技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及柳蘭有效部位及其制備方法和應(yīng)用，屬于植物提取物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

柳蘭（Epilobium angustifolium L.）為柳葉菜科（Onagraceae）柳蘭屬多年生粗壯草本植物，是藏醫(yī)傳統(tǒng)藥用植物。其主要生于海拔2800~4250米的山坡林緣、林下及河谷濕草地。分布在我國(guó)西南、西北、華北至東北。北溫帶廣布，北美洲、歐洲至日本、小亞細(xì)亞至喜馬拉雅等地也有。柳蘭全草味苦，無(wú)毒，有消腫利水，下乳，潤(rùn)腸之功能。主治乳汁不足，氣虛浮腫。格爾?格桑扎西在《實(shí)用藏藥名庫(kù)》記載其具有清熱利膽、止瀉、殺蟲(chóng)功能。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一種嚴(yán)重影響公共衛(wèi)生與人體健康的全球性流行性疾病,盡管乙肝防治已有很大提高,但仍缺乏高效的藥物與手段。乙肝是影響我國(guó)國(guó)計(jì)民生的重大傳染性疾病，迄今為止尚無(wú)特異有效的治療手段。

2009年墨西哥與美國(guó)先后出現(xiàn)甲型H1N1型流感，并在很短時(shí)間內(nèi)席卷全球，世界衛(wèi)生 組織（WHO）將此次全球流感大流行的預(yù)警級(jí)別提高到5級(jí).目前研究表明甲型H1N1流感病毒是人流感病毒、北美州禽流感病毒，以及北美洲、歐洲和亞洲豬 流感病毒的混合體，其易感人群的年齡段主要在20～45歲，且人群間傳染性強(qiáng)，臨床表面除一般流感癥狀外，表現(xiàn)出特異的呼吸道和消化道疾病癥狀，病死率高 于一般流感。甲型H1N1型流感是影響我國(guó)國(guó)計(jì)民生的重大傳染性疾病，迄今為止尚無(wú)特異有效的治療手段。

申請(qǐng)人在研究中發(fā)現(xiàn)：目前制備抗乙型肝炎病毒（簡(jiǎn)稱HBV病毒）藥物和制備抗甲型流感病毒（簡(jiǎn)稱甲型H1N1病毒）藥物的原料較為匱乏、且藥效不理想。柳蘭植物主要含有多酚類、黃酮、三萜酸、鞣質(zhì)化合物等多種化學(xué)成分，本領(lǐng)域中柳蘭主要功效為清熱利膽、消腫利水、下乳、潤(rùn)腸，但目前還沒(méi)有抗乙型肝炎、抗甲型流感方面的相關(guān)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供柳蘭有效部位及其制備方法和應(yīng)用，該柳蘭有效部位能具有明顯的HBV病毒、甲型H1N1病毒表面抗原親和作用，能用于制備抗HBV病毒藥物、抗甲型H1N1病毒藥物。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：該柳蘭有效部位，其特征在于：選自柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位中的一種或兩種按任意質(zhì)量比的混合物。

該柳蘭有效部位，其特征在于：選自柳蘭正丁醇部位。

該柳蘭有效部位的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：將柳蘭全草粉碎，加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液提取，將所得提取液濃縮、干燥，得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取所得乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液，分別揮去溶劑，得到柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位。

所述的提取為超聲波輔助回流提取；超聲波輔助回流提取的具體操作為：將粉碎后的柳蘭全草加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液超聲波提取0.5~3小時(shí)，過(guò)濾，濾渣加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液回流提取2~3次，合并提取液，即得。

該柳蘭有效部位的應(yīng)用，其特征在于：在制備抗HBV病毒藥物方面的應(yīng)用。

該柳蘭有效部位的應(yīng)用，其特征在于：在制備抗甲型H1N1病毒藥物方面的應(yīng)用。

所述藥物是通過(guò)柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位中的一種或兩種按任意質(zhì)量比的混合物與藥用輔料混合，制成的口服制劑或注制射劑或注制射劑。

