本發(fā)明涉及中藥制造及應用領域，具體涉及一種治療骨性關節(jié)炎的藥物配伍。

背景技術：

膝骨關節(jié)炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是關節(jié)炎里最常見的疾病，根據(jù)人口統(tǒng)計學資料預測，到2020年，受關節(jié)疾病影響的人口比例將占到全世界人口的50％,將有5.7億人受到KOA的困擾。KOA是世界上導致殘疾的第八大疾病。盡管如此，但KOA發(fā)病機制還不清楚。并且到目前為止，還沒有一種治療方法可以從根本上預防、改變或中止KOA的疾病進程。最后多數(shù)KOA晚期患者不得不通過接受膝關節(jié)置換術，來“治愈”KOA。而很多KOA患者由于自身身體條件及家庭經濟承受能力所限，無法接受膝關節(jié)置換術。因此，研究KOA的發(fā)病機制，并尋找防治KOA的有效治療藥物及手段是保證國民健康，提高KOA患者生活質量和減輕國家醫(yī)療負擔的迫切需求。

申請?zhí)枮?01310100692.2的專利公開了一種治療骨關節(jié)炎的內服中藥方劑，其中，桂枝6-9克，白芍10-15克，進一步的，桂枝7克，白芍13克；申請?zhí)枮?01410491235.5的專利公開了一種用于治療骨關節(jié)炎的中藥片劑及其制備方法，其中桂枝5-7份，白芍3-9份，但這些專利都未對桂枝白芍以一定的比例共同應用于治療KOA的效果進行詳細的說明。

技術實現(xiàn)要素：

發(fā)明人經過多年實驗研究，根據(jù)大量臨床實踐，調整桂枝白芍配伍比例，證明桂枝白芍以一定比例配伍，治愈率高，復發(fā)率低。

本發(fā)明的目的是提供一種療效好、治愈率高的治療骨性關節(jié)炎的藥物配伍。

本發(fā)明的桂枝白芍的配伍比例，是經過發(fā)明人在多年基礎實驗和臨床試驗經驗總結得出，它是由下列重量份的原料藥組成：桂枝25～50份，白芍25～50份。

原料藥的重量份的最佳配比：桂枝:白芍＝5:3。

上述原料藥物中：其中白芍、桂枝為通絡止痛湯的君藥，桂枝辛甘溫，有溫通經脈，助陽化氣之功效；白芍苦、酸、微寒，有養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛之功效。兩者合用一斂一散,一補一開，解肌發(fā)表,調和營衛(wèi),使發(fā)汗而不傷陰，氣血調而不傷氣。兩藥合用亦可治療氣血不調導致的四肢酸楚、麻木、疼痛等。《金貴要略·血痹虛勞病脈證并治第六》中治療痹癥用黃芪桂枝五物湯方，其中以桂枝白芍配伍為主。桂枝與白芍的配伍，以及其在成方、中成藥中配伍組合、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述配伍的組合；還包括二者的有效成分提取物、衍生物，如包括桂皮醛，白芍總苷，桂皮醛與白芍總苷的混合物及白芍與桂枝中其他成分提取物。

本發(fā)明藥物配伍可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內服制劑，例如可以將桂枝白芍原料研成粉末混合均勻然后制成散劑，或丸劑或膠囊，還可以為針或凍干粉針制劑、丸劑、湯劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊、控釋、緩釋制劑、注射劑或口服制劑。

附圖說明

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進一步說明。

圖1是不同比例桂枝白芍作用于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞NO的濃度變化

圖2是不同比例桂枝白芍作用于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TNF的濃度變化

圖3是不同比例桂枝白芍作用于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞IL-1的濃度變化

圖4是桂枝與白芍比例為1：1作用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達

圖5是桂枝與白芍比例為1：2作用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達

圖6是桂枝與白芍比例為5:3作用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達

圖7是白芍作用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達

圖8是桂枝作用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達

圖9是對照組

具體實施方式

本實施例用于對本發(fā)明權利要求的解釋，本發(fā)明的保護范圍并不限于下列描述。

本發(fā)明的目的是提供一種療效好、治愈率高的治療骨性關節(jié)炎的藥物配伍。

一種治療骨性關節(jié)炎的藥物配伍，包括下列重量份的原料藥：桂枝25～50份，白芍25～50份；其中，原料藥的重量份的最佳配比：桂枝:白芍＝5:3，桂枝與白芍配伍以及其在成方、中成藥中配伍組合、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述配伍的組合；還包括二者的有效成分提取物、衍生物，在制備骨關節(jié)炎預防、治療、輔助治療和/或預后防復發(fā)的藥物中都可進行應用。

