本發(fā)明涉及芎梔中藥口服制劑及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)。

背景技術(shù)：

據(jù)2002年衛(wèi)生部組織的全國(guó)居民27萬(wàn)人營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查資料顯示，我國(guó)年齡>60歲老年人群高血壓的患病率為49％。即約每2位老年人中就有1例高血壓。高血壓的知曉率、治療率和控制率是高血壓流行病和防治研究的重要參數(shù)。盡管許多試驗(yàn)結(jié)果顯示，老年人高血壓能從降壓治療中獲益，但其治療率及控制率均較低。隨著年齡增長(zhǎng)，接受降壓治療的高血壓患者血壓控制率下降。在年齡<60歲、60一79歲和≥80歲的人群中，血壓控制正常率分別為38％、28％和23％。而在我國(guó)僅32.2％的老年高血壓患者接受治療，控制率儀為7.6％。

高血壓是心血管疾病最重要的危險(xiǎn)因素，老年高血壓患者較年輕人發(fā)生心腦血管事件的危險(xiǎn)性明顯升高，我國(guó)2003年第3次國(guó)家衛(wèi)生服務(wù)調(diào)查顯示，我國(guó)高血壓的直接疾病負(fù)擔(dān)201.5億人民幣，由高血壓造成冠心病和腦卒中的直接經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)達(dá)190.8億元人民幣。因此老年高血壓防治是我們迫切需要解決的問(wèn)題。

目前上市的一些老年高血壓的中藥復(fù)方制劑，有些屬于治標(biāo)不治本，有些使用價(jià)格昂貴的成分，有些在開發(fā)過(guò)程中由于療效不確切而中斷開發(fā)。

本發(fā)明的目的根據(jù)祖國(guó)中醫(yī)中藥理論，研發(fā)了一種針對(duì)老年高血壓動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展變化的有效治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種芎梔口服制劑，由以下重量配比的中藥原料藥制備而成：

優(yōu)選的本發(fā)明所述的口服制劑，由以下重量配比的中藥原料藥制備而成：

另一優(yōu)選的本發(fā)明所述的口服制劑，由以下重量配比的中藥原料藥制備而成：

以上配比的中藥原料，重量是以藥材量計(jì)算的，藥材經(jīng)過(guò)提煉加工制成可制成藥物制劑。

以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖或瘦小的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過(guò)一倍，藥效不變。

以上組成中的單味中藥，尤其是臣藥和佐藥，也可以被適當(dāng)?shù)木哂邢嗤幮缘闹兴幪鎿Q，替換后的中藥制劑其藥物作用不變。

本發(fā)明的口服制劑，是通過(guò)將上述配方組成的中藥原料經(jīng)過(guò)提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該物質(zhì)為原料，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的。所述活性物質(zhì)可以通過(guò)分別提取中藥原料得到，也可以通過(guò)共同提取中藥原料得到，也可以通過(guò)其他方式得到，如：通過(guò)粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過(guò)篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、層析等方法得到、這些活性物質(zhì)可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根據(jù)制劑的不同需要決定制成不同的濃度。

本發(fā)明的口服制劑中的藥物活性物質(zhì)，其在制劑中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋等。

本發(fā)明的口服制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括：片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、混懸劑、粉劑、滴劑、滴丸劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是口服劑型，如：膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑等。

本發(fā)明的口服制劑，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤(rùn)劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。

適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤(rùn)滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉。

可通過(guò)混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中。

口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。

本發(fā)明的口服制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自：甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β－環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種本發(fā)明的口服制劑的制備方法。

發(fā)明的口服制劑雖然可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的任何一種方法進(jìn)行加工提取制備，但作為嚴(yán)格的研究者，本發(fā)明人在對(duì)工藝進(jìn)行了篩選后，發(fā)現(xiàn)以下工藝特別適合本發(fā)明的口服制劑，而且效果優(yōu)異。

