本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體為一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

隨著人們工作、生活節(jié)奏地加快，人們的健康正在受到各種因素的威脅，肺腎兩虛、氣陰不足等是其健康受到影響的主要表現(xiàn)。中醫(yī)理論認(rèn)為，肺腎兩虛、氣陰不足均屬“虛癥”范疇，主要是由于機體元氣虛損，臟腑虧虛，陰陽平衡失調(diào)所致，導(dǎo)致氣短，腰膝酸痛，神疲乏力，潮熱，煩渴等癥狀，為此，肺和腎的功能起著至關(guān)重要的作用。

蝙蝠蛾擬青霉菌粉，是新鮮冬蟲夏草標(biāo)本中分離得到的麥角菌科真菌蝙蝠蛾擬青霉菌株，經(jīng)液體深層發(fā)酵所得菌絲體的干燥粉末，又稱發(fā)酵蟲草菌粉，是冬蟲夏草的人工替代品。從人工蟲草菌絲體中分離提取的蟲草多糖能顯著地增加小鼠碳粒廓清指數(shù)及吞噬指數(shù)，增強氫化可的松誘導(dǎo)的免疫功能低下小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能；在遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗中，蟲草多糖劑量組能顯著地增加小鼠耳腫脹度，提示蟲草多糖可增強環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)；蟲草多糖劑量組能顯著提高小鼠溶血素水平，提示蟲草多糖可增強環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠的特異性體液免疫功能，以上試驗結(jié)果說明人工蟲草多糖對免疫功能低下小鼠非特異性和特異性免疫功能具有一定增強作用。

靈芝提取物，為多孔菌科真菌赤芝的干燥子實體的提取物。味甘，性平。具有補氣安神，止咳平喘之效。靈芝作為一種名貴中藥用于臨床已有悠久的歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》認(rèn)為“益心氣”、“安精魂”、“補肝益氣”、“堅筋骨”等并列為上品；《本草綱目》也記載“滋補強壯”、“延年益壽”，久服使人“好顏色”等。靈芝的主要活性成分為靈芝多糖、靈芝酸、腺苷等，其具有提高機體細(xì)胞免疫和體液免疫的能力，能促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增生，增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高小鼠自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的活性，提高激活狀態(tài)下巨噬細(xì)胞產(chǎn)生白介素-1(IL-1)和肝細(xì)胞產(chǎn)生白介素-2(IL-2)的能力，能促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(TNF)，提高溶血素量等。邢國慶等研究了靈芝多糖口服液對免疫抑制劑環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能的影響，結(jié)果顯示靈芝多糖口服液能使免疫抑制模型小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、吞噬細(xì)胞的吞噬功能及脾細(xì)胞增殖指數(shù)接近正常，說明靈芝多糖口服液具有增強機體免疫功能的作用。

紅景天提取物，為景天科植物大花紅景天的干燥根及干根莖的提取物，具有益氣活血之功效?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》列為上品，研究指出，紅景天具有類似人參“扶正固本”的“適應(yīng)原樣”作用。紅景天對小鼠炎癥早期血管通透性增加、滲出和水腫有明顯的抑制作用，小鼠血清溶血素試驗抗體積數(shù)結(jié)果表明，紅景天可以提高小鼠血清素水平，且各劑量組與樣品溶劑對照組比較，有顯著性差異，表明紅景天具有明顯的增強小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫功能；小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗結(jié)果表明，各劑量組吞噬百分率、吞噬指數(shù)與對照組比較有顯著性差異，說明紅景天具有明顯增強小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用；小鼠NK細(xì)胞活性試驗中，高劑量組的NK細(xì)胞活性與溶劑對照組比較有顯著性差異，說明紅景天具有增強小鼠NK細(xì)胞活性的作用。

