本發(fā)明屬于骨質(zhì)疏松治療領(lǐng)域，具體涉及一種改善骨質(zhì)疏松的組合物及其用途。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松發(fā)病率已躍居世界各種常見(jiàn)病的第七位，也有報(bào)道顯示居常見(jiàn)疾病的第六位。骨質(zhì)疏松癥主要患病人群是中老年人，特別是絕經(jīng)后的女性。我國(guó)人口老齡化加快，老年人口所占比例不斷增加，加上環(huán)境的惡化等因素，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率將明顯增加。目前我國(guó)骨質(zhì)疏松癥發(fā)病絕對(duì)人數(shù)已居世界首位。
老年人骨質(zhì)疏松發(fā)病率較高，全球有2億骨質(zhì)疏松患者，骨質(zhì)疏松嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)疏松性骨折，一旦患者經(jīng)歷了第一次骨質(zhì)疏松性骨折，繼發(fā)性骨折的危險(xiǎn)明顯加大。我國(guó)老年人居于世界首位，現(xiàn)有骨質(zhì)疏松癥患者9000萬(wàn)，占總?cè)丝诘?.1％。隨著社會(huì)老齡化的進(jìn)程，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，根據(jù)劉彩念等人的調(diào)查分析預(yù)測(cè)：隨著老齡人口的增加，骨質(zhì)疏松患者也不斷增加，到2020年時(shí)患病人數(shù)將超過(guò)1.5億。以上預(yù)測(cè)只是考慮未來(lái)人口數(shù)和老年人口比例對(duì)骨質(zhì)疏松發(fā)病人數(shù)的影響，但實(shí)際上還有其它因素的影響，比如其它疾病或藥物等一些因素誘發(fā)的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松將會(huì)增加，發(fā)病人數(shù)將會(huì)超過(guò)以上預(yù)測(cè)值。那時(shí)全世界一半以上的骨質(zhì)疏松性骨折將發(fā)生在亞洲，絕大部分在我國(guó)。
異位鈣化亦稱異位骨化。除正常生理鈣化外，在骨骼組織以外發(fā)生的鈣鹽沉積。這種改變通常發(fā)生于骨骼的肌腱附著處、韌帶、血管壁、骨筋膜等處。鈣離子由骨骼系統(tǒng)的析出，常導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生，故有的學(xué)者主張將異位鈣化作為骨質(zhì)疏松的間接征象。
血管鈣化(血管異位鈣化)是動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、腎病、衰老和高血壓等多種疾病的病理生理基礎(chǔ),是心血管疾病的主要危險(xiǎn)因子。血管異位鈣化和骨質(zhì)疏松往往同時(shí)發(fā)生，且隨著年齡的增加而明顯增加，尤其是在老年人、雌激素缺乏和自身免疫性疾病中較多見(jiàn)，也是老齡化社會(huì)中致殘、致死的主要原因。近來(lái)人群縱向研究發(fā)現(xiàn)血管鈣化和骨質(zhì)疏松的程度平行：骨質(zhì)喪失越多，血管鈣化進(jìn)程越嚴(yán)重，兩者之間有著密切的聯(lián)系。但是血管鈣化的病理機(jī)制尚無(wú)形成系統(tǒng)性的研究，針對(duì)性的治療藥物也十分缺乏。
目前大多數(shù)骨質(zhì)疏松的人群補(bǔ)鈣比較盲目，特別是老年病人，缺乏醫(yī)生指導(dǎo)，在不知情是否具有異位骨化病癥或風(fēng)險(xiǎn)的情況下用常規(guī)的補(bǔ)鈣劑補(bǔ)鈣，盡管可獲得較高的血鈣濃度，但鈣并不在骨組織沉積，而是在異位沉積，發(fā)生或加重異位鈣化，特別是血管鈣化最容易發(fā)生，大大增加心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種改善骨質(zhì)疏松的組合物，該組合物可以補(bǔ)鈣，抑制或逆轉(zhuǎn)異位鈣化，并促進(jìn)鈣轉(zhuǎn)移至骨骼，增加骨的形成。
