本發(fā)明涉及一種多糖蛋白片的制備工藝。
背景技術(shù)：
多糖蛋白片是以蘑菇浸膏為主要原料加工制成的片劑，為免疫系統(tǒng)用藥，抗腫瘤藥，胃癌，神經(jīng)系統(tǒng)用藥，呼吸系統(tǒng)用藥，本品為多糖蛋白粉制成的片劑，含有氨基酸、核酸、多糖等有效成分，可使白細(xì)胞明顯上升，肝功能好轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能，提高人體免疫能力，是經(jīng)典的延緩衰老方藥。
原多糖蛋白片工藝是白蘑菇水煎煮提取濃縮，加入適宜的輔料制成糖衣片，因多糖的提取單用水提效果不好；氨基酸單用水提只能提取游離的氨基酸；多糖蛋白片中的多糖蛋白干膏粉吸濕性較強(qiáng)，糖衣片在生產(chǎn)及保存過程水分較易進(jìn)入片芯，水分的存在不僅影響色糖層中水溶性色案的穩(wěn)定性，使其發(fā)生褪色、變色，同時(shí)會出現(xiàn)含量下降，糖衣表面出現(xiàn)花斑。故研究多糖蛋白片工藝是很有必要的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種多糖蛋白片制備工藝，通過對多糖蛋白片處方中白蘑菇的特性對多糖進(jìn)行超聲提取、對氨基酸進(jìn)行酸化提取，并成品進(jìn)行薄膜包衣，提高藥材的生物利用度及穩(wěn)定性，進(jìn)而提高產(chǎn)品的質(zhì)量及穩(wěn)定性，達(dá)到療效的提高。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對多糖超聲提取工藝、氨基酸酸化提取工藝的優(yōu)化、對產(chǎn)品進(jìn)行薄膜包衣的研究，提高了藥物的生物利用度，藥品質(zhì)量得到了很大提高。
本發(fā)明所述的多糖蛋白片制備工藝，其具體步驟包括如下：
1、一種多糖蛋白片制備工藝，包括如下步驟：
(1)稱量、配料
按重量計(jì)領(lǐng)取白蘑菇400-500份,核對品名、規(guī)格、批號、數(shù)量，并有專人核對；
(2)提取多糖
取步驟(1)所述的白蘑菇，加入8倍量的水，所述的8倍量指白蘑菇1g需加入水8g，在超聲儀(頻率為60kHz)提取30min，提取2次，收集合并提取液，藥渣備用，提取液濃縮至適量，即得多糖濃縮液，備用。
(3)提取氨基酸
取步驟(2)的藥渣，加入20倍量的水，所述的20倍量指白蘑菇1g需加入水20g，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為1，加熱提取40min，過濾，濾液加熱揮去稀鹽酸，濃縮至適量，即得氨基酸濃縮液。
(4)混合、干燥
將步驟(2)的多糖濃縮液、步驟(3)的氨基酸濃縮液、硫酸鈣、可溶性淀粉一起投入混合機(jī)中混合均勻后，置于微波真空干燥機(jī)中干燥，溫度50～60℃，時(shí)間60～90分鐘；真空度為-0.05～-0.06Mpa，將干燥好的干膏裝入潔凈的容器中，備用；
(5)粉碎、過篩、總混
將干燥后的干膏進(jìn)行粉碎，過100目篩，轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，混合20分鐘，即得多糖蛋白粉。
(6)制粒、壓片
將多糖蛋白粉投入制粒機(jī)中，混合5～10分鐘，加入適量的體積分?jǐn)?shù)為85％乙醇，混合5～10分鐘后制粒，制粒過程切割速度和攪拌速度保持低速。制粒結(jié)束后將顆粒放出，置顆粒機(jī)中進(jìn)行整粒過篩(14目篩)。將濕顆粒放入干燥設(shè)備中進(jìn)行干燥，控制干燥條件，溫度為60～70℃，時(shí)間為3～4小時(shí)，溫度升高宜平穩(wěn)。將干燥后的顆粒加入搖擺式顆粒機(jī)中整粒(過14目篩)。將整好的顆粒轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，加入硬脂酸鎂混合20分鐘，將混合好的顆粒按0.3g/片平均重量進(jìn)行壓片，即得多糖蛋白素片。
(7)包薄膜衣
將素片投入包衣機(jī)中，噴槍噴嘴到片面的最小距離為250～300mm，角度接近45℃，并使噴槍噴射截面的長軸與片芯的流向垂直，進(jìn)風(fēng)溫度為80～140℃，包衣機(jī)轉(zhuǎn)速定為3～8轉(zhuǎn)/分，空壓0.4kg/m2，片芯預(yù)熱20min，包衣(包衣中注意觀察并調(diào)節(jié)各參數(shù))，至包衣片表面光潔，衣層均勻，無麻點(diǎn)。在包衣機(jī)中通風(fēng)冷卻25～35分鐘，即得多糖蛋白片薄膜衣片。
(8)包裝
檢驗(yàn)合格后分裝成成品。
本發(fā)明多糖蛋白片工藝有三個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)：
創(chuàng)新點(diǎn)一：對處方中多糖進(jìn)行超聲提取，逐個(gè)分析多糖提取的影響因素，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對多糖的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，提高多糖的提取效率。
改進(jìn)此工藝原因有二個(gè)：一、多糖具有抗腫瘤、降低血糖、抗衰老、防輻射的作用，是多糖蛋白片的有效成分之一。二、白蘑菇中的多糖水提效果不好，有效成分提取效率及利用度不大，故本專利對多糖進(jìn)行超聲提取，以提高提取效率和增加生物利用度。超聲提取是利用超聲波具有空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)及熱效應(yīng)，還可以產(chǎn)生乳化、擴(kuò)散、擊碎、化學(xué)效應(yīng)等許多次級效應(yīng)，這些作用增大了介質(zhì)分子的運(yùn)動速度，提高介質(zhì)的穿透能力，促進(jìn)藥物有效成分溶解及擴(kuò)散，縮短提取時(shí)間，提高藥物有效成分的提取率。具體改進(jìn)及研究如下：
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述：
1.1實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1實(shí)驗(yàn)儀器
KQ250B超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，購于格蘭仕集團(tuán)有限公司；80-2型離心機(jī)，購于上海浦東物理光學(xué)儀器廠；高速萬能粉碎機(jī)，購于天津市泰斯特儀器有限公司；WF722型可見分光光度計(jì)，購于上海光譜儀器有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，購于鄭州長城科工貿(mào)有限公司。
1.1.2實(shí)驗(yàn)材料
白蘑菇，采摘福建漳州；95％濃硫酸(AR級)；無水乙醇(AR級)；苯酚(AR級)；標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖。
1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
1.2.1單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
采用超聲提取白蘑菇中多糖，研究超聲頻率、料液比、超聲時(shí)間、提取次數(shù)等因素對多糖提取效果的影響。