所述的注射制劑為脂質(zhì)體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑。

所述的口服制劑為散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑或溶液劑。

申請(qǐng)人對(duì)于本發(fā)明的說(shuō)明如下：現(xiàn)有技術(shù)中，柳蘭常規(guī)功效為具有利水滲濕、活血調(diào)經(jīng)，未見(jiàn)其有抗病毒功效的相關(guān)報(bào)道。申請(qǐng)人通過(guò)大量研究發(fā)現(xiàn)：柳蘭有效部位還具有抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒的作用，但是其功效不明顯，也不能確定其具體的有效部位。因此通過(guò)怎樣的溶劑、采用怎樣制備方法，才能獲得抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒活性效果最好的有效部位，是必須要解決的問(wèn)題。申請(qǐng)人通過(guò)研究，最終發(fā)現(xiàn)：采用本發(fā)明制備方法，所得的柳蘭乙酸乙酯部位和柳蘭正丁醇部位有較強(qiáng)的抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒效果。

制備方法中，加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液提取可以只采用回流提取。優(yōu)選采用超聲波輔助回流提取，具有較高的收率和提取效率。超聲波輔助回流提取的具體操作為：超聲波提取后，過(guò)濾獲得超聲波提取液和濾渣，向?yàn)V渣中加體積百分比濃度65%~95%乙醇水溶液回流提取，合并超聲波提取液和回流提取液。進(jìn)一步的說(shuō)明，回流提取的具體操作為：向回流加熱裝置中直接加入粉碎后的藥材或加入超聲波提取后的濾渣，加入乙醇水溶液，加熱提取，放冷過(guò)濾得一次提取液和濾渣；再向?yàn)V渣中加入乙醇水溶液，加熱、進(jìn)行第二次回流提取，放冷過(guò)濾得二次提取液和濾渣（以上為回流提取2次）；合并多次提取液，即得回流提取液。優(yōu)選的，每次回流提取0.5~2小時(shí)；每次回流提取時(shí)所加乙醇溶液沒(méi)過(guò)藥材表面1cm~2cm。回流提取的溫度為乙醇回流提取的常規(guī)溫度，需高于乙醇的沸點(diǎn)，優(yōu)選為80℃~100℃。并且，申請(qǐng)人分別針對(duì)HBV病毒、甲型H1N1病毒的特點(diǎn)，通過(guò)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)柳蘭的體外抗病毒活性和靶點(diǎn)，并從中尋找具有抗病毒活性的有效部位。建立成熟Hep2.2.15-乙肝病毒細(xì)胞培養(yǎng)體系，可用于快速的體外抗病毒活性篩選。此外，采用表面等離子共振SPR（BIAcore）技術(shù)探討提取物與病毒蛋白的體外結(jié)合親和力，并結(jié)合相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)初步確定作用靶點(diǎn)。該技術(shù)簡(jiǎn)便高效、應(yīng)用成熟，課題組已通過(guò)表達(dá)純化或其他途徑獲得十多種病毒相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白。以上技術(shù)的應(yīng)用將為作用機(jī)制明確的抗病毒藥物開(kāi)發(fā)提供可能。申請(qǐng)人分別研究了柳蘭乙酸乙酯部位和柳蘭正丁醇部位對(duì)HBV病毒（即乙肝病毒）體表抗原（即HBsAg）的親和能力，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其中柳蘭正丁醇部位抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒的效果最優(yōu)。另外，本發(fā)明回流提取所用的乙醇溶液是由乙醇和溶劑水組成。

制備方法中，浸膏為粗提取物，采用不同的溶劑萃取浸膏分散液，指的是依次將石油醚加入浸膏分散液萃取分離獲得石油醚萃取液、將乙酸乙酯加入浸膏分散液萃取分離獲得乙酸乙酯萃取液、將正丁醇加入浸膏分散液萃取分離獲得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發(fā)去除溶劑后，所得即選自柳蘭乙酸乙酯部位和柳蘭正丁醇部位；將萃取后剩余的浸膏分散液（溶劑為水），揮發(fā)去除溶劑即得柳蘭水相萃取部位。水相萃取部位也可以稱作水相萃取物，水相萃取部位易溶于水。其中，柳蘭乙酸乙酯部位含有生物堿、黃酮類化合物；柳蘭正丁醇部位含有苷類和酚類化合物；柳蘭水相萃取部位含有多糖和有機(jī)酸類化合物（以上為各部位中的主要成分）。揮去溶劑即揮發(fā)去除溶劑。揮去溶劑可以采用常壓加熱使溶劑（石油醚、乙酸乙酯和正丁醇）揮發(fā)。優(yōu)選的，揮去溶劑采用減壓濃縮，該方法效率高，并且能避免熱敏性成分因高溫喪失藥性。

