本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病藥物方面的應(yīng)用。

技術(shù)背景

子宮炎是盆腔生殖器官炎癥之一，為婦女常見(jiàn)病，炎癥可局限于一個(gè)部位，也可幾個(gè)部位同時(shí)發(fā)病，臨床上尤以后一種情況為多見(jiàn)，急性炎癥有可能引起彌漫性腹膜炎、敗血癥以致感染性休克等嚴(yán)重后果；子宮水腫一般由于急性炎癥引起，會(huì)導(dǎo)致月經(jīng)量過(guò)多，如果不及時(shí)治療可能導(dǎo)致慢性子宮肥大等；子宮肥大，是指子宮均勻增大，本病的基本病理改變是子宮肌層內(nèi)平滑肌細(xì)胞及血管壁的變化。子宮呈均勻增大，肌層肥厚達(dá)2.5～3.2cm。切面呈灰白色或粉紅色，硬度增加，纖維束呈編織狀排列。動(dòng)靜脈明顯擴(kuò)張，在新生的血管周圍有成團(tuán)的彈力纖維增生。伴有不等程度子宮出血的一種疾病。主要臨床癥狀為白帶增多，月經(jīng)量過(guò)多，持續(xù)天數(shù)延長(zhǎng)；月經(jīng)期延長(zhǎng)，但經(jīng)量不多等，另外，由于結(jié)締組織增生及炎癥沿宮頸旁或經(jīng)宮骶韌帶向盆腔擴(kuò)散，有腰骶部疼痛或會(huì)陰部墜脹感。導(dǎo)致子宮肥大的原因包括子宮增生，原發(fā)性子宮血管病變，雌激素持續(xù)刺激和功能性子宮出血，慢性附件炎、盆腔結(jié)締組織炎及子宮慢性肌炎導(dǎo)致的子宮肌層內(nèi)膠原纖維增生，盆腔淤血引起子宮結(jié)締組織增生，支原體、衣原體、細(xì)菌、病毒等病原體感染等原因。目前一般子宮肥大等情況多考慮保守治療，雄激素治療可減小流血量，保守治療無(wú)效者，可考慮全子宮切除術(shù)，給患者帶來(lái)很大傷害。

阿奇霉素適用于敏感細(xì)菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。近年也有見(jiàn)使用于治療盆腔炎。

目前未見(jiàn)中藥組合物與阿奇霉素聯(lián)合應(yīng)用于制備治療子宮疾病藥物的相關(guān)技術(shù)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是填補(bǔ)現(xiàn)有中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的應(yīng)用技術(shù)

不足，提供一種清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

提供清熱中藥組合物聯(lián)合抗生素在制備治療子宮疾病的藥物方面的應(yīng)用，尤其是應(yīng)用于制備治療改善子宮充血、水腫和/或增生肥大藥物方面的應(yīng)用；所述抗生素為阿奇霉素；所述中藥組合物的活性成分由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木(十大功勞)和單面針組成。

優(yōu)選地，所述清熱中藥組合物中，穿心蓮和單面針的摻入量各為藥材總重量的9％；金櫻根、功勞木和千斤拔的摻入量各為藥材總重量的16％。

所述中藥組合物的制備方法可參照株洲千金藥業(yè)股份有限公司婦科千金片的制備方法。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明提供了一種新的中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素的聯(lián)合應(yīng)用，阿奇霉素適用于敏感細(xì)菌所引起的感染，包括支氣管炎、肺炎等下呼吸道感染，皮膚和軟組織感染，急性中耳炎，鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎等上呼吸道感染。本發(fā)明將其與由千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木(十大功勞)和單面針組成的中藥組合物聯(lián)合應(yīng)用，在治療子宮疾病尤其是改善子宮充血、水腫以及增生肥大方面具有良好的應(yīng)用效果，并通過(guò)大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明所述中藥組合物和阿奇霉素發(fā)揮協(xié)同作用，對(duì)改善子宮臟器指數(shù)趨向正常方面具有確切的影響作用，為中藥組合物和阿奇霉素的新領(lǐng)域應(yīng)用都提供了有力技術(shù)支持。