1.2.1.1不同超聲頻率的提取實(shí)驗(yàn)
稱取白蘑菇樣品，以1：6料液比加入蒸餾水，超聲處理30min，提取次數(shù)為1次，比較不同超聲頻率(20kHz，40kHz，60kHz，80kHz，100kHz)對多糖提取效果的影響，以選取較佳超聲頻率。
1.2.1.2不同料液比的提取實(shí)驗(yàn)
在超聲頻率為60kHz，超聲處理30min，提取次數(shù)為1次的條件下，比較不同料液比(1：4，1：6，1：8，1：10，1：12)對多糖提取效果的影響，以選取較佳料液比。
1.2.1.3不同時(shí)間的提取實(shí)驗(yàn)
稱取白蘑菇樣品，以1：8料液比加入蒸餾水，超聲頻率為60kHz，提取次數(shù)為1次的條件下，比較不同超聲時(shí)間(10，20，30，40，50min)對多糖提取效果的影響，以選取較佳超聲時(shí)間。
1.2.1.4不同提取次數(shù)的提取實(shí)驗(yàn)
稱取白蘑菇樣品，以1：8料液比加入蒸餾水，超聲處理30min，超聲頻率為60kHz，比較不同提取次數(shù)(1，2，3，4，5次)對多糖提取效果的影響，以選取較佳提取次數(shù)。
1.2.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)
為進(jìn)一步優(yōu)化白蘑菇中多糖的提取工藝條件，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選L16(45)作正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以確定提取白蘑菇中多糖的較佳工藝參數(shù)。
1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1白蘑菇中多糖提取方法
準(zhǔn)確稱取50g新鮮白蘑菇→放入高速粉碎機(jī)粉碎→將粉碎后的白蘑菇按各種條件(料液比、超聲頻率、超聲時(shí)間、提取次數(shù))進(jìn)行超聲處理→提取→過濾→濾液濃縮→乙醇沉淀→粗多糖→定容(即為待測樣液)。
1.3.2多糖的含量測定
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：準(zhǔn)確稱取已干燥的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖0.5g于500mL容量瓶中，配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。分別吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，置于具塞試管中，加入苯酚試液各1mL，搖勻.迅速加入濃硫酸各10mL，放置5min后，置于沸水浴中加熱2min，定容至25mL，冷卻后在490nm處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果：回歸方程y＝0.007x-0.019，相關(guān)系數(shù)R2＝0.999，方程在0～160μg/ml范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。
樣品測定：吸取定容液2mL，按上述步驟測定吸光度，計(jì)算含量。
1.4結(jié)果與結(jié)論
1.4.1單因素實(shí)驗(yàn)
1.4.1.1超聲頻率對白蘑菇中多糖提取率的影響
超聲頻率是影響有效成分提取率的主要因素之一，對同一種中藥材使用不同超聲頻率會得到不同的結(jié)果，若選擇的參數(shù)不當(dāng)，會使藥材中所含藥用成分提不出來或得不到理想的結(jié)果。不同頻率對超聲提取多糖效果的影響，結(jié)果可以看出，當(dāng)超聲時(shí)間一定時(shí)，超聲頻率為60kHz時(shí)多糖的提取效果較佳。
1.4.1.2料液比對白蘑菇中多糖提取率的影響
料液比是提取過程的一個(gè)重要影響因素，從傳質(zhì)速率的角度講，主要表現(xiàn)在影響固相主體和液相主體之間的濃度差，即傳質(zhì)推動力，料液比大，提取過程中液相濃度增加快，兩相間的濃度差減少加快，從而使傳質(zhì)推動力衰減加快，結(jié)果可以看出，隨著料液比下降，白蘑菇多糖提取率也逐漸上升，但從提取成本考慮，料液比1：8處為較佳。
1.4.1.3超聲時(shí)間對白蘑菇中多糖提取率的影響
超聲時(shí)間對多糖提取率的影響，結(jié)果可以看出，超聲提取30min，多糖提取效果較好，然后隨時(shí)間增加，對多糖提取影響減小?？赡苡捎诔暥虝r(shí)間內(nèi)對細(xì)胞膜的破碎作用較大，溶出物增多，當(dāng)?shù)竭_(dá)一定程度時(shí)反而會破壞有效成分，所以選擇30min左右為宜。
1.4.1.4提取次數(shù)對白蘑菇中多糖提取率的影響
提取次數(shù)對多糖提取率的影響，結(jié)果可以看出，提取率隨提取次數(shù)的增加而增加，提取2次后其增加不明顯，所以從提取成本考慮，選取較佳提取次數(shù)為2次。
1.4.2正交試驗(yàn)
在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以料液比(A)、超聲頻率(B)、超聲時(shí)間(C)、提取次數(shù)(D)4個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素水平見表1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及極差分析見表2。
表1：因素水平表
表2：正交試驗(yàn)結(jié)果
由表2正交試驗(yàn)結(jié)果極差分析可知，超聲提取白蘑菇多糖的各因素影響的主次為超聲頻率>超聲時(shí)間>料液比>提取次數(shù)，較佳提取工藝為B2C2A4D4，即超聲頻率為60kHz，超聲時(shí)間30min，料液比1：12，次數(shù)為4次。將正交結(jié)果進(jìn)行方差分析，見表3，從方差分析來看，
超聲頻率、超聲時(shí)間和料液比均有極顯著差異(P<0.01)，而提取次數(shù)差異顯著(P<0.05)。
表3：超聲提取多糖正交實(shí)驗(yàn)方差分析
1.4.3正交試驗(yàn)各水平間的多重比較
1.4.3.1料液比各水平間差異顯著性的SSR檢驗(yàn)表4SSR檢驗(yàn)顯示：料液比水平4、水平3與水平1之間存在極顯著性差異(P<0.01)，而水平2與水平1之間顯著性差異(P<0.05)；水平4、水平3、水平2之間不存在顯著性差異(P>0.05)。從表2的極差分析顯示料液比1：12較佳，但由于水平4與水平3、水平2之間不存在顯著性，如果從成本角度考慮，可選擇料液比為1：8。
表4：料液比各水平間差異顯著性SSR檢驗(yàn)
1.4.3.2超聲頻率各水平間差異顯著性的SSR檢驗(yàn)
表5 SSR檢驗(yàn)顯示：超聲頻率水平2與水平3之間存在顯著性差異(P<0.05)，水平2和水平3與水平1、水平4之間則存在極顯著性差異(P<0.01)，所以超聲提取的較佳工藝參數(shù)確定為超聲頻率為60kHz。
表5：超聲頻率各水平間差異顯著性SSR檢驗(yàn)
1.4.3.3超聲時(shí)間各水平間差異顯著性的SSR檢驗(yàn)
表6 SSR檢驗(yàn)顯示：超聲時(shí)間水平3與水平2之間、水平4與水平1之間不存在顯著性差異(P>0.05)，而水平2與水平1、水平4之間存在極顯著性差異(P<0.01)，水平3與水平4之間存在顯著性差異(P<0.05)。所以超聲時(shí)間以30min較為合適。