本方的制備方法，步驟如下：

川芎的提取

取川芎飲片，稍粉碎，用95％乙醇于索氏回流提取裝置中回流提取9小時(shí)。溶媒用量為8～10倍。提取液用布氏抽濾器抽濾，抽濾液減壓濃縮至干，再加適量水，加熱使溶解，抽濾，濾液回到已處理好的大孔樹脂柱(干膏和樹脂的比例為1：15～1：20)上，控制加樣流速為3秒/滴，慢慢滴加完后，先用水洗，(1～2秒/滴)洗至還原糖反應(yīng)呈陰性，(1ml水洗脫液加入甲基萘酚0.5％試液2～3滴。沿試管壁緩緩加入0.5ml濃硫酸，陰性為二界面處出現(xiàn)棕色環(huán))約用30％乙醇洗脫至無(wú)色，合并30％乙醇洗脫液減壓回收乙醇，冷卻后用乙醚萃取，醚提取液用1N硫酸溶液萃取，酸液經(jīng)飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9～10。用氯仿提取，提取液減壓回收氯仿至干，得到總生物堿。取總生物堿石油醚溶解部分，減壓蒸發(fā)石油醚，得橙黃的膏狀物，上堿性AL2O3柱，層析分離，石油醚－氯仿(8∶2)的洗脫部分，減壓濃縮，經(jīng)升華結(jié)晶得無(wú)色的針狀結(jié)晶，備用。

梔子的提取

取梔子果實(shí)粗粉，加乙醇乙酯回流提取5h，趁熱抽慮后，冷卻，用水萃取，收集水相，減壓干燥得到粘稠狀濃縮物，備用。

決明子的提取

取決明子粗粉，用水提取三次，第一次8倍量水(1.5小時(shí))，第二次6倍量水(1小時(shí))，第三次6倍量水(45分)，過(guò)濾，合并提取液，放冷，經(jīng)wld樹脂吸附。先用水沖洗至近無(wú)色，再用70％的乙醇沖洗至近無(wú)色，回收乙醇，濃縮，干燥，備用。

杜仲的提取

取杜仲葉干粉，水浴加熱，乙醇回流提??；提取液經(jīng)粗濾，于60℃減壓濃縮，回收乙醇；加蒸餾水，攪拌后靜置2h，超濾,取上清液，濃縮干燥，備用；

隨后，以上述四種提取物為藥物活性成分，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成本發(fā)明口服制劑。

本發(fā)明口服制劑，經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，具有補(bǔ)腎活血，化濁通脈之功效。用于高血壓患者肝腎虧虛，痰濁瘀阻之證。癥見頭暈頭脹，頭昏蒙，腰膝酸軟，肢體麻木，身體重著等癥，舌暗苔膩，脈沉細(xì)或弦滑或澀。本發(fā)明口服制劑，還能增加機(jī)體抵抗力，提高免疫力，具有扶正祛邪之功。

以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的有益效果：

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)資料：

1 一般情況

實(shí)驗(yàn)藥物采用本發(fā)明實(shí)施例1的芎梔膠囊(實(shí)驗(yàn)中稱為芎梔組)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除空白對(duì)照組外，其他各組兔均因進(jìn)食高脂飼料存在不同程度的食欲不振、飲食量減少、腹瀉等不適，以實(shí)驗(yàn)中期最頻繁、嚴(yán)重。造模及給藥第15周末,因腹瀉(腸炎)及腹脹(腸梗阻)共死亡兔9只,分別是空白對(duì)照組2只,芎梔小劑量組4只,芎梔中劑量組、芎梔大劑量組及辛伐他汀組各1只。并于12周末提前處死模型組兔1只查看AS斑塊形成情況。最終剩余兔空白對(duì)照組8只,模型組9只,芎梔小劑量組6只,芎梔中劑量組9只,芎梔大劑量組9只,辛伐他汀組9只。

