本發(fā)明涉及牛乳鐵蛋白應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種牛乳鐵蛋白及水解或酶解物在婦科藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
流行病學(xué)調(diào)查表明：女性?xún)?nèi)外陰疾患仍然是女性朋友主要的常見(jiàn)病和多發(fā)病之一。我國(guó)有關(guān)資料調(diào)查顯示，育齡婦女?huà)D科疾病發(fā)病率在70%以上。論文參考網(wǎng)同40年前相比，我國(guó)女性的卵巢癌發(fā)病率增加了33%，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率上升到15%以上。許多女性的卵巢早衰也提前了5～10年，在40～55歲的女性中，有近一半的女性提前出現(xiàn)了更年期癥狀。在大量的門(mén)疹病患的取樣檢驗(yàn)中都可檢出幾種乃至幾十種致病菌，說(shuō)明細(xì)菌和病毒是這些疾患的致病原因之一。婦科炎癥和婦女美容有著內(nèi)在的因果關(guān)系，會(huì)引起系列皮膚、形體等方面的美容問(wèn)題，比如面色蒼白或萎黃、皮膚色斑、容貌憔悴、形體消瘦或肥胖、體臭等。治療的藥物和方法林林總總確實(shí)不少，但是，由于疾患的特殊性，它要求擬選用的藥物既有廣譜的抑菌殺菌作用，又沒(méi)有合成抗生素的副作用而致患處微環(huán)境變壞，既有保護(hù)和修復(fù)粘膜的作用，又沒(méi)有不適感的。因此需要提供一種滿(mǎn)足上述要求的藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種牛乳鐵蛋白及其酶解物在婦科藥物中的應(yīng)用，由牛乳鐵蛋白及其酶解物制備的婦科藥品殺菌效果好，其而具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌以及美容養(yǎng)顏的功效。
牛乳鐵蛋白及其水解或酶解物在制備婦科藥品中的應(yīng)用，所述水解或酶解物為乳鐵素。
進(jìn)一步的，所述牛乳鐵蛋白是指從牛奶、牛初乳或者牛乳清蛋白中分離提取的具生物活性的蛋白。
進(jìn)一步的，所述牛乳鐵蛋白為從正常乳牛分泌的乳汁中提取的牛乳鐵蛋白，或者從經(jīng)注射疫苗或基因改造后的乳牛所產(chǎn)的乳汁中提取的牛乳鐵蛋白。
進(jìn)一步的，所述乳鐵素分子量在3700-5000Da之間。
進(jìn)一步的，所述治療婦科疾病藥物是指用于治療外陰潰瘍、炎癥、紅腫或者糜爛的藥物以及用于清洗陰道的藥物。
以下給出一種應(yīng)用牛乳鐵蛋白及其酶解物的婦科用品，其為泡騰片，包括如下組分：
牛乳鐵蛋白或者乳鐵素 4-10㎎
金銀花提取物 60-120㎎
蒲公英提取物 40-100㎎
碳酸氫鈉 100-500㎎
檸檬酸 60-150㎎
十二烷基硫酸鈉 2-10㎎
微晶纖維素 60-130㎎
乙醇 8-20ml
硬脂酸鎂 3-15㎎
干淀粉 200-500㎎
所述牛乳鐵蛋白為飽和度為5-8%的低鐵飽和度乳鐵蛋白。
上述泡騰片制備方法為：
（1）、將金銀花、蒲公英分別用8-10倍重量水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾濃縮至干，從而分別得到金銀花提取物、蒲公英提取物；
（2）、將低鐵飽和度乳鐵蛋白或者乳鐵素、碳酸氫鈉、檸檬酸、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、乙醇、硬脂酸鎂、干淀粉與金銀花提取物、蒲公英提取物混勻，壓片即得。
所述低鐵飽和度乳鐵蛋白的制備步驟為：
第1步，使用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂對(duì)牛乳中的乳鐵蛋白進(jìn)行吸附、解析；所述解析過(guò)程是采用二級(jí)解析，第一級(jí)解析是采用1～2.5%的鹽溶液解析，解析液是乳過(guò)氧化物酶蛋白，棄去；第二級(jí)解析是采用3.5～7%的鹽溶液解析，解析液送入第2步處理；所述的鹽溶液是指鈉鹽、鉀鹽或者鈣鹽溶液；
第2步，對(duì)第1步得到的解析液采用分離膜進(jìn)行濃縮；所述的分離膜是截留分子量在1000～30K的超濾膜；
第3步，第2步得到的濃縮液采用不溶性Fe3+螯合樹(shù)脂進(jìn)行吸附，再采用分離膜對(duì)濃縮液進(jìn)行濃縮；所述吸附操作時(shí)需要在濃縮液中加入醋酸、醋酸鹽以及枸櫞酸鹽，配制其吸附環(huán)境中枸櫞酸鹽濃度為0.1mol/L~0.5mol/L,并調(diào)節(jié)pH至5.0～6.7；所述的分離膜是截留分子量在1000～30K的超濾膜；
進(jìn)一步的，所述的第2步得到的濃縮液在送入第3步之前，可再經(jīng)過(guò)一次弱酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂的吸附、解附和超濾膜的濃縮處理；所述的弱酸型陽(yáng)離子樹(shù)脂是指CM樹(shù)脂。