附圖說(shuō)明

圖1 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治療組動(dòng)物子宮疾病病理切片圖。

圖2 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后子宮臟器系數(shù)變化情況。

圖3 AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF組治療前后胸腺臟器系數(shù)變化情況。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。下述實(shí)施例僅用于示例性說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。除非特別說(shuō)明，下述實(shí)施例中使用的原料為常規(guī)市購(gòu)或商業(yè)途徑獲得的原料，除非特別說(shuō)明，下述實(shí)施例中使用的方法和設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)使用的方法和設(shè)備。

實(shí)施例1

1.實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，大腸埃希菌(ATCC25922)購(gòu)

買(mǎi)于中國(guó)國(guó)家菌種庫(kù)。受試菌株凍干粉用無(wú)菌M-H(B)培養(yǎng)基混懸后均勻鋪于無(wú)菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過(guò)夜復(fù)活，18h后平板表面生長(zhǎng)出菌苔，選取其中長(zhǎng)勢(shì)良好的單一菌團(tuán)，重新涂抹于M-H(A)斜面，相同條件下孵育18h，密封，4℃條件下冷藏保存；試驗(yàn)前一天取斜面菌涂抹于M-H(A)平板，35℃孵育過(guò)夜，即可使用。所有操作均在超凈工作臺(tái)完成。

2.菌液制備方法

方法一：(高濃度菌液制備)

挑3～4個(gè)單菌落于40毫升的M-H(B)培養(yǎng)基中。受試菌隔夜增菌培養(yǎng)16小時(shí)(37℃，水浴搖床振搖16小時(shí))，次日取出原菌液用全波長(zhǎng)多功能讀數(shù)議測(cè)OD值(細(xì)菌生長(zhǎng)飽和期)；取20mL，分裝于離心管中，每管2mL，離心10000～15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理鹽水混勻后，再離心15000rpm/min，10分鐘，棄取上清液中的生理鹽水，收集細(xì)菌細(xì)胞菌體2mL。將相同方法培養(yǎng)的金色葡萄球菌和大腸埃希菌按1：1混合即獲得4mL混合菌液。將該菌液為100菌液濃度，用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，稀釋至0.1×100，0.01×100，備用(共3個(gè)劑量)。

方法二：(低濃度菌液制備)

挑單一菌落(包括金色葡萄球菌和大腸埃希菌)于2毫升的生理鹽水中，分別配制成為0.5麥?zhǔn)蠞舛?約1×108CFU·mL^－1)細(xì)菌混懸液，將金色葡萄球菌和大腸埃希菌混懸液混合，即得到混合菌液4mL。將該菌液設(shè)置成為10A菌液濃度，用生理鹽水進(jìn)行對(duì)倍稀釋，稀釋至0.5×10^A，0.25×10^A，備用(共3個(gè)劑量)。

3.藥品與試劑：M-H(A)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號(hào)：CM0337A)；M-H(B)培養(yǎng)基(OXOID公司，生產(chǎn)批號(hào)：CM0405B)；烏拉坦溶液(20％)；生理鹽水(四川科倫藥液股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：M12012004)；其他試劑和耗材均由成都雅榮生化設(shè)備經(jīng)營(yíng)部購(gòu)買(mǎi)提供。

4.儀器：電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司，BPH-9162)；優(yōu)普系列超純水機(jī)(成都超純科技有限公司，UpK-1-10T)；微量加樣器(EppendorfResearch，10、100、100uL)；空氣浴振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)，HZQ-C)；自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠，LDZX-40BI)；全波長(zhǎng)多功能讀數(shù)議(美國(guó)Thermo)；菌落計(jì)數(shù)儀。