本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
一種改善骨質(zhì)疏松的組合物，組合物包括橄欖果汁凍干粉30-50重量份、氨基葡萄糖鹽酸鹽80-120重量份、碳酸鈣80-120重量份和茯苓提取物40-60重量份。
作為優(yōu)選，本發(fā)明的組合物包括橄欖果汁凍干粉35-45重量份、氨基葡萄糖鹽酸鹽90-110重量份、碳酸鈣90-110重量份和茯苓提取物45-55重量份。
作為優(yōu)選，本發(fā)明的組合物包括橄欖果汁凍干粉40-45重量份、氨基葡萄糖鹽酸鹽100-110重量份、碳酸鈣100-110重量份和茯苓提取物45-50重量份。
作為優(yōu)選，本發(fā)明的組合物包括橄欖果汁凍干粉40重量份、氨基葡萄糖鹽酸鹽100重量份、碳酸鈣107.5重量份和茯苓提取物50重量份。
作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的橄欖果汁凍干粉含橄欖多酚不低于6％。
作為優(yōu)選，本發(fā)明的組合物還包括黃精提取物40-60重量份。
作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的黃精提取物為50重量份。
正常的骨代謝有骨吸收和骨形成兩個(gè)方面。如骨骼中的鈣被析出進(jìn)入血液后沉積于骨以外的組織即形成異位鈣化，常見(jiàn)的有軟組織鈣化和血管鈣化。鈣化的血管舒張功能降低、僵硬性增加，往往導(dǎo)致血栓形成和動(dòng)脈粥樣斑塊破裂等嚴(yán)重后果。血管鈣化往往與骨質(zhì)疏松同時(shí)發(fā)生并隨著年齡的增加而增加,兩者的共同因素即鈣的沉積部位的改變。鈣從骨組織中流失導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,而鈣沉積于動(dòng)脈血管壁上則導(dǎo)致血管鈣化。
基于人們對(duì)骨質(zhì)疏松長(zhǎng)期以來(lái)的認(rèn)識(shí)，認(rèn)為骨質(zhì)疏松必然是因?yàn)槿扁}，因此現(xiàn)有手段治療骨質(zhì)疏松，通常補(bǔ)充大量的鈣劑和促進(jìn)鈣吸收的補(bǔ)充劑，前者如各類鈣質(zhì)：葡萄糖酸鈣、碳酸鈣、檸檬酸鈣等等，后者如維生素D或其衍生物類等。然而這類補(bǔ)鈣物質(zhì)對(duì)伴有異位鈣化的患者，特別是老年患者并不理想。因?yàn)榘橛挟愇烩}化的患者其骨質(zhì)疏松的原因既包括鈣質(zhì)的缺乏，還包括機(jī)體對(duì)鈣化過(guò)程的調(diào)控失常，表現(xiàn)出骨組織被破骨細(xì)胞分解釋放鈣入血，以及血鈣沉積到非骨組織形成異位鈣化，對(duì)于這樣的患者，僅僅補(bǔ)充鈣并不能改善骨質(zhì)疏松的情況，反而會(huì)加重異位鈣化，如果是血管鈣化，則加重心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明的發(fā)明人長(zhǎng)期致力于研發(fā)可逆轉(zhuǎn)異位鈣化并改善骨質(zhì)疏松的產(chǎn)品，通過(guò)將橄欖果汁凍干粉、氨基葡萄糖鹽酸鹽、碳酸鈣和茯苓提取物進(jìn)行有機(jī)組合，獲得本發(fā)明的組合物，可實(shí)現(xiàn)不加重異位鈣化甚至逆轉(zhuǎn)異位鈣化的同時(shí)改善骨質(zhì)疏松的功能。
