩個相等的分劑量，或當(dāng)胃腸外給藥(即，肌內(nèi)、皮下或經(jīng)皮給藥)時，以0.003到3.0mg/kg體重每天(優(yōu)選0.015到0.3mg/ml)的劑量范圍給藥，對于平均體重的人來說每天1.5mg，尤其是每天3.0mg，優(yōu)選為兩個相等的分劑量。優(yōu)選SERMs與下述藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體一起給予。優(yōu)選的5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑是由PfizerUSA以商品名"萬艾可"推向市場的昔多芬、EliLillyUSA以商品名"Cialis"推向市場的Tadalafil、Bayer(德國)以商品名"Levitra"推向市場的伐地那非。還優(yōu)選當(dāng)前正在開發(fā)的5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑：Dong-APharmTech(韓國)開發(fā)的DA-8159、Merck(德國)開發(fā)的EMR-62203、Seiyaku(日本)開發(fā)的TA-1790、Schering-Plough(美國)開發(fā)的SCH-446132和Pfizer(美國)開發(fā)的UK-371800。1個優(yōu)選的前列腺素是由NexMed(美國)以商品名"Alprox-TD"推向市場的前列腺素E1。對于本文推薦的所有劑量，主治臨床醫(yī)生應(yīng)當(dāng)監(jiān)測個體患者反應(yīng)，并相應(yīng)調(diào)整劑量。本發(fā)明效力的實施例實施例1材料和方法動物和處理在實驗開始時使用體重大約220-270g的10到12周齡的雌性Sprague-Dawley大鼠(Crl:(SD)BrVAF/PlusTM)(CharlesRiverLaboratory，St-Constant，Canada)。在開始實驗前，使動物適應(yīng)環(huán)境條件至少一周(溫度：22±3℃；濕度：50±20％；12-h光照-12-h黑暗循環(huán)，在07:15h開燈)。將動物單獨圈養(yǎng)，它們可自由接近水和嚙齒動物食物(LabDiet5002，RalstonPurina，St-Louis，MO)。本實驗是根據(jù)在動物實驗室中保護(hù)和使用實驗動物的CCAC指南進(jìn)行的，該指南是由加拿大動物保護(hù)理事會(CCAC)和實驗動物保護(hù)鑒定和委派協(xié)會(AAALAC)批準(zhǔn)的。將總共126只雌性大鼠隨機(jī)分成9組，每組14只動物，分組如下：1)未受損對照組；2)切除卵巢對照組(OVX)；3)OVX+Acolbifene(2.5mg/kg)；4)OVX+倍美力(0.5mg/kg)；5)OVX+倍美力+Acolbifene；6)OVX+DHEA(80mg/kg)；7)OVX+DHEA+Acolbifene；8)OVX+DHEA+倍美力；9)OVX+DHEA+Acolbifene+倍美力。在研究的第一天，在異氟烷-誘導(dǎo)麻醉下將各組動物(除了第1組)雙側(cè)切除卵巢(OVX)。通過口服強(qiáng)飼法(0.5ml/大鼠)施用作為0.4％甲基纖維素混懸液中的倍美力和Acolbifene，同時將50％乙醇-50％丙二醇中的DHEA(0.5ml/大鼠)局部應(yīng)用到脫了毛的2×2cm背部皮膚上。倍美力的劑量選擇對應(yīng)于足以逆轉(zhuǎn)OVX-引起的子宮萎縮的最小劑量，而Acolbifene則以足以引起與OVX類似的子宮萎縮的劑量給藥，在它對倍美力-處理的OVX動物給藥以后。所用的DHEA劑量使得DHEA血中濃度為70-100nmol/L。在研究的第2天開始處理，化合物每天給藥一次，共給藥36周。未受損對照組和OVX對照組的動物只接受賦形劑。最后一次給藥后24小時，在異氟烷麻醉下通過腹主動脈處放血將通宵禁食的動物處死(9只動物每組)，或者通過心內(nèi)灌注10％中性緩沖福爾馬林將通宵禁食的動物處死(5只動物每組)。從非灌注動物中收集陰道并稱重，而從灌注動物中收集的陰道則用黑墨水在腹側(cè)標(biāo)記，然后如下所述進(jìn)行修剪。組織學(xué)手術(shù)將各只灌注動物的未受損陰道后固定(post-fixed)在10％中性緩沖福爾馬林中。然后將各個陰道分成7個相等的橫節(jié)段，如圖1所示，常規(guī)處理，并完全包埋在同一個石蠟塊中。在石蠟塊內(nèi)部，將7個陰道圓柱狀節(jié)段按照它們原來的解剖位置的順序放置，并與石蠟塊表面垂直定向放置，然后在橫切面上切割各節(jié)段。每只動物都切割4μm厚的石蠟切片，并用蘇木精-曙紅染色，以進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查。組織形態(tài)測定術(shù)在第5節(jié)段上進(jìn)行不同陰道層的測量(圖1)，該第5節(jié)段大約在中間區(qū)域和陰道部子宮(第7節(jié)段)之間的一半位置處。發(fā)現(xiàn)該第5節(jié)段具有典型的上皮表面和足夠厚的平滑肌。用DC-3303CCD彩色照相機(jī)(Dage-MTI，MichiganCity，IN，USA)拍照，并用Image-ProPlus3.0軟件(MediaCybernetics，SilverSpring，MD，USA)進(jìn)行定量。如此，使用×5物鏡(LeicaMicrosystems，Willowdale，Ont.，Canada)，從上皮層和肌層的典型區(qū)域中得到了每層3-4個厚度的測量結(jié)果，和3個陰道層總共的測量結(jié)果。如此測量總的陰道厚度、上皮層厚度和肌層厚度。從總的陰道厚度中減去上皮層和肌層的厚度得到固有層的厚度。免疫組織化學(xué)用ZymedSP試劑盒(SanFrancisco，CA)進(jìn)行免疫染色。在甲醇中使石蠟切片(4μm)脫石蠟，并通過乙醇再水合。用3％H2O2的甲醇溶液預(yù)培養(yǎng)30min消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。應(yīng)用采用檸檬酸鹽緩沖液的微波回收技術(shù)(microwaveretrievaltechnique)(TachaandChen，1994)。載玻片冷卻以后，用10％山羊血清阻斷非特異性結(jié)合20min。然后在室溫下分別用1：200、1：250和1：250濃度的ERα(AB-1，Calbiochem，California)、AR(N-20，SantaCruzBiotechnology，California)或PR(Ab-4，NeoMarkers，California)抗體培養(yǎng)切片1.5h。在PBS緩沖液中清洗以后，用生物素化的抗家兔二次抗體培養(yǎng)各切片10min，此后用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶再培養(yǎng)10min。將二氨基聯(lián)苯用作色原體使生物素/鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶復(fù)合物在顯微鏡監(jiān)測下顯影。用#2Gill's蘇木精復(fù)染30秒。為了對照，用培養(yǎng)抗體的過量的肽進(jìn)行免疫吸附法，或用非免疫家兔IgG來代替。如表2所示進(jìn)行免疫染色過的細(xì)胞核的數(shù)量和強(qiáng)度的半定量評價。表1.7個大鼠陰道節(jié)段中的上皮層、固有層和肌層的組織學(xué)評價E＝上皮形態(tài)：KS(角化復(fù)層鱗狀)，LHM(大的肥大粘液細(xì)胞)，SCM(小的對齊的柱狀或立方粘液細(xì)胞)，MSM(被粘液細(xì)胞混合復(fù)層鱗狀覆蓋)，A(萎縮：小的立方細(xì)胞)。對于給定節(jié)段的兩種不同的縮寫表示兩種不同的模式，第一種是主要的。'L＝固有層厚度：T(厚)，MT(中等厚)，t(薄)；'膠原纖維的緊密程度：H(高)，M(中)，L(低)；M＝肌層厚度：T(厚)，MT(中等厚)，t(薄)，s(不足)。表2.在大鼠陰道第5節(jié)段的上皮層、固有層和肌層中免疫染色過的細(xì)胞核的AR、Erα和PR的數(shù)量和強(qiáng)度的半定量評價。-雄激素受體(AR)，雌激素受體α(ERα)，黃體酮受體(PR)，上皮層(E)，固有層(L)，肌層(M)。