本發(fā)明涉及微生物制藥技術(shù)領(lǐng)域中提高注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架中間產(chǎn)品——乳化液除菌過濾有效成份通過率的方法。

背景技術(shù)：

艾克佳的有效成分是紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架，注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架(n-cws)規(guī)格為200μg/瓶，阿拉伯糖含量為66～104μg/瓶，通過測定阿拉伯糖含量推算n-cws含量。所以，注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架的裝量取決于過濾后乳化液阿拉伯糖含量的高低。在投料量不變的情況下，如果過濾后的乳化液阿拉伯糖含量高，則相應(yīng)的每瓶裝量變小，成品率(批量)會變大。

影響阿拉伯糖含量高低的一個重要因素是藥液經(jīng)除菌過濾后有效成份的通過率。除菌過濾過程中有效成份截留越少，糖含量相應(yīng)越高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種既保持原有物質(zhì)活性和性能，又使物料提高除菌過濾過程有效成份盡最大可能的通過率，即在保證產(chǎn)品質(zhì)量、滿足產(chǎn)品預(yù)定用途的情況下提高產(chǎn)品得率；又提高藥物在人體內(nèi)快速充分釋放的方法。本工藝穩(wěn)定可靠且品質(zhì)均一。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)以上目的：

一種提高紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架乳化液除菌過濾有效成份通過率的方法，包括如下步驟：

1)原輔料預(yù)混合及分散：

①原輔料研磨：將稱量好的原粉置研磨機(jī)的研缽內(nèi)，加入處方量的角鯊烯、聚山梨酯80、適量的20％甘露醇注射液和注射用水混合液，研磨15-25min；

②均質(zhì)：將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)，900～1100bar均質(zhì)一次；高壓均質(zhì)，1700～1900bar三次；均質(zhì)液收入容器內(nèi)，用適量注射用水清洗均質(zhì)機(jī)腔體，將殘留藥液洗出并與之前的均質(zhì)液混合；固液比為1g：500-700ml；

2)攪拌磨研磨：

①一級研磨：0.08-0.2mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為85-95％；固液比：1g：500-700ml；

a.將均質(zhì)后的藥液倒入循環(huán)斗內(nèi)；設(shè)置攪拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3600～3800rpm，設(shè)置出口最高溫度：40℃；

b.啟動攪拌磨，整個研磨時間為85-95min，其中蠕動泵泵速第一個10min為8-12％，第二個10min為15-25％，最后以20-30％的泵速研磨至結(jié)束；放出藥液，得藥液a；

c.用適量的注射用水沖洗研磨腔及管路，得到的液體為b液，混勻a液、b液，得ab液，使固液比為1g：800-1000ml；

②二級研磨：0.02-0.07mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為85-95％；

a.將0.08-0.2mm研磨珠卸下，裝入0.02-0.07mm研磨珠；

.將ab液均分兩份，分次倒入裝配好的珠磨機(jī)循環(huán)杯中，設(shè)置攪拌磨轉(zhuǎn)速3600rpm-3800rpm，研磨40-50分鐘；蠕動泵泵速第一個10min為8-12％，第二個15-25min為20％，然后以20-30％的流速研磨至結(jié)束；

d.根據(jù)配方量加入注射用水至全量，開啟攪拌漿，400-600rpm攪拌8-12min。

3)預(yù)過濾：將藥液用0.4-0.5μm過濾器進(jìn)行預(yù)過濾；

4)除菌過濾：將0.4-0.5μm濾后的藥液用除菌過濾器進(jìn)行過濾。

在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，步驟4)除菌過濾之后，還包括取樣，測其有效成份阿拉伯糖含量的步驟。

在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，步驟4)所述的除菌過濾孔徑為0.22μm。。

本發(fā)明研磨珠的材料可以為天然磨料，包括金剛石、剛玉、石榴石、石英等。或是人造磨料，包括金剛石系、碳化物系(如碳化硅)、剛玉系等。

本發(fā)明的有益效果：1、操作過程的優(yōu)化設(shè)計：有效的前處理使物料微粒化，制造合適的懸浮液流變性，為攪拌磨研磨效果提供一個良好的物料濃度與微?；A(chǔ)；2、高能研磨在低溫下進(jìn)行，從而實(shí)現(xiàn)熱穩(wěn)定，保持原有物質(zhì)活性和性能。3、攪拌磨選擇不同規(guī)格的研磨珠分級研磨，有效提高破碎效果，在保證產(chǎn)品質(zhì)量、滿足產(chǎn)品預(yù)定用途的情況下提高產(chǎn)品有效成分通過率，繼而提高成品率。3、在產(chǎn)品成品率提高的同時，抑瘤率基本保持不變。