橄欖果汁凍干粉、氨基葡萄糖鹽酸鹽和碳酸鈣是現(xiàn)有多種改善骨質(zhì)疏松產(chǎn)品中常用的原料，碳酸鈣在胃酸中溶解性好，機(jī)體吸收率可達(dá)39％，能補(bǔ)充機(jī)體所需的鈣；橄欖果汁凍干粉含有效成分橄欖多酚，具有較強(qiáng)的自由基清除能力及較高的抗氧化活性，能對(duì)抗骨質(zhì)疏松的一個(gè)危險(xiǎn)因子—氧化應(yīng)激；氨基葡萄糖鹽酸鹽的氨基葡萄糖是天然的氨基單糖，是軟骨基質(zhì)主要成分蛋白多糖的前體物質(zhì)，可以刺激軟骨細(xì)胞合成有正常多聚體結(jié)構(gòu)的蛋白多糖，修復(fù)和重建關(guān)節(jié)軟骨，而且抑制損傷軟骨的基質(zhì)金屬蛋白酶和磷脂酶A2的活性，阻斷白細(xì)胞介素1和α-腫瘤壞死因子對(duì)軟骨的破壞作用。
本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)茯苓提取物具有抑制和逆轉(zhuǎn)異位鈣化，特別是血管鈣化的功能，將其與橄欖果汁凍干粉、氨基葡萄糖鹽酸鹽和碳酸鈣配伍，經(jīng)試驗(yàn)證明具有較好的增加骨密度改善骨質(zhì)疏松的效果并且可以抑制和逆轉(zhuǎn)血管鈣化，降低骨折和血管鈣化誘發(fā)心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明所述提取物的制備方法為：將藥材加4-10倍量水先浸泡0.2-1h后，加熱煎煮提取2次，每次煎煮時(shí)間為1-2h，過(guò)濾，收集濾液，減壓濃縮，干燥，過(guò)80目篩后，即得。
本發(fā)明還提供了含有上述組合物的制劑，這些制劑可以是丸劑、片劑、膠囊劑、散劑或顆粒劑，通過(guò)將本發(fā)明的組合物與常規(guī)輔料按常規(guī)方法即可制備。
本發(fā)明還提供了以上組合物在制備改善骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用，作為優(yōu)選，所述骨質(zhì)疏松癥伴異位鈣化，作為更優(yōu)的選擇，所述異位鈣化為血管鈣化。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
表1配方
橄欖果汁凍干粉含橄欖多酚不低于6％，購(gòu)自帝斯曼維生素(上海)有限公司；
氨基葡萄糖鹽酸鹽購(gòu)自青島海普生物技術(shù)有限公司；
碳酸鈣購(gòu)自北京惠康源生物科技有限公司。
實(shí)施例1
茯苓提取物和黃精提取物的制備
1、分別取黃精和茯苓置于提取罐中，加藥材10倍量水先浸泡0.5h后，加熱煎煮提取2次，每次煎煮時(shí)間為2h，120目不銹鋼濾網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液，合并兩次濾液，備用；
2、取上述水提取液置單效加熱器中減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15(60℃熱測(cè))，工藝參數(shù)：溫度70℃，壓力0.06-0.09Mpa。
3、取上述濃縮液置高速離心噴霧干燥機(jī)噴霧干燥(入口溫度150-180℃，出口溫度80-90℃)，得噴霧干燥粉，過(guò)80目篩后，分別得黃精提取物和茯苓提取物細(xì)粉。
實(shí)施例2
按表1中實(shí)施例2對(duì)應(yīng)的配方稱取原料，茯苓提取物和黃精提取物按實(shí)施例1制備，各原料過(guò)80目篩得到細(xì)粉備用。先橄欖果汁凍干粉、茯苓提取物和黃精提取物細(xì)粉混合20min得混合粉I，再與氨基葡萄糖鹽酸鹽混合20min得混合粉II。將2500g糊精和25g甜菊糖苷混合20min得混合粉III。最后將碳酸鈣、混合粉II和混合粉III充分混合20min，進(jìn)行包裝，制成1000袋，得到改善骨質(zhì)疏松的散劑。
實(shí)施例3-8
按表1中實(shí)施例3-7對(duì)應(yīng)的配方稱取原料，按實(shí)施例2的方法制備。
實(shí)施例9增加骨密度功能試驗(yàn)
1材料和方法