實施例1：

如圖1-3所示，應用ELISA法檢測應用不同比例桂枝白芍作用于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞，NO、TNF、1L-1等炎癥因子的影響。

1.材料和方法

1.1組織來源

人KOA炎性滑膜組織源于行關節(jié)置換治療的KOA患者廢棄滑膜組織。無菌條件下將取得的滑膜組織去除脂肪、纖維等,加入PBS洗滌，PBS清洗兩次后放在無菌小青霉素瓶中用解剖剪切碎成糊狀。置于2mL 0.4％I型膠原酶的25cm2培養(yǎng)瓶中消化2.5h(期間搖勻數(shù)次)。經200目金屬篩過濾。取未黏附的細胞移至離心管中，用2000轉離心5min，,棄上清，加入含有10％胎牛血清的RPMI－1640培養(yǎng)基,反復吹打后將細胞接種在25cm2的培養(yǎng)瓶中,置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中備用。

1.2主要試劑及設備

NO、TNF、1L-1人酶聯(lián)免疫試劑盒，杭州聯(lián)科生物技術股份有限公司；胎牛血清購自四季青公司；RPMI－1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25％)、I型膠原酶均購自Gibco公司；ELX800型酶聯(lián)免疫檢測儀，美國生物技術儀器公司；96孔細胞培養(yǎng)板，美國Corning；CO2培養(yǎng)箱，美國Thermo Scientific；25cm²培養(yǎng)瓶，丹麥NUCU公司；四環(huán)凍干機，北京四環(huán)科學儀器廠有限公司。

1.3藥物制備及劑量

桂枝、白芍、桂芍比1:1、桂芍比1:2、桂芍比5:3。將上述中藥飲片按成方比例置煎煮容器內,加水浸泡,煮沸30分鐘,棄藥渣取湯劑，經過離心機2000轉/分鐘離心，棄藥渣取湯劑，利用冷凍干燥機進行冷凍干燥，粉末狀，PBS溶解至等體積，對照組為等體積PBS，用0.22μm微孔濾器過濾除菌。-20度儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.4觀察項目及檢測方法

將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)箱中取出，棄上清液，鋪板，加入桂枝、白芍、桂芍比1:1、桂芍比1:2、桂芍比5:3、對照組(PBS)各組藥物。繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。次日，吸取上清，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定NO、TNF、1L-1的水平，嚴格按照試劑使用說明書操作。

1.5統(tǒng)計學方法

應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理,采用One-way ANOVA分析，多變量之間的關系采用多元直線回歸，兩變量之間的關系采用相關分析以P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。計量資料用均數(shù)±標準差表示。

1.6結果

實驗結果表明，桂枝白芍配伍比桂枝配伍和芍藥配伍對于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞的作用明顯。

而各組濃度較對照組降低、桂芍比5:3的配伍炎癥因子濃度最低(圖1-3)，由此可以得出結論，桂芍比為5:3時作用最佳。

實施例2：

如圖4-9所示，應用流失細胞術檢測應用不同比例桂枝白芍作用于用TLR2、TLR4標記的膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞TLR2、TLR4的表達情況。

1.材料和方法

1.1組織來源

人KOA炎性滑膜組織源于關節(jié)置換治療的KOA患者廢棄滑膜組織。無菌條件下將取得的滑膜組織去除脂肪、纖維等,加入PBS洗滌，PBS清洗兩次后放在無菌小青霉素瓶中用解剖剪切碎成糊狀。置于2mL 0.4％I型膠原酶的25cm2培養(yǎng)瓶中消化2.5h(期間搖勻數(shù)次)。經200目金屬篩過濾。取未黏附的細胞移至離心管中，用2000轉離心5min，棄上清，加入含有10％胎牛血清的RPMI－1640培養(yǎng)基,反復吹打后將細胞接種在25cm2的培養(yǎng)瓶中,置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中。1～2d換液1次，選取3～4代細胞，純度大于98％，經鑒定后用于實驗。

