本發(fā)明涉及一種膝關(guān)節(jié)半月板缺損修復(fù)的復(fù)合支架材料及其制備方法，特別涉及一種蠶絲/膠原復(fù)合支架的制備方法及其在半月板缺損修復(fù)中的應(yīng)用。

(二)

背景技術(shù)：

半月板是位于膝關(guān)節(jié)股骨和脛骨平臺之間的纖維軟骨組織，具有傳遞負荷，吸收震蕩，維持膝關(guān)節(jié)穩(wěn)定性，從而保護軟骨的作用。在體育活動及日常生活中，半月板因受到撞擊、擠壓、研磨和牽拉等多種刺激，極易發(fā)生急性損傷(多發(fā)于40歲以下的年輕人)和慢性勞損(多發(fā)于65歲以上的老年人)。隨著年齡的增長，半月板也逐漸發(fā)生自身的退變，從而導(dǎo)致其發(fā)生損傷的概率明顯增加，最高可達60％左右。在美國，平均每年有150萬例的膝關(guān)節(jié)鏡手術(shù)病例，而其中有一半以上涉及到半月板組織。

臨床上，目前半月板損傷的主要治療方式包括縫合修補、部分/大部分切除、同種異體移植和異種移植等。然而，這些治療方式尚不完美，均存在著一定的缺陷。直接縫合只適合于外側(cè)的紅區(qū)或中間的紅白區(qū)，且修復(fù)作用十分有限，組織愈合率低，而對于缺乏血供的內(nèi)側(cè)白區(qū)則基本無效。由于半月板內(nèi)側(cè)白區(qū)部分缺少血供，自我修復(fù)能力差，因此對于白區(qū)的損傷多采用部分或大部分切除術(shù)，雖然該治療方法能在短期內(nèi)明顯改善患者臨床癥狀，如彈響，卡壓和疼痛等，但長期隨訪研究表明這種治療方式會不可避免地加速關(guān)節(jié)軟骨的退變，從而繼發(fā)骨性關(guān)節(jié)炎。同種異體或異種移植術(shù)主要適用于半月板全切術(shù)后，雖然有良好的短中期療效，但也存在供體來源缺乏、形狀不匹配，免疫排斥、疾病傳播風(fēng)險等問題，從而限制了其應(yīng)用。

隨著組織工程技術(shù)的興起，該技術(shù)手段已越來越成為現(xiàn)有臨床治療手段的有力補充，有的甚至開辟了新的道路。在半月板組織工程技術(shù)中，可降解組織工程支架CMI(collagen meniscus implant)成為首個商業(yè)化的產(chǎn)品，但后續(xù)的臨床應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)，單純的膠原支架初始力學(xué)性能不足，體內(nèi)降解過快，無法達到長期替代天然半月板的功能，從而無法起到保護關(guān)節(jié)軟骨的作用。部分研究者采用可降解的高分子合成材料制成半月板組織工程支架，雖然其力學(xué)特性有所提升，但是生物相容性較差，降解產(chǎn)物存在一定毒性。專利200710192209.2，醫(yī)用膝關(guān)節(jié)半月板的制備方法，提供了一種復(fù)合編織蠶絲和膠原的支架，然而其隨著膠原的降解，無法提供持續(xù)的力學(xué)強度。總之，當(dāng)前半月板組織工程支架的研究不能很好地仿生模擬正常半月板在體內(nèi)的完整結(jié)構(gòu)和功能，不能提供合適的力學(xué)強度，從而難以有效地保護關(guān)節(jié)軟骨。因此，如何制備一種能夠模擬天然半月板形態(tài)、結(jié)構(gòu)及功能，且具有持續(xù)良好力學(xué)性能的復(fù)合型半月板支架的問題亟待解決。

(三)