-代表標(biāo)記細(xì)胞核的半定量評價數(shù)字：0＝無，1＝低，2＝中，3＝高-標(biāo)記強(qiáng)度表示為：低+，中++，和高+++統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)表示為每組8-9只動物的陰道重量的平均數(shù)±SEM或每組5只動物的陰道層厚度測定的平均數(shù)±SEM。根據(jù)Duncan-Kramer的多范圍檢驗測定統(tǒng)計學(xué)顯著性(Kramer，1956，Biometrics，12：307-310)。結(jié)果大鼠陰道各層的形態(tài)學(xué)和厚度為了精確詳細(xì)的檢查大鼠陰道壁的三個層，也就是上皮層、固有層和肌層，首先檢查沿著縱軸獲得的7個節(jié)段(圖1)。雖然在各組之間觀察到了顯著的形態(tài)差異，但是一般而言，在同一組的所有動物中差異是一致的，并且第2、3、4、5、6和7節(jié)段已經(jīng)顯示出了相似的上皮形態(tài)。觀察到的極少數(shù)例外的情況將在后面提及。因此將第5節(jié)段用于舉例說明各種處理對陰道上皮的影響。在OVX組中，卵巢刺激的缺乏導(dǎo)致陰道上皮萎縮，其特征在于所有節(jié)段(表1和圖2C)都存在一些小的粘液細(xì)胞區(qū)域。最重要的是，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)伴隨著上皮內(nèi)微膿腫的很多病灶集中點(上皮組織內(nèi)成團(tuán)的白細(xì)胞的小區(qū)域)的中度到重度炎癥。這些改變經(jīng)常伴隨著病灶侵蝕(上皮層部分消失的區(qū)域)和潰瘍(上皮層完全消失)(圖3)。在用Acolbifene處理的OVX動物中，第1節(jié)段顯示出了與未受損組類似的角化復(fù)層鱗狀上皮，除了它包括9-11個細(xì)胞層以外，而相比較的是，在動情期動物中或當(dāng)OVX動物接受倍美力時，是10-15層(圖4)。因此，經(jīng)Acolbifene處理的動物第1節(jié)段的上皮厚度高于OVX大鼠，它只含有4-6個細(xì)胞層。在其它節(jié)段中(表1)，基底層被低柱狀粘液細(xì)胞層所覆蓋(圖2D)，后者比OVX動物發(fā)育得更多。在OVX+Acolbifene組中，在5只動物中只有3只顯示出了最小炎癥的跡象，而在所有的OVX動物中普遍發(fā)現(xiàn)了中度到重度的炎癥改變。在所有的組中，第1節(jié)段顯示出了類似的復(fù)層鱗狀上皮，除了在OVX組的動物中，在該組中，萎縮是主要的特征(圖4)。而且，在OVX+DHEA和OVX+DHEA+Acolbifene組中，粘液細(xì)胞經(jīng)常伴隨著第1節(jié)段的占優(yōu)勢的復(fù)層鱗狀上皮(未顯示)。接受DHEA的OVX動物陰道上皮的7個節(jié)段由大型多層柱狀粘液細(xì)胞組成，該細(xì)胞具有擴(kuò)張的細(xì)胞質(zhì)液泡，這是雄性作用的典型特征(表1，圖2G)。多個大型內(nèi)陷具有DHEA處理后的上皮的特征。在OVX+DHEA+Acolbifene組的所有節(jié)段中發(fā)現(xiàn)了類似的上皮形態(tài)，除了粘液細(xì)胞的大小和它們的層數(shù)增多了以外(表1，圖2H)。在DHEA+倍美力處理的動物中，從第2節(jié)段到第5節(jié)段觀察到了由被多層粘液細(xì)胞覆蓋的不同比例鱗狀上皮組成的"混合"類型的厚復(fù)層上皮(表1，圖21)，從而揭示了聯(lián)合的雌激素作用和雄激素作用。在該組中，3只動物在上述節(jié)段上顯示出了粘液化，而在另外2只動物中，在所有節(jié)段中均觀察到了復(fù)層鱗狀上皮(表1)。當(dāng)倍美力與DHEA和Acolbifene聯(lián)合時，上皮就類似于DHEA+Acolbifene組，從而說明了雌激素引起的鱗狀細(xì)胞增殖被Acolbifene阻斷(表1和圖2J)。DHEA向OVX動物給藥將陰道上皮的厚度增加到了38±4μm，而Acolbifene向DHEA的加入并沒有改變上皮厚度，它仍舊保持在37±5μm。當(dāng)倍美力和DHEA聯(lián)合對OVX動物給藥時，觀察到了84±6μm的極大的厚度，這個值與單獨接受倍美力的動物組的值沒有顯著區(qū)別。最后，倍美力、DHEA和Acolbifene的聯(lián)用導(dǎo)致了32±3μm-厚的上皮，這個值與單獨接受DHEA的組或接受DHEA與Acolbifene聯(lián)用的組的值類似。固有層將陰道內(nèi)膠原纖維的緊密程度分為低度、中度和高度(圖6)，如在接近上皮的地方所觀察到的?！兜投取泛汀吨卸染o密》分別與松弛地或較不松弛地聚集在一起的粗膠原纖維的存在有關(guān)，而《高度緊密》是用于描述緊密填充的精細(xì)膠原纖維的術(shù)語，這樣的膠原纖維顯示出了光滑的有織紋的外觀。在所有的動物中，相對于膠原的量存在有相對較少比例的纖維細(xì)胞，它們主要表現(xiàn)為鱗狀和萎縮。仔細(xì)檢查每只動物(表1)發(fā)現(xiàn)，一般而言，第1節(jié)段中膠原纖維的緊密程度是中度(除了在動情期大鼠和倍美力-處理的OVX動物中它是低的，或在OVX大鼠和DHEA-處理的OVX大鼠中它是高的)，而在第2和3節(jié)段中緊密程度增大至達(dá)到平臺，一般保持不變直至第7節(jié)段。因此，沿著動情期未受損大鼠陰道的縱軸，膠原纖維的緊密程度在第1-3節(jié)段中是低的，在第4-7節(jié)段中是高的。萎縮經(jīng)常與OVX組和OVX+Acolbifene組中膠原纖維的緊密程度增加有關(guān)(表1)。在倍美力-處理的OVX動物中，第1節(jié)段的緊密程度是低的，第2和3節(jié)段是中度，而在其他節(jié)段中，膠原纖維的緊密程度逐漸增大，在第6和7節(jié)段變得最大。沿著陰道的固有層厚度的可見光學(xué)顯微鏡檢查普遍揭示了第1節(jié)段是中等厚度，而在第2-4節(jié)段中較厚。在第5-7節(jié)段中，厚度漸進(jìn)地增大到與第1節(jié)段相似的水平。在第5節(jié)段中測量到的固有層厚度的對應(yīng)平均值(圖5B)表明，OVX導(dǎo)致固有層厚度顯著增大(在未受損組中是76±2μm對135±28μm)，而Acolbifene引起了非顯著的減小(60±8μm)。在OVX動物中在倍美力或倍美力+Acolbifene給藥以后觀察到的增加維持在低于未受損組的水平(100±9μm和90+3μm，分別相對于135±28μm)。DHEA的給藥也導(dǎo)致了固有層厚度的統(tǒng)計學(xué)非顯著的增加(96±20μm)，并且Acolbifene的加入導(dǎo)致了厚度進(jìn)一步增加(136±17μm)，達(dá)到了未受損動物的水平。用倍美力+DHEA處理OVX動物顯著增大了厚度(144±14μm)，當(dāng)與單獨DHEA給藥相比時。最后，用倍美力+DHEA+Acolbifene處理的動物顯示出厚度(99±9μm)類似于單獨用DHEA處理的組，并且低于倍美力+DHEA組，雖然這種差別在統(tǒng)計學(xué)上并不顯著。DHEA導(dǎo)致肌層厚度中度增加(50±2μm)，通過加入Acolbifene該厚度稍微減小(41±3μm)。最后，用倍美力和DHEA聯(lián)合處理導(dǎo)致厚度顯著增加(62±3μm)，當(dāng)與單獨用DHEA處理的動物相比時。當(dāng)把Acolbifene加入到倍美力和DHEA中時，肌層厚度減小(46±5μg)至與DHEA和Acolbifene給藥相當(dāng)?shù)臄?shù)值。當(dāng)測量總陰道壁厚度時(圖5D)，構(gòu)成外膜的結(jié)締組織的外部薄層沒有被包括在內(nèi)。OVX導(dǎo)致了顯著的(51％)陰道壁萎縮(128±3μm，相對于未受損動物的262±39μm)，并且Acolbifene加入到OVX沒有作用(108±8μm)(圖7A、B和C)。倍美力處理將總厚度維持在與未受損動物相似的數(shù)值上(253±10μm)，而Acolbifene向倍美力中加入則逆轉(zhuǎn)了倍美力的作用(150±4μm)(分別是圖7O和E)。DHEA處理所達(dá)到的總陰道厚度(184±21μm)比倍美力單獨處理組低大約25％(圖7F)。另一方面，Acolbifene加入到DHEA導(dǎo)致了非顯著的厚度增加(213±20μm)，這種增加非顯著地區(qū)別于未受損組(圖7G)。最后，倍美力和DHEA對OVX動物聯(lián)合給藥將厚度(290±13μm)顯著增加至與未受損動物相似的數(shù)值(圖7H)。Acolbifene向DHEA和倍美力的加入將數(shù)值(176±11μm)逆轉(zhuǎn)到與DHEA單獨給藥沒有顯著區(qū)別的程度(圖7I)。