1.1樣品根據(jù)實(shí)施例2、實(shí)施例6、實(shí)施例8得到的產(chǎn)品分別作為樣品1、2和3，人體推薦劑量為1袋/日/人。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物及飼料：SPF級(jí)雌性大鼠100只，合格證號(hào)：SCXK(川)2008-24，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，動(dòng)物飼養(yǎng)：動(dòng)物在屏障級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)(許可證號(hào)：四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)SYXK(川)2008-011號(hào))。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，動(dòng)物自由攝食和飲水，室溫20-26℃，相對(duì)濕度40-70％。
1.3飼料：低鈣飼料，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，低鈣飼料配方(克％)：酪蛋白10，黃豆粉15，小麥粉54，花生油4，纖維素2，AIN-76混合鹽2.6，AIN-76混合維生素1，氯化膽堿0.2，DL-蛋氨酸0.2，淀粉11，實(shí)測(cè)每公斤飼料含鈣量789.5mg，加入碳酸鈣使飼料的鈣含量達(dá)到實(shí)測(cè)150mg/100g，作為低鈣飼料。
1.4主要儀器與試劑：原子吸收分光光度計(jì)，DPX-L雙能X線骨密度儀，電子天平。
1.5試驗(yàn)方法大鼠用基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂飼7天后，根據(jù)體重，隨機(jī)分組：低鈣對(duì)照組、樣品1、樣品2和樣品3各三個(gè)劑量組，每組10只，三個(gè)劑量組:417、833、1667mg/kg BW組，(分別相當(dāng)于人體攝入量的5/10/20倍)。三個(gè)樣品各個(gè)劑量組分別取樣品4.17、8.33、16.67g加蒸餾水配制成100mL溶液灌胃，低鈣對(duì)照組灌胃等量的蒸餾水，每天一次，連續(xù)灌胃90天，每周稱體重并按體重調(diào)整灌胃量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取出右側(cè)股骨，于105℃烘箱中，烤至衡重，稱量骨重，采用DPX-L雙能X線骨密度儀測(cè)定左骨頭骨密度，以骨的平均骨密度代表該骨的骨密度。采用原子吸收分光光度法測(cè)定右股骨頭鈣含量。
1.6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：使用PEMS3.1統(tǒng)計(jì)軟件包，對(duì)各指標(biāo)的組間差異作方差分析。
2結(jié)果
2.1樣品對(duì)大鼠骨重的影響
表2樣品對(duì)大鼠骨重的影響
注：*與陰性對(duì)照組比較，P<0.05，**與陰性對(duì)照組比較，P<0.01
由上表可見(jiàn)，樣品1、2和3各劑量組與陰性對(duì)照組比較，均能增加右股骨骨重，且差異具有顯著性(P<0.05)，且樣品1的中、高劑量組差異非常顯著(P<0.01)。
2.2樣品對(duì)大鼠骨密度及含鈣量的影響
表3樣品對(duì)大鼠骨密度及含鈣量的影響
注：*與陰性對(duì)照組骨密度比較，P<0.05，**與陰性對(duì)照組骨密度比較，P<0.01；#與陰性對(duì)照組骨鈣含量比較，P<0.05，##與陰性對(duì)照組骨鈣含量比較，P<0.01。
由上表可見(jiàn)，樣品1、2和3各劑量組與陰性對(duì)照組比較，骨密度和骨鈣含量均有所增加，樣品1與陰性對(duì)照組比較骨密度和骨鈣含量差異均具有顯著性(P<0.05)。
有上述實(shí)驗(yàn)可知，本發(fā)明的組合物具有增加低鈣動(dòng)物骨密度的功能。
實(shí)施例10樣品對(duì)異位鈣化大鼠的影響實(shí)驗(yàn)
