本發(fā)明涉及口腔護(hù)理領(lǐng)域，具體涉及多相單室脂質(zhì)體包裹重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和四氫嘧啶混合水凝膠劑組合物。

背景技術(shù)：

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Epidermai Growth Factor)，簡(jiǎn)稱EGF；是一種廣泛存在于人的皮膚細(xì)胞、體液、腎臟和腦組織中的由53個(gè)氨基酸組成的生物活性多肽，是一種具有生理功能的生物活性物質(zhì)，具有很強(qiáng)的生物學(xué)效應(yīng)。在人體內(nèi)，極微量的表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子就能起到很大的生物學(xué)作用，能促進(jìn)皮膚組織細(xì)胞的增殖與生長(zhǎng)，使新生年輕的細(xì)胞迅速代替衰老和死亡細(xì)胞。定期為皮膚細(xì)胞補(bǔ)充表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，就可以持續(xù)促進(jìn)細(xì)胞的合成，保持表皮細(xì)胞旺盛的新陳代謝，還有促進(jìn)皮膚和粘膜創(chuàng)傷愈合、消炎止痛、防治潰瘍的功效。但是表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在人體細(xì)胞及組織中含量極低，來(lái)源有限，價(jià)格昂貴。

近年來(lái)陸續(xù)有人通過(guò)大腸桿菌、短芽孢桿菌、酵母菌基因重組技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、藻類細(xì)胞體外培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)了重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Recombinant epidermal growth factor，rhEGF)的量產(chǎn)化。但是在實(shí)際使用中，重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的穩(wěn)定性受到溫度、pH值、蛋白酶、添加劑(抑菌劑、抗氧劑等)等因素的影響，使活性大大降低。如針對(duì)潰瘍病癥，創(chuàng)傷面的酶會(huì)降解重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，需要添加酶抑制劑。

四氫嘧啶(1，4，5，6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidinecarboxylic acid)是N-乙酰化的二氨基丁酸通過(guò)分子內(nèi)脫水形成的一種嘧啶衍生物，是大多數(shù)中度嗜鹽菌中的主要相容性溶質(zhì)。四氫嘧啶可以穩(wěn)定天然蛋白質(zhì)的水合層、保護(hù)酶、DNA、RNA等生物大分子和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，幫助細(xì)胞抵抗高鹽、高溫、低水分、冷凍和輻射等各種非特異性環(huán)境的特性。

將四氫嘧啶作為一種保護(hù)劑和重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)配，一方面可以保護(hù)重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子不受溫度、pH值、蛋白酶、添加劑(抑菌劑、抗氧劑等)等因素的影響；另一方面可以保護(hù)炎癥、潰瘍、創(chuàng)面處的新生細(xì)胞。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
同時(shí)采用脂質(zhì)體包裹也可以提高生物制劑的穩(wěn)定性。脂質(zhì)體在化妝品中的應(yīng)用比較多，主要包括兩方面：一、脂質(zhì)體作為功能性成分的載體避免生物活性物質(zhì)相互作用或發(fā)生生物降解；二、脂質(zhì)體膜中的磷脂和不飽和脂肪酸本身具有很好的保濕和護(hù)膚作用。脂質(zhì)體特別是其與皮膚組成相似的類脂，如神經(jīng)鞘磷脂所形成的脂質(zhì)體與皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)有高度相似性，能增加藥物在皮膚局部的蓄積，增強(qiáng)皮膚靶向性，并能持續(xù)釋放藥物；具有增強(qiáng)藥物進(jìn)入角質(zhì)層和表皮類脂內(nèi)的作用。