陰道重量處理了8個月以后，在不同組之間觀察到的陰道重量的改變(圖8)通常隨著上述形態(tài)學(xué)觀察而出現(xiàn)。的確，OVX以后陰道重量減小了大約50％(101±5mg)，與未受損組相比(205±11mg)，而用Acolbifene單獨處理OVX動物對于陰道重量卻沒有影響。另一方面，倍美力給藥導(dǎo)致了陰道重量增加，但仍然沒有達(dá)到未受損動物的數(shù)值水平(170±9mg)，而Acolbifene加入到倍美力中則將雌激素-引起的重量增加逆轉(zhuǎn)至與OVX動物類似的數(shù)值水平(96±4mg)。相反，當(dāng)DHEA對OVX動物給藥時，陰道重量增加至與倍美力-處理組類似的數(shù)值水平(171±12mg)，并且Acolbifene和DHEA的聯(lián)用導(dǎo)致了重量減小(135±9mg)，該數(shù)值仍然高于OVX組。最后，倍美力和DHEA對OVX動物聯(lián)合給藥導(dǎo)致陰道重量增加(179±10mg)達(dá)到了與OVX+DHEA組和OVX+倍美力組類似的數(shù)值。Acolbifene向該聯(lián)用的加入沒有顯著影響(194±12mg)。OVX動物的DHEA處理導(dǎo)致三個陰道層很多細(xì)胞核的強(qiáng)烈標(biāo)記或AR，這是當(dāng)采用DHEA+Acolbifene聯(lián)用和DHEA+倍美力聯(lián)用時所發(fā)現(xiàn)的相同的模式，而后一組上皮淺層中較少數(shù)量的標(biāo)記細(xì)胞核則除外。DHEA、倍美力和Acolbifene的聯(lián)合也導(dǎo)致了三個陰道壁層大部分細(xì)胞核的強(qiáng)染色。討論陰道干燥或萎縮性陰道炎，也被稱為泌尿生殖器萎縮，連同性功能障礙是絕經(jīng)后女性的常見問題(Notelovitz，2000，Menopause，7(3)：140-142)。最常見的癥狀是干燥、灼熱、搔癢、刺激和性交困難，從而導(dǎo)致性欲降低和生活質(zhì)量下降(Berman等人，1999，CurrOpinUrol，9(6)：563-568)。由于已知存在雌激素喪失，因此雌激素替代療法(ERT)和HRT是治療的選擇。然而，由于對女性性甾體生理學(xué)的新的信息強(qiáng)烈建議了雄激素的重要作用(Labrie等人，2003，EndRev，24(2)：152-182)，因此本研究比較了HRT或ERT的備選方案的全身激素作用，也就是DHEA單獨或與純抗雌激素Acolbifene聯(lián)合，以及與倍美力一起對大鼠陰道形態(tài)和性甾體受體表達(dá)的影響。DHEA經(jīng)皮給藥避免了通過肝臟的首過效應(yīng)(Labrie等人，1996，Endocrinol，150：S107-S118)。最后，我們的結(jié)果顯示出了用倍美力處理有顯著的陰道重量增加，當(dāng)與OVX動物相比時，該值類似于在DHEA-處理組中觀察到的值。適當(dāng)?shù)幕仡櫲缦?，雖然嚙齒動物陰道和子宮重量增加通常被用作動情力的衡量標(biāo)準(zhǔn)，然而在其它化合物中，這些器官也可以響應(yīng)黃體酮和睪酮(EmmensandMartin，1964，DorfmanEd，EdAcademicPressNY：1)。在可能的三聯(lián)組合中，馬雌激素倍美力的目標(biāo)是作用于腦以緩解血管舒縮癥狀。事實上，純選擇性抗雌激素Acolbifene與雌激素聯(lián)合給藥以中和雌激素不希望出現(xiàn)的外周效應(yīng)的益處已經(jīng)由Labrie等人充分描述了(Labrie等人，2003，Endocrinol，144(11)：4700-4706)。在本研究中，當(dāng)Acolbifene對OVX動物施用時，由SERM引起的最典型的形態(tài)學(xué)特征是覆蓋基底細(xì)胞層的壁對齊的小粘液細(xì)胞淺層的出現(xiàn)，這是在倍美力+Acolbifene組中略微更顯著的模式，這種模式在用Acolbifene處理的所有組中仍然具有優(yōu)勢，包括當(dāng)把SERM加入到DHEA中時。在未成年大鼠(AndersonandKang，1975，AmJanat，144(2)：197-207)和成年大鼠(Yoshida等人，1998，CancerLett，134(1)：43-51)中已經(jīng)報道了在抗雌激素處理下的陰道上皮粘液化。雖然已經(jīng)將這種形態(tài)模式與黃體酮引起的粘液化進(jìn)行了對比(AndersonandKang，1975，AmJanat，144(2)：197-207)，但是由抗雌激素引起的上皮粘液化的分子機(jī)制仍然是未知的。已經(jīng)在絕經(jīng)后女性中報道了DHEA的很多有益效果(Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505；Labrie等人，1991，MolCellEndocrinol，78：C113-C118)。由于對DHEA特異的受體還沒有被表征，所以在大鼠陰道DHEA處理以后觀察到的形態(tài)學(xué)改變反映出它胞分泌轉(zhuǎn)變成通過胞分泌機(jī)制具有雄激素作用和/或雌激素作用的活性性甾體(Labrie等人，1991，MolCellEndocrinol，78：C113-C118)。那些改變包括強(qiáng)烈的上皮粘液化、高度敏銳的緊密性、具有細(xì)微紋理的固有層膠原纖維和中度的肌層厚度都增加了，當(dāng)與OVX動物相比時。兩種最先的形態(tài)學(xué)改變是典型的雄激素作用，而第三是顯示出了雌激素樣活性，這從伴隨著的肌層內(nèi)黃體酮受體表達(dá)增加得到了進(jìn)一步的支持。由于DHEA在外周組織中轉(zhuǎn)變成了雄激素和雌激素二者之一或這二者，所以在本研究中用DHEA處理OVX動物后觀察到的稠粘液化的多層上皮表明了大鼠陰道內(nèi)粘液化的占優(yōu)勢的雄激素作用，這種作用可以在上皮水平掩蓋任何可能的共存的少量雌激素作用。先前的研究已經(jīng)顯示出了大鼠陰道內(nèi)相同的粘液化作用(Sourla等人，1998，JSteroidBiochem.Mol.Biol.，66(3)：137-149)。在那項先前的研究中，陰道內(nèi)應(yīng)用DHEA取得了顯著的作用，其劑量比DHEA應(yīng)用于背部皮膚之后產(chǎn)生作用所需的劑量低十倍。目前的數(shù)據(jù)表明在大鼠陰道內(nèi)共同存在有主要的雄激素作用和次要的雌激素作用。而且，目前的結(jié)果得到了OVX動物陰道上皮的觀察結(jié)果的很好的支持，所述動物接受同樣局部應(yīng)用的DHEA，和我們的研究中所用的相比，還加上皮下劑量的抗雄激素氟他胺(FLU)(未公布的結(jié)果)。的確，由DHEA的雄激素成分產(chǎn)生的粘液化的雄激素作用被FLU完全逆轉(zhuǎn)了，并且產(chǎn)生了復(fù)層鱗狀上皮，這是典型的雌激素作用(數(shù)據(jù)未顯示)。如果DHEA在大鼠陰道中具有特殊的雄激素作用(粘液化)，那么這種作用將被FLU逆轉(zhuǎn)，然后又會觀察到與OVX動物類似的萎縮的上皮。在性腺切除的雄性和雌性大鼠中進(jìn)行的先前的研究已經(jīng)清楚地證明了DHEA的處理會導(dǎo)致對前列腺、精囊和子宮產(chǎn)生刺激的雄激素和/或雌激素作用，這取決于所研究的靶組織(Labrie等人，1988，Endocrinol，123：1412-1417)。另一方面，DHEA+Acolbifene的聯(lián)合顯示出了上皮粘液化程度減少，從而表現(xiàn)出很好對齊的粘液細(xì)胞層——Acolbifene作用——和多層肥大粘液細(xì)胞內(nèi)陷的交替，這對應(yīng)于DHEA的雄激素作用。因此，Acolbifene抑制DHEA的部分雌激素作用，而DHEA的主要雄激素對應(yīng)成分(counterpart)則被保留，并加入了Acolbifene的少許雌激素樣作用，后者在陰道口水平上能看得最清楚。在Acolbifene加入到DHEA之后觀察到的陰道重量減少比Acolbifene加入到倍美力之后獲得的陰道重量減少要小，這說明了被抗雌激素逆轉(zhuǎn)的DHEA的雌激素成分較少，而主要的雄激素成分未受影響。另外，在DHEA+Acolbifene組中固有層厚度和膠原纖維緊密程度的增加，當(dāng)分別與OVX組和未受損動物相比較時，再次表明了雄激素在增加膠原緊密程度和厚度方面的潛在作用，因為DHEA的雌激素成分被Acolbifene阻斷了。