本發(fā)明涉及醫(yī)藥衛(wèi)生和化學(xué)領(lǐng)域的藥物化合物，具體涉及7-O-β-D-糖基-香豆素類化合物及其可藥用鹽、酯及其溶劑化物用于治療焦慮癥的用途。
背景技術(shù)：
：：焦慮癥(Anxietyneurosis)是情感性精神障礙(Mooddisorders)的主要類型，是一種以廣泛和持續(xù)的焦慮感和反復(fù)發(fā)作的驚恐不安為主要特征的綜合征，臨床表現(xiàn)為多慮、急切、煩躁、過分的緊張不安，常伴有植物性神經(jīng)功能紊亂和睡眠紊亂等癥狀。目前已經(jīng)有確切的證據(jù)表明，下丘腦、邊緣葉在焦慮癥中發(fā)揮重要作用；焦慮癥患者存在神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)內(nèi)分泌功能的紊亂，這種改變與中樞神經(jīng)去甲腎上腺素(NE)和5-羥色胺(5-HT)功能障礙相關(guān)。參考文獻(xiàn)見袁勇貴,吳愛勤,張心保.焦慮和抑郁合病的生物學(xué)研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)精神病學(xué)分冊(cè).2000,27(3):143-148.、王筱蘭,袁勇貴,張心保.焦慮癥患者的血漿單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及相關(guān)因素研究[J].中國民康醫(yī)學(xué).2006,18(9):742-748。目前抗焦慮藥已由原有的苯二氮(BDZ)類和丁螺環(huán)酮類藥物發(fā)展到各類作用于廣泛靶點(diǎn)的治療藥物。目前針對(duì)性的臨床藥物主要用三環(huán)苯二氮類抗焦慮藥(BZDs；常見安定類、阿普唑侖)、巴比妥類鎮(zhèn)靜催眠藥、芳香族哌嗪類(常見丁螺環(huán)酮Buspirone坦度螺酮(希德))抗焦慮藥等。參考文獻(xiàn)見李樂華,陳晉東,趙靖平等.氯氟乙酯和地西泮治療焦慮障礙的對(duì)比研究[J].中國臨床康復(fù).2004,8(27):5756。但由于這些藥物使用過程中會(huì)影響患者的運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能，具有一定的成癮性等缺陷，對(duì)患者產(chǎn)生了較大的身體負(fù)擔(dān)。而其他抗焦慮藥如二苯甲烷衍生物(安他樂，Hydroxyzine)哌嗪羧化物、噻嗪和噻唑衍生物、氨基甲酸酯類丙二醇、選擇性5-羥色胺重?cái)z取抑制劑(SSRI)等等，目前效果仍不理想。參考文獻(xiàn)見劉靖,查道建編譯,王林校.抗癲癇藥在治療焦慮障礙中的應(yīng)用[J].國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè).2005,32(3):165-166。而臨床運(yùn)用中醫(yī)藥單味(天麻/茯苓/酸棗仁/柴胡/白芍/當(dāng)歸/遠(yuǎn)志等)和復(fù)方(常見六味地黃丸/逍遙散/歸脾丸/安神定志丸/疏肝散等)治療焦慮癥也取得了一定的進(jìn)展，參考文獻(xiàn)見祝家勝,段武鋼,孫全新.中西醫(yī)結(jié)合治療廣泛性焦慮癥的對(duì)照研究[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志.2004,4(17):2930.也有中藥有效成分(人參皂甙、延胡索乙素、琥珀酸、厚樸酚、沉香呋喃)有效對(duì)抗焦慮癥的報(bào)道。目前，對(duì)類似物天麻素和豆腐果苷的中樞藥理活性研究主要集中在鎮(zhèn)靜、抗抑郁和鎮(zhèn)痛方面，但對(duì)于其抗焦慮作用的研究仍少見報(bào)道?？偟恼f來，目前臨床應(yīng)用的藥物，在藥效、副反應(yīng)、成癮性等方面仍不盡如人意，需要進(jìn)行更深入的研究和廣泛的篩選。雖然在臨床上，焦慮和抑郁癥常伴隨發(fā)生，某些治療抑郁的5-羥色胺重?cái)z取抑制劑也被嘗試用于抗焦慮，如SSIRS、MAOS、TCAS等均具有一定程度的抗焦慮效果，相應(yīng)的，某些抗焦慮劑也有抗抑郁作用。但焦慮和抑郁仍屬于不同病癥，其作用機(jī)理、作用靶點(diǎn)、臨床表現(xiàn)、應(yīng)用藥物和動(dòng)物模型均有顯著不同。參考文獻(xiàn)見王建平,傅宏譯.焦慮障礙與治療(第二版)[M].北京：中國人民大學(xué)出版社.2012.。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提出一種7-O-β-D-糖基-香豆素在治療焦慮癥的藥物中的用途，所涉及的化合物是以小分子酚型糖苷天麻素和豆腐果苷為母體衍生而得的結(jié)構(gòu)類似物。所說的7-O-β-D-糖基-香豆素包括其可藥用鹽、酯或溶劑化物，它們?cè)谥苽溆糜谥委熃箲]的藥物中的用途。