2 芎梔膠囊對(duì)各組AS兔斑塊形成的大體病理觀察

造模及給藥15周后,各組兔主動(dòng)脈壁病理形態(tài)各不相同,對(duì)比如圖1?？瞻讓?duì)照組兔主動(dòng)脈管壁光滑,未見脂質(zhì)沉積病變；模型組兔主動(dòng)脈管壁可見明顯脂質(zhì)條紋形成,斑塊滿布整個(gè)管壁；芎梔小劑量組兔主動(dòng)脈管壁也可見明顯斑塊,但較模型組范圍小,斑塊多集中于管壁兩端；芎梔中劑量組兔動(dòng)脈管壁兩端可見散在斑塊形成；芎梔大劑量及辛伐他汀組兔見動(dòng)脈管壁散在脂斑,范圍很小。結(jié)果提示芎梔膠囊及辛伐他汀能夠減輕高脂喂養(yǎng)兔AS斑塊的形成。

3 各組AS兔血管斑塊病理形態(tài)結(jié)構(gòu)的比較

HE染色后100倍光學(xué)顯微鏡下見各組AS兔形成斑塊結(jié)構(gòu)形態(tài)如圖2:空白對(duì)照組平滑肌細(xì)胞排列整齊、緊密有序,內(nèi)皮細(xì)胞層連續(xù),內(nèi)皮下未見脂質(zhì)沉積；模型組內(nèi)皮層脫落,管壁內(nèi)滿布斑塊,內(nèi)彈力板尚完整,內(nèi)膜增生嚴(yán)重,可見大量泡沫細(xì)胞,中外膜不規(guī)則增厚,可見泡沫細(xì)胞浸潤(rùn)；芎梔小劑量組見明顯斑塊,但厚度較模型組變薄,中外膜增厚,未見典型泡沫細(xì)胞浸潤(rùn)；芎梔中劑量組見內(nèi)皮細(xì)胞尚連續(xù),斑塊厚度明顯減小,內(nèi)膜下見脂質(zhì)沉積,中膜層彈力纖維排列較模型組及小劑量組整齊；芎梔大劑量及辛伐他汀組管壁內(nèi)皮細(xì)胞尚連續(xù),見散在薄斑塊,內(nèi)膜下少量泡沫細(xì)胞沉積,中外膜與對(duì)照組厚度相當(dāng),較模型組薄。HE染色結(jié)果顯示芎梔膠囊能夠減少斑塊形成,抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖重構(gòu)。

4 各組AS兔斑塊脂質(zhì)沉積的病理學(xué)變化比較

油紅O為脂溶性染料,在脂肪內(nèi)能高度溶解,可特異性的使組織內(nèi)甘油三酯等中性脂肪著色,故染色后斑塊內(nèi)的脂肪顆粒著色為紅色。冷凍切片后各組兔主動(dòng)脈標(biāo)本經(jīng)油紅O染色后結(jié)果如圖3?？瞻讓?duì)照組兔動(dòng)脈管壁未見脂質(zhì)沉積；模型組見明顯斑塊,內(nèi)有大量脂質(zhì)沉積；芎梔小劑量組平滑肌細(xì)胞外有斑塊形成,但脂質(zhì)沉積較模型組減少；芎梔中劑量組斑塊較模型組明顯減少,內(nèi)有脂質(zhì)沉積；芎梔大劑量組見散在斑塊形成,內(nèi)有少量脂質(zhì)沉積；辛伐他汀組未見明顯斑塊,內(nèi)皮下見少量脂質(zhì)沉積。結(jié)果提示,芎梔膠囊能夠減少脂質(zhì)在內(nèi)皮下的沉積,減少泡沫細(xì)胞的形成。