表6：超聲時(shí)間各水平間差異性顯著性SSR檢驗(yàn)
1.4.3.4提取次數(shù)各水平間差異顯著性的SSR檢驗(yàn)
表7 SSR檢驗(yàn)顯示：提取次數(shù)水平4、水平3、水平2之間沒有顯著性差異(P>0.05)，而水平4、水平3、水平2與水平1之間存在顯著性差異(P<0.05)，這說明提取次數(shù)達(dá)到2次后其提取次數(shù)增加對提取效果影響不大，所以提取次數(shù)選擇2次為宜。
表7：提取次數(shù)各水平間差異
1.4.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
取一定量樣品，根據(jù)方差分析得到的較佳提取條件(超聲頻率為60kHz，超聲時(shí)間30min，料液比1：12，次數(shù)為4次)和修正后的較佳提取條件(即超聲頻率為60kHz，超聲時(shí)間30min，料液比1：8，次數(shù)為2次)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各平行提取3次，測定多糖提取率如表8.實(shí)驗(yàn)證明，根據(jù)較佳的提取條件所測得的多糖提取率均大于正交設(shè)計(jì)表中其他提取條件下多糖提取率，且提取條件修正對提取結(jié)果不會起到影響。
表8：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.4.5結(jié)論
通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)表明，在超聲提取白蘑菇中多糖的過程中，超聲頻率、料液比和超聲時(shí)間是影響多糖提取率的主要因素.通過極差分析得出超聲提取白蘑菇中多糖的較佳條件是B2C2A4D4，即超聲頻率為60kHz，超聲時(shí)間30min，料液比1：12，超聲時(shí)間30min，次數(shù)為4次.而方差分析表明超聲頻率、料液比和超聲時(shí)間對雙孢蘑菇中多糖提取效果具有極顯著影響(P<0.01)，而料液比對多糖提取具有顯著的影響(P<0.05).通過各因素水平間的比較，表明較佳的工藝參數(shù)超聲時(shí)間30min，料液比1：8，次數(shù)為2次.通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明較佳提取工藝B2C2A4D4和修正后工藝B2C2A2D2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，且多糖提取率也較正交試驗(yàn)的其它結(jié)果高.超聲技術(shù)應(yīng)用于食用菌中多糖的提取是可行的，是一種省時(shí)便捷，值得推廣的方法.
創(chuàng)新點(diǎn)二：對白蘑菇中的氨基酸進(jìn)行酸化水解提取，提高其生物利用度。
改進(jìn)此工藝的原因有兩個(gè)：
一：構(gòu)成人體最基本的物質(zhì)，主要有蛋白質(zhì)、碳水化合物等。生命的產(chǎn)生至消亡，無一不與蛋白質(zhì)有關(guān)。如果人體內(nèi)缺少蛋白質(zhì)，會導(dǎo)致體質(zhì)下降，發(fā)育遲緩，甚至形成水腫、危及生命。而氨基酸是合成蛋白質(zhì)的重要原料，而且對于促進(jìn)生長，進(jìn)行正常代謝、維持生命提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。此外植物類蛋白質(zhì)，其含有大量黏體蛋白質(zhì)，具有預(yù)防心血管疾病，防止動脈粥樣硬化、降低血膽固醇，調(diào)解血糖等作用。二、原工藝只是水提，只能提取游離的氨基酸，現(xiàn)對其進(jìn)行酸化水解處理，再進(jìn)行提取，提高其提取效率，提高生物利用度。具體改進(jìn)及研究如下：
2.1實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器
白蘑菇，Aquelix 5型實(shí)驗(yàn)室高純水系統(tǒng)，重慶市金富科技發(fā)展有限公司；UV2501紫外分光光度計(jì)，日本島津LC-20A高效液相色譜儀；DKS-26型電熱恒溫水浴鍋，寧波江南儀器廠；FA2004B型電子天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司；SHZ-DⅢ型予華牌循環(huán)水真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；FW200型高速萬能粉碎機(jī)，北京科偉永興儀器有限公司。
2.2氨基酸提取新工藝的研究
2.2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)
本試驗(yàn)以白蘑菇中總氨基酸的含量為指標(biāo)，選擇pH、液料比、提取時(shí)間、提取次數(shù)四因素為考察因素，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)。正交因素水平表見表9。
表9：正交試驗(yàn)因素水平表
2.2.2供試品溶液的制備
稱取白蘑菇9g，粉粹成粗粉，分9份，分別進(jìn)行超聲處理，提取，得濾液①，藥渣按表1安排在恒溫水浴鍋中進(jìn)行提取，得濾液②，合并濾液①和濾液②，將濾液轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
2.2.3對照品溶液的制備
十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品加0.02mol/L鹽酸溶液配置成各含0.1μmol/mL溶液(天門冬氨酸Asp,蘇氨酸Thr,絲氨酸Ser,谷氨酸Glu,脯氨酸Pro,甘氨酸Gly,丙氨酸Ala,胱氨酸Cys,纈氨酸Val,蛋氨酸Met,異亮氨酸Ile,亮氨酸Leu,酪氨酸Tyr,苯丙氨酸Phe,組氨酸His,賴氨酸Lys,精氨酸Arg)，用0.45μm濾膜過濾，備用。
2.2.4色譜條件
分析儀器：氨基酸柱后衍生系統(tǒng)，LC-20A(P1-28):[LC-20A系統(tǒng)，包括：LC-20AB×1(輸液泵)，LC-20AT×2(柱后衍生輸液泵)，F(xiàn)CV-11ALS(溶液選擇閥)，SIL-20A(自動進(jìn)樣器)，CTO-20A(柱溫箱)，RF-20A(熒光檢測器)，CBM-20A(系統(tǒng)控制器)和Labsolution(色譜工作站)。]
色譜柱：Shim-pack AMINO-Na 6.0mm×100mm 5μm
抑制柱：Ammonia trap column：ISC-30Na
流速：輸液泵總流速：0.4mL/min
衍生泵A：0.2mL/min
衍生泵B：0.2mL/min
流動相:
MA:0.067mol/L檸檬酸鈉,高氯酸調(diào)至PH3.2
MB:0.20mol/L檸檬酸鈉,0.2mol/L硼酸,用4mol/L NaOH調(diào)至PH10.0
MC:0.2mol/L NaOH溶液
反應(yīng)液：
RA:硼酸-碳酸鈉緩沖鹽[Na2CO3(40.7g)，K2SO4(13.6g)H3BO3(18.8g)加蒸餾水，配成1L溶液]，加入0.4mlNaClO
Rb：硼酸-碳酸鈉緩沖鹽[Na2CO3(40.7g)，K2SO4(13.6g)H3BO3(18.8g)加蒸餾水，配成1L溶液]，加溶于14ml乙醇的800mg OPA的溶液,再加10％Brij-35溶液4ml與2ml2-巰基乙醇.
