本發(fā)明涉及化合物Friedolanostanes的新用途，尤其涉及Friedolanostanes在制備治療慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一種全球范圍內(nèi)常見的慢性病，目前在全球死亡原因中排名第四，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2020年，COPD將在全球疾病發(fā)病中排名第五，死亡原因中排名第三。
COPD是一種不完全可逆的氣流受限特征的疾病，與肺部對(duì)有害氣體或有毒顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)，其慢性炎癥反應(yīng)遍及氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管。參與COPD的細(xì)胞有中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞被激活后釋放多種炎性介質(zhì)，如白三烯B4(LTB4)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、RANTES、Eotaxin、腫瘤壞死因子α(TNFα)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)等，參與肺實(shí)質(zhì)破壞、肺血管等炎癥反應(yīng)。病理變化特征表現(xiàn)為肺泡腔炎性細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)浸潤、小支氣管和細(xì)支氣管周圍灶性炎性細(xì)胞浸潤，肺組織邊緣肺泡腔擴(kuò)張、破壞，肺泡壁變寬，其上皮細(xì)胞腫脹、變圓、部分脫落。COPD與慢性支氣管炎和肺氣腫密切相關(guān)，但定義上有所不同，支氣管哮喘與特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，其氣流受限具可逆性(與慢性氣管炎合并時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣流受限不完全可逆)?，F(xiàn)在尚無藥物能遏制COPD病情的進(jìn)行性發(fā)展，其藥物治療的研究進(jìn)展相當(dāng)緩慢，目前臨床常常將治療哮喘的藥物用于治療COPD，由于COPD的發(fā)病機(jī)制不同于哮喘，難以取得滿意的療效。
本發(fā)明涉及的化合物Friedolanostanes是一個(gè)2014年發(fā)表(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)的新化合物，該化合物擁有全新的骨架類型(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)，對(duì)于本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備治療慢性阻塞性肺疾病藥物中的用途屬于首次公開，由于屬于全新的結(jié)構(gòu)類型，而且其對(duì)于治療慢性阻塞性肺疾病活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于慢性阻塞性肺疾病的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
長期吸煙是最常見的人類COPD致病因素，我們實(shí)驗(yàn)室用香煙誘導(dǎo)模擬小鼠COPD模型，擬研究Friedolanostanes對(duì)香煙誘導(dǎo)的小鼠COPD的緩解作用。
本發(fā)明目的在于提供化合物Friedolanostanes在制備抗COPD疾病藥物中的應(yīng)用。Friedolanostanes在劑量50、100、200mg/kg下灌胃給藥，對(duì)香煙誘導(dǎo)的COPD小鼠BALF中炎性細(xì)胞因子TNFα的生成有抑制作用；對(duì)趨化因子RANTES的分泌由抑制作用；對(duì)BALF中的炎性細(xì)胞(中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)的募集有抑制作用；對(duì)小鼠肺部病理變化有逆轉(zhuǎn)作用。
所述化合物Friedolanostanes結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示：
本發(fā)明涉及的Friedolanostanes在制備抗慢性阻塞性肺疾病藥物中的用途屬于首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對(duì)于慢性阻塞性肺疾病抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于抗慢性阻塞性肺疾病顯然具有顯著的進(jìn)步。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes的制備方法參見文獻(xiàn)(Saranyoo Klaiklay，et al.,Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia hombroniana.Phytochemistry,85(2013)161–166.)
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
實(shí)施例1：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes片劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes，加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成1000片。
實(shí)施例2：本發(fā)明所涉及化合物Friedolanostanes膠囊劑的制備：
取20克化合物Friedolanostanes，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
下面通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步說明其藥物活性。
方法：SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠，18-20g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(特布他林，10mg/kg，灌胃給藥)、藥物處理組(Friedolanostanes 5、10、20mg/kg，灌胃給藥)，每組10只。將小鼠置于4L容器內(nèi)，每日煙熏(金健牌香煙，焦油含量小于16mg)，一周五次，連續(xù)四周，每日煙熏前1小時(shí)灌胃給藥.小鼠在末次煙熏后1小時(shí)，以苯巴比妥鈉麻醉，用0.6mL預(yù)冷的PBS緩沖液(pH7.0)肺部灌流，沖洗3次，吸出支氣管肺泡灌洗液(BALF)，250×g離心10min，上清用于分析TNFα、RANTES的含量。細(xì)胞用PBS緩沖液重懸，計(jì)數(shù)，細(xì)胞涂片后用瑞氏-吉姆薩染色，分析BALF中炎性細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化。
實(shí)驗(yàn)例1：Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎癥介質(zhì)生成抑制作用
(1)Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中TNFα生成抑制作用
前炎性細(xì)胞因子TNFα是COPD的發(fā)病過程中的啟動(dòng)因子。COPD患者的TNFα水平高于正常人，培養(yǎng)的支氣管上皮細(xì)胞與香煙的煙霧接觸可分泌TNFα。TNFα可促使中性粒細(xì)胞脫顆粒，誘導(dǎo)起到粘膜細(xì)胞增生和高分泌，增加上皮細(xì)胞IL-8生成，增加巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶生成，促進(jìn)氣道高反應(yīng)性。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾霧riedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中TNFα生成的影響，結(jié)果見表1.
