本發(fā)明涉及以多種原小檗堿類生物堿季銨鹽為底物經多種衍生化反應獲得的新的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽、其制備方法及其抗?jié)冃越Y腸炎的藥物用途。并同時涉及以多種原小檗堿類生物堿季銨鹽為底物經多種衍生化反應獲得的已知的原小檗堿類生物堿衍生物的抗?jié)冃越Y腸炎的藥物用途。具體原小檗堿生物堿衍生物類或其生理上可接受的鹽包括二氫黃連堿、二氫異黃連堿、二氫小檗堿、二氫巴馬汀、13-甲基二氫黃連堿、(±)-8-氰基二氫黃連堿、(±)-8-氰基二氫異黃連堿、8-氧化二氫黃連堿、8-氧化二氫異黃連堿、(±)-8-甲基酮基取代二氫黃連堿類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代黃連堿季銨鹽類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代小檗堿季銨鹽類。屬創(chuàng)新藥物研究技術領域。

背景技術：

炎性腸道疾病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一種病因和發(fā)病機制尚未完全明確的慢性炎性疾病。目前臨床上較常見的炎性腸道疾病包括克隆氏病(Crohn’s disease，CD)和潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC，又稱慢性非特異性潰瘍性結腸炎),都被報道具有發(fā)病率高、病程長、病情反復發(fā)作等特點。隨著近年來人們對該病的認識及醫(yī)學診斷手段的提高，據統(tǒng)計臨床上大約有5％-7％的UC病人會出現(xiàn)惡性變，最終發(fā)展為潰瘍性結腸炎癌性變，可出現(xiàn)腸道腺體重度發(fā)育不良和結、直腸的腫瘤；病理上以未分化型為主，惡性程度高，預后差。目前對潰瘍性結腸炎尚未有根治方法，即便是在達到顯效的治療方面，也缺少藥物和其它療法，是一種難治性腸道疾病。該病已成為嚴重威脅易患人體生存的惡性疾病。(目前臨床上用于抗UC治療僅有美沙拉嗪(如：SASP等)、免疫抑制劑和激素等少數(shù)幾類藥物。它們雖具有一定療效，但仍有經常復發(fā)的可能，并各自存在較嚴重的不良反應。)

潰瘍性結腸炎的病變主要限于結腸的粘膜層，且以潰瘍?yōu)橹?，以反復發(fā)作的和嚴重的胃腸道炎癥為特征，多累及直腸和遠端結腸，但可向近端擴展，以至遍及整個結腸。中國炎癥性腸病協(xié)作組報道我國UC粗略發(fā)病率為11.62/10萬，住院UC患者以輕度(35.4％)和中度(42.9％)為主。在西方國家患病率為每年79～268/10萬，在亞洲20世紀后期日本和新加坡分別為7.8～18.1/10萬和8.6/10萬。近年來，潰瘍性結腸炎在我國具有逐漸上升的趨勢(或與人們對該病的認識及臨床診斷手段的提高有關)。不但給人們造成精神和肉體上的痛苦,而且還會給個人帶來沉重的經濟負擔。

潰瘍性結腸炎病變早期可有粘膜彌漫性炎癥，可見水腫、充血與灶性出血。粘膜面呈彌漫性細顆粒狀，組織變脆，觸之易出血。粘膜及粘膜下層有淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性及中性粒細胞浸潤。以后隨腸腺隱窩底部聚集大量中性粒細胞，即形成小的隱窩膿腫。當隱窩膿腫融合、潰破，粘膜隨即出現(xiàn)廣泛的淺小不規(guī)則潰瘍。這些潰瘍可沿結腸縱軸發(fā)展，逐漸融合成不規(guī)則的大片潰瘍。結腸炎在反復發(fā)作的慢性過程中，大量新生肉芽組織增生，常出現(xiàn)炎性息肉。粘膜因不斷破壞和修復，其正常結構喪失，纖維組織增加，出現(xiàn)有腺體的變性、排列紊亂、數(shù)目減少等萎縮性改變。由于潰瘍愈合而疤痕形成，粘膜肌層與肌層肥厚，使結腸變形縮短、結腸袋消失，甚至腸腔變窄，造成結腸器質性和功能性的變化，嚴重影響人體的健康。

新近的研究發(fā)現(xiàn)，包括克隆氏病和潰瘍性結腸炎在內的慢性腸道炎性疾病的發(fā)生和發(fā)展與腸道上皮細胞微環(huán)境自穩(wěn)態(tài)功能的失衡密切相關。腸上皮細胞的自穩(wěn)態(tài)功能發(fā)生紊亂后，可促發(fā)細胞內非可控性內質網應激(unresolving ER stress)反應的發(fā)生，從而使腸上皮細胞發(fā)生廣泛而持續(xù)存在的內質網損傷，細胞通常會出現(xiàn)“程序性死亡”，即細胞凋亡。有研究報道：腸道上皮細胞內的非可控性內質網應激反應和炎性腸道疾病的發(fā)生和發(fā)展有著密切聯(lián)系，尤其是內質網應激反應相關的下游關鍵轉錄因子X-box-binding protein 1(xbp1)基因的功能異常在炎性腸道疾病的發(fā)病中起到重要作用。

通常情況下，轉錄因子xbp1對于內質網的擴張、具有分泌功能腺上皮細胞(如：漿細胞，胰島細胞、唾液腺細胞)的發(fā)育以及上皮細胞對炎性刺激等環(huán)境的適應都起到很重要的作用。在體內幾乎所有的細胞類型中，xbp1可直接通過對一組核心基因進行轉錄調控而在內質網基本功能的維持上起重要作用。Kaser的研究小組2008年通過首次建立腸上皮細胞XBP1基因缺陷的基因敲除小鼠模型(XBP1-/-)，發(fā)現(xiàn)xbp1基因敲除后的動物不但會出現(xiàn)Paneth細胞缺乏和杯狀細胞表型明顯改變的特點，并且在回腸還可表現(xiàn)出自發(fā)性的炎癥改變；同時，研究者在此基礎上進一步發(fā)現(xiàn)XBP1基因的有義突變體也與炎性腸道疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。以上實驗結果說明，xbp1基因對于腸上皮細胞的自穩(wěn)態(tài)的維持及抵抗ER應激所誘發(fā)的腸上皮細胞的凋亡具有重要作用。同樣，在臨床研究中通過SNPs技術發(fā)現(xiàn)，患有炎性腸道疾病的病人通常在xbp1基因的編碼區(qū)會出現(xiàn)某些變異，從而使病人對炎性腸道疾病的誘發(fā)因素愈發(fā)敏感。綜上所述，從臨床遺傳學研究資料到實驗室的研究證據都提示我們：xbp1基因在腸道上皮細胞的自穩(wěn)態(tài)調節(jié)中起到非常重要的作用，其表達的缺失或下調會增加機體對IBD誘發(fā)因素的敏感性，促進IBD的發(fā)生和加重IBD病情的發(fā)展。