檢測器：熒光檢測器 激發(fā)波長Ex:350nm 發(fā)射波長Em：450nm
進(jìn)樣量：5ul 柱溫:55℃
梯度程序：
2.2.5分析結(jié)果
2.2.5.1.0.1μmol/mL十七氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖分析
照“2.2.4項(xiàng)方法測定”鹽酸溶液溶劑空白、0.1μmol/mL十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品和扣除空白后得到的十七種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品。結(jié)果在此方法下，氨基酸的分離度良好，可以作為檢測氨基酸的方法。
2.2.5.2.氨基酸色譜圖分析
照“2.2.4項(xiàng)方法測定”多糖蛋白片和扣除空白后得到的多糖蛋白片。結(jié)果在此方法下，多糖蛋白片中氨基酸的分離度良好，可以作為檢測多糖蛋白片氨基酸的方法。
2.2.5.3線性范圍的考察
精密稱取17種氨基酸對照品適量，17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品加0.02mol/L鹽酸溶液配置成各含50μg/mL溶液(天門冬氨酸Asp(55.95μg/ml),蘇氨酸Thr(54.35μg/ml),絲氨酸Ser(58.85μg/ml),谷氨酸Glu(58.20μg/ml),脯氨酸Pro(68.40μg/ml),甘氨酸Gly(56.10μg/ml),丙氨酸Ala(55.55μg/ml),胱氨酸Cys(86.55μg/ml),纈氨酸Val(65.90μg/ml),蛋氨酸Met(59.85μg/ml),異亮氨酸Ile(55.55μg/ml),亮氨酸Leu(56.10μg/ml),酪氨酸Tyr(61.85μg/ml),苯丙氨酸Phe(56.30μg/ml),組氨酸His(60.05μg/ml),賴氨酸Lys(66.05μg/ml),精氨酸Arg(58.05μg/ml))，作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液0.6ml、1.0ml、1.6ml、2.0ml、4.0ml，分別置于10ml量瓶中，加0.02mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，分別吸取上述對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量(W)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，得回歸方程。結(jié)果表明，各氨基酸在一定范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表10。
表10：17種氨基酸的回歸方程
2.2.5.4精密度試驗(yàn)
取同一份17種氨基酸混合對照品溶液，按“2.2.4項(xiàng)”的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，測定峰面積，RSD如下表。結(jié)果表明，該儀器精密度良好。見表11.
表11:17種氨基酸精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.2.5.5回收率試驗(yàn)
精密稱取多糖蛋白片(薄膜衣片)樣品6份,每份0.2g,同時(shí)向樣品中加入17種氨基酸對照品溶液15.0ml,加6mol/L鹽酸適量,抽空后封管,在110℃水解24小時(shí)，冷卻,開管,水解液置水浴蒸干，用0.02mol/L鹽酸溶液稀釋至10mL,取1ml到50ml加0.02mol/L鹽酸溶液定容至刻度,作為供試品溶液。結(jié)果見表12—表29。
表12：天門冬氨酸加樣回收率
表13：蘇氨酸加樣回收率
表14：絲氨酸加樣回收率
表15：谷氨酸加樣回收率
表16：脯氨酸加樣回收率
表17：甘氨酸加樣回收率
表18：丙氨酸加樣回收率
表19：胱氨酸加樣回收率
表20：纈氨酸加樣回收率
表21：蛋氨酸加樣回收率
表22：異亮氨酸加樣回收率
表23：亮氨酸加樣回收率
表24：酪氨酸加樣回收率
表25：苯丙氨酸加樣回收率
表26：組氨酸加樣回收率
表27：賴氨酸加樣回收率
表28：精氨酸加樣回收率
表29：總氨酸加樣回收率
2.2.6供試品溶液的測定
分別精密吸取供試品溶液1mL，按2.2.4項(xiàng)下的測定含量，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)處理結(jié)果見表30，方差分析見表31。
表30：正交試驗(yàn)結(jié)果
2.2.7由表2分析可知最佳的提取工藝為A1B3C3D2；由表3方差分析可知，各因素對總氨基酸得率的影響大小順序?yàn)锽>A>D>C，結(jié)果顯示液料比對總氨基酸的得率有顯著影響，其余三因素均無顯著性。因此，考慮節(jié)約成本等實(shí)際情況，提取工藝調(diào)整為A1B3C1D1，即在pH為1的條件下20倍量水提取1次，提取時(shí)間為40min。
表31：方差分析表
2.2.8工藝驗(yàn)證
按優(yōu)選的工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測定總氨基酸得率平均值為1.93％，RSD＝0.76％(n＝3)，測試結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可靠，可以作為總氨基酸的水提工藝方法。
本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)三：對成品中包衣進(jìn)行研究，改包糖衣為薄膜包衣法。
本品原為糖衣片，在不降低藥物的療效，又能提高藥品質(zhì)量的基礎(chǔ)上，對該品種工藝進(jìn)行薄膜衣片研究。
改進(jìn)此工藝的原因有兩個(gè)：
一、糖衣片存在很多缺點(diǎn)：長期以來國內(nèi)普藥生產(chǎn)中的片劑包衣技術(shù)，大多沿用傳統(tǒng)落后的糖漿包衣工藝，把以滑石粉、蔗糖、明膠為主的多種與藥物治療毫無關(guān)系的輔料，附加在藥物片芯的表層，使糖衣片有效藥物片芯額外增重達(dá)到50～100％，因此，長期服用會對人體造成極大危害、尤其是糖尿病患者。同時(shí)，糖漿包衣生產(chǎn)過程中也難以避免粉塵飛揚(yáng)、污染環(huán)境，化糖、化膠、添加色素、晾片、物料存放均需占用車間較大空間。且生產(chǎn)工藝復(fù)雜，操作過程中大多依賴操作者憑經(jīng)驗(yàn)，憑手感控制包衣質(zhì)量，與藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)大相徑庭。由于糖漿包衣過程中的不可控因素較多，很多糖衣片劑生產(chǎn)企業(yè)在糖衣片生產(chǎn)和存放過程中，還經(jīng)常性的容易出現(xiàn)裂片、花班、霉點(diǎn)、崩解超時(shí)、含量下降、吸濕性強(qiáng)、不易保存、生產(chǎn)時(shí)間和晾片時(shí)間長等諸多缺陷。
