本發(fā)明涉及化妝品
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：護膚品首先具有養(yǎng)顏美容的功能，能增強皮膚的彈性和活力，其次可使人年輕、美麗，護膚品增強了人的自信心，提高了人的美好形象，促進了社會的文明。隨著生活水平的提高，人們越來越注重皮膚的保養(yǎng)，然而內(nèi)在及外在等原因?qū)е赂鞣N皮膚問題。皮膚問題的內(nèi)在原因主要是因為皮膚表皮層不均一的收縮塌陷引起的，表現(xiàn)即皺紋、魚尾紋、細紋、眼尾紋等。皮膚由三層結(jié)構(gòu)構(gòu)成，分別是表皮層、真皮層和皮下脂肪。真皮層包含了膠原蛋白、彈力蛋白、和其他纖維，上述元素雖然構(gòu)成了支撐皮膚的骨架，使皮膚顯得光滑年輕，但易受UVA、UVB以及臭氧或其他氧化因素的損傷。皮膚問題的外在因素主要由于生活壓力和生活環(huán)境，如加班熬夜、長時間對電腦、吸煙、睡眠不足、飲酒、用眼過度等。加上全球工業(yè)化和城市化對環(huán)保的影響很大，各國人民普遍關(guān)注污染問題，因此針對皮膚存在的各種問題的化妝品也被研發(fā)應(yīng)用。護膚品的發(fā)展經(jīng)歷不同時代，由礦物油時代、天然成分時代、抗氧化時代發(fā)展到近期的零負(fù)擔(dān)時代。礦物油時代護膚品化妝品的原料來源于化學(xué)工業(yè)，價格低廉，原料相對簡單，成本低，大多具有有害物質(zhì)。天然成分時代時發(fā)現(xiàn)在護膚品中添加各種天然原料對肌膚有一定的滋潤作用，但大部分底料還是沿用礦物油時代的成分，添加劑、防腐劑等仍然有很多難以攻克難題?？寡趸瘯r代最著名的理論是自由基理論，主張肌膚衰老的根本原因是“肌膚氧化”，只有對抗氧化才能阻止肌膚衰老。零負(fù)擔(dān)時代，有別于之前很多護膚產(chǎn)品實屬天然實際并不一定天然，給肌膚造成了沒必要的損傷，追尋零負(fù)擔(dān)即將成為現(xiàn)階段護膚發(fā)展史中最實質(zhì)性的變革?；诹阖?fù)擔(dān)時代的宗旨，人們尋找具有高科技含量、有益肌膚健康又不受化學(xué)品污染的生物技術(shù)護膚品。因此，有必要研發(fā)一種化妝品、護膚品原料，不僅具有祛斑、亮膚的效果，還可以撫平皺紋及改善皮膚平滑度。技術(shù)實現(xiàn)要素：鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，以“生物轉(zhuǎn)化理論”為指導(dǎo)，本發(fā)明的目的是提出一種祛斑、亮膚、除皺抗皺的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液。本發(fā)明的目的之二是提供上述牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法及其應(yīng)用。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，包括牛奶培養(yǎng)基與益生菌發(fā)酵后提取的有效成分，所述益生菌為乳桿菌和雙歧桿菌混合物，其中所述益生菌的添加量為總重量的40～80克/噸。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進一步地，所述牛奶培養(yǎng)基由牛奶和水組成，所述牛奶的比重占牛奶培養(yǎng)基重量的5～20％。所述牛奶優(yōu)選市售的巴氏奶。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進一步地，所述乳桿菌和雙歧桿菌的重量比為1.2～0.8:0.8～1.2。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進一步地，所述乳桿菌包括植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或羅伊氏乳桿菌中的一種或多種組合。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進一步地，所述雙歧桿菌包括乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌中的一種或多種組合。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液，進一步地，所述有效成分包括發(fā)酵液上清液、發(fā)酵液或發(fā)酵液上清液的萃取物。本發(fā)明還提供牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法，包括下述步驟：S1、將水和牛奶按照一定比例混合，滅菌處理后制得牛奶培養(yǎng)基；S2、將益生菌加入牛奶培養(yǎng)基，在溫度35～45℃條件下發(fā)酵24～72h；S3、發(fā)酵后產(chǎn)物經(jīng)離心、過濾后提取得發(fā)酵上清液，即牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液。本發(fā)明制備方法，進一步地，步驟S1前，先將牛奶和水先進行滅菌處理，滅菌條件為80～95℃，20～40min。滅菌處理保證牛奶培養(yǎng)基品質(zhì)穩(wěn)定，不會后續(xù)發(fā)酵過程中引入雜質(zhì)或雜菌，該滅菌處理條件，既能保留牛奶中的營養(yǎng)成分及活性，又能滿足滅菌要求。本發(fā)明制備方法，進一步地，步驟S3中所述離心條件為，轉(zhuǎn)數(shù)5000～10000r/min、離心半徑6～12cm、離心時間為15～30min；所述過濾的濾紙為0.22μm。該離心條件的轉(zhuǎn)速、離心半徑和離心時間是經(jīng)實驗驗證后的最好分離效果又最節(jié)省時間的離心條件。本發(fā)明所述牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液可在制備化妝品中應(yīng)用，所述化妝品包括具有清除DPPH自由基、抑制酪氨酸酶活性、美白、抗衰老中至少一種功能的產(chǎn)品。