目前有關炎性腸道疾病藥物研發(fā)中以xbp1作為藥物作用靶點的小分子化學合成藥物或是天然藥物單體均未見報道?；谝陨蠌膶嶒炇业脚R床的研究結果，即將xbp1基因的缺失和表達異常同IBD發(fā)病升高緊密聯(lián)系在一起的研究線索，我們預見性地推測xbp1可能成為治療IBD潛在的、新的藥物作用靶點。因此本研究的目的企在通過建立以xbp1基因為作用靶點的體外藥物篩選模型，結合雙熒光素酶報告基因、實時定量聚合酶鏈式反應(PCR)及蛋白質印跡(Western Blot)法等細胞和分子生物學研究手段，擬從xbp1的基因轉錄調控、mRNA表達及蛋白合成等不同層面尋找并發(fā)現(xiàn)xbp1的選擇性激動劑，并為抗炎性腸道疾病藥物的發(fā)現(xiàn)及高通量篩選提供可靠、準確及有效的方法。

本發(fā)明通過對多種原小檗堿類生物堿季銨鹽進行結構修飾，得到了一些原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽，其重要特征在于，通過分子和動物水平的藥效學實驗，證實了這些原小檗堿類生物堿衍生物顯示出一定的或顯著的抗?jié)冃越Y腸炎活性，部分化合物的活性明顯高于底物，并顯著高于陽性藥物；特別是上述化合物1、2和7，體外分子水平試驗結果均具有顯著的xbp1基因轉錄激活效應，其EC₅₀值分別為：2.29×10^-9(mol/L)，7.06×10^-9(mol/L)和2.21×10^-7(mol/L)。動物體內試驗表明：化合物7(500mg/kg)對UC動物模型腸道炎癥疾病指數(shù)(含精神狀態(tài)、體重下降、血便、大便性狀等方面評估指標)的抑制率可達64％；化合物1(300mg/kg)和2(300mg/kg)的抑制率則分別高達69％和80％，而陽性藥美沙拉嗪(SASP)(300mg/kg)的抑制率僅為32％。另外，組織病理檢測結果表明：化合物7(500mg/kg)高劑量組對結腸炎性病變有明顯的改善，腸上皮細胞排列完整，其細胞極性排列甚至可恢復接近正常生理狀態(tài)。因此，不同動物種類、不同發(fā)病機制的動物體內試驗結果均表明，本發(fā)明獲得的原小檗堿類生物堿衍生物的體內活性，明顯好于目前抗UC臨床常用治療藥物SASP，是在治療潰瘍性結腸炎方面極具有藥用價值的化合物。此外，與底物比較，這些原小檗堿類生物堿衍生物的溶解性能均增強，使它們在底物不易溶解的一些溶劑中均較易溶解或溶解性得到明顯改善。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術問題是提供一種治療潰瘍性結腸炎的藥物，即通式I-Ⅷ所示的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽。

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了如下技術方案：

本發(fā)明第一方面提供了一種通式I-Ⅷ所示的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽。

本發(fā)明第二方面提供了通式I-Ⅷ所示的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽的制備方法。

本發(fā)明第三方面提供了通式I-Ⅷ所示的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽的藥物組合物。

本發(fā)明第四方面提供了通式I-Ⅷ所示的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽的治療腫瘤的用途。

如通式Ⅰ所示的原小檗堿生物堿衍生物類及其藥學上可接收的鹽，包括二氫黃連堿、二氫小檗堿、二氫巴馬汀、8-氧化二氫黃連堿、8-氧化二氫異黃連堿：

其中，代表雙鍵或單鍵；

R₂、R₃各自獨立地選自OCH₃或R₂、R₃連接成為OCH₂O；

當為單鍵時，R₈選自H；當為雙鍵時，R₈選自O；

R₉、R₁₀各自獨立地選自OCH₃并且R₁₁選自H，或R₉、R₁₀連接成為OCH₂O并且R₁₁選自H，或R₁₀、R₁₁連接成為OCH₂O并且R₉選自H。

通式Ⅱ所示的13-取代二氫黃連堿類：

其中，R₁₃選自H，或R₁₃選自脂肪烴基，并且R₁₃脂肪烴基通式為C_nH_2n+1或C_mH_2m-1，n選自1-20的整數(shù)，m選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自NHR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自OR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自COOR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自鹵素，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷酰基，C1-C20的烷酰氧基；

上述脂肪烴基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；?、C1-C20的烷酰氧基中的烷基是直鏈或支鏈。

通式Ⅲ所示的二氫異黃連堿和13-取代二氫異黃連堿類：

其中，R₁₃選自H；或R₁₃選自脂肪烴基，并且R₁₃脂肪烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)，

或R₁₃脂肪烴基通式為C_mH_2m-1，m選自2-20的整數(shù)；

或R₁₃選自OR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自CH₂NHR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自CH₂OR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自CH₂COOR₁₃'并且R₁₃'選自H或烴基，并且R₁₃'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)；

或R₁₃選自CH₂R₁₃'并且R₁₃'選自鹵素，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；?，C1-C20的烷酰氧基；

上述脂肪烴基，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；?，C1-C20的烷酰氧基中的烷基是直鏈或支鏈。

如通式Ⅳ所示的8-取代二氫黃連堿類，8-取代二氫異黃連堿類：

其中，R₈選自CN；

或R₈選自CH₂NHR₈'并且R₈'選自H或芐基或烴基，并且R₈'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)，

或R₈'烴基通式為C_mH_2m-1，m選自2-20的整數(shù)；或R₈選自COOR₈'并且R₈'選自H或芐基或烴基，并且R₈'烴基通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)，或R₈'烴基通式為C_mH_2m-1，m選自2-20的整數(shù)。

R₉、R₁₀連接成為OCH₂O并且R₁₁選自H，或R₁₀、R₁₁連接成為OCH₂O并且R₉選自H。

如通式Ⅴ式所示的(±)-8-甲基酮基取代二氫黃連堿類：

其中，

R₈'選自脂肪烴基，通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)，

或R₈'選自脂肪烴基通式為C_mH_2m-1，m選自2-20的整數(shù)；

或R₈'選自羥基、氨基、鹵素、C1-C20的烷氧基、C1-C20的烷硫基；上述C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基中的烷基是直鏈或支鏈。

如通式Ⅵ式所示的(±)-8-甲基酮基取代二氫黃連堿類：

其中，R₈'選自H、羥基、氨基、硝基、苯基、亞甲二氧基、1,2-乙二氧基、鹵素、C1-C20的烷基，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；1-C20的烷酰氧基；上述C1-C20的烷基，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；?、C1-C20的烷酰氧基中的烷基是直鏈或支鏈。

如通式Ⅶ式所示的原小檗堿生物堿季銨鹽類，包括8-α,β-不飽和酮-13-二取代黃連堿季銨鹽類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代小檗堿季銨鹽類：