脂質(zhì)體在化妝品中應(yīng)用本質(zhì)上是為皮膚的局部給藥：在以皮膚為靶向部位設(shè)計(jì)脂質(zhì)體時(shí)，應(yīng)使藥物最大量地保留在皮膚中，盡量少地進(jìn)入血液循環(huán)，即有效性成分作用于皮膚表面的角質(zhì)層或進(jìn)入表皮或真皮。即化妝品中脂質(zhì)體及其他功能性成分要實(shí)現(xiàn)經(jīng)皮滲透而又同時(shí)避免透過(guò)皮膚進(jìn)入血循環(huán)，引起毒副作用。目前，脂質(zhì)體經(jīng)皮給藥的研究表明：脂質(zhì)體粒徑大于1000nm的脂質(zhì)體主要滯留于角質(zhì)層；600nm-1000nm的脂質(zhì)體可以滲透到表皮層和真皮層；而小于200nm的脂質(zhì)體則會(huì)直接進(jìn)入體循環(huán)系統(tǒng)，引起毒副作用。同時(shí)還考慮到不同的劑型，因此，我們?cè)谶x擇制備方法時(shí)以制備單室多相脂質(zhì)體的方法為基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種口腔護(hù)理組合物，通過(guò)四氫嘧啶和重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)配，同時(shí)加以脂質(zhì)體包裹來(lái)改善單獨(dú)使用重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的種種弊端，同時(shí)對(duì)口腔炎癥、潰瘍防治具有協(xié)同增效的作用。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)如下方案予以實(shí)現(xiàn)的：

一種口腔護(hù)理組合物，所述的口腔護(hù)理組合物由多相單室脂質(zhì)體包裹重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和四氫嘧啶混合水凝劑構(gòu)成。

所述的脂質(zhì)體占組合物重量的80％-99.8％，由一個(gè)磷酸基和一個(gè)季銨鹽基組成的親水性基團(tuán)和兩個(gè)較長(zhǎng)的烴基組成的親脂性基團(tuán)，平均粒徑在600-1600nm之間。其中脂質(zhì)體至少包含卵磷脂、膽固醇、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂中的一種或幾種組成。

所述的重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子占組合物重量的0.1-10.0％，其濃度為100-2000mg/kg，分子量為5900-6500Da，沉降系數(shù)為1.20-1.30S，等電點(diǎn)為pH4.5-4.9，為凍干粉狀。

所述的四氫嘧啶占組合物質(zhì)量比的0.1-10.0％，純度為99％-100％，為粉狀。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有如下有益效果：

1、四氫嘧啶可以保護(hù)重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，不受溫度、pH值、蛋白酶、添加劑(抑菌劑、抗氧劑等)等因素的影響而降低活性，提供了使用的穩(wěn)定性。

2、四氫嘧啶本身對(duì)新生細(xì)胞具有保護(hù)作用，和重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)口腔炎癥、潰瘍防治具有協(xié)同增效的作用。比如使?jié)兠嫘律?xì)胞不再受細(xì)菌的二次侵?jǐn)_，加快增殖。

3、本發(fā)明提供的口腔護(hù)理用品組合物采用單室多相脂質(zhì)體包裹形式，脂質(zhì)體對(duì)兩種生物制劑提供保護(hù)，滿足水劑和乳劑等不同狀態(tài)的要求，同時(shí)提高了組合物的穩(wěn)定性。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明中的重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子可由大腸桿菌、短芽孢桿菌、酵母菌基因重組技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、藻類細(xì)胞體外培養(yǎng)得到，制備方法已被現(xiàn)有技術(shù)所公開(kāi)。其濃度為100-2000mg/kg，為凍干粉狀。

本發(fā)明中的四氫嘧啶可以通過(guò)草酰乙酸或者工程菌種生物合成等方法得到，制備方法已被現(xiàn)有技術(shù)所公開(kāi)。純度為99％-100％，為粉狀。

本發(fā)明的脂質(zhì)體可以由卵磷脂、膽固醇、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂中的一種或幾種組成?？梢员ＷC耐熱超氧化物歧化酶和表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的穩(wěn)定性、生物相容性、透皮吸收和緩釋控釋效果。脂質(zhì)體可由以脫水再水化法或預(yù)制脂質(zhì)體法制備。該制備方法已被現(xiàn)有技術(shù)所公開(kāi)，且包封率相比較其他方法最高，達(dá)到65-80％