二、薄膜包衣工藝可廣泛用于片劑、丸劑、顆粒劑，特別對吸溫性強(qiáng)、易開裂、易退色的片劑更顯示其優(yōu)越性。薄膜包衣與包糖衣比較，主要有以下優(yōu)點(diǎn)：時(shí)間較短(包一鍋片劑只需2小時(shí)左右，而包一鍋糖衣片需要約16小時(shí))，操作簡便，干燥速度快，藥物受熱影響小，有利于提高藥品的質(zhì)量；薄膜包衣工藝節(jié)約勞動力(1～2名操作工人)、廠房及設(shè)備(只需一間標(biāo)準(zhǔn)廠房及一臺包衣鍋)，節(jié)約材料，所以成本較低，而前期投入也十分有限；應(yīng)用薄膜包衣工藝的片劑僅使片芯重增加2％～4％，而糖衣片劑(其中主要輔料成分是國外已淘汰的滑石粉)往往可使片芯重量增大50％～100％；薄膜包衣工藝能減少工作場所的粉塵飛揚(yáng)，有利于環(huán)保和勞動保護(hù)，亦可節(jié)約包裝材料等；應(yīng)用薄膜包衣工藝的片劑壓在片上的標(biāo)志在包薄膜衣后仍清晰可見，便于患者辨別和使用；薄膜包衣的片劑堅(jiān)固耐磨，不易開裂；薄膜包衣材料有優(yōu)異的物理性能，大多數(shù)材料均能抗?jié)窨篃?，可提高產(chǎn)品質(zhì)量，延長產(chǎn)品的有效期；薄膜包衣有眾多的材料可供選擇。除了能達(dá)到一般的包衣目的外，還可通過選擇薄膜材料和設(shè)計(jì)包衣配方，使形成的包衣膜在一定的pH范圍內(nèi)溶解或崩解，也可控制膜的滲透性，使所包的藥物在體內(nèi)通過擴(kuò)散作用陸續(xù)釋放出來，達(dá)到定時(shí)、定位釋放藥物的目的，這是薄膜包衣具有廣泛發(fā)展前途的一個(gè)重要原因；生產(chǎn)工藝過程和材料用量可以標(biāo)準(zhǔn)化。具體改進(jìn)及研究如下：
3.多糖蛋白片薄膜包衣法的研究
3.1研究背景現(xiàn)狀
多糖蛋白片是以白蘑菇提取濃縮加工制成的片劑，為免疫系統(tǒng)用藥，抗腫瘤藥，胃癌，神經(jīng)系統(tǒng)用藥，呼吸系統(tǒng)用藥，本品為多糖蛋白粉制成的片劑，含有氨基酸、核酸、多糖等有效成分，可使白細(xì)胞明顯上升，肝功能好轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能，提高人體免疫能力，是經(jīng)典的延緩衰老方藥。為了保證片劑質(zhì)量和方便服用，在壓片后的片芯表層包裹適宜的衣層材料，使片劑中的藥物與外界隔離，從而達(dá)到防潮、避光、隔絕空氣氧化、增強(qiáng)藥物保存的穩(wěn)定性，掩蓋片劑中的不良嗅味和減少藥物刺激的目的，故需要在藥物片芯表層進(jìn)行包衣。本品為糖衣片，多糖蛋白片中的多糖蛋白干膏粉吸濕性較強(qiáng)，糖衣片在生產(chǎn)及保存過程水分較易進(jìn)入片芯，水分的存在不僅影響色糖層中水溶性色案的穩(wěn)定性，使其發(fā)生褪色、變色，同時(shí)會出現(xiàn)含量下降，糖衣表面出現(xiàn)花斑。
薄膜包衣是利用可成膜性高分子材料在片劑表面包制一層薄膜，與糖包衣比較，抗?jié)裥詮?qiáng)，操作簡便、省時(shí)、節(jié)能，減少輔料用量。包衣材料可以采用現(xiàn)有通用的包衣材料如歐巴代或纖維素衍生物、丙烯酸樹脂類等，本發(fā)明優(yōu)先使用的包衣材料歐巴代(上?？房蛋录夹g(shù)有限公司)所采用的色案是鋁色錠顏料，它是由水溶性母體染料和鋁鹽合成所制得，其特點(diǎn)是不溶于水和大部分溶劑，因此操作過程不會產(chǎn)生顏色的遷移，而且穩(wěn)定性極佳，著色力強(qiáng)，不易褪色、變色。
3.2材料與儀器
3.2.1材料
蘑菇浸膏，硫酸鈣，可溶性淀粉，歐巴代，乙醇。
3.2.2儀器
六管崩解儀(上海黃海藥檢儀器廠).PYX-DHS型隔水式電熱培養(yǎng)箱(上海市躍進(jìn)匿療器械一廠)，751型紫外分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)，小型包衣機(jī)(寶雞健華機(jī)械廠)，19沖壓片機(jī)(上海天樣醫(yī)藥機(jī)械廠)，78X-2型片劑四用測定儀(上海黃海藥檢儀器廠)。
3.3實(shí)驗(yàn)研究
3.3.1包衣材料的選擇
薄膜包衣需用形成薄膜的材料、增塑劑、溶劑及其它材料。成膜材料又分為胃溶性和腸溶性兩類，根據(jù)本品特性以及釋放吸收部位，可確定需使用胃溶性成膜材料。胃溶性成膜材料指在水或胃液中可以溶解的材料，常用者有以下幾種。
(1)纖維素衍生物羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉等均可用成膜材料。目前應(yīng)用最廣泛的是羥丙基甲基纖維素，其優(yōu)點(diǎn)是可溶于某些有機(jī)溶劑和水，易在胃液中溶解，對片劑崩解和藥物溶出的不良影響??；其成膜性較好，形成的膜的強(qiáng)度適宜，不易脆裂等。本品在國外有3種型號，并根據(jù)粘度不同而分為若干規(guī)格，其低粘度者可用于薄膜包衣。市場上既有HPMC原料出售，也有配成包衣材料的復(fù)合物(加入色素、遮光劑二氧化鈦及增塑劑等)，用前加溶劑溶解(混懸)后包衣。
(2)聚維酮本品性質(zhì)穩(wěn)定、無毒，能溶于水及多種溶劑。本品可形成堅(jiān)固的膜，但本品具有吸濕性，本品較宜與其它成膜材料合用，例如可與蟲膠、甘油醋酸酯等合用，也可與PEG合用。
(3)丙烯酸樹脂類丙烯酸樹脂是一大類共聚物，常用甲基丙烯酸二甲胺基乙酯—中性甲基丙烯酸酯共聚物，國產(chǎn)品名稱為丙烯酸Ⅳ號樹脂。本品可溶于醇、丙酮、異丙醇、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，本品在水中的溶解度與pH有關(guān)，溶解度因pH值下降而升高，在胃液中可快速溶解，因此本品是良好的胃溶性包衣材料；本品的成膜性能較好，膜的強(qiáng)度較大；可包無色透明薄膜衣，也可加入二氧化鈦、色料及必要的增塑劑后用于包衣。
(4)聚乙烯乙醛二乙胺乙酯(簡稱AEA)本品無味無嗅，可溶于乙醇、甲醇、丙酮，不溶于水中，但可溶于酸性水中，其化學(xué)性穩(wěn)定。用本品包衣，可增加防潮等性能，可在胃中快速溶解，對藥物溶出的不良影響較小。