優(yōu)選的，抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒藥物的劑型為口服制劑或注射制劑，是由于申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)口服制劑和注射制劑為最佳給藥途徑。此處，所述口服制劑為經(jīng)腸胃道給藥制劑，優(yōu)選的，口服制劑為緩釋型或控釋型口服制劑。另外，本發(fā)明中的抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒藥物也可以為非腸胃給藥的其他口服劑，如呼吸道給藥制劑（噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑）；皮膚給藥制劑（外用溶液劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑）；膜給藥制劑（滴眼劑、滴鼻劑、眼用軟膏、含漱劑、舌下片劑）；腔道給藥制劑（栓劑）。注射制劑可以為常規(guī)注射制劑。根據(jù)藥物傳遞系統(tǒng)進(jìn)行分類，優(yōu)選的，本發(fā)明的注射制劑為脂質(zhì)體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑；其他的，本發(fā)明的注射劑還可以為微囊注射劑、聚合物膠束注射劑、微乳或亞微乳注射劑、亞微粒注射劑或凝膠注射劑，以上藥物傳遞系統(tǒng)的注射劑能延長(zhǎng)藥物載體在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間、延長(zhǎng)載藥微粒在吸收部位的停留時(shí)間、控制藥物在釋放初期的突釋效應(yīng)。藥用輔料包括藥物載體，以及溶劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、助懸劑、澄清劑、反絮凝劑、矯味劑、著色劑、防腐劑、化學(xué)滅菌劑、吸附劑、助濾劑、抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、抗粘著劑、緩釋劑、控釋劑、包衣材料、成膜材料、膠囊材料中的一種或多種。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的柳蘭有效部位及其制備方法和應(yīng)用所具有的有益效果是：

1、該柳蘭有效部位能具有明顯的HBV病毒、甲型H1N1病毒表面抗原親和作用，能用于制備抗HBV病毒藥物、抗甲型H1N1病毒藥物。本領(lǐng)域中，柳蘭具有利水滲濕，理氣消脹，活血調(diào)經(jīng)之功。申請(qǐng)人在研究中發(fā)現(xiàn)抗乙肝病毒藥物和抗甲型流感病毒藥物存在中藥原料匱乏的問(wèn)題，并通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)柳蘭還具有抗腫瘤的功效，通過(guò)設(shè)計(jì)制備方法、進(jìn)行藥效篩選，通過(guò)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位的具有抑制HBV病毒和H1N1病毒的活性，適宜開(kāi)發(fā)成治療乙型肝炎和甲型流感的新藥。進(jìn)一步的，申請(qǐng)人通過(guò)鴨感染乙型肝炎模型實(shí)驗(yàn)（2年齡北京鴨感染DHBV）發(fā)現(xiàn)，柳蘭乙酸乙酯部位高劑量組（800mg/kg/d）、柳蘭正丁醇部位中劑量組（500mg/kg/d）和高劑量組（800mg/kg/d），具有較好的抗乙肝病毒效果；申請(qǐng)人通過(guò)小鼠抗甲型H1N1流感模型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，柳蘭乙酸乙酯部位中劑量組（500mg/kg/d）和高劑量組（800mg/kg/d）、柳蘭正丁醇部位中劑量組（500mg/kg/d）和高劑量組（800mg/kg/d），具有較好的抗甲型H1N1流感病毒效果。申請(qǐng)人在以上發(fā)現(xiàn)問(wèn)題解決問(wèn)題的過(guò)程中，付出了大量的創(chuàng)造性勞動(dòng)。

2、該柳蘭有效部位的制備方法提取方便，提取效率高。制備方法中，申請(qǐng)人設(shè)計(jì)加入體積百分比濃度65%~95%乙醇水溶液進(jìn)行超聲波輔助回流提取，提高了提取效率。

3、該柳蘭有效部位在制備抗HBV病毒藥物、抗甲型H1N1病毒藥物方面的應(yīng)用。拓展了抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒的原料渠道，擴(kuò)大了柳蘭的用途，使柳蘭發(fā)展成為抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒藥物的新原料，顯著提高了柳蘭的附加值。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1~3是本發(fā)明的柳蘭有效部位及其制備方法和應(yīng)用的具體實(shí)施方式，其中實(shí)施例1為最佳實(shí)施例。

實(shí)施例1

制備方法，包括下述步驟：將柳蘭全草粉碎，采用體積百分比濃度75%~85%乙醇溶液超聲波提取0.5~1小時(shí)，然后過(guò)濾得超聲波提取液和濾渣，向?yàn)V渣中加入體積百分比濃度75%~85%乙醇溶液回流提取3次，每次0.5~1小時(shí)，過(guò)濾得回流提取液，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮去溶劑，得到柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位；將萃取后剩余的浸膏分散液濃縮、干燥，得柳蘭水相萃取部位。