其它研究已經(jīng)證明了DHEA對大鼠乳腺(Sourla等人，1998，Endocrinol，139：753-764)、皮膚皮脂腺(Sourla等人，2000，JEndocrinol，166(2)：455-462)和骨礦物質(zhì)密度(Martel等人，1998，JEndocrinol，157：433-442)的作用幾乎是唯一的雄激素作用。然而，大鼠陰道內(nèi)DHEA的雌激素作用的存在先前已經(jīng)在用該化合物處理過的未成熟大鼠中通過誘導(dǎo)陰道開放和早熟排卵而證明過了，而DHT，一種不能芳構(gòu)化成雌激素的雄激素，沒有產(chǎn)生這種作用(KnudsenandMahesh，1975，Endocrinol，97(2)：458-468)。大鼠陰道組織使雄激素尤其是Testo芳構(gòu)化的能力很有可能解釋DHEA在該器官中的大部分雌激素作用(Lephart等人，1989，BiolReprod，40(2)：259-267)。雄甾-5-烯-3β,17β-二醇(5-二醇)，已知與雌激素受體結(jié)合的一種DHEA代謝產(chǎn)物(Shao等人，1950，JBiolChem，250：3095-3100；Poortman等人，1975，JClinEndocrinolMetab，40(3)：373-379；VanDoorn等人，1981，Endocrinol，108：1587-1594；Adams等人，1981，CancerRes，41：4720-4726)，也可能促成雌激素作用(PoulinandLabrie，1986，CancerRes，46：4933-4937)。因此，抗雌激素Acolbifene與DHEA的計劃聯(lián)用將會避免5-二醇的任何不希望的刺激作用。另一方面，通過防止骨流失，acolbifene還將顯示出額外的益處(Martel等人，2000，JSteroidBiochemMolBiol，74(1-2)：45-56)。在我們的知識的最大范圍之內(nèi)，先前還沒有研究顯示出DHEA對固有層膠原纖維的緊密度和形態(tài)具有刺激作用，范圍縮小一些，甚至沒有顯示出對肌層的刺激作用。這種DHEA-衍生的雄激素和雌激素作用對于絕經(jīng)后女性的陰道功能可能會具有有益的影響，并且將為5型磷酸二酯酶抑制劑如昔多芬或tadalafil的作用提供所需的底物，所述作用有可能是經(jīng)由雄激素或雌激素-誘導(dǎo)的內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)-介導(dǎo)的促進(jìn)陰道平滑肌舒張(綜述在Munarriz等人，2003，JUrol，170(2Pt2)：S40-S44，DiscussionS44-S45)。事實上，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了Acolbifene引起了人類和大鼠上皮細(xì)胞的eNOS(Simoncini等人，2002，Endocrinol，143(6)：2052-2061)。在用DHEA處理的所有組中獲得的結(jié)果顯示，從大鼠陰道內(nèi)DHEA胞分泌轉(zhuǎn)化衍生的雄激素在三個組織隔層中以類似的方式上調(diào)了AR表達(dá)。伴隨著雄激素對大鼠陰道AR的強(qiáng)烈調(diào)節(jié)所觀察到的有益的形態(tài)學(xué)改變說明，絕經(jīng)后女性DHEA-衍生的雄激素的血清水平下降可能會促成這個年齡組的陰道健康下降并最終促成性欲缺乏和性快感喪失。確實在為性欲降低尋求咨詢的女性中發(fā)現(xiàn)了下降的血清總Testo、游離Testo和DHEA-S(GuayandJacobson，2002，JSexMaritalTher，28Suppl1：129-142)。在本研究中，我們已經(jīng)顯示了用DHEA或用DHEA與Acolbifene的聯(lián)合以及用DHEA與Acolbifene和倍美力的聯(lián)合處理OVX雌性大鼠，經(jīng)由AR，通過占優(yōu)勢的雄激素作用，逆轉(zhuǎn)了在陰道中發(fā)現(xiàn)的OVX-引起的萎縮改變，這反應(yīng)在強(qiáng)烈的上皮粘液化和固有層內(nèi)膠原纖維的緊密度增加。單獨用DHEA處理也適當(dāng)?shù)卦龃罅思雍穸?。該?shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了從外周靶組織中的DHEA和DHEA-S局部合成的性甾體的重要性。除了這些有益作用以外，Acolbifene還降低了炎癥的發(fā)病率，這很可能是通過陰道口的保護(hù)角質(zhì)化鱗狀上皮的雌激素-樣誘導(dǎo)作用和內(nèi)部粘液化的抗雌激素作用。已經(jīng)進(jìn)行了各種嘗試來解決陰道干燥的問題，該問題通常與性交困難和性快感喪失相關(guān)聯(lián)。舉例來說，通常開出局部陰道雌激素制劑的藥方來提供緩解，但是子宮內(nèi)膜可能被非對抗性雌激素刺激(Mattson等人，1989，Maturitas，11：217-222)。在切除子宮的絕經(jīng)后女性中，ERT仍然被使用，但公知具有發(fā)展成乳腺癌的增加的風(fēng)險。而且，ERT通過增加性激素結(jié)合球蛋白而降低血漿雄激素水平，這可能會引起相對的卵巢和腎上腺雄激素缺乏，從而為同時存在的生理雄激素替代創(chuàng)造了額外的理論(Casson等人，1997，ObstetGynecol，90(6)：995-998).實施例2方法動物和處理使用切除了卵巢的體重215-265g的10到12周齡的雌性Sprague-Dawley大鼠(CrL:CD(SD)Br)(CharlesRiverLaboratory，St-Constant，Canada)。將動物單獨圈養(yǎng)在環(huán)境控制室內(nèi)(溫度：22±3℃；濕度：50±20％；12-h光照-12-h黑暗循環(huán)，在07:15h開燈)。動物可自由接近自來水和合格的嚙齒動物食物(LabDiet5002(團(tuán)粒)，RalstonPurina，St-Louis，MO)。本實驗是在動物實驗室中根據(jù)保護(hù)和使用實驗動物的CCAC指南進(jìn)行的，該實驗室是由加拿大動物保護(hù)理事會(CCAC)和實驗動物保護(hù)鑒定和委派協(xié)會(AAALAC)批準(zhǔn)的。進(jìn)行不同的實驗：兩項20天的研究和兩項8個月的研究。在這兩項第一個實驗的每一個中，將動物隨機(jī)分成3組，每組13或14只動物，分組如下：1)未受損對照組；2)切除卵巢(OVX)對照組；3)OVX+雷洛昔芬(0.5mg/kg)，或3)OVX+LY363381(0.5mg/kg)。在第一項8個月的研究中，將動物隨機(jī)分成5組，每組7-8只動物，分組如下：1)未受損對照組；2)切除卵巢(OVX)對照組；3)OVX+Acolbifene(0.5mg/kg)；4)OVX+ERA-923(0.5mg/kg)；5)OVX+TSE-424(0.5mg/kg)。在另一項8個月的研究中，將動物隨機(jī)分成3組，每組10-11只動物，分組如下：1)未受損對照組；2)切除卵巢(OVX)對照組；3)OVX+拉索昔芬(0.5mg/kg)。在研究的第一天，將適當(dāng)組的動物在異氟烷麻醉下雙側(cè)切除卵巢(OVX)。然后從研究的第1天到第20天，或者從研究的第1天到第32周通過口服強(qiáng)飼法每天一次給予作為0.4％甲基纖維素混懸液(0.5ml/大鼠)中的試驗化合物。最后一次給藥后24小時，在異氟烷麻醉下通過放血將動物處死。收集陰道并在切除后立即將其浸入10％中性緩沖福爾馬林。然后將陰道切成7個橫節(jié)段(用于Acolbifene、ERA-923和TSE-424)，或者只將樣品切成中部橫節(jié)段(雷洛昔芬、拉索昔芬或LY363381)。然后常規(guī)處理各節(jié)段，并包埋在石蠟塊中。適當(dāng)?shù)臅r候，將所有節(jié)段按照它們原來的解剖位置的順序放置在石蠟塊中，并與石蠟塊表面垂直定向放置，從而能在橫切面上切割各節(jié)段。每只動物都切割4μm厚的石蠟切片，并用蘇木精-曙紅染色，以進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查。在圖10和11中顯示了不同SERM之間的比較：在放大率200×下，OVX大鼠的陰道上皮形態(tài)。圖A到D顯示了陰道第1節(jié)段(陰道口)的上皮形態(tài)。雖然OVX動物的上皮是薄的(4-6個細(xì)胞層)，萎縮的，并且在A中沒有顯示出可見的顆粒層，但是在3個SERMs中同樣的上皮卻是厚的(8-11個細(xì)胞層)，并且在B、C和D中顯示出了多層顆粒隔層。在E到K中，描述了位于陰道中部的節(jié)段。