本發(fā)明涉及一種地榆苷元注射用乳劑及其制備方法、用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

骨髓抑制是臨床上常見的造血系統(tǒng)疾病，它可發(fā)生于各系統(tǒng)腫瘤性疾病的放射治療及(或)化學(xué)治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物(氯霉素、苯、磺胺、抗癲癰藥、鎮(zhèn)靜劑、抗甲狀腺藥、抗糖尿病藥、抗瘧疾、安眠藥)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微環(huán)境、造血干細(xì)胞、造血細(xì)胞生長(zhǎng)因子等的損傷，粒、紅、巨核細(xì)胞系統(tǒng)一系、二系或三系細(xì)胞受抑制。粒細(xì)胞缺乏會(huì)引起嚴(yán)重感染；紅細(xì)胞明顯減少會(huì)引起嚴(yán)重貧血；血小板明顯下降引起嚴(yán)重出血，甚至導(dǎo)致死亡。

目前，臨床上對(duì)于骨髓抑制，尤其是放化療引起的骨髓抑制，尚缺乏有效的治療手段。因此，尋找到有效的藥物來緩解骨髓抑制，成為了一個(gè)亟待解決的問題。

地榆苷元是從薔薇科地榆屬植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或長(zhǎng)葉地榆[S.officinalis L.var.longifolia(Bertol.)Yu et Li]的根中提取得到的一種活性成分，是地榆皂苷I和地榆皂苷II的苷元，化學(xué)名：3β，19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸，其結(jié)構(gòu)式如下所示：

然而，迄今尚未見以地榆苷元為活性成分制備注射用乳劑，用于治療和/或預(yù)防骨髓抑制的公開報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種地榆苷元注射用乳劑，它是由下述原輔料制備而成的制劑：地榆苷元、注射用油、乳化劑、甘油、水。

進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原輔料制備而成的制劑：地榆苷元0.5～10份、注射用油1-300份、乳化劑0.5-30份、甘油1-10份、水1-100份。

進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原輔料制備而成的制劑：地榆苷元1份、注射用油300份、乳化劑20份、甘油8份、水50份。

進(jìn)一步地，所述的注射用油為大豆油、中鏈甘油三酯、魚油、橄欖油、油酸乙酯或蓖麻油中的一種或兩種以上的混合物；所述的乳化劑為蛋黃卵磷脂或大豆磷脂中的一種或兩種。

進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原輔料制備而成的制劑：地榆苷元1份、大豆油300份、大豆磷脂20份、甘油8份、水50份。

進(jìn)一步地，它還包含0.5～5份的穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑選自鈉鹽或油酸。

本發(fā)明還提供了前述的注射用乳劑的制備方法，包括如下步驟：

a、稱取各重量配比的地榆苷元、注射用油及乳化劑，加入乙醇溶解；

b、濃縮根據(jù)a步驟得到的乙醇溶液，攪拌下加入甘油、水；

c、剪切，均質(zhì)，滅菌，即得。

本發(fā)明還提供了前述注射用乳劑用于制備治療和/或預(yù)防骨髓抑制的藥物的用途。

進(jìn)一步地，所述的藥物是治療和/或預(yù)防化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的骨髓抑制的藥物的用途。

進(jìn)一步地，所述的藥物是升高外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白或骨髓造血干細(xì)胞中一種或幾種數(shù)量的藥物。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，根據(jù)本發(fā)明制劑處方將地榆苷元制備成注射用乳劑后，能顯著提高外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白和骨髓造血干細(xì)胞的數(shù)量，具有明顯的治療和/或預(yù)防骨髓抑制的作用。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1各實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)比較。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購買市售產(chǎn)品獲得。

實(shí)施例1 本發(fā)明注射用乳劑的制備

處方一(A)：地榆苷元1g、大豆油300g、蛋黃卵磷脂20g、甘油8g、水3500mL。

處方二(B)：地榆苷元2g、中鏈甘油三酯100g、蛋黃卵磷脂20g、甘油10g、水7000mL。

處方三(C)：地榆苷元3g、魚油200g、蛋黃卵磷脂30g、甘油10g、水10500mL。

處方四(D)：地榆苷元0.5g、橄欖油300g、蛋黃卵磷脂30g、甘油10g、水1750mL。

處方五(E)：地榆苷元6g、油酸乙酯300g、蛋黃卵磷脂30g、甘油10g、水21000mL。

處方六(F)：地榆苷元8g、蓖麻油300g、蛋黃卵磷脂30g、甘油10g、水28000mL。

處方七(G)：地榆苷元10g、大豆油300g、大豆磷脂30g、甘油10g、水350000mL。制備方法：

按處方量將地榆苷元與油脂及磷脂混合，以乙醇溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，在高速攪拌下，按照處方量加入油酸和甘油(地榆苷元：油酸1:0.5)，加水至乳劑混懸液中地榆苷元的濃度為0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar壓力下高壓均質(zhì)4次，高壓滅菌，即得。

以下通過具體實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。

實(shí)驗(yàn)例1 采用不同輔料制備地榆苷元乳劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

本實(shí)驗(yàn)設(shè)置9個(gè)實(shí)驗(yàn)組。分別取地榆苷元1.0g、如表1所示的油相、乳化劑、穩(wěn)定劑與等滲調(diào)節(jié)劑，然后將地榆苷元、油相與乳化劑按照重量配比為1:300:20混合，以乙醇溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，按照重量配比地榆苷元︰穩(wěn)定劑︰等滲調(diào)節(jié)劑為1:0.5:1高速攪拌下加入穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑，加水至乳劑中地榆苷元的濃度為0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar壓力下高壓均質(zhì)4次，高壓滅菌。觀察外觀有無分層、絮凝、粘壁，測(cè)定粒徑大小，測(cè)定Ke(以分光光度法測(cè)定乳劑離心前后的吸收度A_o和A進(jìn)而計(jì)算穩(wěn)定常數(shù)Ke＝(A_o-A)/A_o×100％。Ke值越小，說明分散相油滴在離心力作用下上浮或下沉的越少，該乳劑越穩(wěn)定)，結(jié)果見表1。