其中，

R₈'選自脂肪烴基，通式為C_nH_2n+1，n選自1-20的整數(shù)，

或R₈'選自脂肪烴基通式為C_mH_2m-1，m選自2-20的整數(shù)；

或R₈'選自羥基、氨基、鹵素、C1-C20的烷氧基、C1-C20的烷硫基；上述C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基中的烷基是直鏈或支鏈；

R₉、R₁₀各自獨立地選自OCH₃或R₉、R₁₀連接成為OCH₂O；

R₁₃選自H或R₁₃選自脂肪烴基，通式為C_nH_2n+1，n選自1-19的整數(shù)。

如通式Ⅷ式所示的原小檗堿生物堿季銨鹽類，包括8-α,β-不飽和酮-13-二取代黃連堿季銨鹽類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代小檗堿季銨鹽：

其中，

R₈'選自H、羥基、氨基、硝基、苯基、亞甲二氧基、1,2-乙二氧基、鹵素、C1-C20的烷基，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷?；?、C1-C20的烷酰氧基；

上述C1-C20的烷基，C1-C20的烷氧基，C1-C20的烷硫基，C1-C20的烷酰基、C1-C20的烷酰氧基中的烷基是直鏈或支鏈；

R₉、R₁₀各自獨立地選自OCH₃或R₉、R₁₀連接成為OCH₂O；

R₁₃選自H或R₁₃選自脂肪烴基，通式為C_nH_2n+1，n選自1-19的整數(shù)。

本發(fā)明最優(yōu)選的化合物選自如下式1-29所示化合物群組：

本發(fā)明第二方面提供了本發(fā)明化合物的制備方法：所述的原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽可通過如下的合成方法合成：

(1)本發(fā)明的二氫黃連堿、二氫異黃連堿、二氫小檗堿、二氫巴馬汀、13-甲基二氫黃連堿可通過如下的合成方法合成：

(2)本發(fā)明的(±)-8-氰基二氫黃連堿、(±)-8-氰基二氫異黃連堿可通過如下的合成方法合成：

(3)本發(fā)明的8-氧化二氫異黃連堿可通過如下的合成方法合成：

(4)本發(fā)明的8-氧化二氫黃連堿可通過如下的合成方法合成：

(5)本發(fā)明的(±)-8-甲基酮基取代二氫黃連堿類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代黃連堿衍生物季銨鹽類、8-α,β-不飽和酮-13-二取代小檗堿衍生物季銨鹽類可通過如下的合成方法合成：

本發(fā)明第三方面還涉及以本發(fā)明化合物作為活性成份的藥物組合物。該藥物組合物可根據本領域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物與一種或多種藥學上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物在其藥物組合物中的含量通常為0.1-95重量％。

本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼?，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領域常用的增溶劑、助溶劑、pH調劑劑、滲透壓調節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；pH調劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明化合物藥物組合物的給藥劑量依照所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的個體情況，給藥途徑和劑型等可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍為0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.1-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為1-60mg/Kg體重，最優(yōu)選為2-30mg/Kg體重。上述劑量可以一個劑量單位或分成幾個劑量單位給藥，這取決于醫(yī)生的臨床經驗以及包括運用其它治療手段的給藥方案。

本發(fā)明的化合物或組合物可單獨服用，或與其他治療藥物或對癥藥物合并使用。當本發(fā)明的化合物與其它治療藥物存在協(xié)同作用時，應根據實際情況調整它的劑量。

本發(fā)明第四方面提供了化合物在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。本發(fā)明所述原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽在分子和動物水平的活性測試實驗中分別顯示出顯著的或一定的抗?jié)冃越Y腸炎活性，部分化合物的活性明顯高于原料底物，并顯著高于陽性藥物，是在治療潰瘍性結腸炎方面極具有藥用價值的原小檗堿類生物堿衍生物。特別是上述化合物1、2和7，體外分子水平試驗結果均具有顯著的xbp1基因轉錄激活效應，其EC₅₀值分別為：2.29×10^-9(mol/L)，7.06×10^-9(mol/L)和2.21×10^-7(mol/L)。動物體內試驗表明：化合物7(500mg/kg)對UC動物模型腸道炎癥疾病指數(shù)(含精神狀態(tài)、體重下降、血便、大便性狀等方面評估指標)的抑制率可達64％；化合物1(300mg/kg)和2(300mg/kg)的抑制率則分別高達69％和80％，而陽性藥美沙拉嗪(SASP)(300mg/kg)的抑制率僅為32％。另外，組織病理檢測結果表明：化合物7(500mg/kg)高劑量組對結腸炎性病變有明顯的改善，腸上皮細胞排列完整，其細胞極性排列甚至可恢復接近正常生理狀態(tài)。因此，不同動物種類、不同發(fā)病機制的動物體內試驗結果均表明，本發(fā)明獲得的原小檗堿類生物堿衍生物的體內活性，明顯好于目前抗UC臨床常用治療藥物SASP，是在治療潰瘍性結腸炎方面極具有藥用價值的化合物。此外，與底物比較，這些原小檗堿類生物堿衍生物的溶解性能均增強，使它們在底物不易溶解的一些溶劑中均較易溶解或溶解性得到明顯改善。

附圖說明

圖1 MTT法檢測各化合物對體外培養(yǎng)腸上皮細胞IEC-6的毒性結果。

圖2本發(fā)明不同化合物對xbp1基因上游啟動子的激活效應實驗結果。

圖3化合物1的EC₅₀值為2.29×10^-9(mol/L)

圖4化合物2的EC₅₀值為7.06×10^-9(mol/L)

圖5：化合物7的EC₅₀值為2.21×10^-7(mol/L)。

圖6化合物10的EC₅₀值為4.73×10^-8(mol/L)。

圖7化合物7對潰瘍性結腸炎大鼠體重的影響

圖8化合物7對潰瘍性結腸炎大鼠結腸組織病理改變的影響

圖9化合物7對潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠結腸組織病理改變的影響

具體實施方式

制備實施例1 化合物1-29的制備工藝及結構鑒定數(shù)據

化合物1的制備

稱取黃連堿(102mg,0.29mmol)于反應瓶中，加入甲醇(4mL)，放入冰水浴中，加入K₂CO₃(110mg,0.80mmol)，將NaBH₄(9mg,0.24mmol)溶解于5％NaOH(0.8mL)中，逐滴加入到反應瓶中，滴完后撤掉冰水浴，室溫攪拌3h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅分別用30％乙醇(5mL)、80％乙醇(3mL)洗滌，用乙醇做重結晶，得黃色固體59mg，收率64.1％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.78(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),3.04(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),4.15(s,2H,NCH₂),5.96(s,2H,OCH₂O),5.99(s,2H,OCH₂O),6.08(s,1H,ArH),6.46(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),6.68(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),6.74(s,1H,ArH),7.28(s,1H,ArH).MS(m/z):321.3.