表1Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中TNFα生成的影響(n＝10)
與模型對(duì)照組比較，**P<0.01*P<0.05，與正常對(duì)照組比較，##P<0.01#P<0.05
結(jié)果：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下對(duì)COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠BALF中TNFα的生成。
(2)Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中RANTES分泌抑制作用
炎癥細(xì)胞的遷移受到趨化因子的調(diào)節(jié)，各種結(jié)構(gòu)細(xì)胞核炎性細(xì)胞均可分泌這些小分子蛋白，COPD發(fā)病過程中RANTES分泌增加，趨化單核/巨噬細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞，嗜酸性細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾霧riedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中RANTES分泌的影響，結(jié)果見表2。
表2Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中RANTES分泌的影響(n＝10)
與模型對(duì)照組比較，**P<0.01*P<0.05，與正常對(duì)照組比較，##P<0.01#P<0.05
結(jié)果：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下對(duì)COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠BALF中RANTES的分泌。
實(shí)驗(yàn)例2Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中炎性細(xì)胞募集的抑制作用
(1)Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中總炎性細(xì)胞募集的抑制作用
COPD以遍及氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管的慢性炎癥為特征，這種炎癥表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在肺內(nèi)增多。激活的炎癥細(xì)胞釋放一系列炎性介質(zhì)，包括LTB4、IL-8、TNFa和其他能破壞肺結(jié)構(gòu)或維持中性粒細(xì)胞炎癥的介質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾霧riedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中總炎性細(xì)胞募集的影響，結(jié)果見表3。
表3Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中總炎性細(xì)胞募集的影響(n＝10)
與模型對(duì)照組比較，**P<0.01*P<0.05，與正常對(duì)照組比較，##P<0.01#P<0.05
結(jié)果：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下對(duì)COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠BALF中總炎性細(xì)胞的募集。
(2)Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中中性粒細(xì)胞募集的抑制作用
中性粒細(xì)胞在COPD發(fā)病中具有重要作用，它可以釋放兩種絲氨酸蛋白酶，彈性蛋白酶和半胱氨酰蛋白酶-3，誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生人類肺氣腫樣的病理變化。中性粒細(xì)胞生命短暫，它循環(huán)招募到氣道以及穿越間隙腔的過程十分迅速。病理研究證明有些COPD患者支氣管組織內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目增加與氣流阻塞的程度有關(guān)。吸煙的COPD患者氣道內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)目增加，特別是那些伴有慢性支氣管炎的患者。影響COPD患者肺內(nèi)中性粒細(xì)胞募集的主要因素為IL-8趨化活性增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾霧riedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中中性粒細(xì)胞募集的影響，結(jié)果見表4。
表4Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中中性粒細(xì)胞募集的影響(n＝10)
與模型對(duì)照組比較，**P<0.01*P<0.05，與正常對(duì)照組比較，##P<0.01#P<0.05
結(jié)果：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下對(duì)COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠BALF中中性粒細(xì)胞的募集。
(3)Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中巨噬細(xì)胞募集的抑制作用
吸煙者和COPD患者肺內(nèi)巨噬細(xì)胞較正常人群水平增加，多聚集在肺泡、細(xì)支氣管和小氣道。肺泡壁巨噬細(xì)胞數(shù)目和輕中度肺氣腫以及COPD患者的小氣道疾病程度呈正相關(guān)。組織病變和損傷部位可見到COPD緩慢進(jìn)展和慢性病變與巨噬細(xì)胞長期增加平行。巨噬細(xì)胞可能通過釋放基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)致彈性組織降解能力異常增高，誘發(fā)肺氣腫的發(fā)生。
本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诳疾霧riedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中巨噬細(xì)胞募集的影響，結(jié)果見表5。
表5Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠BALF中巨噬細(xì)胞募集的影響(n＝10)
與模型對(duì)照組比較，**P<0.01*P<0.05，與正常對(duì)照組比較，##P<0.01#P<0.05
結(jié)果：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下對(duì)COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠BALF中巨噬細(xì)胞的募集。
實(shí)驗(yàn)例3Friedolanostanes對(duì)COPD小鼠肺部病理變化的逆轉(zhuǎn)作用
對(duì)小鼠肺部病理觀察可見，模型組肺泡壁變寬，肺泡壁上皮細(xì)胞腫脹，變圓，部分脫落，肺泡腔可見巨噬細(xì)胞，小支氣管和細(xì)支氣管周圍灶性炎性細(xì)胞浸潤，肺組織邊緣肺泡腔擴(kuò)張。Friedolanostanes組肺泡壁上皮細(xì)胞腫脹，肺泡腔可見少量巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞浸潤，未見淋巴細(xì)胞浸潤，小鼠肺組織未見出血。
結(jié)論：Friedolanostanes在劑量5、10、20mg/kg下灌胃給藥，對(duì)香煙誘導(dǎo)的小鼠慢性阻塞性肺淤血、炎性細(xì)胞浸潤等有一定的治療作用。