本發(fā)明涉及戈氏梭菌馴化株在制備放療增敏劑中的應(yīng)用，特別涉及戈氏梭菌馴化株(DerivativesofClostridiumghonii,DCG)在制備增加鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)對X-ray敏感性藥物中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：放療是腫瘤治療三種傳統(tǒng)手段之一，其在腫瘤治療中占據(jù)著重要地位。近年來隨著放射治療技術(shù)和設(shè)備完善，取得了一定程度提高，但大多數(shù)腫瘤都存在一定的放射抗拒性，即使用最大可能的照射劑量或改變照射方法，放射野內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)依舊存在。目前研究認為，放射抵抗的原因是多方面的，其中最重要的是由于實體腫瘤中普遍存在10％～50％乏氧腫瘤細胞，對射線有抗拒作用，限制了腫瘤放療的效果。目前臨床上用于放療的增敏劑以化學(xué)藥物為主，如多西他賽、5-氟脲嘧啶、順鉑和阿霉素等，但當化學(xué)藥物與放療聯(lián)合雖提高了腫瘤細胞殺傷作用，同時也由于缺乏組織分布特異性而增加對正常細胞的毒副作用。因此，迫切需要找到一種能夠滿足在實體瘤中發(fā)揮放療增敏作用，同時避免對正常組織細胞損傷的增敏藥物。目前，戈氏梭菌馴化株的研究主要集中于利用其分泌的水解酶和介導(dǎo)的機體抗腫瘤免疫反應(yīng)抑制殺傷腫瘤，至今未見有將細菌作為放療增敏藥物使用的報道。如中國專利文獻CN104473973A(申請?zhí)?01410803072.X)公開了一株馴化戈氏梭菌MW-DCG-HNCv-18菌株在制備治療非小細胞肺癌藥物中的應(yīng)用。該發(fā)明還公開了馴化戈氏梭菌MW-DCG-HNCv-18菌株和多西他賽為藥效成分聯(lián)用的藥物。其首次發(fā)現(xiàn)MW-DCG-HNCv-18菌株對非小細胞肺癌具有特異性抑制作用，對非小細胞肺癌抑制效果顯著優(yōu)于現(xiàn)有已知的其他類似菌株，并通過篩選發(fā)現(xiàn)其與多西他賽注射液聯(lián)用時，對非小細胞肺癌抑制效果更加突出，為治療非小細胞肺癌提供了新的途徑。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供戈氏梭菌馴化株在制備放療增敏劑中的應(yīng)用。本發(fā)明技術(shù)方案如下：一株戈氏梭菌馴化株在制備放療增敏劑中的應(yīng)用，所述戈氏梭菌馴化株保藏于澳大利亞國家計量研究院，菌株編號為V12/001485。上述應(yīng)用，所述放療增敏劑特異性應(yīng)用于鼻咽癌。上述應(yīng)用，所述放療增敏劑包括以戈氏梭菌馴化株菌株為有效成分和藥學(xué)上可接受的輔料。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述放療增敏劑劑型為粉針劑；所述戈氏梭菌馴化株菌株為芽孢凍干粉，藥學(xué)上可接受的輔料為溶媒。進一步優(yōu)選的，所述溶媒選自林格氏液、質(zhì)量濃度為0.9％的生理鹽水、磷酸鹽緩沖液。所述溶媒需要滿足非毒性、可注射用的要求。通過靜脈、腫瘤瘤內(nèi)注射和腹腔等方式給藥。進一步優(yōu)選的，所述戈氏菌馴化株芽孢凍干粉的制備方法如下：將戈氏梭菌馴化株芽孢液在-80～-70℃條件下預(yù)冷凍1～1.5h，然后在冷阱溫度-50～-40℃、真空度15～25Pa條件下冷凍干燥7～9h。有益效果1、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)戈氏梭菌馴化株具有對腫瘤的放療增敏作用。戈氏梭菌馴化株可特異性分布并維持于腫瘤組織中，并具有抑制腫瘤細胞增殖和將腫瘤細胞周期阻滯于G2/M期(對放療最敏感的細胞周期階段)和誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡等增加腫瘤細胞對放療敏感性的作用。2、本發(fā)明首次將戈氏梭菌馴化株應(yīng)用于鼻咽癌的放療增敏劑中，較應(yīng)用于其他類型癌細胞具有更加顯著的增敏效果。