表1地榆苷元乳劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果

注：“+”表示有；“-”表示無；與其他組比較：*P<0.05

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)本發(fā)明制劑處方中所用輔料種類，均能制備得到質(zhì)量較好的地榆苷元乳劑，乳劑外觀無分層、絮凝、粘壁等現(xiàn)象；其中，實(shí)驗(yàn)組6與其他實(shí)驗(yàn)組相比乳劑的粒徑、Ke值有顯著性減小(P<0.05)，表明制備地榆苷元乳劑最適宜使用的輔料種類為：豆油為油相，大豆磷脂為乳化劑，油酸為穩(wěn)定劑，甘油為滲透壓調(diào)節(jié)劑。

實(shí)驗(yàn)例2 輔料用量對(duì)地榆苷元乳劑質(zhì)量的影響

本實(shí)驗(yàn)設(shè)置7個(gè)實(shí)驗(yàn)組。分別按表2所示的重量配比稱取地榆苷元、豆油、大豆磷脂(固定地榆苷元重量0.6g)，以乙醇溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，按照重量配比地榆苷元︰油酸︰甘油為1:0.5:1高速攪拌下加入油酸、甘油，加水至乳劑中地榆苷元的濃度為0.3mg/mL，10000rpm下高速剪切5min，800bar壓力下高壓均質(zhì)4次，高壓滅菌。觀察外觀有無分層、絮凝、粘壁，測(cè)定粒徑大小，測(cè)定Ke，結(jié)果見表2。

表2地榆苷元乳劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果

注：“+”表示有；“-”表示無；與其他組比較：*P<0.05

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：地榆苷元：豆油：大豆磷脂重量配比在1:1～350:0.5～40的范圍內(nèi)，均能制備得到質(zhì)量較好的乳劑；其中，實(shí)驗(yàn)組6與其他實(shí)驗(yàn)組相比乳劑的粒徑、Ke值有顯著性減小(P<0.05)，表明地榆苷元乳劑中輔料的最佳用量配比為：地榆苷元：豆油：大豆磷脂＝1:300:20。

實(shí)驗(yàn)例3 本發(fā)明地榆苷元乳劑的藥效實(shí)驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)材料、試劑、儀器

1.1、受試藥物不同輔料制備的地榆苷元脂肪乳溶液組(A、B、C、D、E、F、G)、地榆苷元10％DMSO-生理鹽水組。

1.2、工具藥物環(huán)磷酰胺。

1.3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.4、實(shí)驗(yàn)儀器：全自動(dòng)血球分析儀；BS-600L電子天平：規(guī)格：600g/0.1g，上海友聲衡器有限公司。

2、統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進(jìn)行LSD檢驗(yàn)，方差不齊者進(jìn)行Tamhane’s T2檢驗(yàn)。

3、實(shí)驗(yàn)方法

3.1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備

所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分為：空白組；模型組；不同處方地榆苷元乳劑組(A、B、C、D、E、F、G)，配制成2.5mg·kg-1混懸液，臨用前配制；地榆苷元組：地榆苷元粉末，用10％DMSO-生理鹽水溶解，配制成2.5mg·kg-1混懸液，臨用前配制。實(shí)驗(yàn)第1天，除空白組外，其余各組小鼠按50mg·kg-1劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液，連續(xù)3天，空白組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水。

3.2、給藥

各實(shí)驗(yàn)組自實(shí)驗(yàn)第1天開始按劑量、iv給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)7天。

3.3、標(biāo)本采集

實(shí)驗(yàn)第8天，各實(shí)驗(yàn)組小鼠眼眶取血，用裝有EDTA抗凝劑的0.5mlEP管收集待測(cè)。

3.4、檢測(cè)指標(biāo)及方法

(1)外周血象檢測(cè)：采用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀對(duì)各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞(NEUT)紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

(2)骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)(以骨髓細(xì)胞CD34+抗原表達(dá)量計(jì))用含牛血清白蛋白濃度為0.2％的PBS緩沖液沖出小鼠右側(cè)股骨骨髓細(xì)胞，取出106個(gè)細(xì)胞離心，棄上清，加入30μL正常小鼠血清以封閉非特異結(jié)合位點(diǎn)，再加入10μL FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD34+抗體，對(duì)照管加入10μL相應(yīng)對(duì)照抗體，4℃避光反應(yīng)30min。加入2mL紅細(xì)胞裂解液，作用5min，洗細(xì)胞2次，加入終濃度為3μg/mL的PI染液，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓細(xì)胞CD34+抗原表達(dá)。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1、外周血主要血細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

由表3可知，與模型組比較，不同輔料制備的地榆苷元乳劑組小鼠外周血WBC、RBC、PLT數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，不同輔料制地榆苷元注射用乳劑組小鼠外周血WBC、RBC、PLT數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

表3各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血血細(xì)胞數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；注：與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

由表4可知，與模型組比較，不同輔料制備的注射用地榆苷元乳劑組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，不同處方制備的注射用地榆苷元乳劑組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

表4各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

4.2、骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

從圖1可知，與模型組比較，不同處方制地榆苷元乳劑組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，不同輔料制地榆苷元乳劑組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，根據(jù)本發(fā)明制劑處方將地榆苷元制備成注射用乳劑后，可顯著提高藥物升高血細(xì)胞水平的作用，能有效防治骨髓抑制。