在OVX動物中，E中的陰道上皮是薄的和萎縮的(2-3個細(xì)胞層)，然而在所有的處理組中該厚度卻增加了(F到K)，這是由于覆蓋基底細(xì)胞層的一個(Acolbifene、ERA-923和TSE-424)或多個(雷洛昔芬、拉索昔芬或LY363381)粘液細(xì)胞層的存在。實施例3材料和方法實驗開始時，使用體重大約250-275g的10到12周齡的雌性Sprague-Dawley大鼠(CrL:(SD)Br)(CharlesRiverLaboratory，St-Constant，Canada)。在實驗開始前使動物適應(yīng)環(huán)境條件(溫度：22±3℃；濕度：50±20％；12-h光照-12-h黑暗循環(huán)，在07:15h開燈)至少一周。將動物單獨圈養(yǎng)，并可自由接近水和嚙齒動物食物(LabDiet5002，RalstonPurina，St-Louis，MO)。本實驗是根據(jù)保護(hù)和使用實驗動物的CCAC指南進(jìn)行的，該指南是由加拿大動物保護(hù)理事會(CCAC)和實驗動物保護(hù)鑒定和委派協(xié)會(AAALAC)批準(zhǔn)的。將總共25只雌性大鼠隨機(jī)分成5組，分組如下：1)3只切除卵巢的不受影響的對照組(OVX)；2)4只OVX+安慰劑栓劑；3)6只OVX+0.33mgDHEA栓劑；4)6只OVX+0.66mgDHEA栓劑；5)6只OVX+1.00mgDHEA栓劑。在研究的第1天，在異氟烷-誘導(dǎo)麻醉下將所有組的動物都進(jìn)行雙側(cè)卵巢切除(OVX)。在研究的第5天開始將一個栓劑插入陰道，并持續(xù)每天一次，直至研究的第18天，總共處理14天。將栓劑輕輕地放在陰道開口處，然后在小光滑玻璃棒的幫助下在陰道內(nèi)小心推大約2-3mm，玻璃棒用70％乙醇消毒，并在各只動物使用之間使其干燥。最后一次給藥后24小時，在異氟烷麻醉下通過放血將動物處死。收集陰道——包括尿道——和子宮，然后如下所述進(jìn)行修建。為了進(jìn)行進(jìn)一步的分析，抽取兩片腹股溝乳腺的樣品，還抽取大約2×2cm的脫毛背部皮膚正方形片的樣品，將后者放在一張卡片紙上并輕輕地弄平。栓劑的制備用WhitepsolH-15基質(zhì)制備DHEA栓劑(Medisca，Montreal，Canada)。也可以使用任何其它的親脂性基質(zhì)，如Fattibase、Wecobee、可可脂、可可豆油或Whitepsol基質(zhì)的其它聯(lián)合。稱取適量DHEA，得到最終體積50μl±3μl，0.33mg或0.66mg或1.00mg每栓劑的最終濃度。根據(jù)先前測量過的栓劑基質(zhì)密度計算要稱重以獲得所需最終體積的栓劑基質(zhì)小丸的適當(dāng)?shù)牧?，?7.5mg每50μl。將栓劑基質(zhì)放入小燒杯中，以50％功率用微波熔化大約3min和30sec，然后轉(zhuǎn)移到加熱板上，將其調(diào)節(jié)到最低功率，以保持栓劑基質(zhì)溫度為50±3℃。然后將DHEA微粉(從ScheweizerhallInc.得到，純度100％)一次性全部加入基質(zhì)中，在被光滑的圓端玻璃棒小心緩慢壓碎和溶解之前，讓整團(tuán)物質(zhì)下沉并潤濕3min。最后，用帶有預(yù)熱吸管端的1000μl-Gilson移液管將含有溶解的DHEA的基質(zhì)(安慰劑是不含DHEA的基質(zhì))傾倒入含有一連串50μl-模具的管架內(nèi)。這些模具是由微量離心管制成的，它們中的每一個之前都用50μl水標(biāo)過刻度，并在水平面處拉出的水平線處切斷。室溫冷卻30min以后，將栓劑在4℃下再放置30min。最后，用保險刀片修建溢出的基質(zhì)，從模具中將栓劑取出，并在4℃下保存在密封玻璃瓶中直至使用。在給動物應(yīng)用之前，使它們恢復(fù)到室溫。組織學(xué)手術(shù)切除后立即將器官浸入10％中性緩沖福爾馬林中。將各個陰道和子宮分成8個相等的橫節(jié)段和4個橫節(jié)段，這4個橫節(jié)段中分別包括來自子宮頸的2個節(jié)段和來自兩個鄰近的角(proximalhorn)和遠(yuǎn)端的角(distalhorn)之一的2個節(jié)段。將這些節(jié)段常規(guī)處理，并全部一起包埋在同一個石蠟塊中。在石蠟塊內(nèi)部，將所有的節(jié)段按照它們原來的解剖位置的順序放置，并與石蠟塊表面垂直定向放置，然后在橫切面上切割各節(jié)段。每只動物都切割4μm厚的石蠟切片，并用蘇木精-曙紅染色，以進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查。結(jié)果上皮形態(tài)在檢查了所有陰道節(jié)段以后，發(fā)現(xiàn)第4和6節(jié)段對于各處理組之間的比較是典型的。第4節(jié)段最接近陰道口，它不顯示出外部皮膚的特征，并且不受或最低限度地受通常在對照動物的陰道粘膜外部區(qū)域中發(fā)現(xiàn)的輕度到中度炎癥改變的影響。第6節(jié)段代表了較深的陰道粘膜，是從子宮頸分離出的唯一一個節(jié)段。一般而言，與背側(cè)相比，陰道腹側(cè)存在較厚的和分泌更多粘液的上皮。未受損如圖13所示，在動情期，陰道上皮主要受雌激素影響，較厚且角質(zhì)化。這出現(xiàn)在第4節(jié)段的12-18個細(xì)胞層中，和第6節(jié)段的12-15層中。與在陰道口處看到的厚復(fù)層鱗狀上皮相反，顆粒層在內(nèi)部陰道上皮中并不明顯。在動情后期，在最低限度激素的影響下，陰道上皮變薄。這出現(xiàn)在第4節(jié)段的6-10個細(xì)胞層中，和第6節(jié)段的5-7層中。切除卵巢的不受影響的如圖14中所示，在第4節(jié)段中，陰道排列著2-6個細(xì)胞層的鱗狀復(fù)層上皮。在動物之間，這個節(jié)段的厚度差別很大。在第6節(jié)段中，觀察到了完全的萎縮，只有2-3個扁平細(xì)胞層?？梢栽谶@些動物的整個陰道中看到一些罕見的小柱狀粘液細(xì)胞病灶集中點。在該組的3只動物中，有2只在外部的3個節(jié)段中出現(xiàn)了輕度炎癥改變。安慰劑如圖15中所示，與OVX不受影響的組相比，安慰劑組的陰道鱗狀復(fù)層上皮稍微厚一些，第4節(jié)段具有4-8個細(xì)胞層。然而在第6節(jié)段中，觀察到了在OVX不受影響的組中發(fā)現(xiàn)的相同的形態(tài)，即2-3個上皮細(xì)胞層。和OVX不受影響的動物一樣，在整個陰道中可以發(fā)現(xiàn)小柱狀粘液細(xì)胞病灶集中點，當(dāng)與OVX不受影響的動物相比時稍微多一些。在該組的4只動物中，3只動物在外部的3個節(jié)段中出現(xiàn)了輕度炎癥改變。DHEA0.33mg/栓劑如圖16中所示，一般而言，在低劑量時，DHEA的形態(tài)學(xué)影響以對齊得很好的圓柱狀粘液細(xì)胞為特征，而在較高劑量時，粘液細(xì)胞擴(kuò)大(肥大)，形成空泡并且混亂。在本組中，DHEA的作用在第2節(jié)段中輕微可辨，在第3-4節(jié)段逐漸增加，在第3-4節(jié)段中，對齊得很好的和肥大的粘液細(xì)胞交替存在。DHEA的作用在第5和6節(jié)段中緩慢減小，在那里幾乎只能觀察到對齊得很好的粘液細(xì)胞。這種作用在第7節(jié)段中變得幾乎不存在了，并且在第8節(jié)段的側(cè)面陰道皺褶中消失了(第8節(jié)段包括子宮頸的開始部分)。這樣，在第4節(jié)段中，陰道上皮是3-7個細(xì)胞層的復(fù)層鱗狀上皮。大約20到60％的陰道內(nèi)層由對齊得很好的粘液細(xì)胞間隔著15到50％的肥大粘液細(xì)胞組成，覆蓋著一個或多個鱗狀復(fù)層上皮層，且具有不分泌粘液的區(qū)域。在第6節(jié)段中，上皮厚度減小至幾乎與在OVX不受影響的動物中所發(fā)現(xiàn)的厚度一樣。它由2-5個細(xì)胞層的鱗狀復(fù)層上皮組成，被對齊得很好的粘液細(xì)胞層所覆蓋。在存在的粘液細(xì)胞中觀察到了大量的變化，這些細(xì)胞覆蓋了5到75％的陰道表面，間隔著不分泌粘液的區(qū)域。在6只處理過的動物中，它們中的4只出現(xiàn)了輕度炎癥，炎癥不平坦地分布在整個陰道上。DHEA0.66mg/栓劑如圖17中所示，在這一組中，在第2節(jié)段中可辨別出DHEA的作用，在第3-4和5節(jié)段中這種作用顯著加大，在那里觀察到了大部分肥大粘液細(xì)胞。肥大粘液細(xì)胞的數(shù)量在第6和7節(jié)段中減少，在那里大部分細(xì)胞是對齊得很好的粘液細(xì)胞。因此，在第4節(jié)段中，復(fù)層鱗狀上皮是3-6個細(xì)胞層厚。