5.芎梔膠囊對(duì)AS兔血管平滑肌細(xì)胞TC及FC的影響

采用ELISA試劑盒直接測(cè)定血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的TC及FC，因各組織研磨后取得的樣本濃度不一致,同時(shí)測(cè)定各樣本蛋白濃度進(jìn)行校準(zhǔn),取各樣本測(cè)定的TC及FC值與蛋白濃度相比得出最終結(jié)果,各組兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)的TC及FC含量如圖4及表9。15周末模型組兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)TC明顯升高,與空白對(duì)照組相比有顯著性差異(P＝0.006,P<0.01)；FC呈現(xiàn)相同的趨勢(shì)(模型組與空白對(duì)照組比較P＝0.008,P<0.01)。各治療組較模型組相比細(xì)胞內(nèi)的TC及FC均有不同程度的降低。芎梔小劑量組及辛伐他汀組TC有減少趨勢(shì),但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.145；P＝0.065,P>0.05)；芎梔中劑量組較模型組細(xì)胞內(nèi)TC明顯減少(P＝0.035,P<0.05),芎梔大劑量組降低效果更加明顯(P＝0.004,P<0.01)。FC結(jié)果顯示藥物治療效果更加顯著,芎梔小劑量組較模型組FC即有明顯減少(P＝0.024,P<0.05)；芎梔中劑量組、大劑量組(P＝0.001,P<0.01)及辛伐他汀組FC水平則有更明顯的降低(P＝0.006,P<0.01)。

表1 各組兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)TC/FC含量比較(單位:mmol/l)

注:與空白對(duì)照組比△△P<0.01；與模型組比▲P<0.05,▲▲P<0.01。

6.各組兔動(dòng)脈管壁cav-1/親環(huán)素A蛋白表達(dá)水平比較

各組兔動(dòng)脈壁蛋白WB結(jié)果如圖5,通過(guò)軟件分析目標(biāo)條帶及內(nèi)參蛋白β-actin灰度值,做相對(duì)定量分析,由圖可知目標(biāo)蛋白特異性良好。

正常組織豐富表達(dá)cav-1,AS模型兔表達(dá)量明顯下降(P＝0.001,P<0.01),與模型組相比,芎梔中、大劑量組cav-1表達(dá)增加(P＝0.022<0.05,P＝0.002<0.01),辛伐他汀組及芎梔小劑量組與模型組相比cav-1表達(dá)也有增加趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＝0.063,P＝0.179)，見圖6、表2?？瞻讓?duì)照組正常表達(dá)親環(huán)素A,AS模型組兔表達(dá)量較對(duì)照組明顯增加(P＝0.013,P<0.05),芎梔中、大劑量組及辛伐他汀組較模型組親環(huán)素A表達(dá)減少(P＝0.017<0.05,P＝0.006,0.000<0.01)見圖7、表2。

7.各組兔動(dòng)脈管壁cav-1/親環(huán)素A基因轉(zhuǎn)錄水平比較

根據(jù)real-time PCR結(jié)果繪制基因擴(kuò)增曲線及熔解曲線峰值基本一致,擴(kuò)增產(chǎn)物特異性高。根據(jù)Ct值,以對(duì)照組為1,使用2-ΔΔCt方法計(jì)算各組基因的相對(duì)表達(dá)量(表2)。與對(duì)照組相比,模型組cav-1mRNA表達(dá)量明顯下降(P＝0.001,P<0.01),辛伐他汀組及芎梔大劑量組較模型組增加(P＝0.014,P<0.05；P＝0.001,P<0.01),如圖6。模型組兔親環(huán)素A mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比有下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.884,P>0.05)；芎梔大劑量組及辛伐他汀組較模型組相比明顯增加(P＝0.003,P＝0.004<0.01),余治療組較模型組無(wú)明顯差異,如圖7。

表2 各組兔動(dòng)脈管壁cav-1及親環(huán)素A蛋白水平及mRNA表達(dá)量比較

注:與空白對(duì)照組比△P<0.05,△△P<0.01；與模型組比▲P<0.05,▲▲P<0.01。

8.芎梔膠囊對(duì)AS兔肝臟LXRα蛋白表達(dá)及LXRαmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響