其中，糖基部分為任意吡喃糖或者呋喃糖，代表化合物為7-O-β-D-木糖-香豆素，自編號(hào)為XH006，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：該化合物為乳白色粉末，無特殊氣味；乙醇和二甲亞砜中完全溶解，甲醇和水中部分溶解，乙醚中不溶。天麻素(gastrodin，對(duì)羥基苯-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)和豆腐果苷(heliceid，對(duì)甲醛基苯-O-β-D-阿洛吡喃糖苷)結(jié)構(gòu)相似，都為β型吡喃糖苷，區(qū)別僅在于糖基部分和官能團(tuán)的不同。天麻素和豆腐果苷化學(xué)結(jié)構(gòu)見下圖：關(guān)于天麻素的神經(jīng)藥理活性研究表明，研究結(jié)果表明，天麻具有保護(hù)心腦血管、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、鎮(zhèn)靜、抗癲癇、抗驚厥、鎮(zhèn)痛等作用；2007年，JungJW等報(bào)道了天麻根莖水提取物中所含的酚性化合物在小鼠高架十字迷宮模型中體現(xiàn)的抗焦慮活性，其抗焦慮成分主要是天麻素的苷元部分--4-羥基芐醇和4-羥基苯甲醛，并確定這些有效成分是通過5-HT1A和GABAA發(fā)揮作用，參考文獻(xiàn)見李樹蕾譯.天麻及其酚類化合物對(duì)小鼠的抗焦慮作用[J].BiolPharmBull.2006,29(2):261～265.國外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè).2007,22(1):35。本發(fā)明以天麻素和豆腐果苷作為母體化合物，對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，并對(duì)該類類似物的神經(jīng)藥理活性進(jìn)行篩選，得到了抗焦慮活性更強(qiáng)、同時(shí)副作用更小的結(jié)構(gòu)類似物XH006。本發(fā)明提供了經(jīng)過結(jié)構(gòu)優(yōu)化的小分子酚型糖苷化合物7-O-β-D-糖基-香豆素用于制備治療焦慮癥疾病的藥物的用途。本發(fā)明所屬化合物用于治療焦慮癥，代表化合物7-O-β-D-木糖基-香豆素(XH006)在焦慮癥三個(gè)行為模型、一個(gè)藥理模型上，KM種小鼠單次灌胃給藥均能體現(xiàn)出切實(shí)的抗焦慮效果，其抗焦慮效果高于等量豆腐果苷。在兩個(gè)行為模型上的測(cè)定也表明，該有效劑量點(diǎn)沒有體現(xiàn)出干擾受試動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)和肌力的不良反應(yīng)。綜上所述，XH006可能成為有效的抗焦慮前藥。本發(fā)明的化合物按照本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)制備成用于治療焦慮癥的各種口服劑型，有效劑量為45-100毫克/千克。目前，沒有查到該化合物應(yīng)用于抗焦慮治療研究的報(bào)導(dǎo)。本發(fā)明的研究過程受省科技廳基金《2013FZ102--天麻素與豆腐果苷類似物的中樞神經(jīng)藥理活性研究》及國家自然科學(xué)基金《21362018--高等真菌活性成分Pulverolide及其類似物的合成和構(gòu)效關(guān)系研究》支持。附圖說明圖1是本發(fā)明中小鼠明暗穿箱實(shí)驗(yàn)?zāi)荏w現(xiàn)抗焦慮活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果曲線。圖2是本發(fā)明中小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)?zāi)荏w現(xiàn)抗焦慮活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果曲線。圖3是本發(fā)明中小鼠傾板實(shí)驗(yàn)?zāi)荏w現(xiàn)抗焦慮活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果曲線。具體實(shí)施方式具體藥理實(shí)驗(yàn)如下：1.受試藥物名稱：7-O-β-D-木糖基-香豆素(XH006)受試化合物由本研究自行合成提供，于受試前以混懸劑研磨混懸。2.模型及對(duì)照藥物地西泮(Diazapam,DA)：C16H13ClN2O，分子量：284.74。白色片劑，2.5mg/片。上海醫(yī)藥(集團(tuán))有限公司信誼制藥總廠，批號(hào)：H31021151；豆腐果苷(Helicid,HEL)，云南玉溪萬方天然藥物有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：040701助溶物：tween-80，分子式C64H124O6，分子量：1308，黃色特殊氣味粘稠液體?