本發(fā)明屬于醫(yī)藥制備領(lǐng)域，特別涉及Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

膠質(zhì)瘢痕是中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化并大量增殖而形成的。在損傷之后的急性期，膠質(zhì)瘢痕可以抑制損傷進(jìn)一步擴(kuò)大，抑制炎癥反應(yīng)在損傷組織內(nèi)的擴(kuò)散，但另一方面膠質(zhì)瘢痕的形成在后期的神經(jīng)新生方面，根據(jù)已有文獻(xiàn)的報(bào)道，是不利的。一般來說，膠質(zhì)瘢痕形成的屏障會(huì)阻礙神經(jīng)元的新生，從而對損傷后的恢復(fù)產(chǎn)生負(fù)面影響。

Adjudin，又名AF-2364，現(xiàn)有技術(shù)中，Adjudin是作為男性避孕藥被發(fā)現(xiàn)，是化療藥氯尼達(dá)明(lonidamine)的衍生物，是一類具有吲哚酸結(jié)構(gòu)的小分子藥物。Adjudin的化學(xué)機(jī)構(gòu)式是：

現(xiàn)有技術(shù)中，未有研究證實(shí)，Adjudin可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損后抑制膠質(zhì)瘢痕的藥物進(jìn)行應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中的應(yīng)用，在實(shí)驗(yàn)中，Adjudin可有效減少小鼠腦組織損傷后膠質(zhì)瘢痕的大小，顯著抑制原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖遷移，說明其可用于制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中的應(yīng)用中。

Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中的應(yīng)用。

所述抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、混懸劑、

糖漿劑、腸溶制劑、乳劑懸浮液和注射劑中的至少一種制劑形式。

所述膠質(zhì)瘢痕為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，星形膠質(zhì)細(xì)胞活化、增殖所形成的膠質(zhì)瘢痕。

本發(fā)明的有益效果為：

1、本發(fā)明提供了Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中的應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)表明，可有效減少小鼠腦組織損傷后膠質(zhì)瘢痕的大??；在體外原代細(xì)胞劃痕模型中，顯著抑制原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖遷移，并改善腦損傷后小鼠的行為學(xué)，促進(jìn)恢復(fù)。表明Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中有重要的應(yīng)用價(jià)值。

2、本發(fā)明為臨床上更合理的將Adjudin應(yīng)用在抑制膠質(zhì)瘢痕形成藥物中提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

附圖說明

圖1是實(shí)施例1中，Adjudin抑制小鼠腦組織損傷后膠質(zhì)瘢痕的對比圖。

圖2是實(shí)施例1中，Adjudin抑制原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖遷移的對比圖。

圖3是實(shí)施例1中，Adjudin改善小鼠腦損傷后的行為學(xué)指標(biāo)對比圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：

實(shí)施例1

1、小鼠造模與細(xì)胞培養(yǎng)：

本實(shí)施例中研究所使用的小鼠為ICR小鼠。進(jìn)行大腦中動(dòng)脈栓塞模型。造模后七天腹腔注射Adjudin,用量為50mg/kg。每七天進(jìn)行行為學(xué)測試，第35天犧牲老鼠，取腦切片。所用細(xì)胞為原代星形膠質(zhì)細(xì)胞。星形膠質(zhì)細(xì)胞從新生鼠，即出生24小時(shí)以內(nèi)的小鼠腦中分得，兩天后換液，貼壁培養(yǎng)。

2、膠質(zhì)瘢痕染色實(shí)驗(yàn)

小腦灌注后冰凍切片，吹干后用預(yù)冷的無水甲醇固定10分鐘后，用PBS洗3次，每次5分鐘；用10％Donkey serum(含有0.1％Triton-100)在室溫封閉1小時(shí)；用PBS洗3次，每次5分鐘，用1％的Donkey serum配制GFAP一抗，四度孵育過夜。第二天吸走一抗，PBS洗3次，每次5分鐘，加上二抗，室溫孵育1小時(shí)；PBS洗3次，每次5分鐘，用PBS配制DAPI(1:500)，加入DAPI后室溫孵育10分鐘；PBS再洗3次，每次5分鐘。用抗熒光淬滅劑封片，周圍用透明指甲油封片，用以固定蓋玻片。暗室晾干，用激光共聚焦顯微鏡(confocal)拍照。

Adjudin能有效減少小鼠腦組織損傷后膠質(zhì)瘢痕的大小。造模后的ICR小鼠在35天犧牲取腦切片染色，發(fā)現(xiàn)腦損傷后腦組織內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活并大量增殖，形成膠質(zhì)瘢痕。與DMSO組(對照組)相比，Adjudin組小鼠腦組織內(nèi)的膠質(zhì)瘢痕的形成明顯得到抑制。具體結(jié)果見圖1。

3、原代細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞鋪板培養(yǎng)，用槍頭劃痕，劃痕后換培液，換成含有0、15μmol/L、30μmol/L Adjudin的培液，并在0小時(shí)拍照，作為對照，培養(yǎng)48小時(shí)后再進(jìn)行拍照，并作出統(tǒng)計(jì)。

