本發(fā)明涉及干細(xì)胞因子的活性保存方法領(lǐng)域，具體涉及一種用于

美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法。

背景技術(shù)：

干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞。干細(xì)胞即為起源細(xì)胞。干細(xì)胞具有自我更新復(fù)制的能力，能夠產(chǎn)生高度分化的功能細(xì)胞。

人體的衰老，皺紋的出現(xiàn)，究其根源實(shí)質(zhì)上都是細(xì)胞的衰老和減少。而細(xì)胞的衰老和減少則是由干細(xì)胞老化引起的。干細(xì)胞族群的老化嚴(yán)重減弱了其增殖和分化的能力，新生的細(xì)胞補(bǔ)充不足，衰老細(xì)胞不能及時(shí)被替代，全身各系統(tǒng)功能下降，讓人一天天老去。而你的皮膚，也因?yàn)槠つw干細(xì)胞的衰老而無(wú)法及時(shí)更新，衰老的皮膚得不到修復(fù)，所以，你有了皺紋，失去了青春容顏。

同時(shí)研究表明干細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以快速激活休眠的干細(xì)胞并促使其生長(zhǎng)，同時(shí)可以調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)微環(huán)境，為干細(xì)胞提供有利的生長(zhǎng)條件。生長(zhǎng)因子多為廣義的肽激素，有表皮生長(zhǎng)因子、成纖細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板來(lái)源增殖因子等。有研究表明該類生長(zhǎng)因子在美容方面功能強(qiáng)大：1）對(duì)受損皮膚、敏感皮膚、創(chuàng)傷皮膚以及改建性皮膚具有良好的修復(fù)、護(hù)理作用；2）美白、淡斑；3）縮短創(chuàng)傷愈合時(shí)間以及減少疤痕形成；4）再生血管，促進(jìn)膠原蛋白合成，延緩衰老等。

但在傳統(tǒng)美容護(hù)膚的霜膏劑或水乳劑的狀態(tài)下，干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性保存時(shí)間很短，達(dá)不到美容護(hù)膚抗衰的效果，這大大限制了干細(xì)胞活性因子的美容護(hù)膚方面的作用。而本發(fā)明通過(guò)脂質(zhì)體包裹技術(shù)加上凍干技術(shù)，在保留干細(xì)胞生長(zhǎng)因子產(chǎn)品美容抗衰效果的同時(shí)也大大的增強(qiáng)了干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在產(chǎn)品中的活性保存期，并且該方法適于大規(guī)模生產(chǎn)，為干細(xì)胞因子服務(wù)于美容事業(yè)提供了一條新的道路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，現(xiàn)提供一種可以保留干細(xì)胞生長(zhǎng)因子產(chǎn)品美容抗衰效果，同時(shí)也大大增強(qiáng)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在產(chǎn)品中的活性保存期的用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法，其創(chuàng)新點(diǎn)在于：包括原材料的選擇、脂質(zhì)體的制備和凍干工藝完成對(duì)用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存；具體步驟如下：

（1）干細(xì)胞活性因子的選擇：選用純度大于等于99%的干細(xì)胞活性因子；

（2）脂質(zhì)體的制備：包括水合溶劑的選擇、藥脂比的確定和超聲覆膜工藝；

（3）凍干工藝：制得的脂質(zhì)體按一定的濃度溶于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，并加入一定比例的賦形劑，在凍干機(jī)中抽真空使得液體升華，形成粉狀物質(zhì)。

進(jìn)一步的，所述步驟（2）脂質(zhì)體的制備的具體步驟如下：

a.水合溶劑的選擇：選用PH為7.4的PBS溶劑、PH為7.0的二次水溶劑、PH為7.4的D-Hanks、PH為9.5的D-Hanks、濃度為0.9%的Nacl、濃度為5%的葡萄糖中的一種；

b.藥脂比的確定：所述干細(xì)胞活性因子與脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1:1；

c.超聲覆膜工藝：將卵磷脂、膽固醇和干細(xì)胞因子溶解在水合溶劑中，混合均勻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除水合溶劑，將剩下的溶液再經(jīng)過(guò)水浴超聲處理，離心后得到脂質(zhì)體。