采用檢測(cè)試劑盒在酶標(biāo)儀上直接測(cè)定LXRα蛋白濃度(單位:ng/ml),用于統(tǒng)計(jì)。LXRαmRNA轉(zhuǎn)錄水平如實(shí)驗(yàn)二中,以空白對(duì)照組為1,進(jìn)行相對(duì)定量比較。如表3 顯示,檢測(cè)結(jié)果為空白對(duì)照組兔肝臟組織正常表達(dá)LXRα,AS模型兔表達(dá)量較空白對(duì)照組略下降(P＝0.798,P>0.05),但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與模型組相比芎梔大劑量組表達(dá)增加(P＝0.005,P<0.01),余治療組與模型組相比表達(dá)有增加趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見圖8。與空白對(duì)照組相比,模型組LXRαmRNA表達(dá)量明顯增加(P＝0.000,P<0.01),各治療組較模型組無(wú)明顯差異(P>0.05)如圖9。

表3 各組AS兔肝臟LXRα及LXRαmRNA水平比較

注:與空白對(duì)照組比△△P<0.01；與模型組比▲▲P<0.01。

9.芎梔膠囊對(duì)AS兔肝臟SR-BⅠ蛋白表達(dá)及mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響

WB結(jié)果顯示(如圖10),模型組與空白對(duì)照組兔相比肝臟SR-BⅠ蛋白表達(dá)量有減少趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.281,P>0.05)。相比與模型組芎梔膠囊各治療組蛋白表達(dá)量有增多趨勢(shì),但仍無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。辛伐他汀組兔與模型組相比,SR-BⅠ蛋白表達(dá)量增多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.049,P<0.05),但與芎梔大劑量組相比表達(dá)量無(wú)明顯差異?；驒z測(cè)結(jié)果顯示,設(shè)定空白對(duì)照組兔肝臟組織表達(dá)SR-BⅠmRNA水平為1,AS模型兔表達(dá)量較空白對(duì)照組明顯增加(P＝0.021,P<0.05)。各給藥組與模型組相比,基因轉(zhuǎn)錄水平無(wú)明顯增多(P>0.05)。但芎梔中劑量組、芎梔大劑量組及辛伐他汀組兔SR-BⅠ基因轉(zhuǎn)錄水平有升高趨勢(shì),且大劑量組較中劑量組更加明顯,如圖11,表4。

表4 各組AS兔肝臟SR-BⅠ及SR-BⅠmRNA水平比較

注:與空白對(duì)照組比△P<0.05；與模型組比▲P<0.05。

10.芎梔膠囊對(duì)AS兔血漿白介素-2及TNF-α水平的影響

對(duì)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量的白介素-2(interleukin-2,IL-2)及TNF-α采用重復(fù)測(cè)量方差分析。不同時(shí)間段IL-2存在差異(F＝50.526,P＝0.000,P<0.01),造模及用藥時(shí)間與治療方法之間存在交互作用(F＝7.214,P＝0.000,P<0.01),不同治療方法間IL-2水平存在差異(F＝2.875,P＝0.023,P<0.05)。組間兩兩比較結(jié)果示模型組與空白對(duì)照組相比IL-2水平增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.790,P>0.05)；與模型組相比,芎梔中、大劑量組及辛伐他汀組兔血漿IL-2水平均明顯降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＝0.004<0.01,P＝0.026、P＝0.013,P<0.05),見圖12、表5。

表5 AS兔各時(shí)間段血漿白IL-2濃度(單位:pg/ml)

不同測(cè)量時(shí)間點(diǎn)各組兔TNF-α水平存在差異(F＝79.099,P＝0.000,P<0.01)。造模及給藥時(shí)間與治療方法間存在交互作用(F＝2.276,P＝0.006,P<0.01)。各組間TNF-α水平存在差異(F＝5.803,P＝0.000,P<0.01),組間兩兩比較示模型組兔TNF-α水平較空白對(duì)照組高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.120,P>0.05),芎梔中、大劑量組及辛伐他汀組較模型組兔TNF-α水平明顯降低(P＝0.032,P＝0.013,P＝0.049,P<0.05),各時(shí)間點(diǎn)各組兔血漿TNF-α均值見圖13、表6。