所述的不溶性Fe3+螯合樹(shù)脂是指D403螯合樹(shù)脂；所述的第3步中，樹(shù)脂的吸附時(shí)間20～120分鐘，吸附時(shí)攪拌槳轉(zhuǎn)速速率為20～150rpm，吸附溫度在3～30℃。
所述第1步中，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的制備步驟為：
第1步，取10g氯乙?；郾揭蚁?二乙烯基苯微球載體PS-acyl-Cl，加入60ml四氫呋喃溶脹12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氫鈉為1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氫鈉，在于80℃下攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物倒入砂芯漏斗中，用蒸餾水洗至中性，甲醇洗濾3遍真空干燥至恒重，得到交聯(lián)EDA微球載體；
第2步，稱(chēng)60g取交聯(lián)EDA微球載體，置于三頸燒瓶中，加入二甲基甲酰胺溶脹12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸雙環(huán)戊烯基酯、K2CO3 5g、四丁基溴化銨12g，攪拌下于一定溫度的油浴中回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸餾水濾洗至中性，最后用甲醇洗濾后抽干，真空干燥至恒重，得到陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
牛乳鐵蛋白是一種天然的廣譜抗菌素，對(duì)引起婦科病患的致病菌有抑制和殺滅作用。牛乳鐵蛋白的水解或酶解物乳鐵素更具有比牛乳鐵蛋白高兩個(gè)數(shù)量級(jí)的抑菌和殺菌效果，并且能夠有效地調(diào)節(jié)腸道菌群活動(dòng)，促進(jìn)人體新陳代謝，從而調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌，減少色斑等。研究表明，牛乳鐵蛋白還有保護(hù)和修復(fù)粘膜的作用和免疫調(diào)節(jié)延緩衰老的作用等。因此選用牛乳鐵蛋白及其水解或酶解物乳鐵素做為治療婦科疾患的藥物是可取的。
本發(fā)明通過(guò)在婦科藥物中加入牛乳鐵蛋白及其酶解物乳鐵素，在婦科局部用藥中具有藥物溶解度高、起效快、療效確切等優(yōu)點(diǎn)。與栓劑相比，其溶解速度比栓劑快，吸收比栓劑好。 實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明制備的泡騰片對(duì)淋球菌、金黃色葡萄球菌、大腸肝菌、白色念珠菌、石膏樣小孢子菌能具有顯著的抑菌作用，因此對(duì)于上述病菌引起的婦科炎癥有較好的療效。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例1
一種治療婦科疾病的泡騰片，其組分如下：
低鐵飽和度乳鐵蛋白 6㎎
金銀花提取物（固形物＞80％） 100㎎
蒲公英提取物（固形物＞80％） 80㎎
碳酸氫鈉 300㎎
檸檬酸 100㎎
十二烷基硫酸鈉 4㎎
微晶纖維素 100㎎
乙醇 10ml
硬脂酸鎂 6㎎
干淀粉 294㎎。
泡騰片制備方法如下：
1、低鐵飽和度乳鐵蛋白的制備：半脫脂牛奶1890L，pH6.7，總蛋白為3.38g/L，乳鐵蛋白濃度為126mg/L，將SPC70樹(shù)脂加入攪拌罐，吸附80min，攪拌速率為60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水沖洗樹(shù)脂，加入第一級(jí)100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，攪拌轉(zhuǎn)速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二級(jí)100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，攪拌轉(zhuǎn)速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集樹(shù)脂3次。第二級(jí)的解析液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，輸送到0.1μm的微濾膜設(shè)備中進(jìn)行除菌、除雜；用30K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，取樣檢測(cè)其鐵飽和度為20%；將乳鐵蛋白濃液輸入到裝有CM樹(shù)脂罐中除去雜蛋白，收集已吸附雜蛋白后的乳鐵蛋白溶液繼續(xù)用10K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，將其中的少量濃液進(jìn)行冷凍干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.1%，總蛋白為96.3%，鐵飽和度20%；再將剩余的乳鐵蛋白濃液輸入到裝有放置D403螯合樹(shù)脂罐中進(jìn)行脫鐵，加入0.1mol/L枸櫞酸鹽，并醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)pH至6.0，加以攪拌吸附鐵離子，樹(shù)脂吸附時(shí)間120分鐘，攪拌槳轉(zhuǎn)速速率60rpm。收集以吸附鐵離子后的乳鐵蛋白溶液繼續(xù)用10K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，收集濃液進(jìn)行冷凍干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，總蛋白為96.3%，鐵飽和度7%。