大約5到20％的陰道里層由對齊得很好的粘液細(xì)胞間隔著10到75％的肥大粘液細(xì)胞組成，覆蓋著一個或多個鱗狀復(fù)層上皮層。還存在不分泌粘液的區(qū)域。在第6節(jié)段中，上皮厚度減小，且由2-4個細(xì)胞層的鱗狀復(fù)層上皮組成，該上皮被對齊得很好的粘液細(xì)胞層覆蓋。分泌粘液的區(qū)域的數(shù)量占陰道表面的20到80％，且間隔著不分泌粘液的區(qū)域。在6只處理過的動物中，2只動物在3個外部節(jié)段中顯示出了輕度炎癥。DHEA1.00mg/栓劑如圖18中所示，在這一組中，DHEA的作用在第2節(jié)段中也可辨別，但這種作用在第3-4和5節(jié)段中顯著增大，在第3-4和5節(jié)段中觀察到了非常大量的肥大粘液細(xì)胞，這種作用在第6-7和8節(jié)段中很緩慢地減小，在第6-7和8節(jié)段中觀察到了非常大量的對齊得很好的粘液細(xì)胞。因此，在第4節(jié)段中，復(fù)層鱗狀上皮具有3-9個細(xì)胞層。覆在3-4個鱗狀細(xì)胞層上面的肥大粘液細(xì)胞覆蓋了50-70％的陰道表面，而對齊得很好的粘液細(xì)胞則覆蓋了5-30％的陰道表面。不分泌粘液的區(qū)域分散在分泌粘液的細(xì)胞之間。在第6節(jié)段中，上皮厚度也減小了，且由2-4個細(xì)胞層組成。覆在1-3個鱗狀細(xì)胞層上面的肥大粘液細(xì)胞覆蓋了大約30-100％的陰道表面，而對齊得很好的粘液細(xì)胞則覆蓋了0-70％。還觀察到了極少數(shù)散在的不分泌粘液的區(qū)域。在6只處理過的動物中，它們中的4只在4個外部節(jié)段中出現(xiàn)了輕度炎癥。結(jié)論1.用于大鼠陰道內(nèi)處理的賦形劑具有令人想要的特性：a.在標(biāo)有刻度的模具中很容易制備；b.完全溶解DHEA微粉的極好的能力，從而確保標(biāo)準(zhǔn)化劑量；c.陰道粘膜沒有顯著的組織反應(yīng)和形態(tài)改變：在前3-4個節(jié)段中只觀察到了輕微的厚度增加，這很可能是由于插入栓劑所用的操作手法的問題。2.DHEA以最低試驗劑量(0.33mg/栓劑)對陰道上皮形態(tài)產(chǎn)生了影響。這種影響從第3節(jié)段到第5節(jié)段變得最大，然后逐漸減小至在第7節(jié)段消失。3.在0.66mg/栓劑的DHEA劑量下，這種作用也在第3節(jié)段中存在，并在第6節(jié)段中仍然很強(qiáng)。4.在1.00mg/栓劑的DHEA劑量下，這種作用從第2-3節(jié)段到鄰近子宮頸的深陰道皺褶處都很強(qiáng)。藥物組合物實施例如下所列，通過實施例的方式而非限制，是利用優(yōu)選的活性SERMAcolbifene、優(yōu)選的活性性甾體前體DHEA、優(yōu)選的激素17β-雌二醇或倍美力、優(yōu)選的5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑昔多芬或Tadalafil的數(shù)種藥物組合物?；钚猿煞值臐舛瓤稍诒疚挠懻摰暮艽蠓秶鷥?nèi)變化?？砂ㄔ趦?nèi)的其它成分的量和類型是本領(lǐng)域公知的。實施例A片劑成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA15.0明膠5.0乳糖63.5淀粉16.5實施例B膠囊成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA15.0含水乳糖70.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4實施例C片劑成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0明膠5.0乳糖58.5淀粉16.5實施例D膠囊成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0含水乳糖65.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4實施例E片劑成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0倍美力0.5明膠5.0乳糖63.0淀粉16.5實施例F膠囊成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0倍美力0.5含水乳糖64.5淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4實施例G片劑成分重量％(按照總組合物的重量)昔多芬15.0DHEA15.0明膠5.0乳糖48.5淀粉16.5實施例H明膠膠囊成分重量％(按照總組合物的重量)昔多芬15.0Acolbifene5.0DHEA15.0含水乳糖50.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4實施例I片劑成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0昔多芬15.0明膠5.0乳糖43.5淀粉16.5實施例J明膠膠囊成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0DHEA15.0昔多芬15.0含水乳糖50.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4實施例K陰道乳膏成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA1.0acolbifene0.2乳化蠟，NF18.0輕質(zhì)礦物油，NF12.0芐醇1.095％乙醇，USP33.8純水，USP34.0實施例L陰道栓劑成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA0.66到2.0WhitepsolH-15基質(zhì)98到99.34用WhitepsolH-15基質(zhì)(Medisca，Montreal，Canada)制備DHEA栓劑?？墒褂萌魏纹渌H脂性基質(zhì)，如Fattibase、Wecobee、可可脂、可可豆油或Whitepsol基質(zhì)的其它組合。藥盒實施例如下所列，通過實施例的方式而非限制，是利用優(yōu)選的活性SERMAcolbifene、優(yōu)選的活性性甾體前體DHEA、優(yōu)選的激素17β-雌二醇或倍美力、優(yōu)選的5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑昔多芬或Tadalafil的數(shù)種藥盒?；钚猿煞值臐舛瓤稍诒疚挠懻摰暮艽蠓秶鷥?nèi)變化?？砂ㄔ趦?nèi)的其它成分的量和類型是本領(lǐng)域公知的。實施例ASERM、雌激素和5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑口服給藥，而性甾體前體局部應(yīng)用或經(jīng)皮給藥?？诜o藥的SERM組合物(膠囊)成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0含水乳糖80.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4口服給藥的SERM+雌激素組合物(膠囊)成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0倍美力0.5含水乳糖79.5淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4口服給藥的SERM+雌激素+5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑組合物(膠囊)成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0倍美力0.5昔多芬15.0含水乳糖64.5淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4局部給藥的性甾體前體組合物(凝膠)成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA2.0辛酸-癸酸甘油三酯(NeobeeM-5)5.02-甲-2,4-戊二醇15.0Transcutol(二乙烯二醇單乙醚)5.0芐醇2.0環(huán)甲硅油(Dowcorning345)5.0乙醇(絕對的)64.0羥丙纖維素(KLUCEL)2.0實施例BSERM和性甾體前體口服給藥口服給藥的非甾體抗雌激素組合物(膠囊)成分重量％(按照總組合物的重量)Acolbifene5.0含水乳糖80.