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種三維蠶絲/膠原復(fù)合支架、制備方法及應(yīng)用，該支架模擬天然半月板形態(tài)、結(jié)構(gòu)及功能，具有持續(xù)良好力學(xué)性能，可應(yīng)用于膝關(guān)節(jié)半月板損傷修復(fù)的醫(yī)用支架。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一種蠶絲/膠原復(fù)合支架，所述支架按如下方法制備：(1)以桑蠶蠶絲為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析，獲得截留液，將截留液或截留液的濃縮液過濾或離心，取濾液或上層離心液得到絲素蛋白，用去離子水配制成絲素蛋白溶液；(2)將絲素蛋白溶液加入模具中，-80℃放置至絲素蛋白溶液固化，真空干燥2-3天，脫模后再在體積濃度70～100％乙醇水溶液中浸泡0.5～2小時，然后在溫度35～75℃，濕度70～100％條件下放置0.5～2小時(優(yōu)選90％乙醇水溶液中浸泡1h，60℃、濕度90％條件下放置1h)，晾干，獲得交聯(lián)絲素蛋白支架；所述模具為兩端設(shè)有帶活塞的筒體，所述活塞與筒體緊密配合，所述筒體的表面設(shè)有透氣孔；(3)將交聯(lián)絲素蛋白支架浸入5～20mg/ml(優(yōu)選10mg/ml)的膠原溶液中，使用凍干機抽真空1～3min，再在交聯(lián)絲素蛋白支架表面滴加一層5～20mg/ml(優(yōu)選10mg/ml)的膠原溶液，真空干燥2-3天，再在25～110℃放置交聯(lián)，獲得蠶絲/膠原復(fù)合支架。

進一步，步驟(1)所述活塞在遠離筒體一端設(shè)有擋件。

進一步，步驟(1)所述絲素蛋白溶液濃度為50～150mg/ml。具體所述絲素蛋白溶液的制備:a)脫膠：將桑蠶蠶絲放入2M碳酸鈉水溶液中，96℃水浴30min，純化水清洗，該過程重復(fù)3次，脫去絲膠蛋白，留下絲素蛋白，將絲素蛋白在50℃烘干，獲得干燥后的絲素蛋白；碳酸鈉水溶液體積用量以桑蠶蠶絲質(zhì)量計為50L/g；b)溶解：將上述干燥后的絲素蛋白以質(zhì)量體積比0.2：1溶于9.3M的溴化鋰(LiBr)水溶液中，60℃水浴90min至絲素蛋白充分溶解，獲得含絲素蛋白和少量不溶性顆粒組成的混合液；c)透析：將混合液用再生纖維素透析袋(截留分子量4000道爾頓)透析，用10倍混合液體積的無菌純化水在3d透析12次，去除溶液中的LiBr離子，獲得截留液a；d)濃縮：將透析后的透析袋放入4倍體積的質(zhì)量濃度50％聚乙二醇(PEG，分子量7000)水溶液，室溫靜置濃縮5h，取截留液b，即獲得截留液a的濃縮液；e)將截留液b在水平轉(zhuǎn)子5000g，4℃，離心10min，除去底部的未溶解絲素蛋白和溴化鋰中可能存在不溶性顆粒，取上清液在-80℃冷凍干燥2-3天，獲得凍干的絲素蛋白；取凍干后的絲素蛋白用去離子水在4℃溶解3天，配制成50～150mg/ml的絲素蛋白溶液。

進一步，步驟(2)所述模具由一次性溶量注射器制成；以注射器的截去針座的空筒為筒體，空筒兩端各自帶有密切配合活塞，同時在筒體上開鑿?fù)笟饪?，通氣孔的孔?0～100μm。