；瘜W(xué)純，洛陽市化學(xué)試劑廠，批號(hào)：020404；混懸劑：TWEEN-80的純凈水溶液，濃度：1％；實(shí)驗(yàn)器具清潔劑：分析純醋酸的1‰水溶液，臨用現(xiàn)配；3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM(昆明)種小鼠，普通級(jí)，♂，6-7周齡。體重18～22g，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(滇)2012-2014。小鼠分籠飼養(yǎng)，每籠10只，除實(shí)驗(yàn)造模特殊要求外均自由飲水、進(jìn)食，飼養(yǎng)室溫22±2℃，相對(duì)濕度45±10％，保持12h/12h晝夜節(jié)律。每次實(shí)驗(yàn)前均適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境7天；實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水18h后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組和待測(cè)組，每組至少10只動(dòng)物。開始觀察前1h，各組分別灌胃相應(yīng)濃度的受試藥或混懸劑；陽性對(duì)照藥DA為同時(shí)單次腹腔注射給藥，母體對(duì)照藥物豆腐果苷和待測(cè)糖苷均為灌胃給藥，給藥濃度為1.5mg/kg。給藥體積均為20mL/kgBW。4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件包作為統(tǒng)計(jì)工具，全部數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(One-wayANOVA)，其中方差齊性者采用Dunnett法，方差不齊者采用Dannett’sT3法檢驗(yàn)組間差異的顯著性。數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05為有顯著意義，記為*，P<0.01為有極顯著性差異，記為**。5.藥物評(píng)價(jià)模型共采用五個(gè)動(dòng)物模型對(duì)化合物XH006的抗焦慮活性和可能出現(xiàn)的副作用進(jìn)行測(cè)試，實(shí)驗(yàn)在早8點(diǎn)半至中午2點(diǎn)間進(jìn)行，每只動(dòng)物只用一次。具體操作方式見下：(1)化合物抗焦慮活性測(cè)試采用三個(gè)行為模型(小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)、小鼠明暗穿箱實(shí)驗(yàn)和開野實(shí)驗(yàn))和一個(gè)藥理學(xué)模型(期待性焦慮實(shí)驗(yàn))對(duì)化合物XH006的抗焦慮效果進(jìn)行驗(yàn)證。A.期待性焦慮模型(Testofanticipatoryanxiety,TAA)參考文獻(xiàn)見徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,第二版.2002:817。將每組前3只小鼠(隨機(jī)抽取)取出，用數(shù)字體溫計(jì)探頭插入肛門2厘米，測(cè)定直腸溫度作為基礎(chǔ)體溫T0。每只小鼠測(cè)量3次，以平均值計(jì)數(shù)。而后每隔2分鐘將每組平行號(hào)碼小鼠順次取出放入另一框內(nèi)。至原籠內(nèi)剩余3只小鼠為止。按照順序逐一取出后三只小鼠，測(cè)定肛溫作為應(yīng)激體溫值，每只小鼠測(cè)量3次，取平均值記為Tt。(每只小鼠只使用一次。)研究表明，BDZ類、丁螺環(huán)酮類抗焦慮藥物、乙醇可抑制SIH；各種抗抑郁藥物、抗精神病藥物，β-腎上腺素受體阻斷劑、中樞興奮劑和阿片受體拮抗劑均無效。利血平雖然也能降低體溫但同時(shí)表現(xiàn)鎮(zhèn)靜等行為癥狀。B.小鼠明暗穿箱實(shí)驗(yàn)(Light-darktransitiontest，LDT)參考文獻(xiàn)見黃繼中,王祖承.焦慮動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)方法和藥理學(xué)評(píng)價(jià)[J].上海精神醫(yī)學(xué).2003,15(2):106。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠放入明暗箱的明箱一側(cè)中央?yún)^(qū)，背向暗箱。為消除放置時(shí)間不同帶來的誤差，各組放置先后隨機(jī)選擇。放入小鼠后，實(shí)驗(yàn)觀察6min，當(dāng)小鼠四肢全部進(jìn)入某箱內(nèi)記為進(jìn)入某箱，僅部分肢體進(jìn)入時(shí)忽略不計(jì)。