本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

急性腎功能衰竭(Acute Renal Failure，ARF)是由多種原因引起的臨床綜合征，可見于臨床各科病人，發(fā)病率高且往往帶來嚴(yán)重后果，其特點(diǎn)為短期內(nèi)(數(shù)小時(shí)至數(shù)天)腎功能急劇下降，臨床表現(xiàn)為急性少尿(尿量<400mLPd)或無尿(尿量<100mLPd)，體內(nèi)氮質(zhì)代謝產(chǎn)物排出產(chǎn)生障礙，迅速出現(xiàn)氮質(zhì)血癥，水及電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂，并引起全身各系統(tǒng)相應(yīng)功能失調(diào)。引起急性腎衰的主要因素是腎血流量的急劇減少，以及由于腎組織缺血引起的氧化應(yīng)激和細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致腎臟組織結(jié)構(gòu)的破壞和功能的惡化。目前臨床上尚無公認(rèn)的治療急性腎衰有效的藥物，僅能通過糾正水電解質(zhì)平衡，糾正酸中毒等對癥治療措施改善癥狀，后期還需要通過血液透析維持機(jī)體機(jī)能。在改善腎臟血流灌注障礙和減輕腎組織損傷方面有明顯療效的臨床藥物少見。

從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2009年發(fā)表(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗急性腎衰活性進(jìn)行了評價(jià)，其具有抗急性腎衰活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該 組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為60％和40％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明的目的是提供組合物用于治療急性腎衰的用途，即用于制備治療急性腎衰藥物的用途。

本發(fā)明的組合物對急性腎衰疾病有明顯的治療作用。

通過我們的研究發(fā)現(xiàn)組合物能夠改善腎臟的功能。

以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Harrisotone A的制備

化合物Harrisotone A(I)的制備方法參照Sheng Yin等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的方法。

實(shí)施例2 Harrisotone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌3h。3h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌2次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(602mg，76％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H). ¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₃₄H₅₀Br₃O₆:793.1137；found 793.1134.

實(shí)施例3 Harrisotone A的O-(二乙氨基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙胺(2920mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的淡黃色固體(246.1mg,64％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.13(s,2H),4.19(s,2H),3.52(d,J＝5.3Hz,4H),3.21(s,2H),3.04(s,2H),2.85(s,12H),2.64(d,J＝13.5Hz,4H),2.33(s,3H),2.18(s,1H),2.11(s,2H),2.04(s,1H),1.98(s,1H),1.88(s,1H),1.77(d,J＝5.0Hz,7H),1.70(d,J＝15.5Hz,7H),1.61(s,1H),1.54(s,1H),1.44(s,1H),1.37(s,1H),1.10(s,24H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.30(s),198.04(s),195.18(s),190.07(s),135.11(s),119.89(s),114.86(s),84.15(s),76.42(s),66.70(s),62.58(s),60.18(s), 59.97(s),52.53(s),51.93(s),50.76(s),47.69(s),45.04(s),39.51(s),36.43(s),30.63(d,J＝8.9Hz),28.61(s),25.10(s),23.93(d,J＝19.2Hz),22.57(s),18.04(s),12.27(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₆H₈₀N₃O₆:770.6047；found:770.6044。

實(shí)施例4 Harrisotone A的O-(哌嗪基)乙基衍生物的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于16mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和無水哌嗪(6892mg，80mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集淡棕色集中洗脫帶即得到化合物IV的淡棕色固體(286.9mg,71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.14(s,2H),4.21(s,2H),3.53(d,J＝6.2Hz,4H),3.09(s,2H),3.05(s,2H),2.66(s,12H),2.57–2.53(m,4H),2.33(d,J＝15.0Hz,15H),2.24(s,1H),2.14(s,2H),2.10(s,1H),2.00(s,1H),1.88(d,J＝10.5Hz,3H),1.79(d,J＝5.0Hz,7H),1.71(d,J＝15.5Hz,7H),1.63(s,1H),1.55(s,1H),1.46(s,1H),1.15–1.05(m,8H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.30(s),198.04(s),195.28(s),190.07(s),135.11(s),119.89(s),114.86(s),84.25(s),76.42(s),66.70(s),62.58(s),60.18(s),59.97(s),54.35(s),54.16(s),53.66(s),50.78(s),45.24(s),45.06(s),39.49(s),36.45(s),30.61(d,J＝8.9Hz),28.61(s),25.10(s),23.93(d,J＝19.2Hz),22.58(s),18.04(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₆H₇₇N₆O₆:809.5905；found:809.5901。

實(shí)施例5組合物對急性腎衰大鼠的治療作用

(一)實(shí)驗(yàn)方法

組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的60mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的40mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

采用肌肉注射甘油致急性腎功能衰竭大鼠動(dòng)物模型。選用180～220g健康雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組(肌肉注射生理鹽水)；模型組(肌肉注射甘油)；給藥干預(yù)組(組合物、化合物III或者化合物IV 0.6mg/Kg,肌肉注射甘油)，各組大鼠在甘油造模后立即尾靜脈注射生理鹽水或待試藥物，12和24小時(shí)后再給藥一次。

(二)觀察指標(biāo)

大鼠末次給藥或生理鹽水后放入代謝籠收集24小時(shí)尿，留尿后6小時(shí)用4％水合氯醛腹腔注射麻醉，采用激光多普勒血流儀測定造模后及治療后雙側(cè)腎臟血流量，取平均值作為單只動(dòng)物腎血流量；取血制備血清，測定血BUN和Cre(均按試劑盒說明書操作)。

(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.組合物可增加急性腎衰小鼠腎血流量

組合物可顯著增加急性腎衰小鼠腎血流量，而化合物III和化合物IV無此作用。

表1組合物對急性腎衰小鼠腎血流量的影響

*P<0.05vs急性腎衰模型組

2.組合物對急性腎衰小鼠腎功能具保護(hù)作用

急性腎衰大鼠靜脈注射生理鹽水24小時(shí)后，血清BUN和Cre見表2。急性腎衰模型組明顯高于假手術(shù)組，說明模型組動(dòng)物腎功能損害嚴(yán)重。組合物能改善急性腎衰大鼠的腎功能(P<0.05)，而化合物III和化合物IV無此作用。見表2。

表2各試驗(yàn)組大鼠腎功能指標(biāo)比較

*P<0.05vs急性腎衰模型組

結(jié)論：組合物能夠保護(hù)腎臟的功能,可以用來制備抗急性腎衰藥物。而化合物III和化合物IV不能夠保護(hù)腎臟，不可用來制備抗急性腎衰藥物。

實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。