進一步，步驟(2)將絲素蛋白溶液加入模具中，推動活塞排除氣體后將透氣孔密封。

進一步，步驟(2)真空干燥條件為-120℃、0MPa。

進一步，步驟(3)真空干燥條件為-120℃、0MPa。

進一步，步驟(3)交聯(lián)條件為：分別在25℃真空干燥1天，在110℃真空干燥3天，在65℃真空干燥1天。

本發(fā)明還提供一種所述蠶絲/膠原復(fù)合支架在制備膝關(guān)節(jié)半月板缺損修復(fù)材料中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述膠原溶液的制備按如下步驟進行：取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成小塊后使用純化水沖洗。在4℃，pH2.5的醋酸緩沖液中孵育16h后，使用華林勻漿器勻漿。4℃，22000g離心15min，棄上清。洗滌：使用含20mM EDTA、2mM N-乙基馬來酰亞胺(NEM)、0.1M NaCl的0.05M Tris-HCl(pH7.2)混合溶液洗滌沉淀物3天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液，再使用含20mM EDTA、2mM NEM、1.0M NaCl的0.05M Tris-HCl(pH7.2)洗滌5天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液。進一步純化：含4M尿素和2mM NEM的0.5M醋酸緩沖液(pH2.5)洗滌1天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液；用含2mM NEM的0.5M醋酸緩沖液(pH2.5)洗滌3天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液。最后分別用去離子水，丙酮，去離子水洗滌2、4和3天，即得所需純度膠原蛋白，使用pH2.5，0.5M醋酸緩沖液配置成5～20mg/ml的膠原溶液，備用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：

1.本發(fā)明蠶絲/膠原復(fù)合支架同時具有良好的力學(xué)性能和生物相容性，填補了單一材料支架的缺陷，在移植早期就能承擔(dān)半月板穩(wěn)定膝關(guān)節(jié)、傳導(dǎo)負荷、保護關(guān)節(jié)軟骨等作用。

2.本發(fā)明蠶絲/膠原復(fù)合支架具有多孔性，孔隙連接性良好，能促進移植后期細胞浸潤和血管長入。

3.本發(fā)明蠶絲/膠原復(fù)合支架制作方法簡單，其形狀可通過模具進行調(diào)整。

4.本發(fā)明同時明確了蠶絲/膠原復(fù)合支架的理化特征，并實現(xiàn)了體內(nèi)的功能驗證，為該支架的臨床應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。

(四)附圖說明

圖1為6％、9％、12％三種單純蠶絲支架及蠶絲/膠原復(fù)合支架掃描電鏡圖(100倍)；A、C、E分別代表6％、9％、12％三種濃度的單純蠶絲支架的掃描電鏡圖(×100)；B、D、F分別代表6％、9％、12％三種濃度的蠶絲/膠原復(fù)合支架的掃描電鏡圖(×100)；

圖2為實施例1步驟(6)涂層膠原后的支架掃描電鏡圖(100倍)；

圖3為實施例4中6％、9％、12％三種蠶絲/膠原復(fù)合支架壓縮彈性模量圖；

圖4為實施例5中半月板細胞在不同支架上的增殖曲線圖；

圖5為實施例6支架皮下預(yù)埋2周及2月標本的HE染色圖；

圖6為實施例7中大體動物半月板支架標本照片，A植入支架作為實驗組，B不進行操作作為空白對照，12周后的標本大體照片；

圖7為實施例7中大體動物股骨髁及脛骨平臺標本照片，A、C分別代表實驗組(支架植入側(cè))股骨髁、脛骨平臺墨汁染色大體照片；B、D分別代表空白對照組股骨髁、脛骨平臺墨汁染色大體照片；

圖8為實施例7中半月板組織的HE染色圖，A、B分別表示實驗組、空白對照組12周時半月板組織的HE染色圖；

圖9為實施例7中半月板組織的Masson染色圖，A、B分別表示實驗組、空白對照組12周時半月板組織的Masson染色圖。

(五)具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此：

實施例1 6％蠶絲/膠原復(fù)合支架及單純蠶絲支架

(1)絲素蛋白溶液的制備:a)脫膠：將100g桑蠶蠶絲(浙江華芝絲綢有限責(zé)任公司，5A級)放入5L的2M碳酸鈉水溶液中，96℃水浴30min，純化水清洗，該過程重復(fù)3次，脫去絲膠蛋白，留下絲素蛋白，將絲素蛋白在50℃烘干，獲得70g干燥后的絲素蛋白，備用；b)溶解：將上述干燥后的絲素蛋白以質(zhì)量體積比0.2：1溶于9.3M的溴化鋰(LiBr)水溶液中，60℃水浴90min至絲素蛋白充分溶解，獲得含絲素蛋白和少量不溶性顆粒組成的混合液；c)透析：將混合液用再生纖維素透析袋(截留分子量4000道爾頓)透析，用10倍混合液體積的無菌純化水在3d透析12次，去除溶液中的LiBr離子，獲得截留液a；d)濃縮：將透析后的透析袋放入4倍體積的質(zhì)量濃度50％聚乙二醇(PEG，分子量7000)水溶液，室溫靜置濃縮5h，取截留液b，即獲得截留液a的濃縮液；e)將截留液b在水平轉(zhuǎn)子5000g，4℃，離心10min，除去底部的未溶解絲素蛋白和溴化鋰中可能存在不溶性顆粒，取上清液在-80℃冷凍干燥2-3天，獲得凍干的絲素蛋白。取凍干后的絲素蛋白120mg，用去離子水在4℃溶解3天，配制成60mg/ml(即質(zhì)量濃度6％)的絲素蛋白溶液2ml。