進(jìn)一步的，所述賦形劑的添加量占總體積的22-27%，所述凍干粉溶于精華液中的因子濃度保證在5μg/ml。

進(jìn)一步的，所述超聲覆膜工藝步驟中的卵磷脂、膽固醇的質(zhì)量比為3:1，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速為120-160r/min，蒸發(fā)溫度為33-39℃。

進(jìn)一步的，所述超聲覆膜工藝步驟中的水浴超聲的強(qiáng)度為30%，每次超聲時(shí)間為30s間隔5s，總的水浴超聲時(shí)間為4min，所述離心速度為2900-3100r/min，所述離心時(shí)間為4-6min。

本發(fā)明的有益效果如下：

（1）本發(fā)明通過(guò)采用脂質(zhì)體的制備和凍干技術(shù)，有效延長(zhǎng)干細(xì)胞活性因子在液體狀態(tài)下的活性保存期限。

（2）本發(fā)明將干細(xì)胞活性因子應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域，實(shí)現(xiàn)生物化妝品功效，直接作用于皮膚細(xì)胞層面，使用效果佳。

（3）本發(fā)明通過(guò)引用高純度的干細(xì)胞活性因子，實(shí)現(xiàn)清除衰老凋亡細(xì)胞，激活睡眠的皮膚干細(xì)胞，不斷分化新生細(xì)胞。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的水浴超聲粒徑圖；

圖2為本發(fā)明的探頭超聲粒徑圖；

圖3為0.01M PH=7.4PBS水合溶劑粒徑圖；

圖4為二次水水合溶劑粒徑圖；

圖5為0.01M PH=7.4D-Hanks水合溶劑粒徑圖；

圖6為0.005mol/L PH=9.5D-Hanks水合溶劑粒徑圖；

圖7為0.9%Nacl水合溶劑粒徑圖；

圖8為5%葡萄糖水合溶劑粒徑圖。

具體實(shí)施方式

以下由特定的具體實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，熟悉此技術(shù)的人士可由本說(shuō)明書(shū)所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)及功效。

實(shí)施例1

用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法，包括原材料的選擇、脂質(zhì)體的制備和凍干工藝完成對(duì)用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存；具體步驟如下：

（1）干細(xì)胞活性因子的選擇：選用純度大于等于99%的干細(xì)胞活性因子；

（2）脂質(zhì)體的制備：包括水合溶劑的選擇、藥脂比的確定和超聲覆膜工藝，具體步驟如下：

a.水合溶劑的選擇：選用PH為7.4的PBS溶劑、PH為7.0的二次水溶劑、PH為7.4的D-Hanks、PH為9.5的D-Hanks、濃度為0.9%的Nacl、濃度為5%的葡萄糖中的一種；

b.藥脂比的確定：干細(xì)胞活性因子與脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1:2；

c.超聲覆膜工藝：將卵磷脂、膽固醇和干細(xì)胞因子溶解在水合溶劑中，混合均勻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除水合溶劑，將剩下的溶液再經(jīng)過(guò)水浴超聲處理，離心后得到脂質(zhì)體，卵磷脂、膽固醇的質(zhì)量比為3:1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速為120r/min，蒸發(fā)溫度為33℃，水浴超聲的強(qiáng)度為30%，每次超聲時(shí)間為30s間隔5s，總的水浴超聲時(shí)間為4min，離心速度為2900r/min，離心時(shí)間為4min；

（3）凍干工藝：制得的脂質(zhì)體按一定的濃度溶于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，并加入一定比例的賦形劑，在凍干機(jī)中抽真空使得液體升華，形成粉狀物質(zhì)，賦形劑的添加量占總體積的22%，凍干粉溶于精華液中的因子濃度保證在5μg/ml。

實(shí)施例2

用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法，包括原材料的選擇、脂質(zhì)體的制備和凍干工藝完成對(duì)用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存；具體步驟如下：

（1）干細(xì)胞活性因子的選擇：選用純度大于等于99%的干細(xì)胞活性因子；

（2）脂質(zhì)體的制備：包括水合溶劑的選擇、藥脂比的確定和超聲覆膜工藝，具體步驟如下：

a.水合溶劑的選擇：選用PH為7.4的PBS溶劑、PH為7.0的二次水溶劑、PH為7.4的D-Hanks、PH為9.5的D-Hanks、濃度為0.9%的Nacl、濃度為5%的葡萄糖中的一種；

b.藥脂比的確定：干細(xì)胞活性因子與脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1:1；

c.超聲覆膜工藝：將卵磷脂、膽固醇和干細(xì)胞因子溶解在水合溶劑中，混合均勻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除水合溶劑，將剩下的溶液再經(jīng)過(guò)水浴超聲處理，離心后得到脂質(zhì)體，卵磷脂、膽固醇的質(zhì)量比為3:1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速為160r/min，蒸發(fā)溫度為39℃，水浴超聲的強(qiáng)度為30%，每次超聲時(shí)間為30s間隔5s，總的水浴超聲時(shí)間為4min，離心速度為3100r/min，離心時(shí)間為6min；