表6 AS兔各時(shí)間段血漿TNF-α濃度(單位:pg/ml)

11.芎梔膠囊對(duì)AS兔主動(dòng)脈NF-κBp65蛋白水平影響

11.1兔NF-κB蛋白量化學(xué)發(fā)光圖結(jié)果如圖14、15、16。

看圖可初步判斷模型組比空白對(duì)照組NF-κBp65蛋白表達(dá)量增多,各給藥組相比模型組表達(dá)量減少明顯,使用Gelpro32軟件分析上圖,根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照蛋白值得出每個(gè)樣本的IOD值,進(jìn)行定量分析(見表7、圖17)。

11.2相對(duì)定量后比較各組兔NF-κBp65蛋白表達(dá)量

模型組與空白對(duì)照組兔相比,主動(dòng)脈NF-κBp65表達(dá)量增多,但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.169,P>0.05),各給藥組與模型組相比蛋白表達(dá)量減少,其中芎梔大劑量組(P＝0.035,P<0.05)、辛伐他汀組(P＝0.001,P<0.01)與模型組相比下降更明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且辛伐他汀組表達(dá)量更低。

12.各組兔主動(dòng)脈NF-κBmRNA表達(dá)水平比較

Real-timePCR結(jié)果示模型組NF-κBmRNA表達(dá)與空白對(duì)照組相比略有減少,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.893,P>0.05)。芎梔大劑量組表達(dá)量較模型組增加(P＝0.031,P<0.05),各給藥組基因表達(dá)量與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P>0.05),如表7、圖18。

表7 各組兔動(dòng)脈壁NF-κB及其mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

注:與模型組比▲P<0.05,▲▲P<0.01。

13.芎梔膠囊對(duì)AS兔血漿PON1及MPO水平的影響

如圖19、20及表8,各治療組兔PON1水平無(wú)明顯差異(P>0.05),模型組兔與空白對(duì)照組兔血漿PON1亦無(wú)差異(P＝0.697,P>0.05)。模型組兔血漿MPO水平與空白對(duì)照組相比明顯升高(P＝0.025,P<0.05),各治療組兔較模型組相比血漿MPO水平均有一定程度的下降。其中芎梔中劑量組及大劑量組、辛伐他汀組下降更為明顯,與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.028,P＝0.013,P<0.05；P＝0.004,P<0.01),芎梔中、大劑量組與辛伐他汀組比較無(wú)差異(P>0.05)。

表8.各組兔血漿PON1及MPO水平比較 (單位:ng/ml)

注:與空白對(duì)照組比△P<0.05；與模型組比▲P<0.05,▲▲P<0.01。

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，可以得到以下結(jié)果：

研究顯示：芎梔膠囊能夠抑制AS兔主動(dòng)脈斑塊形成,減少動(dòng)脈壁細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。

研究顯示：.芎梔膠囊能夠通過(guò)保護(hù)AS兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)cav-1蛋白表達(dá),增加主動(dòng)脈細(xì)胞內(nèi)膽固醇跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,從而減少主動(dòng)脈細(xì)胞內(nèi)TC及FC含量，起到抗AS作用。

研究顯示：芎梔膠囊能夠促進(jìn)AS兔肝臟表達(dá)LXRα,促進(jìn)肝臟內(nèi)膽固醇代謝,推動(dòng)RCT過(guò)程,其對(duì)SR-BⅠ促進(jìn)作用不明顯。

研究顯示，芎梔膠囊能夠降低AS兔血漿IL-2、TNF-α水平,降低主動(dòng)脈細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65的活性水平,抑制AS中的炎癥反應(yīng)。

研究顯示，芎梔膠囊能夠降低AS兔血漿中MPO水平,保護(hù)HDL抗炎功能,維持其正常運(yùn)載脂質(zhì)的作用,其對(duì)血漿PON1水平作用不明顯。