1.2主要試劑與儀器

胎牛血清，購自四季青公司；RPMI－1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25％)、I型膠原酶，均購自Gibco公司；1L-1β、MMP-13人酶聯(lián)免疫試劑盒，杭州聯(lián)科生物技術股份有限公司；PE-anti-human-TLR4、FITC-anti-human-TLR2，美國eBioscience公司；流式細胞儀，美國BD公司FACS Calibur；4℃低溫高速離心機，美國Thermo；ELX800型酶聯(lián)免疫檢測儀，美國生物技術儀器公司；CO2培養(yǎng)箱，美國Thermo Scientific；四環(huán)凍干機，北京四環(huán)科學儀器廠有限公司。

1.3藥物制備及劑量

桂枝、白芍、桂芍比1:1、桂芍比1:2、桂芍比5:3。將上述中藥飲片按成方比例置煎煮容器內,加水浸泡,煮沸30分鐘,棄藥渣取湯劑，經過離心機2000轉/分鐘離心，棄藥渣取湯劑，利用冷凍干燥機進行冷凍干燥，粉末狀，PBS溶解至等體積，對照組為等體積PBS，用0.22μm微孔濾器過濾除菌。-20度儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.4流式細胞術(FCM)檢測細胞中TLR2、TLR4表達情況

采用細胞免疫熒光直接標記法，樣品中依次加入PE-抗人TLR4單克隆抗體和FITC-抗人TLR2單克隆抗體兩種熒光標記抗體，振蕩器充分混勻，2)室溫避光染色15min。3)1500rpm/min，離心6min，如此反復PBS洗3遍，將細胞碎片及未結合的熒光標記抗體去除。將細胞密度調整為1×106個/ml上機。流式細胞儀檢測采用SSC和FSC設門，測定10000個滑膜細胞中TLR4、TLR2陽性表達百分率，用FACSDiva Version 6.1.3軟件對數(shù)據(jù)獲取及分析。

1.5統(tǒng)計學方法

應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理,采用One-way ANOVA分析，多變量之間的關系采用多元直線回歸，兩變量之間的關系采用相關分析以P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。計量資料用均數(shù)±標準差表示。

1.6結果

實驗結果表明，桂枝白芍配伍比桂枝配伍和芍藥配伍對于膝骨關節(jié)炎滑膜成纖維細胞的作用明顯。

桂枝芍藥配伍隨著芍藥的比例減少表達明顯降低，其中桂芍比為5：3的配伍TLR2、TLR4的表達最低(圖4-9)，即桂芍比為5:3為最佳配比。

實施例3

通絡止痛方是治療膝骨關節(jié)炎的經驗方，組成包括：桂枝10g、白芍6g、桃仁5g、紅花5g、制草烏1g、細辛0.3g、川椒2g、牛膝2g、乳香3g、沒藥3g；君藥為桂枝，白芍；主要功效包括活血化瘀，通絡止痛。

1研究方案

1.1一般資料

本研究病例來源于門診及住院部診治的患者，按照納入、排除標準納入受試者30例。其中女16例，男14例；年齡最小44歲，最大65歲，平均年齡59.3歲。所有病例均經B超檢査證實存在關節(jié)積液，積液范圍最大10cm×5cm，最小2cm×3cm。所有病例均經X線或CT檢查排除結核或胂瘤。

隨機分為超聲促透通絡止痛湯組(治療組)與超聲促透生理鹽水組(對照組)，治療組15例，無脫落病例，其中男6例，女9例，共19個膝關節(jié)，平均病程5.1年；對照組15例，脫落1例，其中男7例，女7例，共20個膝關節(jié)，平均病程5.2年。兩組病例性別、年齡、病程無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)(具有可比性。