（3）凍干工藝：制得的脂質(zhì)體按一定的濃度溶于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，并加入一定比例的賦形劑，在凍干機(jī)中抽真空使得液體升華，形成粉狀物質(zhì)，賦形劑的添加量占總體積的27%，凍干粉溶于精華液中的因子濃度保證在5μg/ml。

實(shí)施例3

用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存方法，包括原材料的選擇、脂質(zhì)體的制備和凍干工藝完成對(duì)用于美容護(hù)膚的干細(xì)胞因子的活性保存；具體步驟如下：

（1）干細(xì)胞活性因子的選擇：選用純度大于等于99%的干細(xì)胞活性因子；

（2）脂質(zhì)體的制備：包括水合溶劑的選擇、藥脂比的確定和超聲覆膜工藝，具體步驟如下：

a.水合溶劑的選擇：選用PH為7.4的PBS溶劑、PH為7.0的二次水溶劑、PH為7.4的D-Hanks、PH為9.5的D-Hanks、濃度為0.9%的Nacl、濃度為5%的葡萄糖中的一種；

b.藥脂比的確定：干細(xì)胞活性因子與脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1:1；

c.超聲覆膜工藝：將卵磷脂、膽固醇和干細(xì)胞因子溶解在水合溶劑中，混合均勻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除水合溶劑，將剩下的溶液再經(jīng)過(guò)水浴超聲處理，離心后得到脂質(zhì)體，卵磷脂、膽固醇的質(zhì)量比為3:1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速為140r/min，蒸發(fā)溫度為36℃，水浴超聲的強(qiáng)度為30%，每次超聲時(shí)間為30s間隔5s，總的水浴超聲時(shí)間為4min，離心速度為3000r/min，離心時(shí)間為5min；

（3）凍干工藝：制得的脂質(zhì)體按一定的濃度溶于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，并加入一定比例的賦形劑，在凍干機(jī)中抽真空使得液體升華，形成粉狀物質(zhì)，賦形劑的添加量占總體積的25%，凍干粉溶于精華液中的因子濃度保證在5μg/ml。

超聲方式可以選擇水浴超聲和探頭超聲，通過(guò)對(duì)脂質(zhì)體的包封率及粒徑的測(cè)試，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表：

采用納米粒度儀測(cè)定兩種超聲方法制得的PDGF-L的粒徑，粒徑的分布圖如圖1和圖2所示。

從包封率和粒徑綜合考慮，探頭超聲法制備脂質(zhì)體具有更好的效果。

水合溶劑種類的篩選：考查以下六種水合溶劑對(duì)脂質(zhì)體的包封率、載藥量及粒徑的影響，結(jié)果見(jiàn)下表。

采用納米粒度儀測(cè)定不同水合溶劑制得PDGF-L的粒徑，粒徑分布圖如圖3-8所示，由上述圖表所示，選用二次水為溶劑制備脂質(zhì)體為最佳選擇。

本發(fā)明通過(guò)采用脂質(zhì)體的制備和凍干技術(shù)，有效延長(zhǎng)干細(xì)胞活性因子在液體狀態(tài)下的活性保存期限，本發(fā)明將干細(xì)胞活性因子應(yīng)用于化妝品領(lǐng)域，實(shí)現(xiàn)生物化妝品功效，直接作用于皮膚細(xì)胞層面，使用效果佳，本發(fā)明通過(guò)引用高純度的干細(xì)胞活性因子，實(shí)現(xiàn)清除衰老凋亡細(xì)胞，激活睡眠的皮膚干細(xì)胞，不斷分化新生細(xì)胞。

上述實(shí)施例只是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的限制，只要是不經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)即可在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的技術(shù)方案，均應(yīng)視為落入本發(fā)明專利的權(quán)利保護(hù)范圍內(nèi)。