借由上述方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點：本發(fā)明方法采用可食用益生菌發(fā)酵，產(chǎn)品天然不需要添加酶等物質(zhì)，不僅有益肌膚健康又不受酶和化學(xué)品等污染，而且最大化的簡化了生產(chǎn)步驟、節(jié)約生產(chǎn)成本。本發(fā)明方法條件溫和、操作簡易，有利于實現(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，且充分保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液不含任何化學(xué)成分，可以直接作為面膜、精華液、爽膚水等化妝品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會給肌膚造成任何負(fù)作用，且發(fā)酵成分中含有小分子多肽，易于讓皮膚充分吸收。上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說明書的內(nèi)容予以實施，以下以本發(fā)明的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。附圖說明圖1是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對DPPH清除作用折線圖；圖2是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對對酪氨酸酶活性的抑制作用柱形圖；圖3是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對色斑改善作用柱形圖；圖4是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對皮膚黑色素改善作用折線圖；圖5是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液撫平皺紋效果柱形圖；圖6是本發(fā)明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液改善皮膚平滑度折線圖。具體實施方式本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明進行各種改動和變型而不脫離本發(fā)明的精神和范圍。這樣，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動和變型在內(nèi)。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)重量比10％左右，溶質(zhì)為牛奶。下述實施例中的牛奶來自市面銷售?！緦嵤├?】牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的制備方法牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液制備：將一定量的牛奶和水按照1:9的比例稱量，得到發(fā)酵培養(yǎng)液；95℃，20min滅菌后，按照60g/噸的量接入益生菌，其中植物乳桿菌和乳雙歧桿菌各30g/噸，得到發(fā)酵體系。將發(fā)酵體系在37℃恒溫箱中發(fā)酵48小時，得到發(fā)酵產(chǎn)物；將發(fā)酵產(chǎn)物在6500r/min、離心半徑為9cm的條件下離心20min，棄沉淀，收集離心上清液，然后用0.22μm濾膜過濾，再將此上清液108℃高壓滅菌20min，得到滅菌后的發(fā)酵濾液，即為本發(fā)明提供的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液?！緦嵤├?】牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液在作為化妝品中的應(yīng)用一、牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的安全性檢測人體斑貼試驗主要是用于檢測化妝品終產(chǎn)品或原料的刺激性。本發(fā)明對實施例1獲得的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液進行人體封閉式斑貼試驗，旨在對其潛在皮膚刺激性進行評估。1、試驗對象選擇合適的志愿者30人，年齡范圍在18-60歲隨機選擇。2、試驗方法稱取0.020g-0.025g固體樣品或半固體的樣品放入斑試器中備用。將液體樣品0.2mL到0.025mL滴加在濾紙片上，再將濾紙片置于斑試器內(nèi)。每個樣品均設(shè)置空白對照，在對照斑試器孔內(nèi)加入與樣品等量的樣品溶劑，如蒸餾水或橄欖油。試驗部位選為人體背部，利用無刺激性的膠帶將斑試器固定貼敷于受試者背部。測試周期持續(xù)24h。為了試驗結(jié)果的準(zhǔn)確、可信和科學(xué)，在測試期間志愿者按照要求，不能摘掉斑試器，亦不可使受試部位接觸水。24h后去除斑試器，靜置30min后，等待壓痕消失，觀察皮膚的反應(yīng)。如果試驗結(jié)果為陰性，則需要在斑貼試驗后24h和48h分別再觀察一次。3、試驗結(jié)果斑貼試驗結(jié)果如表1所示：“-”＝陰性反應(yīng)；“±”＝可疑反應(yīng)：僅有微弱紅斑；“+”＝弱陽性反應(yīng)(紅斑反應(yīng))：紅斑、浸潤、水腫、可有丘疹；“++”＝強陽性反應(yīng)(皰疹反應(yīng))：紅斑、浸潤、水腫、丘疹、皰疹；反應(yīng)可超出受試區(qū)；“+++”＝極強陽性反應(yīng)(融合性皰疹反應(yīng))：明顯紅斑、嚴(yán)重浸潤、水腫、融合性皰疹，反應(yīng)超出受試區(qū)。