本發(fā)明涉及中醫(yī)藥制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
苦參是豆科槐屬多年生落葉亞灌木植物苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，性味苦、寒，歸心、肝、脾、腎、大腸、小腸諸經(jīng)。具有清熱燥濕、殺蟲(chóng)利尿的功效，可作苦味健胃劑、利尿劑、消炎藥、止瀉藥和驅(qū)蟲(chóng)藥。
苦參的主要功能性成分為黃酮類和生物堿類成分，現(xiàn)有同時(shí)提取苦參黃酮和苦參總堿的工藝較少，如專利“一種同時(shí)制備苫參總黃酮提取物與總生物堿提取物的方法”，該專利公開(kāi)的方法是通過(guò)提取、過(guò)濾、濃縮、干燥等步驟結(jié)合大孔樹(shù)脂等分離手段得到提取物，但該方法沒(méi)有涉及苦參生物堿和黃酮類物質(zhì)的進(jìn)一步分離，應(yīng)該只得到苦參生物堿和苦參黃酮的粗提物，純度不高 ；再如專利“一種生產(chǎn)苦參總黃酮及黃酮鹽類的方法”，該專利采用的方法是先用酸水提取生物堿直至完全，再用醇提取苦參黃酮類物質(zhì)，醇提液經(jīng)處理得到純度較高的黃酮和黃酮鹽類產(chǎn)品，該方法采用兩次提取的方法能耗大、溶劑用量大，且未提及生物堿的純化步驟，僅得到黃酮和黃酮鹽類物質(zhì)。專利號(hào)為“201110045288.0”，發(fā)明名稱為“一種苦參總黃酮與苦參總堿的聯(lián)合制備工藝”公開(kāi)了一種進(jìn)一步優(yōu)化的提取方案，但是該方案仍然存在提取效率不足，步驟繁瑣的缺陷。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問(wèn)題提出的一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物及其制備方法，完全分離總黃酮和總堿的同時(shí)，能夠兼顧極高的提取效率和操作的簡(jiǎn)便易行。
為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)措施為：
一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，苦參原料粉碎后過(guò)篩，使用醇溶液提取2-3次，然后合并提取液；
步驟二，將步驟一獲得的合并提取液離心過(guò)濾獲得總黃酮提取濾液，同時(shí)留存濾渣備用；
步驟三，將步驟二獲得的濾液使用大孔吸附樹(shù)脂吸附洗脫，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物；
步驟四，將步驟二獲得的留存濾渣提取2-3次，然后合并提取液；
步驟五，將步驟四獲得的合并提取液減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH為3-4，靜置，濾過(guò)，得上清液；
步驟六，將獲得的上清液使用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附洗脫，然后用水及乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用濃氨水堿化樹(shù)脂，再用乙醇洗脫，收集洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物。
為了優(yōu)化上述技術(shù)方案，本發(fā)明所采取的進(jìn)一步的技術(shù)措施為：
優(yōu)選地，步驟一中苦參原料粉碎后過(guò)10目篩。
優(yōu)選地，步驟一中提取使用的醇溶液為80%乙醇溶液，每次提取時(shí)間為1-1.5小時(shí)。
優(yōu)選地，步驟三中使用大孔吸附樹(shù)脂吸附洗脫在上樣完成后靜置飽和30min，先用蒸餾水6倍柱體積洗脫，再用70%乙醇液4倍柱體積洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物。
優(yōu)選地，步驟四中將步驟二獲得的留存濾渣，按照醇提取前質(zhì)量加10倍量水，分別提取3次，每次1h。
優(yōu)選地，步驟五中使用1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH。
優(yōu)選地，步驟六中上清液經(jīng)處理合格的732陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用10倍樹(shù)脂體積水及6倍樹(shù)脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用1倍樹(shù)脂體積濃氨水堿化樹(shù)脂，用6倍樹(shù)脂體積30%乙醇洗脫，收集此次30%醇洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物10g。
優(yōu)選地，還包括將步驟三獲得的苦參總黃酮提取物和步驟六獲得的苦參總堿提取物合并為苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的步驟。
另一方面，本發(fā)明還提供根據(jù)上述制備方法所制備得到的苦參總堿和苦參總黃酮的組合物以及其在制備治療宮頸癌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明不但能夠?qū)崿F(xiàn)高效率的苦參總堿和苦參總黃酮的完全分離，同時(shí)最大限度地簡(jiǎn)略了操作步驟和所需耗材。
附圖說(shuō)明