(2)模具制造：用5ml一次性容量注射器5個(內(nèi)徑均為10mm)，包括注射器的筒體和帶有活塞的推桿，先將針筒的針座端鋸斷，然后制成雙側(cè)帶活塞推桿的模具，并且于注射器的筒體中間的封閉面上開鑿一圓形小孔，孔徑約100μm。

(3)材料凍干：先將0.25ml的步驟(1)絲素蛋白溶液加入模具內(nèi)，緩慢推壓，使氣體從筒體側(cè)面的小孔排出，然后用粘膠帶封閉小孔。轉(zhuǎn)入-80℃的冰箱過夜冷凍，再使用真空凍干機對冷凍后的絲素溶液進行-120℃、0MPa低溫減壓干燥3天，脫模并獲得凍干的圓柱形絲素蛋白支架，厚度2.5mm，直徑10mm，具體的厚度參數(shù)可通過模具進行調(diào)節(jié)。

(4)絲素交聯(lián)：將步驟(3)獲得的絲素支架用體積濃度90％的乙醇水溶液浸泡1小時，然后在溫度60℃，濕度90％條件下熱交聯(lián)1小時，最后晾干。

(5)膠原溶液制備：取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成小塊后使用純化水沖洗。在4℃，pH2.5，0.5M的醋酸緩沖液中孵育16h后，使用華林勻漿器勻漿。4℃，22000g離心15min，棄上清。洗滌：洗滌：使用含20mM EDTA、2mM N-乙基馬來酰亞胺(NEM)、0.1M NaCl的0.05M Tris-HCl(pH7.2)混合溶液洗滌沉淀物3天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液，再使用含20mM EDTA、2mM NEM、1.0M NaCl的0.05M Tris-HCl(pH7.2)洗滌5天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液。進一步純化：含4M尿素、2mM NEM的0.5M醋酸緩沖液(pH2.5)洗滌1天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液，再在含2mM NEM的0.5M醋酸緩沖液(pH2.5)洗滌3天，每天在4℃，22000g下離心15min，更換緩沖液。最后分別用去離子水，丙酮，去離子水洗滌2、4和3天，即得所需純度膠原蛋白，使用0.5M、pH2.5醋酸緩沖液配置成10mg/ml的膠原溶液，備用。

(6)膠原復(fù)合及涂層：將上述支架放入12孔板中，每孔可放3個支架，支架置于底部，然后孔內(nèi)灌注上述10mg/ml的膠原溶液，放入凍干機中進行真空抽干1～3min，最后再在材料表面滴加2～5滴10mg/ml膠原溶液，-120℃、0MPa低溫減壓干燥3天。

(7)膠原交聯(lián)：將步驟(6)獲得的支架真空熱干，時間分別為25℃1天；110℃3天；65℃1天。

(8)采用⁶⁰Coγ射線進行輻照處理30min以上，即可制得6％絲素溶液制備的蠶絲/膠原復(fù)合支架(簡稱為6％S+C)，同時，去掉步驟(5)，(6)，(7)后可制得6％絲素溶液制備的單純蠶絲支架(簡稱為6％S)。