西洋參提取物，為五加科植物西洋參的干燥根的提取物，具有補氣養(yǎng)陰，清熱生津之效。主要用于氣虛陰虧，虛熱煩倦等癥。西洋參皂苷能明顯增強腫瘤病人免疫功能，提高外周血中自然殺傷細(xì)胞及淋巴因子活化細(xì)胞的活性。三七洋參膠囊由三七、西洋參組成，動物實驗表明,0.90g/kg和0.45g/kg的灌胃劑量能增強小鼠體力和提高耐缺氧能力,通過抑制環(huán)磷酰胺所致免疫器官的萎縮,提升碳廓清速率和吞噬指數(shù)來提高免疫功能。研究發(fā)現(xiàn)，西洋參皂苷能使TB淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著提高，促進(jìn)ConA誘導(dǎo)IL-2產(chǎn)生，顯著提高脾臟T細(xì)胞百分率及B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生水平，說明西洋參皂苷具有顯著的增強免疫力的作用。西洋參含片和原粒茶能提高動物血清溶血素體積數(shù)、吞噬指數(shù)，提高NK細(xì)胞活性，提高ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。西洋參等藥組成的扶正排毒片可顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，同時促進(jìn)溶血素、溶血空斑的形成與外周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物及其制劑，本發(fā)明組成的藥物組合物諸藥相互配伍，具有相使互補，補氣培元，益精生血。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物，所述的原料包括蝙蝠蛾擬青霉菌粉200-300份、靈芝提取物25-75份、紅景天提取物25-75份、西洋參提取物20-60份。

上述的一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物，所述的原料重量份為蝙蝠蛾擬青霉菌粉260份、靈芝提取物50份、紅景天提取物50份、西洋參提取物40份。

上述的一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物，所述中藥組合物的劑型為丸劑、片劑或膠囊制劑。

上述的一種用于肺腎兩虛、氣陰不足的中藥組合物膠囊劑的制備方法為：

(1)、將選定配方比例的靈芝提取物、紅景天提取物和西洋參提取物混合30分鐘，混合均勻，再與選定配方比例的蝙蝠蛾擬青霉菌粉混合30min，混合均勻后用85％乙醇制成軟材；

(2)、將制好的軟材以16目篩制粒；

(3)、制好的濕顆粒用烘盤接成均勻厚度為3～5cm的濕粒，放入烘箱55～60℃條件下鼓風(fēng)、排濕干燥，干燥4-6小時；

(4)、烘干后的顆粒過14目篩整粒，即得半成品顆粒，裝入0號膠囊既得。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：根據(jù)肺腎兩虛、氣陰不足的機理，我們結(jié)合中醫(yī)藥理論，以及現(xiàn)代藥理研究，以“扶正固本、益氣養(yǎng)血、補益肝腎”為治則，選用蝙蝠蛾擬青霉菌粉、靈芝提取物、紅景天提取物、西洋參提取物為原料，制成本品，以達(dá)到補肺腎，益氣陰的作用。

具體實施例

實施例一成型工藝研究

1、混合工藝參數(shù)的確定

為了確定混合工藝的具體參數(shù)，按配方量，稱取蝙蝠蛾擬青霉菌粉260g、靈芝提取物50g、紅景天提取物50g、西洋參提取物40g，共計400g。我們先將靈芝提取物、紅景天提取物和西洋參提取物混合30min，混勻后，再與蝙蝠蛾擬青霉菌粉分別混合10、20、30分鐘，于不同時間點從混合機的不同部位取混合細(xì)粉5份，置光滑紙上，平鋪約5cm²，將其表面壓平，在明亮處觀察其外觀情況。同時為了進(jìn)一步確保其混合均勻，以總皂苷含量為考察指標(biāo)，分別測其總皂苷含量，測定結(jié)果見下表1。

表1混合工藝參數(shù)考察

以上結(jié)果表明，混合30分鐘后，從混合機不同部位所取樣品色澤均勻，無花紋與色斑，并且總皂苷含量相對接近，RSD值為2.28％，說明混合30分鐘，細(xì)粉可混合均勻，故選擇混合30分鐘。

2、潤濕劑的選擇

取本品混合好的細(xì)粉(蝙蝠蛾擬青霉菌粉、靈芝提取物、紅景天提取物、西洋參提取物)3份，每份200g，分別以等量75％、85％、95％乙醇制粒(16目篩)，55～60℃干燥，過14目篩整粒，對顆粒成型的難易及干顆粒的硬度等進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。

表2不同濃度乙醇制?？疾旖Y(jié)果

試驗結(jié)果證明，用85％乙醇制粒，顆粒成型好，硬度適中，顆粒大小較均勻，制粒質(zhì)量較好，故確定以85％乙醇為潤濕劑。

3、干顆粒流動性的測定

顆粒流動性的大小，會直接影響到膠囊填充機分裝時裝量差異的大小。相對而言，流動性大時裝量差異會小，反之則大。顆粒流動性可用休止角來表示。休止角越大，流動性就越差。采用固定漏斗法，對休止角進(jìn)行測定，以堆高度與堆底面半徑的函數(shù)值來表示。通過試驗測定，結(jié)果見表3。