本發(fā)明的水凝劑由保濕劑和增稠劑構(gòu)成，保濕劑優(yōu)選甘油、聚乙二醇、丙二醇、山梨(糖)醇一種或多種；增稠劑優(yōu)選明膠、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、卡波姆一種或多種。

最佳實(shí)施例(口腔護(hù)理組合物凝膠劑)

上述口腔護(hù)理組合物中重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、四氫嘧啶、卵磷脂、膽固醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、甘油、聚乙二醇4000、明膠、羧甲基纖維素鈉、卡波姆980、三乙醇胺均為市售純品。其中重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子濃度為1100mg/kg，為凍干粉；四氫嘧啶純度為99.5％，為粉狀。

最佳實(shí)施例的制備方法：

將重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、四氫嘧啶、凝膠劑(聚乙二醇4000、明膠、羧甲基纖維素鈉、卡波姆980)常溫下加入甘油中攪拌(30分鐘后卡波姆體系中需加入三乙醇胺中和)形成透明凝膠，加入水繼續(xù)攪拌2小時(shí)后靜置待用。

將上述水凝膠劑、卵磷脂、膽固醇、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂通過(guò)有機(jī)溶劑溶解，制成脂質(zhì)溶液。

通過(guò)流化床將上述脂質(zhì)體溶液直接噴霧與懸浮在流化床中間的支撐劑上，揮發(fā)有機(jī)溶劑，即得重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子/四氫嘧啶水凝膠脂質(zhì)體。

本實(shí)施例所述的有機(jī)溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚和乙醇。

本實(shí)施例所述的支撐劑選自甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、氯化鈉和聚乙烯吡咯烷酮中的一種。

最佳實(shí)施例的穩(wěn)定性：

將最佳實(shí)施例D置于密閉離心管中，分別于60℃、37℃、室溫和-18℃保存6個(gè)月，定時(shí)檢測(cè)凝膠劑的外觀、失水、酸堿度及重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量。結(jié)果表明，凝膠劑幾乎沒(méi)有物理外觀改變、pH值也無(wú)變化。采用放射免疫分析法(RIA)法測(cè)定凝膠劑中重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度及活性，結(jié)果顯示濃度和制備時(shí)相同，活性為制備時(shí)的97％。

最佳實(shí)施例的臨床效果：

病例選擇

合格病例70例(男40例，女30例)，其中試驗(yàn)組35例，對(duì)照組35例。試驗(yàn)組30例中男20例，女15例，平均年齡(31.26±8.45)歲，輕型口瘡17例，潰瘍13例，皰疹性口炎5例；對(duì)照組30例中男20例，女15例，平均年齡(30.22±10.78)歲，輕型口瘡15例，潰瘍17例，皰疹性口炎3例。

試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采取隨機(jī)平行對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)組用最佳實(shí)施例D凝膠劑，用前漱口，用無(wú)菌棉簽蘸取凝膠劑適量，均勻涂抹于患處，厚度大約2mm，使用至潰瘍愈合或2周為治療終點(diǎn)；對(duì)照組用等量單純重組表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子凝膠劑，用法、用量和療程與試驗(yàn)組相同。期間禁用其他治療潰瘍的藥物。

觀察指標(biāo)

檢查潰瘍的部位、數(shù)目、大小、深度、形態(tài)及周圍粘膜情況。以所有潰瘍創(chuàng)面愈合為指標(biāo)判斷愈合時(shí)間。

結(jié)果

試驗(yàn)組潰瘍愈合時(shí)間較對(duì)照組明顯雖短，愈合例數(shù)明顯增加。

本試驗(yàn)中，均未發(fā)現(xiàn)明顯的不量反應(yīng)，未見(jiàn)局部刺激性反應(yīng)。