實施例2 9％蠶絲/膠原復(fù)合支架及單純蠶絲支架

取實施例1中步驟(1)制備的凍干絲素蛋白180mg，用去離子水在4℃溶解3天，配制成90g/ml(即質(zhì)量濃度9％)的絲素蛋白溶液2ml。

其余步驟同實施例1，即可制得9％絲素溶液制備的蠶絲/膠原復(fù)合支架(簡稱為9％S+C)，同時，去掉步驟(5)，(6)，(7)后可制得9％絲素溶液制備的單純蠶絲支架(簡稱為9％S)。

實施例3 12％蠶絲/膠原復(fù)合支架及單純蠶絲支架

取實施例1中步驟(1)制備的凍干絲素蛋白240mg，用去離子水在4℃溶解3天，配制成120g/ml(即質(zhì)量濃度12％)的絲素蛋白溶液2ml。

其余步驟同實施例1，即可制得12％絲素溶液制備的蠶絲/膠原復(fù)合支架(簡稱為12％S+C)，同時，去掉步驟(5)，(6)，(7)后可制得12％絲素溶液制備的單純蠶絲支架(簡稱為12％S)。

實施例1，2，3中制備的6％，9％，12％三種濃度單純蠶絲支架電鏡觀察可見具有良好的孔隙率，孔徑大小均一，孔的分布均勻，孔徑大小和絲素濃度呈負相關(guān)性(見圖1中A，C，E)。

通過復(fù)合及涂層膠原后的蠶絲/膠原復(fù)合支架電鏡觀察到膠原已充分填充入絲素海綿的孔內(nèi)(見圖1中B，D，F(xiàn))，同時表明材料表面覆蓋了一薄層膠原層(見圖2)。表面膠原降解后即可在材料表面形成一組織膜，可起到改善材料表面界面的作用。

實施例4

對蠶絲/膠原復(fù)合支架進行力學(xué)測試(壓縮實驗)，具體為：

(1)采用實施例1中的方法將6％，9％，12％三種濃度的蠶絲/膠原復(fù)合支架制作成直徑10mm，高度5mm的圓柱體標準件，用水浸泡至少24h以充分水合，備用。

(2)力學(xué)測試所用儀器為美國Instron公司生產(chǎn)的5543型材料試驗機。

(3)使用(2)中的儀器，采用速率為1mm/min的位移控制模式對(1)中的標準件進行壓縮測試，配套的計算機軟件自動生成應(yīng)力應(yīng)變曲線圖，取應(yīng)力應(yīng)變曲線彈性區(qū)的斜率作為標準件的壓縮彈性模量。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)9％和12％蠶絲/膠原復(fù)合具有良好的力學(xué)性能，但6％蠶絲/膠原復(fù)合力學(xué)性能明顯降低(見圖3)。

實施例5

在實施例1，2，3中所得的蠶絲/膠原復(fù)合支架和單純蠶絲支架上種植半月板細胞。具體操作為：

(1)獲取半月板細胞：將一只兔子處死后取其半月板，使用膠原酶(2mg/ml)消化6h，獲得其中的半月板細胞，使用加了100units/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和20％小牛血清的DMEM細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基每3天換一次，取第3代細胞培養(yǎng)液用于細胞種植。

(2)細胞種植：將實施例1-3制備的6組支架(分別由6％，9％，12％的絲素溶液制備的蠶絲/膠原復(fù)合支架，簡稱為6％S+C，9％S+C，12％S+C，以及分別由6％，9％，12％的絲素溶液制備的單純蠶絲支架，簡稱為6％S，9％S，12％S)滅菌后用DMEM細胞培養(yǎng)基浸泡過夜，此后每個支架分別加入20ul包含1×10⁵個步驟(1)細胞培養(yǎng)液。2h后再加入1ml完全培養(yǎng)基。完完全培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基加上100units/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和20％小牛血清。

(3)檢測：使用cck-8試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所)檢測1、3、7、21天細胞的增殖情況，表明細胞在蠶絲/膠原復(fù)合支架上增殖正常。(見圖4)。