具體實(shí)施方式

不同乳化方法對乳化液除菌過濾有效成份通過率的影響

實(shí)施例1：

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

處方(現(xiàn)有技術(shù))：

紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉1g

介質(zhì)適量

介質(zhì)配方：

2.處理參數(shù)：

①瑪瑙研磨：處方量的原粉、角鯊烯、聚山梨酯80、適量的20％甘露醇注射液和注射用水混合液，研磨20min；

②均質(zhì)：將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)，1000bar均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1800bar三次；均質(zhì)液收入容器內(nèi)，用適量注射用水清洗均質(zhì)機(jī)腔體，將殘留藥液洗出并與之前的均質(zhì)液混合；固液比為1g：600ml(濃配)。

③攪拌磨研磨：

a.一級研磨：0.1mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為90％；固液比：1g：600ml攪拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3600rpm；

啟動攪拌磨，整個研磨時間為90min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。放出藥液，得藥液a；

用適量的注射用水沖洗研磨腔及管路(b液)，混勻a液、b液，得(ab液)，使固液比為1g：900ml(濃配)；

b.二級研磨：0.05mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為90％；固液比：1g：900ml拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3700rpm；啟動攪拌磨，整個研磨時間為90min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。根據(jù)配方量加入注射用水至全量。開啟攪拌漿，500rpm攪拌10min。

④藥液經(jīng)過處理后，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行預(yù)過濾，預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.45μm；除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

取樣，測其有效成份阿拉伯糖含量。

以及抑瘤試驗(yàn)：按《中國藥典》2010年版第三增補(bǔ)本的“注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架”進(jìn)行。

實(shí)施例2：

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

處方(現(xiàn)有技術(shù))：

紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉1g

介質(zhì)適量

介質(zhì)配方：

2.處理參數(shù)：

①瑪瑙研磨：處方量的原粉、角鯊烯、聚山梨酯80、適量的20％甘露醇注射液和注射用水混合液，研磨18min；

②均質(zhì)：將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)，1000bar均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1700bar三次；均質(zhì)液收入容器內(nèi)，用適量注射用水清洗均質(zhì)機(jī)腔體，將殘留藥液洗出并與之前的均質(zhì)液混合；固液比為1g：700ml(濃配)。

③攪拌磨研磨：

a.一級研磨：0.2mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為85％；固液比：1g：700ml攪拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3700rpm；

啟動攪拌磨，整個研磨時間為85min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。放出藥液，得藥液a；

用適量的注射用水沖洗研磨腔及管路(b液)，混勻a液、b液，得(ab液)，使固液比為1g：800ml(濃配)；

b.二級研磨：0.1mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為85％；固液比：1g：700ml拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3700rpm；啟動攪拌磨，整個研磨時間為85min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。根據(jù)配方量加入注射用水至全量。開啟攪拌漿，500rpm攪拌10min。

④藥液經(jīng)過處理后，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行預(yù)過濾，預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.45μm；除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

取樣，測其有效成份阿拉伯糖含量。

以及抑瘤試驗(yàn)：按《中國藥典》2010年版第三增補(bǔ)本的“注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架”進(jìn)行。

實(shí)施例3：

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

處方(現(xiàn)有技術(shù))：

紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉1g

介質(zhì)適量

介質(zhì)配方：

2.處理參數(shù)：

①瑪瑙研磨：處方量的原粉、角鯊烯、聚山梨酯80、適量的20％甘露醇注射液和注射用水混合液，研磨25min；

②均質(zhì)：將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)，1000bar均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1900bar三次；均質(zhì)液收入容器內(nèi)，用適量注射用水清洗均質(zhì)機(jī)腔體，將殘留藥液洗出并與之前的均質(zhì)液混合；固液比為1g：500ml(濃配)。

③攪拌磨研磨：

a.一級研磨：0.1mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為90％；固液比：1g：600ml攪拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3600rpm；

啟動攪拌磨，整個研磨時間為90min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。放出藥液，得藥液a；

用適量的注射用水沖洗研磨腔及管路(b液)，混勻a液、b液，得(ab液)，使固液比為1g：900ml(濃配)；

b.二級研磨：0.02mm研磨珠攪拌磨乳化，研磨珠填充度為90％；固液比：1g：900ml拌磨轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速3700rpm；啟動攪拌磨，整個研磨時間為95min，其中蠕動泵泵速第一個10min為10％，第二個10min為20％，最后以25％的泵速研磨至結(jié)束。根據(jù)配方量加入注射用水至全量。開啟攪拌漿，500rpm攪拌10min。