實(shí)施例2

制備方法，包括下述步驟：將柳蘭全草粉碎，采用體積百分比濃度85%~95%乙醇溶液超聲波提取2~3小時(shí)，然后過(guò)濾得超聲波提取液和濾渣，向?yàn)V渣中加入體積百分比濃度85%~95%乙醇溶液回流提取3次，每次1~1.5小時(shí)，過(guò)濾得回流提取液，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮去溶劑，得到柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位；將萃取后剩余的浸膏分散液濃縮、干燥，得柳蘭水相萃取部位。

實(shí)施例3

制備方法，包括下述步驟：將柳蘭全草粉碎，采用體積百分比濃度65%~75%乙醇溶液超聲波提取1.5~2小時(shí)，然后過(guò)濾得超聲波提取液和濾渣，向?yàn)V渣中加入體積百分比濃度65%~75%乙醇溶液回流提取2次，每次1.5~2小時(shí)，過(guò)濾得回流提取液，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮去溶劑，得到柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位。

性能測(cè)試

以實(shí)施例1得到的柳蘭乙酸乙酯部位（標(biāo)號(hào)為X1）、柳蘭正丁醇部位（標(biāo)號(hào)為X2），作為受試藥物。

一、檢測(cè)樣品與乙肝病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的親和力實(shí)驗(yàn)。

采用 BIAcore 3000 生物分子相互作用儀，采用乙肝病毒表面抗原HBsAg直接與CM5 芯片偶聯(lián)，采用牛血清蛋白（BSA）作為陰性對(duì)照。將X1、X2部位提取物用經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾的PBS稀釋到200μg/mL ，流速20μL/min，注入量為60μL進(jìn)樣，記錄樣品流經(jīng)靶蛋白結(jié)合期時(shí)的RU值與流經(jīng)BSA 蛋白結(jié)合期的RU值，二者之差為該樣品與靶蛋白的結(jié)合響應(yīng)值。

表1 柳蘭有效部位與HBV病毒表面抗原的體外親和RU值

。

通過(guò)表1可以看出：柳蘭乙酸乙酯部位和柳蘭正丁醇部位均對(duì)HBV病毒表面抗原具有較高的親和力，抗HBV病毒的效果好。

二、檢測(cè)樣品與甲型流感病毒（H1N1）凝集素（HA）的親和力實(shí)驗(yàn)。

另取新的實(shí)施例1所得X1、X2進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。采用 BIAcore 3000生物分子相互作用儀，采用甲流病毒血凝素（HA）直接與CM5 芯片偶聯(lián)，采用牛血清蛋白（BSA）作為陰性對(duì)照。將X1、X2用經(jīng) 0.45μm濾膜過(guò)濾的 PBS 稀釋到200μg/mL ，流速20μL/min，注入量為60μL進(jìn)樣，記錄樣品流經(jīng)靶蛋白結(jié)合期時(shí)的 RU值與流經(jīng)BSA蛋白結(jié)合期的RU 值，二者之差為該樣品與靶蛋白的結(jié)合響應(yīng)值。

表2 柳蘭有效部位與與甲型H1N1病毒凝集素的體外親和力

。

通過(guò)表1可以看出：柳蘭乙酸乙酯部位和柳蘭正丁醇部位均對(duì)甲型H1N1病毒表面抗原具有較高的親和力，抗甲型H1N1病毒的效果好。

三、小鼠抗甲型H1N1流感實(shí)驗(yàn)。

1、實(shí)施例1小鼠抗甲型H1N1流感實(shí)驗(yàn)方法如下：

SPF級(jí)的雌性BALB/C小鼠，體質(zhì)量14~16g，隨機(jī)選鼠分組，每組10只；分組名稱為：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和給藥組；給藥組包括：柳蘭乙酸乙酯部位低、中、高劑量組，柳蘭正丁醇部位低、中、高劑量組； 除正常對(duì)照組外，其它各組均在乙醚輕度麻醉下以10個(gè)LD₅₀流感病毒液（甲型H1N1流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM/1/47株）滴鼻感染，每鼠40μL；從病毒感染前1天開(kāi)始，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組分別灌胃給藥10mL/kg注射用生理鹽水；給藥組采用灌胃給藥實(shí)施例1制得的柳蘭乙酸乙酯部位、柳蘭正丁醇部位，每天給藥1次，每次給藥劑量詳見(jiàn)下表，連續(xù)給藥7天后斷食8h，將小鼠稱體重、解剖、稱取肺臟重量，計(jì)算出肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。測(cè)算方法：肺指數(shù)=（肺臟重量/體重）×100%；肺指數(shù)抑制率=（模型對(duì)照組平均肺指數(shù)－給藥組平均肺指數(shù)）÷模型對(duì)照組平均肺指數(shù)×100%； 將肺指數(shù)抑制率計(jì)算結(jié)果錄入表3。