化合物2的制備

稱取異黃連堿(310mg,0.87mmol)于反應瓶中，加入甲醇(8mL)，加入K₂CO₃(300mg,2.17mmol)，稱取NaBH₄(33mg,0.87mmol)溶解于5％NaOH(1.5mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌3h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗至中性，干燥得黃色固體222mg，收率79.3％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.78(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),3.00(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),4.06(s,2H,NCH₂Ar),5.91(s,2H,OCH₂O),5.99(s,2H,OCH₂O),6.04(s,1H,ArH),6.57(s,1H,ArH),6.70(s,1H,ArH),6.75(s,1H,ArH),7.26(s,1H,ArH).

化合物3的制備

稱取小檗堿(810mg,2.18mmol)于反應瓶中，加入甲醇(8mL)，加入K₂CO₃(753mg,5.45mmol)，稱取NaBH₄(83mg,2.19mmol)溶解于5％NaOH(1.5mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌3h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗至中性，干燥得黃色固體619mg，收率84.2％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):2.78(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),3.04(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),3.70(s,3H,OCH₃),3.75(s,3H,OCH₃),4.20(s,2H,NCH₂Ar),5.99(s,2H,OCH₂O),6.04(s,1H,ArH),6.68(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),6.74(s,1H,ArH),6.81(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),7.28(s,1H,ArH).

化合物4的制備

稱取巴馬汀(82mg,0.21mmol)于反應瓶中，加入甲醇(5mL)，加入K₂CO₃(72mg,0.52mmol)，稱取NaBH₄(8mg,0.21mmol)溶解于

5％NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌3h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗至中性，干燥得黃色固體59mg，收率79.0％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):2.91(t,J＝5.4Hz,2H,NCH₂CH₂),3.16(t,J＝5.4Hz,2H,NCH₂CH₂),3.85(s,6H,2OCH₃),3.89(s,3H,OCH₃),3.94(s,3H,OCH₃),4.33(s,2H,NCH₂Ar),6.00(s,1H,ArH),6.60(s,1H,ArH),6.75(s,1H,ArH),7.18(s,1H,ArH).

化合物5的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入甲醇(8mL)，稱取KCN(55mg,0.84mmol)溶解于水(1mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌反應2h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗，干燥得黃色固體230mg，收率79.0％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.79-2.84(m,2H,NCH₂CH₂),3.05-3.15(m,1H,NCH₂CH₂),3.44-3.48(m,1H,NCH₂CH₂),6.01(s,2H,OCH₂O),6.03(d,J＝3.6Hz,2H,OCH₂O),6.17(s,1H,CHCN),6.41(s,1H,ArH),6.66(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),6.79(s,1H,ArH),6.90(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),7.36(s,1H,ArH).

化合物6的制備

稱取異黃連堿(37mg,0.10mmol)于反應瓶中，加入甲醇(3mL)，稱取KCN(7mg,0.11mmol)溶解于水(0.5mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌反應2h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗，干燥得黃色固體9mg，收率25.0％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.86(br s,2H,NCH₂CH₂),3.15-3.35(m,2H,NCH₂CH₂),5.80(s,1H,CHCN),6.01-6.03(m,4H,OCH₂O),6.36(s,1H,ArH),6.75(s,1H,ArH),6.80(s,1H,ArH),6.93(s,1H,ArH),7.34(s,1H,ArH).

化合物7的制備

稱取黃連堿(99mg,0.28mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入丙酮(0.2mL,2.7mmol)，室溫攪拌1h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗滌至中性，然后用丙酮做重結晶，黃色固體59mg，收率56.2％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.01(s,3H,CHCH₂COCH₃),2.43-2.49(m,1H,CHCH₂COCH₃),2.68-2.75(m,2H,NCH₂CH₂),2.91(dd,J₁＝14.4Hz,J₂＝5.7Hz,1H,CHCH₂COCH₃),3.17-3.23(m,2H,NCH₂CH₂),5.08(t,J＝5.7Hz,1H,CHCH₂COCH₃),5.89(s,1H,ArCH＝C),5.96-6.02(m,4H,2OCH₂O),6.49(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),6.71(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),6.75(s,1H,ArH),7.24(s,1H,ArH).MS(m/z):337.2.

化合物8的制備

稱取胡椒醛(411mg,2.74mmol)于反應瓶中，加入胡椒乙胺(0.5mL,3.04mmol)，160℃加熱反應1h，停止加熱，溫度降低到80℃時，加入CH₃OH(6mL)，溫度降低到室溫時，分批加入NaBH₄(125mg,3.30mmol)，回流反應1h，加入水(10mL)，用氯仿萃取，飽和氯化鈉水溶液洗，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝100:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色油狀物795mg，收率97.0％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.86-2.91(m,2H,NCH₂CH₂),2.99-3.05(m,2H,NCH₂CH₂),4.04(s,2H,NCH₂Ar),5.97(s,2H,OCH₂O),6.04(s,2H,OCH₂O),6.68(dd,J₁＝8.1Hz,J₂＝1.5Hz,1H,ArH),6.82(s,1H,ArH),6.84(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),6.94(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),7.00(dd,J₁＝8.1Hz,J₂＝1.5Hz,1H,ArH),7.16(d,J＝1.5Hz,1H,ArH).

稱取無水CuSO₄(4.2g,26.32mmol)于反應瓶中，加入甲酸(15mL)，在50℃油浴中保溫脫水30min，加入上述黃色油狀物(3.987g,13.32mmol)，乙二醛(3.4mL,26.71mmol)，升溫至100℃，反應4h，在反應過程中按以下次序依次加入濃鹽酸：保溫開始后45min時加入(0.3mL)；90min時加入(0.3mL)；150min時加入(0.4mL)；210min時加入(0.4mL)；230min時加入(0.3mL)。第五次加完后繼續(xù)反應10min，停止加熱，冷卻到10℃以下，冷凍1h，過濾，干燥，用DMF做重結晶得異黃連堿共1.15g，收率24.3％；用80％CH₃OH重結晶得化合物8共718mg，收率16.1％；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.01(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),4.53(t,J＝5.7Hz,2H,NCH₂CH₂),6.04(s,2H,OCH₂O),6.26(s,2H,OCH₂O),6.92(s,1H,ArH),7.39(s,1H,ArH),7.67(s,1H,ArH),8.40(s,1H,ArH),8.58(s,1H,ArH).

化合物9的制備

稱取鐵氰化鉀(2.2g,6.68mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(5mL)攪拌溶解，加入黃連堿(500mg,1.41mmol)，回流反應10h，原料反應完全，冷卻至室溫，過濾，濾餅用水洗至中性，干燥得黃色固體344mg，收率73.0％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.86(t,J＝5.4Hz,2H,NCH₂CH₂),4.09(t,J＝5.4Hz,2H,NCH₂CH₂),6.07(s,2H,OCH₂O),6.19(s,2H,OCH₂O),6.92(s,1H,ArH),7.11(s,1H,ArH),7.15(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),7.34(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),7.47(s,1H,ArH).