根據(jù)化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007，人體斑貼試驗判斷標(biāo)準(zhǔn)為：30例受試者中出現(xiàn)1級皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于5例，或二級皮膚不良反應(yīng)的人數(shù)多于2例，或出現(xiàn)任何1例三級或三級以上皮膚不良反應(yīng)時，則判定受試物對人體有不良反應(yīng)，反之，則視為對人體無不良反應(yīng)。從表中可以看出：實施例1得到的牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液未產(chǎn)生可疑反應(yīng)，說明本發(fā)明提供的牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液均具有安全性，不會給人體帶來不良反應(yīng)。表1、實施例1獲得的牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的斑貼試驗結(jié)果二、牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液的抗氧化性能檢測〖牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對DPPH清除功效〗DPPH是一種早期合成的有機自由基，常用來評估抗氧化物的供氫能力，它在有機溶劑中非常穩(wěn)定，呈紫色，而且在517nm處有一個特征吸收峰，當(dāng)遇到自由基清除劑時，DPPH的孤對電子被配對而使其退色，也就是在最大吸收波長處的吸光值變小。因此，可通過測定吸光值的變化來評價樣品對DPPH自由基的清除效果。DPPH自由基清除實驗的具體實驗步驟為：以實施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液作為待測物；(1)取等體積(一般為3mL)的待測物與2×10-4mol/L的DPPH溶液混勻(A1管)；(2)取等體積的無水乙醇(待測物溶劑)與2×10-4mol/L的DPPH溶液混勻(A2管)；(3)取等體積的無水乙醇與待測物混勻(A3管)；(4)反應(yīng)30min后，在517nm下測A1、A2、A3管吸光度值。清除率計算公式為：清除率(％)＝[(A2+A3)-A1]/A2做出發(fā)酵提取物對DPPH自由基清除作用曲線，見圖1。由圖1可知，實施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對DPPH清除作用的IC50＝8.5％，說明牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液具有一定的抗氧化能力，可清除自由基，促進細胞代謝，增強細胞活力，改善機體的結(jié)構(gòu)和功能，提高機體生命力，從而延緩細胞老化，發(fā)揮其抗衰老的作用。〖牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的美白功效分析〗酪氨酸酶是黑素生成的關(guān)鍵酶，它控制著黑素的形成過程，其活性程度對色素的沉積起主要作用。目前市場上銷售的許多美白、祛斑產(chǎn)品都是以抑制酪氨酸酶達到美白作用，故對酪氨酸酶抑制作用的強弱是評價增白化妝品的主要指標(biāo)。通過測定樣品對酪氨酸酶的影響來評價樣品的美白功能，具體方法如下：按表2配置溶液：表2、溶液配制列表單位(mL)C1C2T1T2L-酪氨酸2222樣品0022PBS4523酪氨酸酶1010總體積7777注：C1和T1加入1mL酪氨酸酶，酶活為100U/mL；樣品為實施例1所得牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液；(1)C2管配好搖勻后，在37℃水浴鍋中水浴加熱10min，波長475nm下調(diào)零。(2)C1管溶液配好搖勻，37℃水浴10min后，加酪氨酸酶1ml，繼續(xù)水浴10分鐘，測定C1吸光度值。(3)按(1)(2)同樣方法，以T2調(diào)零測定T1吸光度值。(4)計算樣品對酪氨酸酶的活性抑制率T(％)：T(％)＝(C1-T1)/C1×100％圖2所示，實驗證明，本發(fā)明實施例1所得10％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液對酪氨酸酶活性的抑制率為24.36％，1％的熊果苷對酪氨酸酶活性的抑制率98.12％。即本發(fā)明提供的10％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的美白效果相當(dāng)于0.246％的熊果苷的效果，具有一定的美白功效?！寂Ｄ贪l(fā)酵產(chǎn)物濾液化妝品人體測試〗方法：分別各選20名年齡在28-50歲之間的女性志愿者使用含10％、20％牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的面膜，以不含牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液的基質(zhì)配方作為空白對照，每天晚上使用1次。使用VISIA全臉分析儀拍照分析，使用MPA580皮膚測試儀分析黑色素數(shù)值。結(jié)果：牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液可顯著降低皮膚色斑數(shù)量，提亮膚色，減輕皺紋數(shù)量和程度，提高平滑度，使肌膚年輕化。①祛斑與亮膚效果參見圖3，牛奶發(fā)酵產(chǎn)物濾液使用4周色斑數(shù)量已有顯著改善。參見圖4，使用6周后皮膚黑色素數(shù)值有顯著下降。②撫平皺紋效果參見圖5，牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液具有顯著的促進皮膚年輕化效果，使用4周后，不同濃度處理組皺紋數(shù)量均有極顯著降低。③改善皮膚平滑度參見圖6，牛奶產(chǎn)物發(fā)酵濾液可快速改善皮膚平滑度，使用2周后有顯著改善。本發(fā)明尚有多種實施方式，凡采用等同變換或者等效變換而形成的所有技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3