實施例6

將實施例1，2，3中所得的蠶絲/膠原復(fù)合支架異位埋于兔子背部皮下。具體操作為：

(1)麻醉：按400mg/kg計算，用10％水合氯醛對實驗兔子實施靜脈麻醉。

(2)植入支架：將兔子背部手術(shù)區(qū)域的兔毛剃凈，用2％碘伏消毒，作正中縱行皮膚切口，暴露皮下組織。將蠶絲/膠原復(fù)合支架(由6％，9％，12％三種絲素溶液濃度制備，簡寫為6％S+C，9％S+C，12％S+C)和單純蠶絲支架(由6％，9％，12％三種絲素溶液濃度制備，簡寫為6％S，9％S，12％S)分別埋于兔子背部皮下?？p合手術(shù)切口。

(3)采集樣本：在手術(shù)后2周和2月進行樣本收集，具體為：處死目標兔子，切開皮膚，暴露手術(shù)區(qū)域，觀察支架埋入后的在體內(nèi)的生物相容性并將支架取下作為樣本。

(4)組織學(xué)評估：將上述樣本進行組織學(xué)HE染色觀察組織長入支架內(nèi)部的情況以及局部炎癥反應(yīng)的程度。

皮下異位埋入支架在大體上可觀察到良好的組織相容性，未出現(xiàn)明顯的局部排斥異物反應(yīng)。通過2周時間點的HE染色觀察，蠶絲/復(fù)合膠原支架相較于單純蠶絲支架明顯有更多的細胞聚集及長入，同時可以觀察到和體外降解曲線相似的結(jié)果，即原先填充內(nèi)部的膠原已完全降解；通過2月時間點的HE染色可以發(fā)現(xiàn)更多的組織長入，同時伴有細胞分泌基質(zhì)的沉積，同樣蠶絲/復(fù)合膠原的蠶絲支架相較于單純蠶絲支架可進一步促進組織長入(見圖5)。其中6％和9％的材料由于具有較大的孔徑，組織長入明顯優(yōu)于12％的材料，因為12％的材料孔徑更小且孔連接性欠佳。

實施例7

1、動物模型的建立和支架植入

(1)麻醉：按400mg/kg計算，用10％水合氯醛靜脈麻醉。

(2)在無菌環(huán)境下行兔子膝關(guān)節(jié)皮膚準備：用2％碘伏消毒，作正中縱行皮膚切口，沿髕韌帶內(nèi)側(cè)緣切開暴露膝關(guān)節(jié)，顯露內(nèi)側(cè)半月板，將內(nèi)側(cè)半月板的前角從橫韌帶切斷，然后將內(nèi)側(cè)半月板完整切除，完成造模。采用自身配對對照，兔左側(cè)膝關(guān)節(jié)為空白側(cè)，右側(cè)為支架植入側(cè)。

2、標本處理及分析：

支架側(cè)將蠶絲/膠原復(fù)合支架(實施例1制備)植入膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間室，予以絲線縫合固定支架，然后立即消毒，縫合?？瞻讉?cè)暴露膝關(guān)節(jié)切除內(nèi)側(cè)半月板后即消毒縫合。

實驗后12周時間點處死所有兔子，取兔子膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)支架及股骨，均于10％福爾馬林中浸泡固定48h后，進行大體觀察，股骨髁軟骨面和脛骨平臺關(guān)節(jié)面進行印度墨汁染色觀察磨損情況，接著半月板標本經(jīng)脫水，石蠟包埋切片，通過HE及Masson染色進行組織學(xué)分析。

3、實驗結(jié)果

大體可見半月板支架在位良好，被部分周圍組織所包裹，空白側(cè)可見僅有少量的疤痕組織生長填充，支架側(cè)相對空白側(cè)有更大范圍的組織覆蓋保護相應(yīng)的軟骨面。(見圖6)墨汁染色可見支架側(cè)的關(guān)節(jié)軟骨面磨損相對空白側(cè)明顯減輕。(見圖7)組織學(xué)觀察可見支架內(nèi)組織長入明顯，伴有明顯的膠原沉積，蠶絲/膠原復(fù)合支架的大體結(jié)構(gòu)仍維持其形狀未見變形，說明該復(fù)合支架具有良好的力學(xué)支撐性能，同時可以很好地引導(dǎo)細胞遷移至其內(nèi)部，最終形成具有生物學(xué)功能的組織工程半月板支架。(見圖8和9)。