5.模型制備

具體操作方法：大鼠稱重標(biāo)記，腹部常規(guī)消毒，20％烏拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，用1mL注射器抽取預(yù)先制備的混合菌液，左手持鼠尾提起大鼠，用10mL注射器磨去針頭尖，于陰道底部的子宮頸分叉處小心進(jìn)入一側(cè)宮腔內(nèi)，針頭在宮腔內(nèi)來(lái)回抽拉2次以機(jī)械性損傷子宮內(nèi)膜組織，然后朝卵巢方向推注菌液0.1mL，同樣操作步驟將0.1mL菌液注入另一側(cè)子宮，注射完畢后，倒置大鼠5min，以防菌液漏出。分別于24h，48h觀察記錄各組大鼠感染情況，以大鼠無(wú)死亡，于造模后24h、72h、96h后分別陰道刮片，進(jìn)行菌落培養(yǎng)，選擇菌落計(jì)數(shù)≥30，≤100的感染菌量作為最佳感染菌量。將該菌量作為體內(nèi)感染的菌量。受試大鼠感染菌量為：

表1

所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無(wú)菌棉簽伸入宮口，來(lái)回抽拉2次后，將棉簽放入含2mL生理鹽水的試管中，獲得含測(cè)試品混懸液，取出棉簽，再用新的無(wú)菌棉簽充分蘸取混合液均勻涂抹于無(wú)菌M-H(A)平板表面，35℃孵育過(guò)夜，18h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。240h犧牲動(dòng)物，觀察子宮感染情況。各組典型鼠感染菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果如下表2：

表2受試大鼠感染菌量

所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于造模后24h、72h和96h，麻醉，常規(guī)消毒腹部，用無(wú)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，3組鼠所感染菌量符合實(shí)驗(yàn)要求。同時(shí)，解剖后可見(jiàn)子宮等直觀可見(jiàn)炎性充血與炎性水腫。

6.試驗(yàn)過(guò)程

模型及分組150只大鼠(雌性SPF級(jí)SD大鼠，220g±20g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所購(gòu)得，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2008-24)。16只用于空白，另行飼養(yǎng)。其余均采用造模方法麻醉后注射混合菌液。觀察5日，每日均隨機(jī)抽取6只及空白組2只麻醉后采集陰道分泌物用于細(xì)菌涂片。5日后存活大鼠隨機(jī)分為5組，即model、AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF(分別表示不予治療的模型組、單獨(dú)使用阿奇霉素組、阿奇霉素清熱合并組、阿奇霉素缺當(dāng)歸合并組、阿奇霉素全方合并組)。

model：不予治療的模型組；

AZM：阿奇霉素治療的模型組。

AZMQR：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMDG：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

AZMFF：阿奇霉素+中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針、雞血藤、當(dāng)歸、黨參參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物)聯(lián)合治療模型組。

1.受試劑量

(1)AZM劑量：本實(shí)施例對(duì)阿奇霉素(AZM)的可選受試劑量進(jìn)行了分析和確定，目的為選擇一個(gè)試用后作用強(qiáng)度適中、時(shí)長(zhǎng)適中的受試劑量，同時(shí)明確同中藥合并用藥時(shí)的時(shí)程長(zhǎng)度。預(yù)試60、30、20、10mg/kg.d三天，發(fā)現(xiàn)原設(shè)定劑量過(guò)高，最終采用10mg/kg.d。

(2)受試藥物劑量：

原設(shè)定各中藥組合物的劑量為2.058g/kg.d，但預(yù)試發(fā)現(xiàn)，此劑量采用最大給容積配制的給藥液為稀漿狀，無(wú)法通過(guò)灌胃針頭。隨調(diào)整最終全方AZMFF給藥劑量為最大給藥量1.66g/kg.d，調(diào)整缺當(dāng)歸組劑量AZMDG為1.41g/kg.d、清熱組劑量AZMQR為1.16g/kg.d。

2.給藥時(shí)間

除空白和模型外，造模后第六日開(kāi)始給予相應(yīng)藥物。AZM與各中藥分別給予，相差時(shí)間約2小時(shí)。所有給藥組在8點(diǎn)左右均先給予相應(yīng)劑量的AZM，兩個(gè)小時(shí)后開(kāi)始給予相應(yīng)的中藥生理鹽水水混物。