附圖說明圖1、戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物對CEN-2Z細胞增殖的影響曲線圖；圖中，左圖為CEN-2Z細胞增殖抑制率隨濃度的變化；右圖為CEN-2Z細胞增殖抑制率隨時間的變化；圖2、戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物對CEN-2Z細胞周期影響圖；圖中，左圖為對照組CEN-2Z細胞周期分布；右圖為實驗組CEN-2Z細胞周期分布；圖3、腫瘤生長曲線圖；圖4、組織勻漿RCM-Agar厭氧培養(yǎng)結(jié)果照片；圖5、腫瘤組織切片Gramstain(40×)結(jié)果照片。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步闡述，但本發(fā)明所保護范圍不限于此。菌株來源戈氏梭菌馴化株來源于澳大利亞國家計量研究院，菌株保藏號為V12/001485；多西他賽購自齊魯制藥有限公司，批號：4040071TA，生產(chǎn)日期：2014年04月30日；小動物放療儀PXI生產(chǎn)，型號：X-RAD225；細胞周期與凋亡檢測試劑盒碧云天，貨號：C1052；AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡試劑盒凱基生物，貨號：GA105-KGA108。實施例1戈氏菌馴化株芽孢凍干粉的制備方法如下：將獲得的戈氏梭菌馴化株芽孢液加入50g/L無菌甘露醇冷凍保護劑，預(yù)凍前檢測凍干裝液容器中總活芽孢量(5×107cfu)。分別將芽孢液置于-20℃、-40℃、-80℃冰箱中進行預(yù)凍，時間分別為0.5h、1.0h、2.0h和4.0h。在冷阱溫度-45℃、真空度20Pa條件下，冷凍干燥8h得到戈氏梭菌馴化株芽孢凍干粉，計數(shù)芽孢數(shù)量。結(jié)果由表1可知，戈氏梭菌馴化株芽孢液預(yù)凍在-20℃、-40℃和-80℃條件下預(yù)凍0.5h芽孢數(shù)同預(yù)凍前相比下降較少，但預(yù)凍效果較差，呈黏液狀，不利于后續(xù)真空冷凍干燥，其中以-80℃預(yù)凍效果為最好。與戈氏梭菌馴化株芽孢液預(yù)凍-20℃、-40℃預(yù)凍1h相比，雖-80℃預(yù)凍1h芽孢數(shù)量有所少量降低，但數(shù)量級仍為107，且芽孢液預(yù)凍完全，預(yù)凍物理狀態(tài)要明顯優(yōu)于前兩者。戈氏梭菌馴化株芽孢液預(yù)凍在-20℃、-40℃和-80℃條件下預(yù)凍2.0h和3.0h芽孢數(shù)量雖減少較少、預(yù)凍干效果好，但考慮到經(jīng)濟和時間節(jié)約的因素，不宜選擇這兩者。表1預(yù)凍溫度及與預(yù)凍時間對芽孢數(shù)量的影響綜上分析認為，戈氏梭菌馴化株芽孢液真空冷凍干燥過程為-80℃預(yù)凍1h，冷阱溫度-45℃、真空度20Pa條件下冷凍干燥8h。實施例2研究方法：(1)對CEN-2Z細胞增殖的影響將不同終濃度的戈氏菌馴化株代謝產(chǎn)物凍干粉(0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、13mg/ml、17mg/ml和20mg/ml)分別與CEN-2Z細胞共培養(yǎng)24h后，進行MTT實驗檢測其對細胞增殖的劑量依賴性關(guān)系。每個濃度設(shè)6個復(fù)孔和設(shè)置調(diào)零孔。將終濃度為10mg/ml戈氏菌馴化株代謝產(chǎn)物凍干粉與CEN-2Z細胞分別共培養(yǎng)0h，6h，12h，18h，24h，48h進行MTT實驗檢測其對細胞增殖的時間依賴性關(guān)系。每組設(shè)6個復(fù)孔，每個時間設(shè)置調(diào)零孔。結(jié)果研究結(jié)果顯示，隨著作用時間和濃度的增加，細胞增殖抑制率逐漸增大，對細胞增殖抑制作用表現(xiàn)出顯著的時間依賴性關(guān)系和劑量依賴性關(guān)系(如圖1所述)。(2)對CEN-2Z細胞周期的影響將終濃度為10mg/ml戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物凍干粉和RCM(細菌培養(yǎng)液)分別與CEN-2Z共培養(yǎng)24h后，以細胞周期檢測試劑盒進行流式細胞術(shù)檢測實驗組和對照組細胞DNA含量的變化以確定細胞所處周期階段。