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4口服給藥的性甾體前體組合物(明膠膠囊)成分重量％(按照總組合物的重量)DHEA15.0含水乳糖70.0淀粉4.8微晶纖維素9.8硬脂酸鎂0.4在上述制劑中其它的SERMs(托瑞米芬、Ospemifene、雷洛昔芬、阿佐昔芬、拉索昔芬、TSE-424、ERA-923、EM-800、SERM3339、GW-5638)可替換Acolbifene，其它的性甾體抑制劑可替換DHEA，其它的雌激素可替換倍美力，其它類型的5cGMP磷酸二酯酶抑制劑或前列腺素El可替換昔多芬或Tadalafil?？砂ㄒ环N以上的SERM或一種以上的前體或雌激素或5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑，在這種情況下加起來的重量百分?jǐn)?shù)優(yōu)選是上述實施例中給出的單個前體或單SERM的重量百分?jǐn)?shù)。已經(jīng)以優(yōu)選的實施方案和實施例的方式描述的本發(fā)明，但并不因此而受限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易地辨別出較寬的適用性和僅受專利實施方案限制的本發(fā)明的范圍。1.治療或降低絕經(jīng)后女性獲得影響陰道固有層和/或肌層的問題的可能性的方法，所述方法包括給予有所述治療需求的患者選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄甾酮、雄甾-5-烯-3β,17β-二醇和4-雄甾烯-3,17-二酮的性甾體前體。2.實施方案1的方法，進(jìn)一步包括作為聯(lián)合治療一部分的給予所述患者治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的步驟。3.實施方案1或2的方法，進(jìn)一步包括作為聯(lián)合治療一部分的給予所述患者治療有效量的雌激素的步驟。4.治療或降低絕經(jīng)后女性獲得陰道炎癥可能性的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑。5.增加絕經(jīng)后女性陰道上皮中粘液細(xì)胞的數(shù)量和大小的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑。6.實施方案1、2或3的方法，其中，陰道疾病是選自陰道干燥、性交困難和性功能障礙的疾病。7.增加絕經(jīng)后女性陰道壁固有層中膠原纖維的緊密度的方法，所述方法包括給予有所述治療需求的患者選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄甾酮、雄甾-5-烯-3β,17β-二醇和4-雄甾烯-3,17-二酮的性甾體前體。8.增加絕經(jīng)后女性陰道壁肌層厚度的方法，所述方法包括給予有所述治療需求的患者選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄甾酮、雄甾-5-烯-3β,17β-二醇和4-雄甾烯-3,17-二酮的性甾體前體。9.治療或降低絕經(jīng)后女性獲得性功能障礙的可能性的方法，所述方法包括給予有所述治療需求的所述患者治療有效量的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，進(jìn)一步包括作為聯(lián)合治療一部分的給予所述患者治療有效量的5型CGMP磷酸二酯酶抑制劑或前列腺素的步驟。10.實施方案9的方法，進(jìn)一步包括給予所述患者治療有效量的選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄甾酮、雄甾-5-烯-3β,17β-二醇和4-雄甾烯-3,17-二酮的性甾體前體的步驟。11.任一前述實施方案1、2、3、7和8的方法，其中，性甾體前體是脫氫表雄酮。12.任一前述實施方案1、2、3、7和8的方法，其中，性甾體前體是硫酸脫氫表雄甾酮。13.任一前述實施方案1、2、3、7和8的方法，其中，性甾體前體是雄甾-5-烯-3β,17β-二醇。14.實施方案9的方法，其中，5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑選自昔多芬(1-[[3-(4,7-二氫-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺?；鵠-4-甲基哌嗪)、Tadalafil(6R,12aR)-6-(1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-2,3,6,7,12,12a-六氫-2-甲基吡嗪并[1',2':1,6]吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮、DA-8159、EMR-62203、TA-1790、UK-371800和SCH-446132。15.實施方案9的方法，其中，前列腺素是前列腺素E1(前列地爾；(11α,13E,15S)-11,15-二羥基-9-氧代前列腺-13-烯-1-酸))。16.陰道應(yīng)用的藥物組合物，包括：a)藥學(xué)可接受的賦形劑、稀釋劑或載體；b)治療有效量的選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮和雄甾-5-烯-3β,17β-二醇的性甾體前體。17.藥物組合物，包括：a)藥學(xué)可接受的賦形劑、稀釋劑或載體；b)治療有效量的至少一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，和c)治療有效量的至少一種5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑。18.藥物組合物，包括：a)藥學(xué)可接受的賦形劑、稀釋劑或載體；b)治療有效量的至少一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑；c)治療有效量的至少一種5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑，和d)治療有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮和雄甾-5-烯-3β,17β-二醇的性甾體前體。19.藥盒，包括包含治療有效量的至少一種選自前列腺素E1、昔多芬和Tadalafil的5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑的第一容器，和進(jìn)一步包括包含治療有效量的至少一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的第二容器。20.藥盒，包括包含治療有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、雄甾-5-烯-3β,17β-二醇的性甾體前體的第一容器，和進(jìn)一步包括包含治療有效量的至少一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的第二容器和包含治療有效量的至少一種5型cGMP磷酸二酯酶抑制劑或前列腺素E1的第三容器。21.前述實施方案2到5，9，17到20，42和43的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有有下述特征的分子式：a)兩個芳環(huán)被1到2個插入碳原子間隔，兩個芳環(huán)都未被取代或者被羥基或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的基團(tuán)取代；b)具有芳環(huán)和叔胺官能團(tuán)或其鹽的側(cè)鏈。22.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，側(cè)鏈選自：23.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，兩個芳環(huán)都是苯基，且側(cè)鏈具有選自次甲基、亞甲基、-CO、-O-和-S-、芳環(huán)和叔胺官能團(tuán)或其鹽的部分。24.