化合物10的制備

稱取小檗堿(95mg,0.26mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入丁酮(0.3mL,3.35mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(3mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(0.6mL,6.02mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體35mg，收率28.8％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):0.86(t,J＝6.9Hz,3H,CH₂CH₃),2.42(q,J＝7.2Hz,2H,CH₂CH₃),3.15(s,3H,ArCH₃),2.94-3.11(m,2H,NCH₂CH₂),3.84(s,3H,OCH₃),3.88(s,3H,OCH₃),3.97-4.01(m,1H,NCH₂CH₂),4.41-4.44(m,1H,NCH₂CH₂),6.03(s,1H,ArH),6.26(d,J＝4.5Hz,2H,OCH₂O),6.67(s,1H,ArH),7.23(s,1H,C＝CH₂),7.28(d,J＝9.0Hz,1H,ArH),7.43(s,1H,C＝CH₂),7.52(d,J＝8.4Hz,1H,ArH).

化合物11的制備

稱取8-丙酮基取代二氫黃連堿(205mg,0.54mmol)于反應瓶中，加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(2mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應5h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體170mg，收率71.5％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.60(s,3H,COCH₃),2.91(s,3H,ArCH₃),2.91-3.09(m,2H,NCH₂CH₂),4.39-4.48(m,2H,NCH₂CH₂),6.16(s,2H,OCH₂O),6.35(d,J＝10.5Hz,2H,OCH₂O),6.81(s,1H,C＝CH₂),7.15(s,1H,ArH),7.16(s,1H,C＝CH₂),7.40(s,1H,ArH),8.03(m,2H,ArH).MS(m/z):402.1(M-Cl)⁺.

化合物12的制備

稱取黃連堿(105mg,0.30mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入丁酮(0.3mL,3.35mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(3mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(0.6mL,6.02mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體43mg，收率32.3％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.16(t,J＝7.2Hz,3H,CH₂CH₃),2.90(s,3H,ArCH₃),3.05(q,J＝7.2Hz,2H,CH₂CH₃),3.13-3.32(m,2H,NCH₂CH₂),4.27-4.34(m,1H,NCH₂CH₂),4.90-4.98(m,1H,NCH₂CH₂),6.05(d,J＝2.1Hz,2H,OCH₂O),6.18(s,1H,OCH₂O),6.27(s,1H,OCH₂O),6.83(s,1H,ArH),7.04(s,1H,ArH),7.17(s,1H,C＝CH₂),7.24(s,1H,C＝CH₂),7.67(d,J＝9.0Hz,1H,ArH),7.80(d,J＝9.0Hz,1H,ArH).MS(m/z):416.1(M-Cl)⁺.

化合物13的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入2-戊酮(0.8mL,7.52mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(1mL)，甲醛(1.5mL,15.06mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體130mg，收率33.1％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.98(t,J＝7.2Hz,3H,CH₂CH₂CH₃),1.71(q,J＝7.2Hz,2H,CH₂CH₂CH₃),2.90(s,3H,ArCH₃),2.90-3.01(m,2H,CH₂CH₂CH₃),3.04-3.14(m,1H,NCH₂CH₂),3.28-3.36(m,1H,NCH₂CH₂),4.26-4.28(m,1H,NCH₂CH₂),4.94-5.01(m,1H,NCH₂CH₂),6.05(br s,2H,OCH₂O),6.16(s,1H,OCH₂O),6.27(s,1H,OCH₂O),6.82(s,1H,ArH),7.03(s,1H,ArH),7.15(s,1H,C＝CH₂),7.32(s,1H,C＝CH₂),7.66(d,J＝8.7Hz,1H,ArH),7.80(d,J＝8.7Hz,1H,ArH).MS(m/z):430.2(M-Cl)⁺.

化合物14的制備

稱取黃連堿(190mg,0.53mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入2-己酮(0.5mL,4.04mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(1mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體106mg，收率41.4％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.91(m,3H,CH₂CH₂CH₂CH₃),1.36(m,2H,CH₂CH₂CH₂CH₃),1.58(m,2H,CH₂CH₂CH₂CH₃),2.91(s,3H,ArCH₃),2.91-3.05(m,2H,CH₂CH₂CH₂CH₃),3.05-3.16(m,2H,NCH₂CH₂),4.22(s,2H,NCH₂CH₂),6.16(s,2H,OCH₂O),6.25(s,1H,OCH₂O),6.36(s,1H,OCH₂O),6.78(s,1H,C＝CH₂),7.14(s,1H,ArH),7.19(s,1H,C＝CH₂),7.39(s,1H,ArH),8.03(s,1H,ArH).MS(m/z):444.2(M-Cl)⁺.

化合物15的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入2-庚酮(1mL,7.18mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(1mL)，甲醛(1.5mL,15.06mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體97mg，收率23.3％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.91(br s,3H,CH₂CH₂(CH₂)₂CH₃),1.33-1.35(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₂CH₃),1.58-1.61(m,2H,CH₂CH₂(CH₂)₂CH₃),2.93(s,3H,ArCH₃),2.93-3.14(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₂CH₃,NCH₂CH₂),4.45(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.40(s,1H,OCH₂O),6.79(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.19(s,1H,C＝CH₂),7.42(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).MS(m/z):458.2(M-Cl)⁺.

化合物16的制備

稱取黃連堿(200mg,0.56mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入2-辛酮(1mL,6.26mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體65mg，收率22.8％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.88(br s,3H,CH₂CH₂(CH₂)₃CH₃),1.31(br s,6H,CH₂CH₂(CH₂)₃CH₃),1.58-1.60(m,2H,CH₂CH₂(CH₂)₃CH₃),2.73-3.15(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₃CH₃,NCH₂CH₂),2.93(s,3H,ArCH₃),4.45(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.40(s,1H,OCH₂O),6.78(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.19(s,1H,C＝CH₂),7.42(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).

化合物17的制備

稱取黃連堿(100mg,0.28mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入2-壬酮(0.5mL,2.91mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(3mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(0.6mL,6.02mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體30mg，收率20.4％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.87(br s,3H,CH₂CH₂(CH₂)₄CH₃),1.28-1.31(m,8H,CH₂CH₂(CH₂)₄CH₃),1.58-1.61(m,2H,CH₂CH₂(CH₂)₄CH₃),2.83-3.15(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₄CH₃,NCH₂CH₂),2.93(s,3H,ArCH₃),4.45(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.40(s,1H,OCH₂O),6.78(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.19(s,1H,C＝CH₂),7.42(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).