以上實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果說(shuō)明芎梔膠囊治療老年高血壓是通過(guò)多種作用途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的，并且藥物安全可靠，各組分相互間具有協(xié)同增效作用。

附圖說(shuō)明

圖1.各組兔主動(dòng)脈AS病變大體樣本比較

1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組 6.辛伐他汀組

圖2.各組兔主動(dòng)脈AS的HE染色比較(×100)

1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組 6.辛伐他汀組

箭頭所示為動(dòng)脈管壁斑塊,其長(zhǎng)度與斑塊厚度相關(guān)。

圖3.各組兔主動(dòng)脈AS油紅O染色比較(×100)

1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組 6.辛伐他汀組

箭頭所示為動(dòng)脈管壁斑塊,其長(zhǎng)度與斑塊厚度相關(guān)。

圖4各組兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)/游離膽固醇(FC)含量(單位:mmol/l)

注:▲▲與空白對(duì)照組比P<0.01；與模型組比P<0.05,P<0.01。

圖5.各組間cav-1/親環(huán)素A蛋白表達(dá)(WB)

A 空白對(duì)照組；B模型組；C芎梔小劑量組；D芎梔中劑量組；E芎梔大劑量組；F辛伐他汀組，

圖6.各組間cav-1/cav-1mRNA表達(dá)量比較

注:▲與空白對(duì)照組比P<0.05；與模型組比P<0.05,P<0.01。

圖7.各組間親環(huán)素A/親環(huán)素A mRNA表達(dá)量比較

注:▲與空白對(duì)照組比P<0.05；與模型組比P<0.05,P<0.01。

注:與空白對(duì)照組比△P<0.05,△△P<0.01；與模型組比▲P<0.05,▲▲P<0.01。

圖8各組AS兔肝臟LXRα水平比較(單位:ng/ml)

注:與模型組比P<0.01。

圖9各組AS兔肝臟LXRαmRNA水平比較

注:▲▲與空白對(duì)照組比P<0.01。

圖10.各組間肝臟SR-BⅠ蛋白表達(dá)(WB)

A 空白對(duì)照組；B模型組；C芎梔小劑量組；D芎梔中劑量組；E芎梔大劑量組；F辛伐他汀組

圖11各組AS兔肝臟SR-BⅠ及SR-BⅠmRNA水平比較

注:▲與空白對(duì)照組比P<0.05,與模型組比P<0.05。

圖12.不同時(shí)間段各組兔IL-2均值水平圖。

注:1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組

6.辛伐他汀組

圖13.不同時(shí)間段各組兔TNF-α均值水平圖。

注:1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組

6.辛伐他汀組

圖14.NF-κBp65蛋白表達(dá)(1)

各泳道對(duì)應(yīng)樣本:泳道A陽(yáng)性對(duì)照6789.5,泳道B陰性對(duì)照,泳道C冷探針競(jìng)爭(zhēng)泳道1-23目的基因 1.空白對(duì)照組 2.模型組 3.芎梔小劑量組

圖15.NF-κBp65蛋白表達(dá)(2)

各泳道對(duì)應(yīng)樣本:泳道A陽(yáng)性對(duì)照6654.43,泳道B陰性對(duì)照,泳道C冷探針競(jìng)爭(zhēng)泳道1-18目的基因 4.芎梔中劑量組 5.芎梔大劑量組

圖16.NF-κBp65蛋白表達(dá)(3)

各泳道對(duì)應(yīng)樣本:泳道A陽(yáng)性對(duì)照 4998.2,泳道B陰性對(duì)照,泳道C冷探針競(jìng)爭(zhēng)泳道1-9目的基因 6.辛伐他汀組

圖17.各組AS兔NF-κBp65蛋白水平比較

注:與模型組比P<0.05,P<0.01。

圖18.各組AS兔NF-κBmRNA轉(zhuǎn)錄水平比較

注:與模型組比P<0.05

圖19.各組兔血漿PON1水平

圖20.各組兔血漿MPO水平

注:▲與空白對(duì)照組比P<0.05；與模型組比P<0.05,P<0.01。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不限于下列實(shí)施例：