在劃痕實(shí)驗(yàn)中，Adjudin能顯著抑制原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖遷移。原代星形膠質(zhì)細(xì)胞在收到劃痕損傷后被激活，并且快速增殖，這一現(xiàn)象可以由15μmol/L、30μmol/L的Adjudin得到明顯抑制。結(jié)果見圖2。

4、小鼠的行為學(xué)評估

對小鼠的行為學(xué)評估分為神經(jīng)行為學(xué)評分和轉(zhuǎn)棒疲勞實(shí)驗(yàn)兩部分。小鼠的行為學(xué)檢測在安靜的環(huán)境中進(jìn)行。

1)神經(jīng)行為學(xué)評分

神經(jīng)評分采用14分的評分規(guī)則，分?jǐn)?shù)越高的表示其損害程度越嚴(yán)重。正常小鼠的評分為0分，其中一項(xiàng)缺失的或無法完成其中一項(xiàng)的小鼠均給予1分。1-5分表示輕度損傷，6-9分表示中度損傷，10-14分表示嚴(yán)重?fù)p傷。

評分內(nèi)容主要分為四項(xiàng)：

①運(yùn)動(dòng)能力的評估(正常值為0分，損傷最大值為3分)

提起小鼠尾巴：前肢彎曲的給1分；后肢彎曲的給1分；前后肢均彎曲，頭部在30s內(nèi)向上仰起超過10°的給1分。

②將小鼠放在一水平面上(正常值為0分，損傷最大值為3分)

正常爬行且頭部向左右兩側(cè)探索的給0分；不能直線爬行的給1分；向損傷對側(cè)偏癱并打轉(zhuǎn)的給2分；向偏癱側(cè)傾倒的給3分。

③平衡測試(正常值為0分，損傷最大值為6分)

能夠在平衡桿上較好的平衡且正常跑動(dòng)的給0分；抱住橫桿不放的給1分；一側(cè)前后肢抱住橫桿，而對側(cè)兩肢掉下橫桿的給2分；抱住橫桿但兩側(cè)肢體掉下的，或抱住橫桿旋轉(zhuǎn)超過30秒的給3分；試圖保持平衡的但卻最終失敗而掉下橫桿的(20-30秒)給4分；試圖保持平衡的但卻最終失敗而掉下橫桿的(10-20秒)給5分；放上后直接掉下橫桿的(小于10秒)給6分。

④反射反應(yīng)(共2分)

角膜反射：用棉棒或是頭部圓潤的物體小心碰觸小鼠的眼睛時(shí)，小鼠不會(huì)出現(xiàn)眨眼動(dòng)作的給1分；耳朵反應(yīng)：突然給予小鼠一個(gè)分貝較大的聲響但小鼠頭不會(huì)震動(dòng)的給1分。

2)轉(zhuǎn)棒疲勞測試

將小鼠置于靜止?fàn)顟B(tài)的木棒上先適應(yīng)1分鐘，然后開啟轉(zhuǎn)棒使其均勻加速，在兩分鐘內(nèi)達(dá)到最大轉(zhuǎn)速40轉(zhuǎn)/分。當(dāng)小鼠從轉(zhuǎn)棒上掉下來或抱著轉(zhuǎn)棒連續(xù)轉(zhuǎn)兩圈則停止轉(zhuǎn)動(dòng)，記錄時(shí)間。每只小鼠重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，取其均值作為結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

上述實(shí)驗(yàn)中，腦損傷后小鼠表現(xiàn)出一定程度的行為學(xué)錯(cuò)誤，與DMSO組(對照組)相比，Adjudin組的小鼠在神經(jīng)行為學(xué)評分和轉(zhuǎn)棒疲勞試驗(yàn)中的行為學(xué)結(jié)果都得到明顯改善，這一點(diǎn)指示在損傷后Adjudin抑制膠質(zhì)瘢痕形成，有助于改善損傷后恢復(fù)。結(jié)果見圖3。

綜上所述，Adjudin(AF-2364)可以抑制膠質(zhì)瘢痕的形成：在小鼠模型中有效減少腦組織中膠質(zhì)瘢痕形成，在體外原代細(xì)胞劃痕模型中有效抑制細(xì)胞的增殖遷移，并且有效改善小鼠腦損傷后行為學(xué)，促進(jìn)恢復(fù)。表明Adjudin在制備抑制膠質(zhì)瘢痕的形成中有重要應(yīng)用價(jià)值。

所有數(shù)據(jù)按照平均值+標(biāo)準(zhǔn)差的方式給出。數(shù)據(jù)使用單因素方差分析進(jìn)行評估，然后使用Student-Newman-Keuls post hoc test。P值小于0.05認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。

以上所述為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，但本發(fā)明不應(yīng)該局限于該實(shí)施例所公開的內(nèi)容。所以凡是不脫離本發(fā)明所公開的精神下完成的等效或修改，都落入本發(fā)明保護(hù)的范圍。