(5)其它如聚乙二醇等。
現(xiàn)在市場上有配成包衣材料的復(fù)合物，根據(jù)產(chǎn)品特性和公司使用的經(jīng)驗(yàn)，我司從上?？房蛋录夹g(shù)有限公司的包衣產(chǎn)品中選出歐巴代水性胃溶型包衣預(yù)混劑做為本產(chǎn)品的包衣材料。
3.3.2樣品的制備
3.3.2.1多糖蛋白粉的制備
按重量計(jì)領(lǐng)取白蘑菇500g,加入8倍量的水，所述的8倍量指白蘑菇1g需加入水8g，在超聲儀(頻率為60kHz)提取30min，提取2次，收集合并提取液，藥渣備用，提取液濃縮至適量，即得多糖濃縮液，備用。取藥渣，加入20倍量的水，所述的20倍量指白蘑菇1g需加入水20g，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為1，加熱提取40min，過濾，濾液揮去稀鹽酸，濃縮至適量，即得氨基酸濃縮液。將多糖濃縮液、氨基酸濃縮液、硫酸鈣、可溶性淀粉一起投入混合機(jī)中混合，干燥，將干燥后的干膏進(jìn)行粉碎，過100目篩，轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，混合20分鐘，將細(xì)粉(多糖蛋白片干膏細(xì)粉)裝入潔凈的容器中，備用。
3.3.2.2素片基本處方
多糖蛋白粉3Kg，硬脂酸鎂適量，乙醇適量，純化水適量，制成1萬片。
3.3.2.3素片的制備
將多糖蛋白片粉投入高效濕法制粒機(jī)中，混合5～10分鐘，加入適量的體積分?jǐn)?shù)為85％乙醇，混合5～10分鐘后制粒，制粒過程切割速度和攪拌速度保持低速。制粒結(jié)束后將顆粒放出，置顆粒機(jī)中進(jìn)行整粒過篩(14目篩)。將濕顆粒以適宜厚度(2～3cm)均勻鋪在干燥盤上，再按從上到下的順序依次將干燥盤放入干燥車，然后將干燥車推進(jìn)烘箱，控制干燥條件，溫度為70～80℃，時(shí)間為3～4小時(shí)，溫度升高宜平穩(wěn)。將干燥后的顆粒加入搖擺式顆粒機(jī)中整粒(過14目篩)；將整好的顆粒轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，加入硬脂酸鎂混合20分鐘，壓片，即得。
3.3.2.4包衣液基本處方
歐巴代OY-24801 25g，體積分?jǐn)?shù)為70％乙醇313g。
3.3.2.5薄膜衣片的制備
將1Kg的素片投入包衣機(jī)中，噴槍噴嘴到片面的最小距離為250～300mm，角度接近45℃，并使噴槍噴射截面的長軸與片芯的流向垂直，進(jìn)風(fēng)溫度為80～140℃，包衣機(jī)轉(zhuǎn)速定為3～8轉(zhuǎn)/分，空壓0.4kg/m2，片芯預(yù)熱10分鐘，包衣(包衣中注意觀察并調(diào)節(jié)各參數(shù))，至包衣片表面光潔，衣層均勻，無麻點(diǎn)。在包衣機(jī)中通風(fēng)冷卻25～35分鐘后，裝入潔凈的容器中，注明品名、批號、數(shù)量、操作者和日期，即得。
3.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)
3.3.3.1吸濕性試驗(yàn)
取多糖蛋白片薄膜衣片及糖衣片各4盒，除去鋁塑板包裝，裸露放置于相對濕度為75％的恒濕瓶中進(jìn)行吸濕性試驗(yàn)，于5、10、20、30天各取樣檢查一次。計(jì)算吸濕率，試驗(yàn)結(jié)果見表32。
吸濕率％＝(試驗(yàn)后重量-試驗(yàn)前重量)/試驗(yàn)前重量×100％。
表32：試驗(yàn)結(jié)果
表1示，薄膜衣片的防潮性能明顯好于糖衣片。
3.3.3.2薄膜衣片和糖衣片質(zhì)量比較
用同一批的原料及輔料照上述多糖蛋白片薄膜衣片工藝及多糖蛋白片糖衣片工藝分別制備3批多糖蛋白片樣品，照多糖蛋白片標(biāo)準(zhǔn)，對其性狀、鑒別、崩解時(shí)限、微生物限度、含量測定(多糖、總氨基酸、谷氨酸和天門冬氨酸)進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)數(shù)據(jù)見表33：
表33：多糖蛋白片糖衣片和薄膜衣片樣品檢驗(yàn)數(shù)據(jù)
結(jié)果：由表1可以看出，多糖蛋白片糖衣片和薄膜衣片均符合藥品標(biāo)準(zhǔn)，且各項(xiàng)目數(shù)據(jù)差異不大。
3.3.3.3恒溫恒濕加速試驗(yàn)
在干燥器下部放入飽和氯化鈉溶液(相對濕度為75％恒濕液)，上部放試驗(yàn)樣品.加蓋密封后，將干燥器放在PYX-DHS型隔水式電熱培養(yǎng)箱內(nèi)，設(shè)定恒定溫度為加40±l℃，連續(xù)放置90天，每隔30天取樣檢查一次。結(jié)果見表34。
表34：試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果表明：薄膜衣片在加速試驗(yàn)90天后各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符舍標(biāo)準(zhǔn)要求；糖衣片的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)也符合標(biāo)準(zhǔn)要求，但90天時(shí)，糖衣片的顏色因樣品吸濕已經(jīng)開始變色，多糖、總氨基酸、谷氨酸和天門冬氨酸有下降趨勢。
3.4結(jié)論
試驗(yàn)可見，同樣制粒工藝制備的多糖蛋白片以不同的包衣工藝進(jìn)行包衣，所得到的樣品在質(zhì)量穩(wěn)定性上有較大的差別，薄膜衣片明顯比糖衣片質(zhì)量穩(wěn)定，保存期長。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：采用本發(fā)明的工藝后，通過實(shí)施例的3批次實(shí)驗(yàn)測定分析和穩(wěn)定性考察，可知：
(1)從現(xiàn)有市售的多糖蛋白片經(jīng)過本發(fā)明的制備后其多糖、氨基酸有效成分得到更充分的溶出，見表35數(shù)據(jù)，可見采用本發(fā)明的工藝制得的多糖蛋白片產(chǎn)品有效成分損失較少。
(2)經(jīng)過加速實(shí)驗(yàn)連續(xù)考察實(shí)施例的三個(gè)批次產(chǎn)品；實(shí)驗(yàn)條件：將采用本發(fā)明所制得的多糖蛋白片產(chǎn)品放入加速實(shí)驗(yàn)設(shè)備中，設(shè)定溫度40℃±2℃；濕度75％±5％，放置6個(gè)月，按1個(gè)月，2個(gè)月，3個(gè)月，6個(gè)月末分別取樣一次，重點(diǎn)考察多糖蛋白片產(chǎn)品的性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量的變化，見表36數(shù)據(jù)，結(jié)果表明此工藝制得的多糖蛋白片產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