記錄并比較給藥組和對(duì)照組小鼠在后5min內(nèi)在明箱停留的累積時(shí)間(timespentinlightarea，LT)和進(jìn)入明箱的次數(shù)(thenumberoftransitions，NS)。抗焦慮藥物可解除環(huán)境變化對(duì)小鼠探究活動(dòng)的抑制，增加實(shí)驗(yàn)中小鼠在明暗兩箱往返的次數(shù)和在明箱部分探尋行為的時(shí)間；同時(shí)，也可以降低小鼠的立起次數(shù)。C.小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)(Thestaircasetest，ST)參考文獻(xiàn)見Crawley,J.N.,Goodwin,F.K.,1982.Preliminaryreportofasimplemodelforthebehaviourfortheanxiolytieeffectsofbenzodiazepines[J].Pharmacol.Biochem.Behav.13,167-170。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將小鼠置于爬梯最下一格，背對(duì)爬梯。觀察小鼠6min，記錄后4min內(nèi)的小鼠爬梯次數(shù)(thenumberofmoves,NM；指小鼠爬梯行為開始的總次數(shù))，總爬梯數(shù)(Thenumberofsteps,NS；指小鼠在指定時(shí)間內(nèi)向上爬越的梯級(jí)總數(shù))，立起次數(shù)(thenumberofrears,NR；指小鼠雙前肢離地1厘米以上的探究行為動(dòng)作)?？菇箲]劑在小鼠爬梯數(shù)沒有顯著性增加的情況下，能顯著降低小鼠站立數(shù)，使兩指標(biāo)分離，體現(xiàn)抗焦慮作用。D.開野模型(OpenFieldTest)Qing-QiuMao,Siu-PoIp,Kam-MingKo,etal.Pwonyglycosidesproduceantidepressant-likeactioninmiceexposedtochronicunpredictablemildstress:Effectsonhypothalamic-pituitary-adrenalfunctionandbrain-derivedneutropathicfactor[J].ProgressinNeuro-Psychopharmacology&BiologicalPsychiatry.2009,33:1211-1216。將單只小鼠放入自主活動(dòng)測(cè)量箱，適應(yīng)1min后，記錄5分鐘內(nèi)小鼠進(jìn)入中央5格次數(shù)(numberofenteringperipHeralarea,NEPA)、中央5格停留時(shí)間(restingdurationinperipHeralarea,RDPA)與立起次數(shù)(numberofrearing，NR)(雙前肢離地1厘米以上)作為小鼠焦慮情緒和不良反應(yīng)的指標(biāo)。每只小鼠實(shí)驗(yàn)完畢后，都迅速清除排泄物，并用分析純醋酸的1‰水溶液和純水擦拭開野框底面，以免嗅跡對(duì)下一只小鼠的行為產(chǎn)生干擾。(2)化合物不良反應(yīng)測(cè)試采用兩個(gè)動(dòng)物行為學(xué)模型(開野實(shí)驗(yàn)和傾板實(shí)驗(yàn))對(duì)化合物XH006的不良反應(yīng)進(jìn)行測(cè)試。A.開野實(shí)驗(yàn)方法同(1)D，主要使用5min內(nèi)小鼠由底面中心開始在方格中的穿越格數(shù)(locomotions,LOCO)考察待測(cè)藥物對(duì)小鼠的中樞興奮狀態(tài)的干擾。中樞興奮作用會(huì)使小鼠穿越格數(shù)增加，而中樞抑制劑會(huì)使小鼠穿越格數(shù)減少。B.傾板實(shí)驗(yàn)(Theinclinedplanetest，IPT)參考文獻(xiàn)見黃繼中,王祖承.焦慮動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)方法和藥理學(xué)評(píng)價(jià)[J].上海精神醫(yī)學(xué),2003,15(2):106。實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用40×20厘米亞克力平板，將小鼠放置于傾板中央位置，頭部朝向抬起方，勻速緩慢抬起平板一頭，密切觀察小鼠，當(dāng)小鼠無法抓住平板滑下的瞬間，停止抬板；記錄該時(shí)間平板與水平面的成角為傾角(IA，單位°)。每只小鼠測(cè)定2次，異常小鼠測(cè)定3次，取平均值記錄。如果受試藥物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)協(xié)調(diào)能力產(chǎn)生干擾，小鼠與空白組相比，在坡度比較平緩的傾斜板上即不能停留。