本發(fā)明屬于傳統(tǒng)中醫(yī)藥用于腫瘤治療方面的領域，尤其是在改善乳腺癌內(nèi)分泌治療后引起的不良反應方面。

背景技術：

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,內(nèi)分泌治療是乳腺癌的重要治療手段之一，其目的在于降低雌激素水平或阻斷雌激素作用，從而抑制乳腺癌細胞生長，可以延長生存，減少復發(fā)，在乳腺癌綜合治療中占有重要地位。但內(nèi)分泌治療后由于體內(nèi)雌激素水平的下降，導致機體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂，出現(xiàn)一系列類似于絕經(jīng)期綜合征的癥狀，主要表現(xiàn)為:①神經(jīng)心理癥候群：潮熱汗出、抑郁、煩躁易怒、月經(jīng)失調(diào)、頭暈耳鳴及心悸失眠等。②骨質(zhì)疏松：體內(nèi)雌激素水平下降，成骨細胞活性降低，破骨細胞重吸收功能增強，兩者之間的動態(tài)平衡遭到破壞，導致骨量減少，骨密度降低。③肝臟損害及脂肪變性：抗雌激素治療使雌激素在肝臟表達減少，從而抑制雌激素對脂蛋白的分解作用，導致脂肪在肝細胞內(nèi)的大量堆積誘發(fā)脂肪肝。

乳腺癌采用西藥內(nèi)分泌治療后，由于其導致了體內(nèi)雌激素水平下降，而致機體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂，出現(xiàn)一系列類似于絕經(jīng)期綜合征的癥狀，主要表現(xiàn)為①神經(jīng)心理癥候群：潮熱汗出、抑郁、煩躁易怒、月經(jīng)失調(diào)、頭暈耳鳴及心悸失眠等。②骨質(zhì)疏松：體內(nèi)雌激素水平下降，成骨細胞活性降低，破骨細胞重吸收功能增強，兩者之間的動態(tài)平衡遭到破壞，導致骨量減少，骨密度降低。③肝臟損害及脂肪變性：抗雌激素治療使雌激素在肝臟表達減少，從而抑制雌激素對脂蛋白的分解作用，導致脂肪在肝細胞內(nèi)的大量堆積誘發(fā)脂肪肝。

現(xiàn)階段治療乳腺癌內(nèi)分泌治療后不良反應的方法主要有：①神經(jīng)心理癥候群的防治：主要建議針灸治療或調(diào)整生活方式，嚴重者需停止內(nèi)分泌治療，停藥不利于乳腺癌的治療。②骨質(zhì)疏松的防治：補充鈣劑和維生素D；根據(jù)多項隨機、多中心、大型臨床研究結果顯示可應用唑來磷酸治療或選用抑制破骨細胞活性的地諾單抗治療，這些治療有效，但在治療同時亦會產(chǎn)生相應的副作用，如唑來磷酸治療會出現(xiàn)發(fā)熱、肌肉酸痛及腎臟損害等不良反應，且價格昂貴，增加了患者經(jīng)濟負擔。

技術實現(xiàn)要素：

解決的技術問題

本發(fā)明采用傳統(tǒng)的中醫(yī)藥治療乳腺癌內(nèi)分泌治療后的煩躁、潮熱、多汗、腰酸等腦內(nèi)缺乏單胺類神經(jīng)遞質(zhì)引起的神經(jīng)心理癥候群，根據(jù)此類癥候群主癥及舌苔脈象，辨證為肝腎陰虛、陰虛火旺型。

采用的技術方案

一種具有調(diào)整腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達功效的中藥組合物，具體由以下配比的中藥成分組成：生地黃400-600份，山茱萸100-300份，山藥100-300份，澤瀉150-250份，牡丹皮150-250份，茯苓150-250份，柴胡100-150份，白芍100-300份，山梔150-250份，酸棗仁100-300份，當歸150-250份。

進一步優(yōu)選，本發(fā)明的中藥組合物由以下配比的中藥成分組成：生地黃480份，山茱萸240份，山藥240份，澤瀉180份，牡丹皮180份，茯苓180份，柴胡120份，白芍240份，梔子180份，酸棗仁240份，當歸180份。

有益效果

本發(fā)明針對內(nèi)分泌治療后擾亂了腎-天葵-沖任-胞宮生殖軸的平衡狀態(tài)，腎精不足、陰虛火旺是本病的主要病機，因此本發(fā)明的技術方案集中于清肝補腎、滋陰降火。

本發(fā)明的中藥組合物由生地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓、柴胡、白芍、梔子、酸棗仁、當歸組成。方中生地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、茯苓滋陰補腎，牡丹皮、柴胡、梔子疏肝降火，酸棗仁、白芍、當歸滋陰養(yǎng)血安神。諸藥合用，使腎陰充養(yǎng)，肝氣暢達，虛火得降。

附圖說明

圖1 ER、PR熒光免疫測定陽性證實小鼠乳腺癌4T1細胞為激素依賴性乳腺癌細胞株。

圖2小鼠陰道細胞涂片出現(xiàn)外底層細胞提示去卵巢手術成功。

圖3絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR與5-HT2AR蛋白表達水平成對應反比關系。

具體實施方式

實施方式一：本發(fā)明中藥組合物對去卵巢的乳腺癌移植小鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達的影響