2、提取物的制備：將金銀花、蒲公英分別用8-10倍重量水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾濃縮至干，從而分別得到金銀花提取物、蒲公英提取物。
3、將其余物質(zhì)加入低鐵飽和度乳鐵蛋白和提取物中，混勻，壓片。
實(shí)施例2
一種治療婦科疾病的泡騰片，其組分如下：
低鐵飽和度乳鐵蛋白 9㎎
金銀花提取物 （固形物＞80％） 90㎎
蒲公英提取物 （固形物＞80％） 90㎎
碳酸氫鈉 280㎎
檸檬酸 110㎎
十二烷基硫酸鈉 7㎎
微晶纖維素 110㎎
乙醇 15ml
硬脂酸鎂 9㎎
干淀粉 280㎎
泡騰片制備方法如下：
1、低鐵飽和度乳鐵蛋白的制備：半脫脂牛奶1890L，pH6.7，總蛋白為3.38g/L，乳鐵蛋白濃度為126mg/L，將SPC70樹(shù)脂加入攪拌罐，吸附80min，攪拌速率為60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水沖洗樹(shù)脂，加入第一級(jí)100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，攪拌轉(zhuǎn)速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二級(jí)100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，攪拌轉(zhuǎn)速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集樹(shù)脂3次。第二級(jí)的解析液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，輸送到0.1μm的微濾膜設(shè)備中進(jìn)行除菌、除雜；用30K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，取樣檢測(cè)其鐵飽和度為20%；將乳鐵蛋白濃液輸入到裝有CM樹(shù)脂罐中除去雜蛋白，收集已吸附雜蛋白后的乳鐵蛋白溶液繼續(xù)用10K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，將其中的少量濃液進(jìn)行冷凍干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.1%，總蛋白為96.3%，鐵飽和度20%；再將剩余的乳鐵蛋白濃液輸入到裝有放置D403螯合樹(shù)脂罐中進(jìn)行脫鐵，加入0.1mol/L枸櫞酸鹽，并醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)pH至6.0，加以攪拌吸附鐵離子，樹(shù)脂吸附時(shí)間120分鐘，攪拌槳轉(zhuǎn)速速率60rpm。收集以吸附鐵離子后的乳鐵蛋白溶液繼續(xù)用10K分子截留量的超濾膜設(shè)備進(jìn)行脫鹽濃縮，收集濃液進(jìn)行冷凍干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，總蛋白為96.3%，鐵飽和度7%。
2、提取物的制備：將金銀花、蒲公英分別用8-10倍重量水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾濃縮至干，從而分別得到金銀花提取物、蒲公英提取物。
3、將其余物質(zhì)加入低鐵飽和度乳鐵蛋白和提取物中，混勻，壓片。
實(shí)施例3
一種治療婦科疾病的泡騰片，其組分如下：
牛乳鐵蛋白或者乳鐵素 4㎎
金銀花提取物（固形物＞80％） 60㎎
蒲公英提取物（固形物＞80％） 50㎎
碳酸氫鈉 120㎎
檸檬酸 80㎎
十二烷基硫酸鈉 4㎎
微晶纖維素 70㎎
乙醇 10ml
硬脂酸鎂 5㎎
干淀粉 200㎎
泡騰片制備方法如下：
1、與實(shí)施例2一致，區(qū)別僅僅在于，將其中的SPC70樹(shù)脂替換為通過(guò)如下的方法制備得到陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：
第1步，取10g氯乙?；郾揭蚁?二乙烯基苯微球載體(PS-acyl-Cl)，加入60ml四氫呋喃溶脹12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比(PS-acyl-Cl)：乙二胺（EDA）：碳酸氫鈉為1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氫鈉，在于80℃下攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物倒入砂芯漏斗中，用蒸餾水洗至中性，甲醇洗濾3遍真空干燥至恒重，得到交聯(lián)EDA微球載體；