化合物18的制備

稱取黃連堿(200mg,0.56mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入2-癸酮(1mL,5.28mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體59mg，收率19.6％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.88(t,J＝9.0Hz,3H,CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃),1.27(br s,10H,CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃),1.58-1.61(m,2H,CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃),2.93(s,3H,ArCH₃),2.93-3.15(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃,NCH₂CH₂),4.45(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(br s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.40(s,1H,OCH₂O),6.79(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.19(s,1H,C＝CH₂),7.42(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).

化合物19的制備

稱取黃連堿(200mg,0.56mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入2-十一酮(1mL,4.87mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體55mg，收率17.8％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.86(t,J＝6.6Hz,3H,CH₂CH₂(CH₂)₆CH₃),1.26-1.31(m,12H,CH₂CH₂(CH₂)₆CH₃),1.58-1.60(m,2H,CH₂CH₂(CH₂)₆CH₃),2.93(s,3H,ArCH₃),2.93-3.14(m,4H,CH₂CH₂(CH₂)₆CH₃,NCH₂CH₂),4.45(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(br s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.40(s,1H,OCH₂O),6.78(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.18(s,1H,C＝CH₂),7.42(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).

化合物20的制備

稱取黃連堿(230mg,0.65mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，慢慢加入對甲氧基苯乙酮(780mg,5.19mmol)，加完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體140mg，收率41.0％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.94(s,3H,OCH₃),2.94-3.13(m,2H,NCH₂CH₂),3.89(s,3H,ArCH₃),4.54(br s,2H,NCH₂CH₂),6.17(s,2H,OCH₂O),6.19(s,1H,OCH₂O),6.43(s,1H,OCH₂O),6.83(s,1H,C＝CH₂),6.97(s,1H,C＝CH₂),7.15(d,J＝9.0Hz,2H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.42(s,1H,ArH),7.97(d,J＝8.7Hz,2H,ArH),8.06(m,2H,ArH).MS(m/z):494.2(M-Cl)⁺.

化合物21的制備

稱取黃連堿(100mg,0.28mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入1-萘乙酮(0.5mL,3.28mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(3mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(0.6mL,6.02mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體34mg，收率22.1％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.98(s,3H,ArCH₃),3.10-3.20(m,2H,NCH₂CH₂),4.57-4.78(m,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.44(d,J＝9.9Hz,2H,OCH₂O),6.82(s,1H,C＝CH₂),7.08(s,1H,C＝CH₂),7.20(s,1H,ArH),7.460(s,1H,ArH),7.64-7.76(m,2H,ArH),8.04-8.14(m,4H,ArH),8.24(d,J＝8.4Hz,1H,ArH).

化合物22的制備

稱取黃連堿(250mg,0.70mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，慢慢加入6-乙酰基-1,4-苯并二氧雜環(huán)(1mL,6.67mmol)，加完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1.5mL,15.06mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體110mg，收率28.1％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:2.95(s,3H,ArCH₃),2.99-3.14(m,2H,NCH₂CH₂),4.37(br d,J＝9.0Hz,4H,O CH₂CH₂O),4.54(br s,2H,NCH₂CH₂),6.19(s,2H,OCH₂O),6.24(s,1H,OCH₂O),6.44(s,1H,OCH₂O),6.86(s,1H,C＝CH₂),6.99(s,1H,C＝CH₂),7.10(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.17(s,1H,ArH),7.44(s,1H,ArH),7.45(d,J＝2.1Hz,2H,ArH),7.54(dd,J₁＝8.4Hz,J₂＝2.1Hz,1H,ArH),8.07(s,2H,ArH).

化合物23的制備

稱取黃連堿(200mg,0.56mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，逐滴加入4-異丁基苯乙酮(1mL,5.40mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體117mg，收率37.4％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:0.92(d,J＝6.6Hz,6H,CH₂CH(CH₃)₂),1.89-1.96(m,1H,CH₂CH(CH₃)₂),2.60(d,J＝6.9Hz,2H,CH₂CH(CH₃)₂),2.96(s,3H,ArCH₃),2.99-3.14(m,2H,NCH₂CH₂),4.56(br s,2H,NCH₂CH₂),6.19(br s,2H,OCH₂O),6.25(s,1H,OCH₂O),6.45(s,1H,OCH₂O),6.87(s,1H,C＝CH₂),7.03(s,1H,C＝CH₂),7.18(s,1H,ArH),7.43(d,J＝7.5Hz,2H,ArH),7.44(s,1H,ArH),7.89(d,J＝7.5Hz,2H,ArH),8.05(s,2H,ArH).

化合物24的制備

稱取黃連堿(250mg,0.70mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1mL)，慢慢加入苯乙酮(0.8mL,6.85mmol)，加完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(1.5mL,15.06mmol)，回流反應3h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得深黃色固體120mg，收率34.3％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.96(s,3H,ArCH₃),2.96-3.15(m,2H,NCH₂CH₂),4.58(br s,2H,NCH₂CH₂),6.19(s,2H,OCH₂O),6.26(s,1H,OCH₂O),6.46(s,1H,OCH₂O),6.88(s,1H,C＝CH₂),7.07(s,1H,C＝CH₂),7.18(s,1H,ArH),7.45(s,1H,ArH),7.62-7.67(m,2H,ArH),7.76(t,J＝7.2Hz,1H,ArH),7.96(d,J＝7.8Hz,2H,ArH),8.08(m,2H,ArH).

化合物25的制備

稱取黃連堿(100mg,0.28mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(0.8mL)，逐滴加入甲基叔丁基甲酮(0.2mL,1.60mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(4mL)，逐滴加入HOAc(0.3mL)，甲醛(0.3mL,3.01mmol)，回流反應1h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(1.5mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體30mg，收率22.2％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.48(s,9H,3CH₃),2.92(s,3H,ArCH₃),2.96-2.99(m,1H,NCH₂CH₂),3.42-3.49(m,1H,NCH₂CH₂),4.09-4.15(m,1H,NCH₂CH₂),5.08-5.14(m,1H,NCH₂CH₂),6.07-6.09(m,2H,OCH₂O),6.20(s,1H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.84(s,1H,ArH),7.06(s,1H,ArH),7.23(s,1H,C＝CH₂),7.64(s,1H,C＝CH₂),7.67(d,J＝9.0Hz,1H,ArH),7.80(d,J＝9.0Hz,1H,ArH).MS(m/z):444.2(M-Cl)⁺.

化合物26的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入甲基異丙基甲酮(0.5mL,4.70mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(1.2mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應1h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2.5mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體140mg，收率35.6％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):1.16-1.20(m,6H,2CH₃),2.92(s,3H,ArCH₃),2.87-3.10(m,2H,NCH₂CH₂),3.67-3.76(m,1H,COCH),4.27-4.50(m,2H,NCH₂CH₂),6.17(s,2H,OCH₂O),6.31(s,1H,OCH₂O),6.39(s,1H,OCH₂O),6.85(s,1H,C＝CH₂),7.15(s,1H,ArH),7.28(s,1H,C＝CH₂),7.41(s,1H,ArH),8.04(s,2H,ArH).MS(m/z):430.2(M-Cl)⁺.