(3)經(jīng)過長期實(shí)驗(yàn)連續(xù)考察市售的3個(gè)批次經(jīng)過本發(fā)明的所制得的多糖蛋白片產(chǎn)品：實(shí)驗(yàn)條件：將產(chǎn)品按市場銷售包裝規(guī)格，放入實(shí)驗(yàn)設(shè)備中，設(shè)定溫度25℃±2℃；濕度60％±10％，放置36個(gè)月，按0個(gè)月，3個(gè)月，6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月，18個(gè)月，24個(gè)月末分別取樣一次，重點(diǎn)考察多糖蛋白片產(chǎn)品的性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量的變化，見表37數(shù)據(jù)，結(jié)果表明此工藝制得的多糖蛋白片產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
1)實(shí)施例1的第一批實(shí)驗(yàn)：
多糖蛋白片的制備方法包括如下步驟：
(1)稱量、配料
按重量計(jì)領(lǐng)取白蘑菇400份,核對品名、規(guī)格、批號、數(shù)量，并有專人核對；
(2)提取多糖
取步驟(1)所述的白蘑菇，加入8倍量的水，所述的8倍量指白蘑菇1g需加入水8g，在超聲儀(頻率為60kHz)提取30min，提取2次，收集合并提取液，藥渣備用，提取液濃縮至適量，即得多糖濃縮液，備用。
(3)提取氨基酸
取步驟(2)的藥渣，加入20倍量的水，所述的20倍量指白蘑菇1g需加入水20g，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為1，加熱提取40min，過濾，濾液加熱揮去稀鹽酸，濃縮至適量，即得氨基酸濃縮液。
(4)混合、干燥
將步驟(2)的多糖濃縮液、步驟(3)的氨基酸濃縮液、硫酸鈣、可溶性淀粉一起投入混合機(jī)中混合均勻后，置于微波真空干燥機(jī)中干燥，溫度50～60℃，時(shí)間60～90分鐘；真空度為-0.05～-0.06Mpa，將干燥好的干膏裝入潔凈的容器中，備用；
(5)粉碎、過篩、總混
將干燥后的干膏進(jìn)行粉碎，過100目篩，轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，混合20分鐘，即得多糖蛋白粉。
(6)制粒、壓片
將多糖蛋白粉投入制粒機(jī)中，混合5～10分鐘，加入適量的體積分?jǐn)?shù)為85％乙醇，混合5～10分鐘后制粒，制粒過程切割速度和攪拌速度保持低速。制粒結(jié)束后將顆粒放出，置顆粒機(jī)中進(jìn)行整粒過篩(14目篩)。將濕顆粒放入干燥設(shè)備中進(jìn)行干燥，控制干燥條件，溫度為60～70℃，時(shí)間為3～4小時(shí)，溫度升高宜平穩(wěn)。將干燥后的顆粒加入搖擺式顆粒機(jī)中整粒(過14目篩)。將整好的顆粒轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，加入硬脂酸鎂混合20分鐘，將混合好的顆粒按0.3g/片平均重量進(jìn)行壓片，即得多糖蛋白素片。
(7)包薄膜衣
將素片投入包衣機(jī)中，噴槍噴嘴到片面的最小距離為250～300mm，角度接近45℃，并使噴槍噴射截面的長軸與片芯的流向垂直，進(jìn)風(fēng)溫度為80～140℃，包衣機(jī)轉(zhuǎn)速定為3～8轉(zhuǎn)/分，空壓0.4kg/m2，片芯預(yù)熱20min，包衣(包衣中注意觀察并調(diào)節(jié)各參數(shù))，至包衣片表面光潔，衣層均勻，無麻點(diǎn)。在包衣機(jī)中通風(fēng)冷卻25～35分鐘，即得多糖蛋白片薄膜衣片。(8)包裝
檢驗(yàn)合格后分裝成成品。
2)實(shí)施例2的第二批實(shí)驗(yàn)：
多糖蛋白片的制備方法包括如下步驟：
(1)稱量、配料
按重量計(jì)領(lǐng)取白蘑菇450份,核對品名、規(guī)格、批號、數(shù)量，并有專人核對；
(2)提取多糖
取步驟(1)所述的白蘑菇，加入8倍量的水，所述的8倍量指白蘑菇1g需加入水8g，在超聲儀(頻率為60kHz)提取30min，提取2次，收集合并提取液，藥渣備用，提取液濃縮至適量，即得多糖濃縮液，備用。
(3)提取氨基酸
取步驟(2)的藥渣，加入20倍量的水，所述的20倍量指白蘑菇1g需加入水20g，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為1，加熱提取40min，過濾，濾液加熱揮去稀鹽酸，濃縮至適量，即得氨基酸濃縮液。
(4)混合、干燥
將步驟(2)的多糖濃縮液、步驟(3)的氨基酸濃縮液、硫酸鈣、可溶性淀粉一起投入混合機(jī)中混合均勻后，置于微波真空干燥機(jī)中干燥，溫度50～60℃，時(shí)間60～90分鐘；真空度為-0.05～-0.06Mpa，將干燥好的干膏裝入潔凈的容器中，備用；
(5)粉碎、過篩、總混
將干燥后的干膏進(jìn)行粉碎，過100目篩，轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，混合20分鐘，即得多糖蛋白粉。
(6)制粒、壓片
將多糖蛋白粉投入制粒機(jī)中，混合5～10分鐘，加入適量的體積分?jǐn)?shù)為85％乙醇，混合5～10分鐘后制粒，制粒過程切割速度和攪拌速度保持低速。制粒結(jié)束后將顆粒放出，置顆粒機(jī)中進(jìn)行整粒過篩(14目篩)。將濕顆粒放入干燥設(shè)備中進(jìn)行干燥，控制干燥條件，溫度為60～70℃，時(shí)間為3～4小時(shí)，溫度升高宜平穩(wěn)。將干燥后的顆粒加入搖擺式顆粒機(jī)中整粒(過14目篩)。將整好的顆粒轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，加入硬脂酸鎂混合20分鐘，將混合好的顆粒按0.3g/片平均重量進(jìn)行壓片，即得多糖蛋白素片。
(7)包薄膜衣