表3干顆粒流動性考察結(jié)果

經(jīng)測定，干顆粒平均休止角為37.1度，表明干顆粒的流動性良好。

4、膠囊裝量確定

配方中蝙蝠蛾擬青霉菌粉260g、靈芝提取物50g、紅景天提取物50g、西洋參提取物40g，全方總量為400g，共制成膠囊1000粒，每粒應(yīng)裝0.4g。

5、空心膠囊型號的選擇

空心膠囊型號根據(jù)制備的膠囊內(nèi)容物(即藥物干顆粒)堆密度與膠囊的容積來確定。堆密度的測定采用體積重量比法進(jìn)行，試驗結(jié)果見表4。

表4藥物干顆粒堆密度測定結(jié)果

表4結(jié)果表明：本品顆粒堆密度為0.6025g/ml，裝量為0.4g/粒，因此確定空心膠囊容積V＝m/ρ＝0.4g/0.6025g/mL＝0.664mL，0號膠囊容積為0.67ml，再結(jié)合多次試裝結(jié)果，能滿足填充要求，因此選擇0號膠囊，每粒膠囊裝0.4g。

實施例二本發(fā)明藥物制劑具體實施例

2.1膠囊劑的制備

處方：蝙蝠蛾擬青霉菌粉260g、靈芝提取物50g、紅景天提取物50g、西洋參提取物40g

制法：(1)、將選定配方比例的靈芝提取物、紅景天提取物和西洋參提取物混合30分鐘，混合均勻，再與選定配方比例的蝙蝠蛾擬青霉菌粉混合30min，混合均勻后用85％乙醇制成軟材；

(2)、將制好的軟材以16目篩制粒；

(3)、制好的濕顆粒用烘盤接成均勻厚度為3～5cm的濕粒，放入烘箱55～60℃條件下鼓風(fēng)、排濕干燥，干燥4-6小時；

(4)、烘干后的顆粒過14目篩整粒，即得半成品顆粒，裝入0號膠囊既得。

2.2片劑的制備

處方：蝙蝠蛾擬青霉菌粉200g、靈芝提取物75g、紅景天提取物25g、西洋參提取物60g

制法：(1)、將選定配方比例的靈芝提取物、紅景天提取物和西洋參提取物混合30分鐘，混合均勻，再與選定配方比例的蝙蝠蛾擬青霉菌粉混合30min，混合均勻后用85％乙醇制成軟材；

(2)、將制好的軟材以16目篩制粒；

(3)、制好的濕顆粒用烘盤接成均勻厚度為3～5cm的濕粒，放入烘箱55℃條件下鼓風(fēng)、排濕干燥，干燥4-6小時；

(4)、烘干后的顆粒過14目篩整粒，即得半成品顆粒，壓片既得。

2.3顆粒劑的制備

處方：蝙蝠蛾擬青霉菌粉300g、靈芝提取物25g、紅景天提取物75g、西洋參提取物20g

制法：(1)、將選定配方比例的靈芝提取物、紅景天提取物和西洋參提取物混合30分鐘，混合均勻，再與選定配方比例的蝙蝠蛾擬青霉菌粉混合30min，混合均勻后用85％乙醇制成軟材；

(2)、將制好的軟材以16目篩制粒；

(3)、制好的濕顆粒用烘盤接成均勻厚度為3～5cm的濕粒，放入烘箱65條件下鼓風(fēng)、排濕干燥，干燥4-6小時；

(4)、烘干后的顆粒過14目篩整粒，即得半成品顆粒，分裝顆粒既得。

實施例三本發(fā)明藥物制劑對肺腎兩虛型COPD大鼠病理及免疫功能的研究

3.1材料

3.1.1實驗用動物8周齡大鼠72只，健康雄性，體重為(200±20)g；清潔級，全部動物自由攝食、飲水,飼料為混合標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料,使用消毒墊料且定期更換。飼養(yǎng)室溫度20～23℃，濕度50～60％,光照每天l2h。

3.1.2藥物和試劑指定品牌香煙；脂多糖(美國Sigma公司)；戊巴比妥鈉(中國醫(yī)藥集團(tuán))；IL-4、IL-8、TNF-α放射性免疫試劑盒,購于解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；IFN-γELISA試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。