化合物27的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入甲基環(huán)丙基甲酮(0.4mL,4.27mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(1.2mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應1h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2.5mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體204mg，收率52.1％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):1.03-1.13(m,4H,2CH₂),2.93(s,3H,ArCH₃),2.93-3.12(m,3H,NCH₂CH₂,COCH),4.42-4.46(m,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.33(s,1H,OCH₂O),6.44(s,1H,OCH₂O),6.85(s,1H,C＝CH₂),7.16(s,1H,ArH),7.39(s,1H,C＝CH₂),7.41(s,1H,ArH),8.05(s,2H,ArH).MS(m/z):428.2(M-Cl)⁺.

化合物28的制備

稱取黃連堿(300mg,0.84mmol)于反應瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入甲基環(huán)己基甲酮(0.6mL,4.37mmol)，滴完后60℃加熱反應3h，停止反應，用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相水洗至中性，加入無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，然后加入無水四氫呋喃(5mL)，逐滴加入HOAc(1.2mL)，甲醛(1mL,10.04mmol)，回流反應1h，原料反應完全，將反應液濃縮，加入2N HCl(2.5mL)，室溫反應1h，然后用氯仿/甲醇(v/v＝10:1)萃取，有機相用無水MgSO₄干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，粗品經硅膠柱層析[v/v＝20:1(氯仿/甲醇)]純化得黃色固體105mg，收率24.7％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):1.14-1.95(m,10H,5CH₂),2.85-3.14(m,2H,NCH₂CH₂),2.91(s,3H,ArCH₃),3.44-3.51(m,1H,COCH),4.23-4.49(m,2H,NCH₂CH₂),6.16(s,2H,OCH₂O),6.29(s,1H,OCH₂O),6.38(s,1H,OCH₂O),6.82(s,1H,C＝CH₂),7.14(s,1H,ArH),7.28(s,1H,C＝CH₂),7.40(s,1H,ArH),8.03(s,2H,ArH).MS(m/z):470.2(M-Cl)⁺.

化合物29的制備

稱取13-甲基黃連堿(41mg,0.11mmol)于反應瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(45mg,0.33mmol)，稱取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5％NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反應瓶中，室溫攪拌2h，原料反應完全，將反應液過濾，濾餅用水洗至中性，干燥得黃色固體28mg，收率75.7％。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.15(s,3H,ArCH₃),2.68(br s,2H,NCH₂CH₂),3.03(br s,2H,NCH₂CH₂),4.14(s,2H,NCH₂Ar),6.00(s,2H,OCH₂O),6.03(s,2H,OCH₂O),6.64(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),6.77(d,J＝8.1Hz,1H,ArH),6.84(s,1H,ArH),7.03(s,1H,ArH).

實驗例1

化合物的抗?jié)冃越Y腸炎生物學研究實施實例

1、化合物的細胞毒性檢測

(1)實驗方法：將體外培養(yǎng)生長至90％匯合狀態(tài)的IEC-6腸上皮細胞以0.25％胰酶/0.1％EDTA消化并接種于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔細胞數(shù)為2×103。培養(yǎng)次日去除原培養(yǎng)基，每孔加入含1×10^-5mol/L的待測化合物工作液繼續(xù)培養(yǎng)。于IEC-6細胞與待測藥物共培養(yǎng)后的0h，24h和72h通過MTT法檢測待測藥物對細胞的毒性(n＝5)。

(2)結果：在實驗測定的時間范圍內，1×10^-5mol/L本發(fā)明所涉及的系列化合物對于腸上皮細胞IEC-6均無顯著的細胞毒性，統(tǒng)計學上檢測無顯著性差異(見圖1)。

(3)結論：本發(fā)明涉及系列原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽適于在IEC-6細胞模型上用于下游實驗的篩選。

本發(fā)明所涉及系列原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽在濃度為1uM時對腸上皮IEC-6細胞毒性檢測結果如上圖所示。實驗表明：除化合物16-19和21外，其余各化合物在該濃度下與IEC-6細胞共孵育24h后無明顯細胞毒作用，共孵育3d后檢測結果與24h一致(此處未展示)，均未表現(xiàn)出明顯的細胞毒效應。

2、24個無明顯IEC-6細胞毒的化合物對pGL3-pxbp1的轉錄激活效應。

(1)實驗方法：將處于生長旺盛期的IEC-6細胞接種于48孔板中，每孔細胞數(shù)為5×104，使細胞在孔內均勻分散，放置于37℃、5％CO₂加濕細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞匯片至70％-80％，對細胞進行相應質粒的轉染(0.6μg/孔)，4h后加入1×10^-5mol/L的各化合物與轉染細胞共孵育(n＝3)。待共培養(yǎng)36h-48h后收樣，利用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Promega，USA)對實驗樣品進行熒光素酶活性檢測。

(2)結果：以無轉染質粒細胞為對照組1，以轉染pGL-xbp1不加藥細胞組為對照組2，經統(tǒng)計學分析結果顯示有24個化合物對xbp1基因上游啟動子具有激活效應。

(3)結論：本發(fā)明所涉及系列原小檗堿類生物堿衍生物或其生理上可接受的鹽對xbp1基因的表達具有轉錄激活效應。

實驗結果見圖2。

不同化合物對xbp1基因啟動子具有一定的轉錄激活效應。圖中con1為本底對照，con2為pGL3空載體對照。結果表明，該類新結構化合物不同程度上能激活xbp1分子的轉錄，具有一定的轉錄激活效應。

3、化合物1、2、7和10的EC₅₀測定

(1)實驗方法：將處于對數(shù)生長期的IEC-6細胞接種于48孔板中，每孔細胞數(shù)為5×104，使細胞在孔內均勻分散，放置于37℃、5％CO₂加濕細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞匯片至70％-80％，對細胞進行相應質粒的轉染(0.6μg/孔)，4h后加入不同濃度梯度的各化合物1、2、7和10與轉染細胞共孵育(n＝3)。待共培養(yǎng)36h-48h后收樣，利用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Promega，USA)對實驗樣品進行熒光素酶活性檢測。

(2)結果：如圖3-6所示。

4、化合物7的體內試驗結果。

(1)實驗方法：本實驗方法參考了文獻：Y.Yoshioka,H.Akiyama,M.Nakano,T.Shoji,T.Kanda,Y.Ohtake,T.Takita,R.Matsuda,T.Maitani.Orally administered apple procyanidins protect against experimental inflammatory bowel disease in mice,international immunopharmacology,2008,1802-1807。