④藥液經(jīng)過處理后，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾，將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行預(yù)過濾，預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.45μm；除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

取樣，測其有效成份阿拉伯糖含量。

以及抑瘤試驗(yàn)：按《中國藥典》2010年版第三增補(bǔ)本的“注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架”進(jìn)行。

對比例1(現(xiàn)有技術(shù)):研磨、剪切、均質(zhì)；

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量(處方同實(shí)施例1)進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

2.處理參數(shù)

①研磨：將稱量好的原粉置研磨機(jī)的研缽內(nèi)，研磨40min；接著加入配方量的角鯊烯，研磨20min；再加入配方量的聚山梨酯80，研磨10min，最后加入配方量的甘露醇、注射用水混合液適量，研磨10min。

②將高速剪切機(jī)分散頭深入藥液，至底部約1cm，開啟電源進(jìn)行剪切分散。將轉(zhuǎn)速調(diào)至17000rpm，剪切20min。

③剪切后將藥液轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中，開啟高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)1100bar均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1900bar三次；

④藥液經(jīng)過均質(zhì)后，得到均一的乳化液。將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾。第一次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為1.0μm，第二次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.65μm，第三次除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

對比例2(現(xiàn)有技術(shù)):研磨、剪切、均質(zhì)；

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量(處方同實(shí)施例1)進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

2.處理參數(shù)

①研磨：將稱量好的原粉置研磨機(jī)的研缽內(nèi)，研磨30min；接著加入配方量的角鯊烯，研磨15min；再加入配方量的聚山梨酯80，研磨15min，最后加入配方量的甘露醇、注射用水混合液適量，研磨20min。

②將高速剪切機(jī)分散頭深入藥液，至底部約1.5cm，開啟電源進(jìn)行剪切分散。將轉(zhuǎn)速調(diào)至17000rpm，剪切20min。

③剪切后將藥液轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中，開啟高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)1000bar)均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1800bar)三次；

④藥液經(jīng)過均質(zhì)后，得到均一的乳化液。將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾。第一次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為1.0μm，第二次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.65μm，第三次除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

對比例3(現(xiàn)有技術(shù)):研磨、剪切、均質(zhì)；

1.紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架原粉及輔料按處方量(處方同實(shí)施例1)進(jìn)行準(zhǔn)確稱量、配制。

2.處理參數(shù)

①研磨：將稱量好的原粉置研磨機(jī)的研缽內(nèi)，研磨20min；接著加入配方量的角鯊烯，研磨10min；再加入配方量的聚山梨酯80，研磨20min，最后加入配方量的甘露醇、注射用水混合液適量，研磨10min。

②將高速剪切機(jī)分散頭深入藥液，至底部約2cm，開啟電源進(jìn)行剪切分散。將轉(zhuǎn)速調(diào)至17000rpm，剪切20min。

③剪切后將藥液轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中，開啟高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，將研磨后藥液加入均質(zhì)機(jī)進(jìn)樣杯中進(jìn)行低壓均質(zhì)900bar)均質(zhì)一次，高壓均質(zhì)1700bar)三次；

④藥液經(jīng)過均質(zhì)后，得到均一的乳化液。將乳化液轉(zhuǎn)移至過濾系統(tǒng)中進(jìn)行過濾。第一次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為1.0μm，第二次預(yù)過濾所用濾芯孔徑為0.65μm，第三次除菌過濾濾芯孔徑為0.22μm。

乳化結(jié)果對比：

通過以上實(shí)驗(yàn)可見實(shí)施例1/2/3，相較對比例1/2/3采用均質(zhì)乳化具有明顯優(yōu)勢：a.濾后藥液的阿拉伯糖損失明顯減少，說明攪拌磨乳化研磨，效率明顯提高，能有效地制備超細(xì)粒徑乳化液，提高原粉乳化后經(jīng)除菌過濾的通過率；b.批量增加。注射用紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架裝量取決于過濾后乳化液阿拉伯糖含量，在投料量不變的情況下，由于增加攪拌磨乳化，濾后乳化液阿拉伯糖含量提高，相同濃度下每瓶裝量變小，成品率(批量)變大，批產(chǎn)量隨之提高；c.成品質(zhì)量穩(wěn)定，符合標(biāo)準(zhǔn)；d.攪拌磨乳化后的藥液，只需經(jīng)二級過濾通過0.22μm濾芯；與對比例1的三級過濾相比，減少了操作過程，節(jié)約了濾芯材料成本。