1.2病例選擇標準

1.2.1診斷標準

參考中華醫(yī)學會骨科學分會制定的《骨關節(jié)炎診治指南》(2007年版)。

(1)近1個月內反復膝關節(jié)疼痛

(2)X線片站立或負重位示關節(jié)間隙變窄、軟骨下骨硬化和或囊性變、關節(jié)緣

骨贅形成

(3)關節(jié)液(至少2次)清亮、黏稠，WBC＜2000個/ml

(4)中老年患者(≥40歲)

(5)晨僵≤30分鐘

(6)活動時有骨摩擦音(感)

注綜合臨床、實驗室及線檢査，符合1+2條或1+3+5+6條或1+4+5+6條，可診斷KOA。

1.2.2納入標準：

(1)符合膝骨關節(jié)炎診斷；

(2)年齡在40～65歲之間；

(3)經B超檢查證實存在關節(jié)積液；

(4)自愿簽署知情同意書。

1.2.3排除標準

(1)合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重危及生命的原發(fā)性疾病及精神病患者；

(2)孕婦及哺乳期的婦女；年齡＞65歲者；

(3)過敏體質及對多種藥物過敏者。

1.3治療方案

隨機、對照、盲法方案

列出流水號01-30，借助SAS 8.2統(tǒng)計軟件提前完成隨機化安排，即治療組與對照組提前完成相鏈接的編碼。

本試驗按1：1的比例隨機分為對照組和治療組。對照組、治療組連接超聲電導儀時外加常溫紗墊，超聲電導儀正常工作，使兩組治療在形式上相同。

操作者(護士)不是本實驗的參與人，僅按要求進行搡作；試驗的療效評定為本實驗的參與者，但評定前并不知道分組情況；數(shù)據(jù)完成后交與第三方處理。

1.4治療藥物

本研究選用藥物為自擬方通絡止痛湯，主要藥物組成為：桃仁、紅花、桂枝、白芍、草烏、細辛、川椒、牛膝、乳香、沒藥。

1.5治療具體操作

本研究采用超聲電導凝膠貼片貼于皮膚患處，使超聲電導儀的探頭與皮膚偶聯(lián)，在治療前在超聲電導凝膠貼片中注入中藥通絡止痛湯5ml。對照組在超聲電導凝膠貼片中注入5ml生理鹽水。

1.6治療時間

每天兩次治療，每次治療25分鐘。14日為一療程，間隔一周，用藥二療程。

1.7療效指標

(1)彩B超下關節(jié)積液療效標準治愈：膝關節(jié)積液經超證實消失，膝關節(jié)腫脹完全消退，浮髕試驗陰性，膝關節(jié)功能活動正常；好轉：膝關節(jié)積液明顯減少，但仍有少量積液，關節(jié)腫脹已基本消退，浮髕試驗陰性，膝關節(jié)功能基本恢復正常，但活動后膝關節(jié)仍有腫脹；無效：膝關節(jié)積液無變化或增加，浮髕試驗陽性，膝關節(jié)功能無改善。

(2)治療前后膝關節(jié)周徑的對比選取膝關節(jié)髕骨上極為測量點，測量膝關節(jié)周徑，并對治療前、治療1療程、治療2療程的膝關節(jié)周徑進行評定。

統(tǒng)計學處理

用統(tǒng)計軟件SAS 8.2建立數(shù)據(jù)庫并進行統(tǒng)計分析。計量資料用配對檢驗，組間比較用檢驗。

2治療結果

兩組治療前后膝關節(jié)周徑變化比較見表1。

治療組治療2周和4周后分別與治療前比較，差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。對照組治療后2周與治療前比較，差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)；治療后4周與治療前比較，差異均有統(tǒng)計學意(p＜0.01)。2組治療前比較，差異無顯著性意義(p＞0.05)。

表1：治療前后膝關節(jié)周徑變化

注：兩組治療前比較，p＞0.05；兩組治療2療程分別與治療前、治療1療程比較ap＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義；治療組治療1療程與治療前比較cp＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義；對照組治療1療程與治療前比較dp＞0.05，差異沒有統(tǒng)計學意義；治療組治療1療程、治療2療程分別與對照組相應對應時間點比gp＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義，超聲組優(yōu)于對照組。

兩組治療前后膝關節(jié)超聲變化比較見表2。

表2：B超示膝關節(jié)積液變化