表3 實(shí)施例1各部位對(duì)小鼠肺指數(shù)抑制率的影響

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2、實(shí)施例2各部位的小鼠抗甲型H1N1流感實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1：，數(shù)據(jù)錄入表4。

表4實(shí)施例2各部位對(duì)小鼠肺指數(shù)抑制率的影響

。

3、實(shí)施例3各部位的小鼠抗甲型H1N1流感實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，數(shù)據(jù)錄入表5。

表5實(shí)施例3各部位對(duì)小鼠肺指數(shù)抑制率的影響

。

由表3~5可以看出：首先，實(shí)施例1~3均有較好的抗甲型H1N1流感效果，實(shí)施例1~3中相同部位相同劑量時(shí)，各組間的抗甲型H1N1流感效果無(wú)明顯差別。其次，與模型對(duì)照組相比，柳蘭乙酸乙酯部位中、高劑量組，柳蘭正丁醇中、高劑量組，抗甲型H1N1病毒的效果好。

實(shí)施例4

將柳蘭有效部位制備為片劑，采用如下步驟：將柳蘭乙酸乙酯部位300mg和淀粉100mg混勻，加體積百分比濃度10%的淀粉糊40mg制成軟材，過(guò)篩得濕顆粒，干燥得干顆粒，整粒，加硬脂酸鎂4 mg混勻、壓片，即得。

實(shí)施例5

沖劑的制備方法：按重量份配比將柳蘭正丁醇部位5份、蔗糖1份、糊精3份混勻，加入適量質(zhì)量百分比95%乙醇溶液2~5份，邊加邊攪拌，制得軟材，將軟材干燥、過(guò)16目篩，分裝即得。

實(shí)施例6

微丸膠囊由以下重量份原料組成：柳蘭正丁醇部位30份、卵磷脂5份、牛黃膽酸鈉5份、微晶纖維素30份；

微丸膠囊的制備方法：按配比將柳蘭正丁醇部位、卵磷脂、牛黃膽酸鈉和微晶纖維素混均，倒入乙醇水溶液攪勻獲得軟材，將軟材倒入擠出機(jī)中擠出，經(jīng)滾圓獲得顆粒，擠出轉(zhuǎn)速250r/min，滾圓轉(zhuǎn)速800r/min，滾圓時(shí)間20min，干燥、過(guò)24~30目篩獲得微丸，將微丸灌裝入膠囊殼內(nèi)，即得。

實(shí)施例7

脂質(zhì)體注射劑的制備方法：

1）在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將50g膽固醇琥珀酸酯、250g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、40g大豆卵磷脂、50g泊洛沙姆-188、和10g柳蘭正丁醇部位溶解于1500mL 體積比為1:1的乙醇和正丁醇的有機(jī)溶劑中，攪拌使其溶解獲得混懸液；將混懸液通過(guò)減壓濃縮揮去有機(jī)溶劑，獲得磷脂膜；

2）在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向磷脂膜中加入8000mL pH為6.8的磷酸鹽緩沖溶液，攪拌，使磷脂膜洗脫并充分溶脹水合，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，得柳蘭正丁醇部位的脂質(zhì)體；

3）在無(wú)菌條件下，向柳蘭正丁醇部位的脂質(zhì)體中，加入100g海藻糖，攪拌均勻，超聲波處理0.5~1小時(shí)，加注射用水定容，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，即得柳蘭正丁醇部位的脂質(zhì)體注射劑。

實(shí)施例8

納米粒注射劑的制備方法：取25g柳蘭乙酸乙酯部位和100g泊洛沙姆407用3000mL 無(wú)水乙醇溶解，加入30mL 1mol/L氯化鋅的乙醇溶液，攪拌混合，超聲波處理0.5~1小時(shí)使其溶解，獲得混合液；將混合液減壓濃縮揮去溶劑，放入-20℃冰箱冷凍2小時(shí)；取出加注射用水定容，超聲波處理0.5~1小時(shí)，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，即得柳蘭乙酸乙酯部位的納米粒注射劑。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。