1.1儀器與試劑標(biāo)準(zhǔn)飼料配方:水分10.0％、碳水化合物60.0％、粗脂肪4.5％、粗纖維5.0％、粗蛋白20.5％。維生素D乳劑由上海信誼金朱藥業(yè)有限公司提供；實(shí)施例2和8制得的產(chǎn)品作為樣品1和2；全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀。
1.2動(dòng)物分組及模型的建立
1.0～1.5月齡健康雄性SD大鼠(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCK(桂)2009-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0001299)41只,體重150～180g。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n＝10)、模型組(n＝11)和2個(gè)樣品組(每組n＝10)。分組當(dāng)天定為實(shí)驗(yàn)0時(shí),分別在0、24和48h給予模型組和樣品組維生素D3乳劑灌胃,劑量為每天400 000IU/kg；對(duì)照組在同一時(shí)刻給予等容量對(duì)照乳劑灌胃。實(shí)驗(yàn)全程3組大鼠均飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料。實(shí)驗(yàn)第4天至第9周結(jié)束,樣品組分別每天給樣品1和2 83.33mg/kg(常用劑量轉(zhuǎn)換而得)溶于生理鹽水1mL中灌胃,另2組分別給予等容量生理鹽水灌胃。第4周末處死模型組1只大鼠取主動(dòng)脈做病理切片,動(dòng)脈鈣化模型成立。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水?？傮w實(shí)驗(yàn)前后各大鼠體重?zé)o明顯差異(P>0.05)。
1.3血管壁鈣和骨組織鈣測(cè)定取腎動(dòng)脈上1cm到髂總分叉處腹主動(dòng)脈段,烘干稱重,濃硝酸硝化適當(dāng)稀釋后電極法測(cè)定血管壁鈣。取右側(cè)股骨組織,去離子水沖洗,加入30％H2O2浸泡30min，再用去離子水沖洗至澄清,置烘箱內(nèi),110℃烘干2h。用陶瓷器皿研磨骨至粉碎狀，稱重，以2mL 14mol/L濃HNO3加熱硝化成澄清液體，去離子水適當(dāng)稀釋降低酸度。自動(dòng)生物化學(xué)儀酶法測(cè)定骨組織鈣。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以表示；計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或方差分析(3組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn))；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)處理。
2.結(jié)果
2.1各組血管壁鈣含量和骨組織鈣含量變化模型組與對(duì)照組比較血管壁鈣含量明顯增加(P<0.01)。樣品組與模型組比較血管壁鈣含量降低了28.8％(P<0.01)。
表4樣品對(duì)大鼠血管壁鈣和骨組織鈣的影響
注：##與對(duì)照組比較，P<0.01；**與模型組比較，P<0.01。
由上表可見(jiàn)，模型組與對(duì)照組比較，血管壁鈣顯著增加，骨組織鈣顯著降低，說(shuō)明用維生素D3構(gòu)建異位鈣化的骨質(zhì)疏松模型成功，樣品1組的血管壁鈣和骨組織鈣與模型組比較，均有差異，且差異非常顯著(P<0.01)，樣品2組的血管壁鈣和骨組織鈣與模型組比較，差異并不顯著(P>0.05)，樣品1能明顯改善血管壁的鈣沉積，促進(jìn)異位鈣向骨轉(zhuǎn)移。
小結(jié)
本發(fā)明的組合物可以促進(jìn)低鈣大鼠對(duì)鈣的吸收和利用，增加骨密度，而且由于本發(fā)明的組合物含有茯苓提取物/和黃精提取物，還具有促進(jìn)異位鈣化的骨質(zhì)疏松大鼠鈣吸收的作用，并且促進(jìn)吸收的鈣向骨組織沉積，抑制或逆轉(zhuǎn)血管鈣化。