3.1.3主要儀器AE200電子分析天平、FAS-CO型全自動血液流變快測儀、GMJ型全自動放射免疫γ計數(shù)器、DDL-5冷凍離心機、γBRIO型全自動酶標(biāo)儀、日立H-800掃描電子顯微鏡等。

3.2方法

3.2.1動物分組及模型將實驗動物隨機分為以下兩組：對照組24只,COPD肺腎兩虛模型組24只,COPD肺腎兩虛治療組24只。造模組模型復(fù)制“采用慢性阻塞性肺病大鼠模型的建立”方法并加以改良建立大鼠肺腎兩虛型COPD模型,即在室溫環(huán)境中,第1、14天大鼠麻醉后氣管內(nèi)滴脂多糖,第2～28天給予大鼠每天兩次香煙煙熏,每次點燃煙絲的重量為9.03g(每支煙煙絲重量為0.645g),持續(xù)時間大約1小時。二次造模：第22天起大鼠背部皮下注射濃度為25mg/ml的醋酸氫化可的松0.3ml.只.d^–1，連續(xù)8d。空白對照組不做任何干預(yù),相同室內(nèi)環(huán)境下自由飲食飲水。實驗前后分別稱重,計算體重增長指數(shù)＝(實驗后體重-實驗前體重)/實驗前體重。

3.2.2給藥方法第30天起肺腎兩虛治療組灌本發(fā)明藥物制劑的混懸液；每天灌服2ml(濃度15g.ml^–1.d^-1,相當(dāng)于成人劑量的10倍),連續(xù)30天。

3.2.3觀察指標(biāo)及方法

3.2.3.1氣管超微結(jié)構(gòu)觀察暴露氣管,取隆突上氣管1～1.5cm,迅速置于4℃2％戊二醛中固定,4℃冰箱保存,2小時后PBS緩沖液充分漂洗,再用四氧化鋨固定30～60min,雙蒸水洗3次。固定過程溫度保持在4℃；固定后用遞增濃度的酒精脫水,臨界點干燥，用導(dǎo)電膠將樣本粘敷在金屬樣品臺上，金屬鍍膜，行掃描電子顯微鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。

3.2.3.2肺組織標(biāo)本處理及HE染色取左肺上葉置于10％中性福爾馬林溶液中固定。以混合固定液(酒精、福爾馬林各半)固定2小時；酒精梯度脫水后二甲苯透明標(biāo)本,浸蠟(時間>3h),包埋,切片(厚5um)；常規(guī)HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變。

3.2.3.3動脈血氣分析用10％水和氯醛(350mg/kg)腹腔注射將大鼠麻醉,然后將大鼠固定于手術(shù)臺上，迅速打開腹腔,從腹主動脈取血1ml(肝素抗凝),動脈血迅速送化驗室進(jìn)行血氣分析。

2.3.4肺組織勻漿測IL-4、IL-8、TNF-α、IFN-γ含量取右肺組織，洗凈稱重后，冰盤上剪碎，每克肺組織加入10ml生理鹽水，用玻璃勻漿器在冰浴中勻漿20次左右，取勻漿液置離心管中,4℃15000r/min離心20min,取上清液,保存于-80℃超低溫中。放射免疫法測肺組織勻漿IL-4、IL-8、TNF-α含量,酶聯(lián)免疫法測肺組織勻漿IFN-γ含量。

2.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用方差分析，數(shù)據(jù)以x±s表示。

3.3結(jié)果

3.3.1一般情況比較對照組大鼠活潑好動,毛發(fā)有光澤,體重逐漸增加,呼吸平穩(wěn),無任何特殊表現(xiàn)；模型組大鼠于造模開始第1天即出現(xiàn)明顯的咳嗽,之后不吸煙時也出現(xiàn)咳嗽,聲音減小,漸轉(zhuǎn)為慢性咳嗽,分泌物較多。活動量減少,拱背蜷臥,體重增幅減輕,食量減少,行動遲緩。造模28天后,出現(xiàn)氣急,部分可聞及哮鳴音。經(jīng)二次造模后,模型組呼吸淺急,喜扎堆而臥,行動遲緩,精神倦怠。治療組經(jīng)喂藥癥狀明顯減輕。模型組大鼠死亡1只,治療組大鼠死亡2只。