圖1為本發(fā)明制備方法的流程示意圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種苦參總堿和苦參總黃酮的組合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，苦參原料粉碎后過(guò)篩，使用醇溶液提取2-3次，然后合并提取液；
步驟二，將步驟一獲得的合并提取液離心過(guò)濾獲得總黃酮提取濾液，同時(shí)留存濾渣備用；
步驟三，將步驟二獲得的濾液使用大孔吸附樹(shù)脂吸附洗脫，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物；
步驟四，將步驟二獲得的留存濾渣提取2-3次，然后合并提取液；
步驟五，將步驟四獲得的合并提取液減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH為3-4，靜置，濾過(guò)，得上清液；
步驟六，將獲得的上清液使用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附洗脫，然后用水及乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用濃氨水堿化樹(shù)脂，再用乙醇洗脫，收集洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物。
下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā)明，但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。
實(shí)施例一制備實(shí)施例
苦參粉碎成10目粉，稱取500g，分別用80%醇提取3次，提取時(shí)間為2h，1h，1h，分別合并3次提取液，過(guò)濾，棄去藥渣，減壓濃縮至0.5g生藥材/ml。上處理好的AB-8樹(shù)脂柱，上樣完成后靜置飽和30min，先用蒸餾水6倍柱體積洗脫，再用70%乙醇液4倍柱體積洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得苦參總黃酮提取物24.69g。
苦參提取后的藥渣，按照醇提取前質(zhì)量加10倍量水，分別提取3次，每次1h。分別合并3次提取液，過(guò)濾，棄去藥渣，減壓濃縮至相對(duì)密度1.06-1.07（50℃），加1mol/L鹽酸溶液調(diào)PH至3-4，靜置，濾過(guò)，上清液經(jīng)處理合格的732陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用10倍樹(shù)脂體積水及6倍樹(shù)脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用1倍樹(shù)脂體積濃氨水堿化樹(shù)脂，用6倍樹(shù)脂體積30%乙醇洗脫，收集此次30%醇洗脫物，濃縮干燥即得苦參總堿提取物10g。
實(shí)施例二應(yīng)用實(shí)施例
本實(shí)施例驗(yàn)以宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞系為對(duì)象，檢測(cè)本發(fā)明制備的組合物對(duì)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，驗(yàn)證本發(fā)明制備的苦參總堿和苦參總黃酮的組合物對(duì)宮頸癌的影響。
實(shí)驗(yàn)方法：
宮頸癌細(xì)胞HeLa，通過(guò)體外培養(yǎng)、待測(cè)物處理，再利用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法，觀察受試樣品對(duì)含病毒基因組細(xì)胞生長(zhǎng)活力的影響，指示樣品對(duì)感染病毒的細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。
利用本發(fā)明的制備方法制備苦參總堿和苦參總黃酮，苦參總黃酮提取物和苦參總堿提取物按照相同生藥量進(jìn)行復(fù)配，以不同的總黃酮和總堿提取物的濃度進(jìn)行體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，確定復(fù)配后對(duì)HeLa細(xì)胞的體外增殖作用影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
從兩次試驗(yàn)的細(xì)胞存活率可見(jiàn)，受試物作用72小時(shí)后，本發(fā)明制備的苦參總堿提取物和苦參總黃酮提取物在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)Hala細(xì)胞的生長(zhǎng)表現(xiàn)出劑量依賴性抑制?？鄥⒖倝A和苦參總黃酮復(fù)方組合物在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)Hala細(xì)胞的存活率均顯示出明顯的劑量依賴性抑制，通過(guò)各復(fù)方中單方濃度對(duì)細(xì)胞存活率的量效反應(yīng)曲線計(jì)算出各自的IC50值后，與單方自身的IC50值比較，苦參總堿和苦參總黃酮提取物在復(fù)方2中效價(jià)強(qiáng)度增加2倍以上。說(shuō)明苦參總堿和總黃酮復(fù)配使用較單獨(dú)使用在體外抑制HeLa細(xì)胞具有增效作用。
以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。