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自苯并噻吩衍生物、三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并吡喃衍生物、5,6,7,8-四氫萘和苯并二氫吡喃衍生物。25.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是下式的苯并噻吩衍生的化合物：其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R3和R4獨立地選自：C1-C4烷基，或者其中的R3、R4和它們結(jié)合的氮，一起為選自吡咯烷子基、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基和嗎啉代的任何結(jié)構(gòu)；其中A選自-CO-、-CHOH和-CH2-；其中B選自次苯基、吡啶亞基和-環(huán)C4H2N2-。26.實施方案25的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自雷洛昔芬、阿佐昔芬(LY353381)和LY335563。27.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑下式的三苯乙烯衍生的化合物：其中D是-OCH2CH2N(R3)R4或-CH＝CH-COOH(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或者R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基和嗎啉代的環(huán)狀結(jié)構(gòu))；其中E和K獨立地是氫或羥基；其中J是氫或鹵素。28.實施方案27的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是他莫昔芬、OH-他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene和GW5638。29.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是下式的吲哚衍生的化合物：其中D選自-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CON(R7)R8、-CC-(CH2)n-N(R7)R8(R7和R8都獨立地選自C1-C6烷基、或R7、R8和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代的環(huán)狀結(jié)構(gòu))；其中X選自：氫和C1-C6烷基；其中R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自：氫、羥基、C1-C6烷基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分。30.實施方案29的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是TSE-424和ERA-923。31.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是下式化合物：其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基、和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R5和R6獨立地是氫或C1-C6烷基；其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或者R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代的環(huán)狀結(jié)構(gòu))。其中X選自-O-和-CH2-。32.實施方案31的方法、藥物組合物或藥盒，其中，化合物選自：(-)-順式-(5R,6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基]-5,6,7,8-四氫萘-2-醇，D-(-)-酒石酸鹽(拉索昔芬)和(3,4-反式-2,2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧基色滿]。33.實施方案21的方法、藥物組合物或藥盒，其中，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑具有下述結(jié)構(gòu)：其中R1和R2獨立地是氫、羥基或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中Z是二價封閉部分；其中R100是通過4-10個插入原子將L隔離B環(huán)的二價部分；其中L是選自-SO-、-CON-、-N<和-SON<的二價或三價極性部分；其中G1選自氫、C1到C5的烴或連接G2和L以形成5-到7-元雜環(huán)的二價部分、和鹵素或前述基團(tuán)的不飽和衍生物；其中G2不存在或選自氫、C1到C5的烴或連接G1和L以形成5-到7-元雜環(huán)的二價部分、和鹵素或前述基團(tuán)的不飽和衍生物；其中G3選自氫、甲基和乙基。34.實施方案33的方法、藥物組合物或藥盒，其中，Z選自-O-、-NH-、-S-和-CH2-。35.實施方案33的方法、藥物組合物或藥盒，其中，化合物是下述通式結(jié)構(gòu)的苯并吡喃衍生物：其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都獨立地選自C1-C4烷基，或R3、R4和它們結(jié)合的氮原子一起為選自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亞甲基亞氨基、嗎啉代、環(huán)的環(huán)狀結(jié)構(gòu))。其中R1和R2獨立地選自：氫、羥基和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分。36.實施方案35的方法、藥物組合物或藥盒，其中，苯并吡喃衍生物是在碳2上具有絕對構(gòu)型S的旋光性化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，所述化合物具有下述分子結(jié)構(gòu)：其中R1和R2獨立地選自羥基和在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基的部分；其中R3是選自飽和的、不飽和的或取代的吡咯烷基，飽和的、不飽和的或取代的哌啶子基，飽和的、不飽和的或取代的哌啶基，飽和的、不飽和的或取代的嗎啉代，含氮環(huán)狀部分，含氮多環(huán)部分和NRaRb(Ra和Rb獨立地是氫、直連或支鏈C1-C6烷基、直連或支鏈C2-C6鏈烯基和直連或支鏈C2-C6炔基)。37.實施方案36的方法、藥物組合物或藥盒，其中，所述化合物或鹽基本上不含(2R)-對映異構(gòu)體。38.實施方案35的方法、藥物組合物或藥盒，其中，苯并吡喃衍生物是選自乙酸、已二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、富馬酸、氫碘酸、氫溴酸、鹽酸、雙氫氯噻嗪酸、羥萘甲酸、乳酸、馬來酸、甲磺酸、甲基硫酸、1,5-萘二磺酸、硝酸、棕櫚酸、三甲基醋酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對苯二甲酸、對-甲苯磺酸和戊酸的酸的鹽。39.任一前述實施方案2到5，9，17到20，42和43的方法、藥物組合物或藥盒，其中，所述選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑是：Acolbifene40.任一前述實施方案2到5，9，17到20，42和43的方法、藥物組合物或藥盒，其中，所述選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑選自雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene、GW5638、TSE-424、ERA-923和拉索昔芬。41.實施方案1的方法，其中性甾體前體是陰道內(nèi)給藥的。42.實施方案16的藥物組合物，另外包括治療有效量的至少一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑。43.實施方案42的藥物組合物，另外包括治療有效量的至少一種雌激素。當(dāng)前第1頁1 2 3