(2)結果和結論：化合物7在體內對乙酸誘導的急性SD大鼠潰瘍性結腸炎具有初步治療作用。

①化合物7能減輕乙酸誘導SD大鼠潰瘍性結腸炎動物體重的降低(圖7)。

由圖7可見，與con組(藍色曲線)相比，模型組(紅色曲線)動物體重明顯降低**P<0.01；化合物7(300mg/kg)給藥組(綠色曲線)能減緩動物體重的下降，與模型組(紅色曲線)相比，#p<0.05，##p<0.01。該實驗結果表明：300mg/kg劑量的化合物7能一定程度緩解實驗性潰瘍性結腸炎SD大鼠體重的減輕。與給藥前相比，各實驗組動物體重變化值為：正常對照組上升↑5.6％，模型組下降↓19.2％，化合物7給藥組降低↓10％。

②化合物7(300mg/kg)對乙酸誘導潰瘍性結腸炎SD大鼠的結腸炎性損傷具有改善作用(圖8)。

由圖8可見，正常對照組肉眼可見腸壁光滑，漿膜張力可，粘膜無水腫、出血及明顯潰瘍，組織病理顯示各層結構正常，無炎性變；模型組肉眼可見腸壁高度腫脹，伴隨明顯出血和滲出，粘膜層可見明顯直徑1cm左右的大小潰瘍(白色箭頭所指)，病理切片則表現(xiàn)為典型的炎性變特征并伴發(fā)結腸各層組織的結構破壞；給藥組無論從肉眼大體到組織病理結果均顯示，化合物7對模型動物的結腸炎性變具有很好的治療作用，表現(xiàn)為炎性水腫和出血明顯減輕，腸上皮細胞甚至恢復至正常排列狀態(tài)，且極性規(guī)整。

③化合物7對乙酸誘導潰瘍性結腸炎SD大鼠疾病活動指數(shù)(DAI)及結腸組織大體評分的影響(見表1)。

DAI評分從體重下降程度、大便性狀、便血等指標考核；結腸組織大體評分從腸粘膜充血、腸壁水腫、潰瘍形成大小等方面評算。DAI及評分越低，提示越接近動物正常生理狀態(tài)。表1中：與相應正常對照組相比，**p<0.01；與相應模型組相比，##p<0.01。

表1 不同組別乙酸誘導潰瘍性結腸炎SD大鼠疾病活動指數(shù)及結腸組織大體評分

④化合物7能有效減輕DSS誘導的潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠體重降低，并具有較好量效關系(見表2)。

與正常對照組相比，**p<0.01；與模型組相比，##p<0.01。高劑量化合物7對實驗動物體重下降的抑制作用甚至優(yōu)于目前潰瘍性結腸炎臨床常用藥SASP。

表2 化合物7在體內對DSS誘導急性C57/blc小鼠潰瘍性結腸炎的治療作用

⑤化合物7對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠結腸損傷具有明顯改善效應，并呈現(xiàn)較好量效關系(結腸組織病理，HE×200)。(圖9)

圖9中，a為正常對照組，b為DSS模型組，c為SASP陽性藥組，d為化合物7高劑量組(500mg/kg)，e為化合物7中劑量組(250mg/kg)，f為化合物7低劑量組(125mg/kg)。與正常對照組(a)相比，DSS模型組(b)可見腸上皮細胞基本結構完全喪失、炎性水腫明顯，粘膜脫落伴嚴重充血和出血，大量炎細胞浸潤至肌層并伴隨肌層結構破壞，證明造模成功；與模型組(b)相比，SASP陽性藥組(c)可見結腸炎性病變有明顯改善，各層結構部分恢復；而化合物7高劑量組(d)腸道炎性病變改善更為顯著，腸上皮細胞排列規(guī)整，其細胞極性排列甚至可恢復接近正常生理狀態(tài)；且化合物7中劑量(e)和低劑量(f)組對結腸組織的炎性病變也有部分緩解作用，并呈現(xiàn)一定的量效關系。

⑥化合物7對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠疾病活動指數(shù)(DAI)、結腸組織大體評分的影響(表3)。

DAI評分從體重下降程度、大便性狀、便血等指標考核；結腸組織大體評分從腸粘膜充血、腸壁水腫、潰瘍形成大小等方面評算。指數(shù)及評分越低，說明越接近動物正常生理狀態(tài)。DAI：疾病活動指數(shù)；表3中：與相應對照組相比，**p<0.01；與相應模型組相比，##p<0.01。

表3 化合物7對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠DAI和結腸組織治療作用的大體評分表

5、化合物1體內試驗結果。

①化合物1能有效減輕DSS誘導的潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠體重降低，并具有較好量效關系(見表4)。

表4結果顯示：化合物1能適度減輕DSS誘導的潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠體重降低。與正常對照組相比，**p<0.01；與模型組相比，#p<0.05，##p<0.01。高劑量化合物1對實驗動物體重下降的抑制作用不甚明顯，可能與化合物1抑制動物食欲有關(此處未顯示實驗結果)，隨著化合物1的給藥量逐漸降低，降至75mg/kg體重時，該低劑量組動物體重反而出現(xiàn)上升，甚至優(yōu)于陽性藥SASP。

表4 化合物1在體內對DSS誘導急性C57/blc小鼠潰瘍性結腸炎的治療作用

②化合物1對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠疾病活動指數(shù)(DAI)、結腸組織大體評分的影響(表5)。

DAI評分從體重下降程度、大便性狀、便血等指標考核；結腸組織大體評分從腸粘膜充血、腸壁水腫、潰瘍形成大小等方面評算。指數(shù)及評分越低，說明越接近動物正常生理狀態(tài)。DAI：疾病活動指數(shù)；表5中：與相應對照組相比，**p<0.01；與相應模型組相比，#p<0.05，##p<0.01。

表5 化合物1對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠DAI和結腸組織治療作用的大體評分表

6、化合物2體內試驗結果。

①化合物2能有效減輕DSS誘導的潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠體重降低，并具有較好量效關系(見表6)。

表6結果顯示：化合物2在劑量為300mg/kg體重時，能有效降低DSS誘導的潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠體重降低。與正常對照組相比，**p<0.01；與模型組相比，##p<0.01。

表6 化合物2在體內對DSS誘導急性C57/blc小鼠潰瘍性結腸炎的治療作用

②化合物2對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠疾病活動指數(shù)(DAI)、結腸組織大體評分的影響(表7)。

DAI評分從體重下降程度、大便性狀、便血等指標考核；結腸組織大體評分從腸粘膜充血、腸壁水腫、潰瘍形成大小等方面評算。指數(shù)及評分越低，說明越接近動物正常生理狀態(tài)。DAI：疾病活動指數(shù)；表7中：與相應對照組相比，**p<0.01；與相應模型組相比，##p<0.01。300mg/kg的化合物2給藥量能有效緩解動物稀便、便血等病癥，效果好于陽性藥SASP。

表7 化合物2對DSS誘導潰瘍性結腸炎C57/blc小鼠DAI和結腸組織治療作用的大體評分表