3.3.2大鼠體重增長指數(shù)比較與對照組比較,模型組及治療組大鼠體重增長指數(shù)顯著下降；與模型組比較,治療組大鼠體重增長指數(shù)顯著上升。(均P<0.01)

3.3.3肺組織外觀對照組大鼠兩肺大小適中,淡粉肉色,外表光滑柔和,彈性好；模型組大鼠兩肺體積明顯增大,暗紅偏紫伴點狀蒼白,外表粗糙略硬,彈性差。支氣管黏膜紅腫,腔中有較多粘液性分泌物；治療組外觀較模型組明顯改善。

3.3.4大鼠肺組織病理學(xué)變化HE染色:對照組中,小支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列整齊,未見嗜酸細(xì)胞浸潤。纖毛無損傷脫落；肺泡結(jié)構(gòu)連續(xù),肺泡壁完整,肺泡間隔無充血水腫，肺泡腔無擴(kuò)大,且未見明顯滲出；模型組小氣道2～3級上皮細(xì)胞變性壞死糜爛脫落，可見不同程度的慢性炎性細(xì)胞浸潤，纖毛倒伏、脫落,變性壞死；肺泡擴(kuò)大融合,肺泡數(shù)量減少,肺泡毛細(xì)血管床減少；治療組各級氣道上皮細(xì)胞變性壞死明顯減輕,慢性炎性細(xì)胞浸潤程度較模型組減輕,纖毛倒伏、脫落減少,肺大泡數(shù)量減少。

電鏡下可見:模型組纖毛不同程度倒伏、粘連、缺失，管腔內(nèi)可見炎性分泌物；治療組明顯好轉(zhuǎn)。

3.3.5動脈血氣分析表5示,與對照組比較,模型組、治療組PaO₂均明顯降低(P<0.01),PaCO₂均明顯升高(P<0.05～0.01)；與模型組比較，治療組PaO 2顯著升高(P<0.05)，PaCO₂顯著降低(P<0.05)；模型組pH值較對照組明顯降低(P<0.05)，模型組與治療組動脈血pH值無顯著差異(P>0.01)。

表5各組大鼠動脈血PH、PaO₂、PaCO₂比較結(jié)果(x±s)

注：與對照比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較,ΔP<0.05

3.3.4肺組織勻漿測IL-4、IL-8、TNF-α、IFN-γ含量及比較表6示,與對照組比較,模型組、治療組IL-4、IL-8、TNF-α水平均明顯升高(P<0.05～0.01),IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值下降明顯下降(P<0.05～0.01)；與模型組比較,治療組IL-4、IL-8、TNF-α水平均明顯下降(P<0.05～0.01),IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值明顯升高(P<0.01)。

表6肺組織勻漿測IL-8、IL-4、TNF-α、IFN-γ含量變化及比較(x±s)

注：與對照比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較,ΔP<0.05

3.4結(jié)論

本研究表明肺腎兩虛型COPD大鼠小氣道2～3級上皮細(xì)胞變性壞死糜爛脫落，可見不同程度的慢性炎性細(xì)胞浸潤，氣道纖毛粘連、倒伏、缺失、變性壞死，肺泡擴(kuò)大融合，肺泡數(shù)量減少，肺泡毛細(xì)血管床減少，大鼠動脈血PaO₂降低、PaCO₂升高,經(jīng)本發(fā)明藥物治療后,各級氣道上皮細(xì)胞變性壞死明顯減輕,慢性炎性細(xì)胞浸潤程度較模型組減輕,纖毛倒伏、脫落減少,肺大泡數(shù)量減少,大鼠動脈血PaO₂升高、PaCO₂降低,提示本發(fā)明藥物制劑能明顯改善管腔阻塞，降低氣道高反應(yīng)性,促進(jìn)氣道的修復(fù)。本研究還表明肺腎兩虛型COPD大鼠肺組織勻漿IL-4水平及IL-8、TNF-α水平均明顯增高,IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值顯著降低,提示存在氣道的慢性炎癥和反復(fù)感染的情況；經(jīng)本發(fā)明藥物治療后,IL-4水平及IL-8、TNF-α水平顯著下降,IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值顯著升高，提示小青龍湯具有糾正Th1/Th 2比值的失衡,抑制炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,增強機體對病原菌的清除功能,對于因肺腎兩虛、氣陰不足的導(dǎo)致的病癥能夠產(chǎn)生積極的效果，尤其是具有解熱、抗炎、平喘、鎮(zhèn)咳和抗過敏作用。