結(jié)果與對照相比，10mg/ml戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物可使G2/M期細胞比例顯著增高(0.29VS12.62)，可見其可將CEN-2Z細胞阻滯于放療的敏感期-G2/M期(圖2)。(3)對CEN-2Z細胞凋亡的影響將終濃度為10mg/ml戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物凍干粉與CEN-2Z分別共培養(yǎng)12h和24h后，以AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡試劑盒進行流式檢測細胞凋亡的情況。結(jié)果與對照組相比，戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物與CEN-2Z作用12h后即可見到早起凋亡。作用24h后，CEN-2Z細胞出現(xiàn)較多晚期凋亡現(xiàn)象(表2)。結(jié)果表明，戈氏梭菌馴化株代謝產(chǎn)物對CEN-2Z細胞具有誘導(dǎo)凋亡作用。表2戈氏梭菌馴化株對CEN-2Z細胞凋亡的影響對照組12h24h細胞存活(％)98.4394.8590.16早期凋亡細胞(％)0.874.283.25后期凋亡(％)0.470.515.54綜上所述，戈氏梭菌馴化株既可顯著抑制CEN-2Z細胞增殖和誘導(dǎo)CEN-2Z細胞凋亡，又能將細胞周期阻滯于G2/M期，增加腫瘤細胞對放療敏感性。實施例3研究方法：①荷瘤鼠模型建立采用細胞皮下注射法將鼻咽癌CEN-2Z細胞緩慢注入雌性Balb/c-nu/nu裸小鼠(5周齡，20g)右背部股外側(cè)皮下處，待腫瘤體積長至300mm3時，進行體內(nèi)試驗。②動物分組與處理對照組：n＝10只(n代表每組的動物數(shù)量)，尾靜脈注射PBS緩沖液0.2ml；戈氏梭菌馴化株芽孢組：n＝10只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)。單獨X-ray組：n＝10只，第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組：n＝10只，第1天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)，第4天放療，劑量400cGy。第5天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)，第7天放療，劑量400cGy。第8天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)，第10天放療，劑量400cGy。第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)，第13天放療，劑量400cGy。Docetaxel聯(lián)合X-ray組：n＝10只，第4天、第7天、第10天和第13天腹腔注射Docetaxel，劑量為2.5mg/(kg·bodyweight)，6h后放射治療1次，劑量400cGy/次。③檢測指標以游標卡尺測量裸鼠移植瘤長徑(a)和橫徑(b)，每周2～3次。④評價標準根據(jù)每次測量的腫瘤長徑和橫徑數(shù)據(jù)計算腫瘤體積(V＝1/2×a×b2)，繪制曲線，動態(tài)觀察腫瘤的變化。抑瘤率(％)＝(對照組平均瘤體積-實驗組平均瘤體積)/對照組平均瘤體積×100％；腫瘤生長延緩(tumorgrowthdelay，TGD)＝治療組腫瘤體積倍增時間-對照組腫瘤體積倍增時間；增強因子(EnhancementFactor，EF)＝(T細菌聯(lián)合-T細菌)/(T放療-T對照)。⑤結(jié)果與X-ray組相比，戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組抑瘤率(60.56％)顯著高于單獨放療組(36.88％)和單獨戈氏梭菌馴化株芽孢組(13.61％)，同時其抑瘤率高于Docetaxel聯(lián)合X-ray組，但差異不顯著(如表3所示)。同時腫瘤生長曲線顯示，戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合放療后腫瘤體積整個觀察過程小于戈氏梭菌馴化株和單獨放療組，也小于Docetaxel聯(lián)合X-ray組腫瘤體積，并以后期最為明顯(如圖3所示)。