第2步，稱(chēng)60g取交聯(lián)EDA微球載體，置于三頸燒瓶中，加入二甲基甲酰胺溶脹12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺(NBMA)3g、丙烯酸雙環(huán)戊烯基酯（DCPA）、K2CO3 5g、四丁基溴化銨（TBAB） 12g，攪拌下于一定溫度的油浴中回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸餾水濾洗至中性，最后用甲醇洗濾后抽干，真空干燥至恒重，得到陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
最終得到的低鐵飽和度乳鐵蛋白的技術(shù)指標(biāo)為：粉末含水量3.0%，灰分1.0%，總蛋白為96.8%，鐵飽和度6%。
2、與實(shí)施例2一致。
3、與實(shí)施例2一致。
實(shí)施例4
一種治療婦科疾病的泡騰片，其組分如下：
乳鐵素 5㎎
金銀花提取物 （固形物＞80％） 110㎎
蒲公英提取物（固形物＞80％） 90㎎
碳酸氫鈉 400㎎
檸檬酸 150㎎
十二烷基硫酸鈉 9㎎
微晶纖維素 120㎎
乙醇 18ml
硬脂酸鎂 14㎎
干淀粉 450㎎
泡騰片制備方法如下：同與實(shí)施例2一致。
上述實(shí)施例中的泡騰片藥效學(xué)試驗(yàn) ：
一、本制劑的抗炎作用
1、實(shí)驗(yàn)材料
1.1 藥物 ：本制劑(以下實(shí)驗(yàn)的本制劑均為本實(shí)施例2所得制劑) ；潔爾陰 ：中外合資成都恩威世享制藥有限公司生產(chǎn) ；二甲苯 ：北京化五廠生產(chǎn)
1.2 動(dòng)物 ：特種獺兔 購(gòu)買(mǎi)自濟(jì)南金豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。
2、實(shí)驗(yàn)方法：
取健康雄性種兔36 只，體重 700-800g，隨機(jī)分為 3 組 ：生理鹽水組、潔爾陰組、本制劑組。
用二甲苯 0.03ml/ 只，涂于種兔右耳殼前后兩面致炎，30 分鐘后右耳殼再分別涂以生理鹽水、潔爾陰和本制劑 (20％溶液；3ml/kg)，隔 2 小時(shí)后脫頸椎處死，每兔剪下左右兩耳廓，用直徑 7mm 打孔器在雙耳對(duì)稱(chēng)處取下兩耳片，用分析天平稱(chēng)重，以右耳片減去左耳片重為右耳腫脹重度，并分別計(jì)算腫脹抑制率，各藥物組與對(duì)照組比較，結(jié)果見(jiàn)表1：
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本制劑組、陽(yáng)性藥物潔爾陰對(duì)照組，對(duì)二甲苯誘致種兔耳廓的腫脹有明顯抑制作用，與對(duì)照組比較差異有顯著性 (P<0.05)。
二、本制劑的抑菌作用實(shí)驗(yàn)
(一)藥物
樣品 ：本制劑按實(shí)施例 1 為本發(fā)明所述之泡騰片、以四種不同濃度進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，濃度分別為 ：1 號(hào) ：5％、2 號(hào) ：10％、3 號(hào) 15％、4 號(hào)20％；潔爾陰 ( 對(duì)照用 )。
以上藥物均用原濃度作抑菌實(shí)驗(yàn)。
(二)實(shí)驗(yàn)菌種
淋球菌新分菌株 P-528-1 以及本教研室保藏的金黃色葡萄球菌、大腸肝菌、白色念珠菌、石膏樣小孢子菌共五種。
(三)實(shí)驗(yàn)方法
采用管碟法，紙片法同時(shí)進(jìn)行。即將上述五種細(xì)菌分別密集劃線接種至相應(yīng)的平板培養(yǎng)基上，然后在每個(gè)培養(yǎng)平板上置放兩個(gè)無(wú)菌鋼質(zhì)牛津杯，在牛津杯中分別加入上述藥物懸液 0.2ml 同時(shí)用紙片 ( 直徑 6mm 高壓滅菌后備用 ) 浸透同一濃度藥液貼于平板上，細(xì)菌培養(yǎng)置 37℃ 24-48 小時(shí)觀察結(jié)果 ；真菌培養(yǎng)置 25℃一周觀察結(jié)果。
(四)結(jié)果
測(cè)量牛津杯及紙片周?chē)幬镆志睆?(mm)，結(jié)果見(jiàn)表 2。
結(jié)論
經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷分析，本制劑 1-4 號(hào)樣品對(duì)淋球菌、金黃色葡萄球菌、大腸肝菌、白色念珠菌、石膏樣小孢子菌的抑菌作用除 1 號(hào)樣品外，均優(yōu)于潔爾陰。
三、各實(shí)施例實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較
結(jié)論
經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷分析，本實(shí)施例四優(yōu)于實(shí)施例一、二、三。