將素片投入包衣機(jī)中，噴槍噴嘴到片面的最小距離為250～300mm，角度接近45℃，并使噴槍噴射截面的長軸與片芯的流向垂直，進(jìn)風(fēng)溫度為80～140℃，包衣機(jī)轉(zhuǎn)速定為3～8轉(zhuǎn)/分，空壓0.4kg/m2，片芯預(yù)熱20min，包衣(包衣中注意觀察并調(diào)節(jié)各參數(shù))，至包衣片表面光潔，衣層均勻，無麻點(diǎn)。在包衣機(jī)中通風(fēng)冷卻25～35分鐘，即得多糖蛋白片薄膜衣片。
(8)包裝
檢驗(yàn)合格后分裝成成品。
3)實(shí)施例3的第三批實(shí)驗(yàn)：
多糖蛋白片的制備方法包括如下步驟：
(1)稱量、配料
按重量計(jì)領(lǐng)取白蘑菇500份,核對品名、規(guī)格、批號、數(shù)量，并有專人核對；
(2)提取多糖
取步驟(1)所述的白蘑菇，加入8倍量的水，所述的8倍量指白蘑菇1g需加入水8g，在超聲儀(頻率為60kHz)提取30min，提取2次，收集合并提取液，藥渣備用，提取液濃縮至適量，即得多糖濃縮液，備用。
(3)提取氨基酸
取步驟(2)的藥渣，加入20倍量的水，所述的20倍量指白蘑菇1g需加入水20g，加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為1，加熱提取40min，過濾，濾液加熱揮去稀鹽酸，濃縮至適量，即得氨基酸濃縮液。
(4)混合、干燥
將步驟(2)的多糖濃縮液、步驟(3)的氨基酸濃縮液、硫酸鈣、可溶性淀粉一起投入混合機(jī)中混合均勻后，置于微波真空干燥機(jī)中干燥，溫度50～60℃，時(shí)間60～90分鐘；真空度為-0.05～-0.06Mpa，將干燥好的干膏裝入潔凈的容器中，備用；
(5)粉碎、過篩、總混
將干燥后的干膏進(jìn)行粉碎，過100目篩，轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，混合20分鐘，即得多糖蛋白粉。
(6)制粒、壓片
將多糖蛋白粉投入制粒機(jī)中，混合5～10分鐘，加入適量的體積分?jǐn)?shù)為85％乙醇，混合5～10分鐘后制粒，制粒過程切割速度和攪拌速度保持低速。制粒結(jié)束后將顆粒放出，置顆粒機(jī)中進(jìn)行整粒過篩(14目篩)。將濕顆粒放入干燥設(shè)備中進(jìn)行干燥，控制干燥條件，溫度為60～70℃，時(shí)間為3～4小時(shí)，溫度升高宜平穩(wěn)。將干燥后的顆粒加入搖擺式顆粒機(jī)中整粒(過14目篩)。將整好的顆粒轉(zhuǎn)入三維運(yùn)動混合機(jī)中，加入硬脂酸鎂混合20分鐘，將混合好的顆粒按0.3g/片平均重量進(jìn)行壓片，即得多糖蛋白素片。
(7)包薄膜衣
將素片投入包衣機(jī)中，噴槍噴嘴到片面的最小距離為250～300mm，角度接近45℃，并使噴槍噴射截面的長軸與片芯的流向垂直，進(jìn)風(fēng)溫度為80～140℃，包衣機(jī)轉(zhuǎn)速定為3～8轉(zhuǎn)/分，空壓0.4kg/m2，片芯預(yù)熱20min，包衣(包衣中注意觀察并調(diào)節(jié)各參數(shù))，至包衣片表面光潔，衣層均勻，無麻點(diǎn)。在包衣機(jī)中通風(fēng)冷卻25～35分鐘，即得多糖蛋白片薄膜衣片。(8)包裝
檢驗(yàn)合格后分裝成成品。
(一)本發(fā)明通過上述三個(gè)實(shí)施例分別考察三批次的本發(fā)明制得的多糖蛋白片產(chǎn)品，詳細(xì)敘述如下：
第一批取5盒多糖蛋白片產(chǎn)品進(jìn)行性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定的檢查具體見表35。
第二批取5盒多糖蛋白片產(chǎn)品進(jìn)行性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定的檢查具體見表35。
第三批取5盒多糖蛋白片產(chǎn)品進(jìn)行性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定的檢查具體見表35。
取傳統(tǒng)工藝所制得的多糖蛋白片產(chǎn)品5盒進(jìn)行性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定、微生物限度的檢查具體見表35。
表35：四批多糖蛋白片產(chǎn)品的相關(guān)數(shù)據(jù)比較：
據(jù)以上數(shù)據(jù)分析：通過本發(fā)明制得的多糖蛋白片產(chǎn)品，測出數(shù)據(jù)與傳統(tǒng)工藝制得的多糖蛋白片產(chǎn)品比較，多糖和氨基酸的總量提取率較高。
(二)本發(fā)明制得的產(chǎn)品穩(wěn)定性考察：
加速實(shí)驗(yàn)連續(xù)考察三個(gè)批次；實(shí)驗(yàn)條件：將產(chǎn)品按市場銷售包裝規(guī)格要求包裝后，放入加速實(shí)驗(yàn)設(shè)備中，設(shè)定溫度40℃±2℃；濕度75％±5％，放置6個(gè)月，按1個(gè)月，2個(gè)月，3個(gè)月，6個(gè)月末分別取樣一次，重點(diǎn)考察多糖蛋白片產(chǎn)品的性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定的變化，數(shù)據(jù)見表36。
表36：考察三個(gè)批次的多糖蛋白片產(chǎn)品加速試驗(yàn)的相關(guān)數(shù)據(jù)
長期實(shí)驗(yàn)連續(xù)考察3個(gè)批次：實(shí)驗(yàn)條件：將產(chǎn)品按市場銷售包裝規(guī)格包裝后，放入實(shí)驗(yàn)設(shè)備中，設(shè)定溫度25℃±2℃；濕度60％±10％，放置24個(gè)月，按0個(gè)月，3個(gè)月，6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月，18個(gè)月，24個(gè)月末分別取樣一次，重點(diǎn)考察多糖蛋白片產(chǎn)品的性狀、鑒別、崩解時(shí)限、多糖和氨基酸含量測定的變化，數(shù)據(jù)見表37。
表37：考察三個(gè)批次的多糖蛋白片產(chǎn)品長期試驗(yàn)的相關(guān)數(shù)據(jù)
通過穩(wěn)定性考察，對該數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較，結(jié)果表明本發(fā)明制得的多糖蛋白片產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，方法可靠，在原有的處方基礎(chǔ)上，通過工藝的改進(jìn)獲得的本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量有充分的保障。