當移植瘤腫瘤體積長至500mm3時，觀察5組移植瘤腫瘤體積倍增(300mm3至500mm3)時間，并計算移植瘤生長延緩。研究結(jié)果顯示，與對照組相比，戈氏梭菌馴化株芽孢組(劑量3.0×105cfu/(kg·bodyweight))腫瘤體積倍增時間(8.33vs9.17)、TGD(0vs0.84)和抑瘤率(0％vs13.61％)均無顯著差異。但當戈氏梭菌馴化株芽孢與X-ray聯(lián)合時，其腫瘤體積倍增時間(23.00vs15.17，p＝0.012)、TGD(14.67vs6.84)和抑瘤率(60.56％vs36.88％)均顯著優(yōu)于單獨X-ray組。與對照組相比，戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組移植瘤生長延緩14.67d，超出了戈氏梭菌馴化株芽孢組與單獨放療組分別引起的移植瘤生長延緩之和(7.68d)(如表3所示)。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組EF＝(23.00-9.17)/(15.17-8.33)＝2.02，即戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray引起的移植瘤生長延緩是單獨放療的2.02倍(如表3所示)。與Docetaxel聯(lián)合X-ray組相比，戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組腫瘤體積倍增時間(21.83vs23.00，p＝0.728)、TGD(14.67vs13.50)和抑瘤率(60.56％vs48.19％)等增敏指標均優(yōu)于Docetaxel對放療的增敏作用，但差別不顯著(如表3所示)。如上分析可見，單獨使用戈氏梭菌馴化株芽孢表現(xiàn)出一定的抗腫瘤作用，但其與放療聯(lián)合表現(xiàn)出顯著增加放療敏感性的作用。表3戈氏梭菌馴化株增敏指標檢測注：與X-ray組相比，※p<0.05。實施例4研究方法：①荷瘤鼠模型建立采用細胞皮下注射法將鼻咽癌CEN-2Z細胞緩慢注入雌性Balb/c-nu/nu裸小鼠(5周齡，20g)右背部股外側(cè)皮下處，待腫瘤體積長至300mm3時，進行體內(nèi)試驗。②動物分組與處理對照組：n＝8只(n代表每組的動物數(shù)量)，尾靜脈注射PBS緩沖液0.2ml；單獨X-ray組：n＝8只，第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢-1組：n＝8只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為1.0×105cfu/(kg·bodyweight)。戈氏梭菌馴化株芽孢-2組：n＝8只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為2.0×105cfu/(kg·bodyweight)。戈氏梭菌馴化株芽孢-3組：n＝8只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)。戈氏梭菌馴化株芽孢-4組：n＝8只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為4.0×105cfu/(kg·bodyweight)。戈氏梭菌馴化株芽孢-5組：n＝8只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為5.0×105cfu/(kg·bodyweight)。