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.期待性焦慮模型表1.XH002、XH006對(duì)小鼠期待性焦慮實(shí)驗(yàn)的影響研究結(jié)果表明(見表1)，在期待性焦慮模型中，HEL、XH006等2個(gè)處理組小鼠與空白對(duì)照組小鼠的體溫變化顯著(P<0.05)，不同程度的體現(xiàn)了對(duì)抗應(yīng)激性體溫升高的作用。這表明，該2個(gè)化合物可能是潛在的抗焦慮藥物。2.小鼠明暗穿箱實(shí)驗(yàn)空白組小鼠暗箱停留時(shí)間和明箱立起次數(shù)(NRL)明顯高于其他組，表明小鼠出現(xiàn)焦慮現(xiàn)象；和空白組相比，陽性藥物(DA)組NT和LT出現(xiàn)了明顯分離，而且NRL數(shù)也明顯降低，說明模型成功。對(duì)于KM種小鼠，HEL組各項(xiàng)指標(biāo)都明顯減少，體現(xiàn)類鎮(zhèn)靜作用。給藥組(XH006)小鼠較空白對(duì)照組小鼠物使小鼠NT和LT明顯分離，且NRL數(shù)值顯著降低，說明該三個(gè)糖苷類似物存在潛在的抗焦慮活性。KM種小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖1。3.小鼠爬梯實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組小鼠相比，陽性藥物(DA)組在此次試驗(yàn)中NS、NR得到了分離，體現(xiàn)了抗焦慮作用，說明模型成功。HEL則使所有指標(biāo)都下降，體現(xiàn)了類鎮(zhèn)靜作用。對(duì)于KM種小鼠，糖苷類似物XH006使NS、NR明顯分離，且其分離程度遠(yuǎn)大于陽性藥物DA處理組。這說明XH006糖苷類似物是可能的抗焦慮藥物。KM種小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖2。4.開野實(shí)驗(yàn)對(duì)XH006進(jìn)行了KM種小鼠的開野實(shí)驗(yàn)研究，以確定該化合物是否具有抗焦慮活性和不良中樞神經(jīng)反應(yīng)。與空白對(duì)照組小鼠相比，地西泮(陽性藥物)組小鼠穿越中心次數(shù)和中心停留時(shí)間增加，穿格數(shù)降低，三者均出現(xiàn)顯著性差異，說明模型成功。XH006在不改變小鼠穿越格數(shù)的同時(shí)，增加了小鼠在中央?yún)^(qū)域活性的傾向，體現(xiàn)了明確的抗焦慮作用。在開野實(shí)驗(yàn)中，XH006穿越格數(shù)和空白組沒有出現(xiàn)顯著差異，說明XH006在該模型上沒有體現(xiàn)出中樞興奮或抑制效果，可以排除實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽性可能。KM種小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2：表2化合物XH006對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響5.傾板實(shí)驗(yàn)在所給劑量上，地西泮體現(xiàn)了明確的肌肉松弛效果，說明模型成功。而豆腐果苷和XH006在本次實(shí)驗(yàn)中，傾板角度與空白組沒有顯著性差異(P＞0.05)，說明小分子酚型糖苷類似物沒有出現(xiàn)類肌松現(xiàn)象，其影響協(xié)調(diào)能力的不良反應(yīng)較陽性對(duì)照藥物(DA)小。傾板實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。七.結(jié)論1.7-O-β-D-木糖基-香豆素(XH006)在KM種小鼠單次灌胃給藥情況下，在期待性焦慮明暗穿箱、爬梯實(shí)驗(yàn)和開野實(shí)驗(yàn)四個(gè)動(dòng)物模型中均體現(xiàn)出較好的抗焦慮活性，抗焦慮效果優(yōu)于母體藥物豆腐果苷。2.對(duì)該化合物的不良反應(yīng)進(jìn)行了傾板實(shí)驗(yàn)和開野實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其結(jié)果表明，XH006沒有體現(xiàn)出中樞興奮或中樞抑制的副作用，遠(yuǎn)低于陽性藥物，低于母體藥物天麻素和豆腐果苷。由此說明，該化合物能制備成用于治療焦慮癥的各種劑型的藥物。以上僅是本發(fā)明的具體應(yīng)用范例，對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍不構(gòu)成任何限制。凡采用等同變換或者等效替換而形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明權(quán)利保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3