3.樣本收集

第1日給予AZM兩小時(shí)后，經(jīng)尾靜脈采集各組大鼠末梢靜脈血。從第二日始各給藥組大鼠每日兩次采血，于給予阿奇前和給予中藥前各經(jīng)尾靜脈采集一次，每次采集血量約0.3mL，取樣時(shí)間誤差約30min。于給藥第2、4、6、8日給予AZM兩小時(shí)后，各組麻醉后犧牲約2～4只大鼠，采集下腔動(dòng)脈抗凝全血，并同時(shí)收集犧牲大鼠的靶器官(子宮、孵巢、胸腺、脾臟)。

4.送樣測(cè)試

所有時(shí)間點(diǎn)0.3mL及末次全血，分取約0.2mL血漿用于UPLC-MS檢測(cè)AZM濃度。末次抗凝全血送檢血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血流變。子宮從子宮體中部切分，取1/2福爾馬林固定后用于病理送檢。子宮、孵巢、胸腺、脾臟稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)又稱臟體比，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某臟器的重量與其體重之比值。正常時(shí)各臟器與體重的比值比較恒定。動(dòng)物染毒后，受損臟器重量可以發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。臟器系數(shù)增大，表示臟器充血、水腫或增生肥大等；臟器系數(shù)減小，表示臟器萎縮及其他退行性改變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1至圖3所示。圖1中，從左至右分別為AZM、AZMQR、AZMDG、AZMFF治療組動(dòng)物子宮病理切片圖。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模后，子宮和胸腺均充血、水腫，臟器系數(shù)與正常組比較均升高，給予不同的藥物組合治療后，各系數(shù)都降低，趨向于回復(fù)正常水平。各治療組之間的治療效果比較，子宮臟器系數(shù)：AZMDG>AZMQR>AZMFF>AZM。本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合阿奇霉素在改善子宮充血、水腫、增生等方面具有良好的應(yīng)用效果。

實(shí)施例2應(yīng)用例

1.研究對(duì)象：選擇門(mén)診自愿者2015年3月至2016年2月，因陰道不規(guī)則出血、月經(jīng)過(guò)多、痛經(jīng)經(jīng)診斷性刮宮病理診斷為子宮內(nèi)膜增生的患者30例，年齡35～50歲，單純型增生27例，復(fù)雜型增生3例，5例痛經(jīng)，10例子宮增大。

2.方法：所有患者在治療前均常規(guī)檢查血常規(guī)、肝和腎功能、卵泡刺激素(FSH)，黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)及孕酮(P)，采用B超檢查測(cè)量子宮大小及內(nèi)膜厚度。刮宮后第5天開(kāi)始口服本發(fā)明中藥組合物(以千斤拔、穿心蓮、金櫻根、功勞木、單面針參照株洲千金藥業(yè)婦科千金片的配方比例和方法制得組合物，湯劑或片劑)和阿奇霉素(參照阿奇霉素規(guī)定劑量)，阿奇霉素與本發(fā)明中藥組合物分開(kāi)服用，相差時(shí)間約2小時(shí)。治療期間每月復(fù)診1次，復(fù)查血常規(guī)、肝和腎功能，了解用藥后不良反應(yīng)及月經(jīng)情況。2個(gè)月后停藥，停藥后l周內(nèi)重復(fù)上述檢查及診斷性刮宮病理學(xué)檢查。隨訪時(shí)間為6個(gè)月，無(wú)失訪病例。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用t檢驗(yàn)。

4.應(yīng)用結(jié)果：

臨床癥狀：有陰道出血者均在用藥后3～7天內(nèi)血止，停藥后29例(97％)恢復(fù)月經(jīng)，恢復(fù)時(shí)間為15～40天。用藥后5例痛經(jīng)癥狀緩解，10例子宮增大者子宮有不同程度縮小。隨訪30例患者均無(wú)復(fù)發(fā)，訴無(wú)明顯不良反應(yīng)。B超檢查顯示，治療后患者子宮內(nèi)膜厚度為(5.5±1.9)mm～(3～10mm)，明顯薄于治療前的(14.3±4.9)mm～(5～22mm)，P<0.05。病理學(xué)檢查示，治療后30例子宮內(nèi)膜為增殖期子宮內(nèi)膜，內(nèi)膜轉(zhuǎn)化率為100％。表明子宮內(nèi)膜增生受到明顯抑制，子宮出血有效控制。