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray-1組：n＝8只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為1.0×105cfu/(kg·bodyweight)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray-2組：n＝8只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為2.0×105cfu/(kg·bodyweight)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray-3組：n＝8只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray-4組：n＝8只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為4.0×105cfu/(kg·bodyweight)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray-5組：n＝8只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為5.0×105cfu/(kg·bodyweight)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。③檢測指標以游標卡尺測量裸鼠移植瘤長徑(a)和橫徑(b)，每周2～3次。④評價標準抑瘤率(％)＝(對照組平均瘤體積-實驗組平均瘤體積)/對照組平均瘤體積×100％。腫瘤生長延緩(tumorgrowthdelay，TGD)＝治療組腫瘤體積倍增時間-對照組腫瘤體積倍增時間增強因子(EnhancementFactor，EF)＝(T細菌聯(lián)合-T細菌)/(T放療-T對照)⑤結(jié)果與對照組相比，單獨戈氏梭菌馴化株芽孢各組的抑瘤率、腫瘤體積倍增時間、TGD未見明顯差異，且單獨戈氏梭菌馴化株芽孢各組之間也未見明顯差異?？梢?，單獨1.0×105～5.0×105cfu/(kg·bodyweight)的戈氏梭菌馴化株芽孢劑量抗腫瘤作用不明顯。但當1.0×105～5.0×105cfu/(kg·bodyweight)劑量的戈氏梭菌馴化株芽孢分別聯(lián)合放療時均表現(xiàn)出顯著抗腫瘤作用，抑瘤率、腫瘤體積倍增時間、TGD均顯著優(yōu)于單獨X-ray組，并且抑瘤率、TGD超過了各劑量戈氏梭菌馴化株芽孢組與單獨放療組之和，表現(xiàn)出疊加增效的超敏作用(如表4所示)。1.0×105～5.0×105cfu/(kg·bodyweight)戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合放療引起的腫瘤生長延緩均大于單獨X-ray的1.55倍(如表4所示)，各劑量組均表現(xiàn)出顯著增敏作用。以抑瘤率、腫瘤體積倍增時間、TGD、EF和經(jīng)濟節(jié)約為指標綜合評價，研究認為1.0×105～5.0×105cfu/(kg·bodyweight)戈氏梭菌馴化株芽孢是聯(lián)合放療增敏的優(yōu)選范圍，其中以3.0×105cfu/(kg·bodyweight)劑量戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合放療為戈氏梭菌馴化株增加鼻咽癌對放療敏感性的最優(yōu)劑量。表4不同劑量戈氏梭菌馴化株增敏指標檢測注：與X-ray組相比，※p<0.05。實施例5研究方法：①荷瘤鼠模型建立采用細胞皮下注射法將鼻咽癌CEN-2Z細胞緩慢注入雌性Balb/c-nu/nu裸小鼠(5周齡，20g)右背部股外側(cè)皮下處，待腫瘤體積長至300mm3時，進行戈氏梭菌馴化株體內(nèi)分布試驗。②組織培養(yǎng)與組織石蠟切片的Gramstain尾靜脈注射DCG芽孢96h后脫頸處死荷瘤鼠，將處死的荷瘤鼠置75％乙醇溶液中殺菌1min。取荷瘤鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟(2個)和腫瘤組織，并將上述臟器均分為兩份，其中一份以10ml/g固液比加入無菌PBS，迅速將組織研磨為勻漿液，操作過程嚴格無菌。分別取上述組織勻漿液300μl均勻涂布RCM-Agar培養(yǎng)基上中，37℃厭氧培養(yǎng)96h，記錄各組織臟器細菌生長狀況，并對菌落進行Gram染色觀察。另一份以中性福爾馬林緩沖液固定后，進行4μm石蠟切片制作，并對切片進行Gramstain和40×顯微觀察，檢測細菌在上述主要臟器組織及腫瘤中的分布。