實(shí)施例1

一種中藥膠囊劑，由四種中藥材川芎，梔子，決明子，杜仲，制備而成，其組分配比(重量份)以生藥計(jì)：川芎，梔子，決明子，杜仲，＝30％:20％:30％:20％制備方法如下：

取川芎飲片，稍粉碎，用95％乙醇于索氏回流提取裝置中回流提取9小時(shí)。溶媒用量為8～10倍。提取液用布氏抽濾器抽濾，抽濾液減壓濃縮至干，再加適量水，加熱使溶解，抽濾，濾液回到已處理好的大孔樹脂柱(干膏和樹脂的比例為1：15～1：20)上，控制加樣流速為3秒/滴，慢慢滴加完后，先用水洗，(1～2秒/滴)洗至還原糖反應(yīng)呈陰性，(1ml水洗脫液加入甲基萘酚0.5％試液2～3滴。沿試管壁緩緩加入0.5ml濃硫酸，陰性為二界面處出現(xiàn)棕色環(huán))約用30％乙醇洗脫至無(wú)色，合并30％乙醇洗脫液減壓回收乙醇，冷卻后用乙醚萃取，醚提取液用1N硫酸溶液萃取，酸液經(jīng)飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9～10。用氯仿提取，提取液減壓回收氯仿至干，得到總生物堿。取總生物堿石油醚溶解部分，減壓蒸發(fā)石油醚，得橙黃的膏狀物，上堿性AL2O3柱，層析分離，石油醚－氯仿(8∶2)的洗脫部分，減壓濃縮，經(jīng)升華結(jié)晶得無(wú)色的針狀結(jié)晶，即得。

取梔子果實(shí)粗粉，加乙醇乙酯回流提取5h，趁熱抽慮后，冷卻，用水萃取，收集水相，減壓干燥得到粘稠狀濃縮物，即得。

取決明子粗粉，用水提取三次，第一次8倍量水(1.5小時(shí))，第二次6倍量水(1小時(shí))，第三次6倍量水(45分)，過(guò)濾，合并提取液，放冷，經(jīng)wld樹脂吸附。先用水沖洗至近無(wú)色，再用70％的乙醇沖洗至近無(wú)色，回收乙醇，濃縮，干燥，即得。

取杜仲葉干粉，水浴加熱，乙醇回流提?。惶崛∫航?jīng)粗濾，于60℃減壓濃縮，回收乙醇；加蒸餾水，攪拌后靜置2h，超濾,取上清液，濃縮干燥，備用；

把上述制備的中藥活性物質(zhì)混合均勻裝入膠囊，再裝入瓶中密封。

實(shí)施例2

顆粒劑的制備：

以實(shí)施例1中的中藥活性物質(zhì)為原料，混合均勻，加入輔料，以乙醇適量制軟材，制顆粒，低溫干燥，整粒后，分裝成袋。

實(shí)施例3

片劑的制備：

以實(shí)施例1中的中藥活性物質(zhì)為原料，混合均勻，加少量硬酯酸鎂及其他輔料，壓制成片，分裝成袋。

實(shí)施例4

軟膠囊劑的制備，

以實(shí)施例1中的中藥活性物質(zhì)為原料，混合均勻，裝入軟膠囊。

實(shí)施例5

滴丸劑的制備，

以實(shí)施例1中的中藥活性物質(zhì)為原料，混合均勻，制備成滴丸。

實(shí)施例6

一種中藥膠囊劑，由四種中藥材川芎，梔子，決明子，杜仲，制備而成，其組分配比(重量份)以生藥計(jì)：

各組分的制備方法同實(shí)施例1.

實(shí)施例7

一種中藥膠囊劑，由四種中藥材川芎，梔子，決明子，杜仲，制備而成，其組分配比(重量份)以生藥計(jì)：

各組分的制備方法同實(shí)施例1。