結(jié)果小鼠主要臟器及腫瘤組織勻漿后37℃厭氧培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢96hs后僅在腫瘤組織勻漿液對應(yīng)的RCM-Agar培養(yǎng)基中出現(xiàn)圓形，白色，表面稍粘，濕潤，不透明菌落(圖4)，其菌落形態(tài)與戈氏梭菌馴化株菌落相同，并經(jīng)Gramstain檢測后確定為戈氏梭菌馴化株。小鼠主要臟器及腫瘤組織石蠟切片進行Gramstain和40X顯微觀察，發(fā)現(xiàn)僅在腫瘤組織中存在大量呈桿狀、G+的戈氏梭菌馴化株(圖5)，而其他主要臟器組織未發(fā)現(xiàn)該細菌存在。該研究結(jié)果與組織勻漿方法結(jié)果相吻合。由上述兩種檢測方法結(jié)果可以看出，戈氏梭菌馴化株作為增敏劑可特異性分布于腫瘤組織中，而目前放療增敏藥物均為化學(xué)藥物或中藥，經(jīng)靜脈給藥后會全身分布并對正常組織細胞產(chǎn)生危害，無組織分布特異性?？梢姡晔纤缶Z化株作為增敏劑表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。實施例6研究方法：①荷瘤鼠模型建立采用細胞皮下注射法分別將惡性黑色素瘤A375、鼻咽癌CEN-2Z和人結(jié)腸癌細胞HCT116細胞緩慢注入雌性Balb/c-nu/nu裸小鼠(5周齡，20g)右背部股外側(cè)皮下處，待腫瘤體積長至300mm3時，進行體內(nèi)試驗。②動物分組與處理CEN-2Z對照組：n＝6只(n代表每組的動物數(shù)量)，尾靜脈注射PBS緩沖液0.2ml；CEN-2Z單獨芽孢組：n＝6只，第1天、第5天、第8天和第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)(0.2ml)。CEN-2Z單獨X-ray組：n＝6只，第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。CEN-2Z芽孢聯(lián)合X-ray組：n＝6只，第1天、第5天、第8天、第11天尾靜脈注射戈氏梭菌馴化株芽孢，劑量為3.0×105cfu/(kg·bodyweight)(0.2ml)。第4天、第7天、第10天、第13天放射治療，1次/天，劑量400cGy/次。③檢測指標以游標卡尺測量裸鼠移植瘤長徑(a)和橫徑(b)，每周2～3次。④評價標準根據(jù)每次測量的腫瘤長徑和橫徑數(shù)據(jù)計算腫瘤體積(V＝1/2×a×b2)。抑瘤率(％)＝(對照組平均瘤體積-實驗組平均瘤體積)/對照組平均瘤體積×100％。腫瘤生長延緩(tumorgrowthdelay,TGD)＝治療組腫瘤體積倍增時間-對照組腫瘤體積倍增時間增強因子(EnhancementFactor，EF)＝(T細菌聯(lián)合-T細菌)/(T放療-T對照)戈氏梭菌馴化株芽孢影響黑色素瘤A375細胞和人結(jié)腸癌HCT116細胞對放療敏感性的動物分組與處理、檢測指標和評價標準均同鼻咽癌CEN-2Z的研究。⑤結(jié)果表5戈氏梭菌馴化株對不同腫瘤模型的增敏指標檢測研究結(jié)果顯示，戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray對三個不同腫瘤模型的抑瘤率表現(xiàn)出：CEN-2Z芽孢聯(lián)合X-ray組>HCT116芽孢聯(lián)合X-ray組>A375芽孢聯(lián)合X-ray組(62.11vs54.55vs46.58)(如表5所示)。同時，CEN-2Z芽孢聯(lián)合X-ray組腫瘤體積倍增時間顯著長于A375芽孢聯(lián)合X-ray組，但與HCT116芽孢聯(lián)合X-ray組腫瘤體積倍增時間無顯著差異(如表5所示)。TGD亦以CEN-2Z芽孢聯(lián)合X-ray組為最佳，高于其他兩組戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray組，表現(xiàn)為CEN-2Z芽孢聯(lián)合X-ray組>HCT116芽孢聯(lián)合X-ray組>A375芽孢聯(lián)合X-ray組(14.77vs11.50vs8.50)(如表5所示)。戈氏梭菌馴化株芽孢聯(lián)合X-ray對三個不同腫瘤模型延緩時間分別是單獨放療的2.04倍、1.3倍和1.5倍。綜上所述可見戈氏梭菌馴化株表現(xiàn)出特異性增加鼻咽癌模型對放療敏感性的作用。當前第1頁1 2 3