1.制備本發(fā)明中藥組合物湯劑

稱取本發(fā)明中藥組合物中各組分的生藥材，生地黃24g，山茱萸12g，山藥12g，澤瀉9g，牡丹皮9g，茯苓9g，柴胡6g，白芍12g，山梔9g，酸棗仁12g，當歸9g，將上述11味中藥加適量蒸餾水浸泡2h，大火加熱煮沸，之后小火煎煮30min，過濾，再用雙蒸水按前法重復煎煮一次，過濾，將2次煎煮的濾液混合后按所需濃度進行濃縮(含生藥1.88g/mL)，制成本發(fā)明中藥組合物濃縮液，置-80℃冰箱保存?zhèn)洹?/p>

2.建立絕經(jīng)后的乳腺癌小鼠模型

1)取對數(shù)生長期的小鼠乳腺癌4T1細胞株，1.0×10⁴個/孔接種于96孔培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，免疫熒光測定ER、PR表達，證實為激素依賴性乳腺癌細胞株(圖1)。選用4～6周的雌性BALB/c小鼠，體重18～22g，共50只，腹部脫毛，用異氟烷吸入式麻醉，仰臥固定，在小鼠右側倒數(shù)第二對乳腺脂肪墊下接種5×10⁵個4T1細胞，建立小鼠乳腺癌移植模型。接種48h后，觀察腫瘤生長狀況。

2)乳腺癌移植小鼠去卵巢手術：小鼠接種2周后行去卵巢手術，1％戊巴比妥鈉(40ml/kg)腹腔注射麻醉后，仰臥固定，剪去腹部長毛，碘伏、70％乙醇消毒腹部皮膚。腹部正中做2～3cm長切口，鈍性分離腹部肌肉。進入腹腔后輕輕將乳白色脂肪組織提出腹腔。分離后找到Y型子宮。在兩側子宮末端可見卵巢。鉗夾、細線結扎子宮，剪去卵巢，同法處理對側卵巢，檢查無滲血后將脂肪組織和子宮送回腹腔內(nèi)。用3/0線間斷二次縫合，關閉腹腔，縫合皮膚，消毒創(chuàng)面。所有小鼠術后第3天開始行陰道細胞涂片觀察手術效果。連續(xù)5d出現(xiàn)外底層細胞證明小鼠體內(nèi)雌激素水平降低，卵巢摘除手術成功(圖2)。

3.動物實驗療效觀察

1)藥物處理：40只去卵巢的乳腺模型小鼠隨機分為4組：實驗組1(來曲唑+中藥組合物低劑量組)、實驗組2(來曲唑+中藥組合物高劑量組)、模型組(蒸餾水)、陽性對照組(來曲唑組)，共4組，每組10只。來曲唑組劑量0.379mg/kg/d，本發(fā)明中藥組合物低劑量組為11.28g/Kg/d，高劑量為45.1g/Kg/d，模型組予以等劑量蒸餾水灌胃，1次/日。

2)檢測指標

a)給藥第4周，各組小鼠用10％的水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔麻醉，腹主動脈取血2ml，離心機3000r/min，離心20分鐘取上清液，-20℃冰箱貯存，檢測E₂、FSH、LH水平。

b)第4周，各組小鼠腹主動脈采血后，用1％戊巴比妥鈉(40mL/kg)麻醉小鼠，開胸暴露心臟，剪開右心耳，經(jīng)左心室插管至升主動脈，200mL生理鹽水沖洗血液，然后用含4％多聚甲醛的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液(phosp-hate buffer solution，PBS，pH7.4，4℃，300mL灌注固定，先快后慢，灌畢，立即取腦，在冰冷的金屬平臺上迅速分離出海馬區(qū)，保存于-86℃的冰箱備測。Elisa法測定小鼠5-HT、NE水平。Western Blot方法檢測小鼠下丘腦組織中5-HT1AR、5-HT2AR蛋白的表達。

4.實驗結果

1)高劑量本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合來曲唑治療絕經(jīng)后的乳腺癌移植小鼠，能增加小鼠腦內(nèi)5-HT、NE的表達，且不增加E2水平，與陽性對照組(來曲唑組)比，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，低劑量本發(fā)明中藥組合物組和來曲唑組比沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。表明本發(fā)明中藥組合物能通過調(diào)整腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達從而發(fā)揮作用(表1、表2)

表1本發(fā)明中藥組合物對E₂、FSH、LH的影響()

*與陽性對照組相比無統(tǒng)計學意義，P>0.05。**與陽性對照組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05；#與模型組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05；

表2本發(fā)明中藥組合物乳腺癌移植小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響()

注：*與陽性對照組組比，無統(tǒng)計學意義，P>0.05；**與陽性對照組比，有統(tǒng)計學意義P<0.05.

2)本發(fā)明中藥組合物不論低劑量還是高劑量均能提高絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR蛋白表達水平、降低絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT2AR蛋白表達水平。(表3)

表3本發(fā)明中藥組合物對5-HT1AR、5-HT2AR蛋白表達的影響()

*與陽性對照組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05。**與陽性對照組相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05；#與模型組

相比有統(tǒng)計學意義，P<0.05；

3)Western Blot檢測結果顯示：絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR與5-HT2AR蛋白表達水平成對應反比關系，結果見圖3。

4)以上動物實驗結果顯示，本發(fā)明中藥組合物確實存在提高5-HT1AR蛋白表達水平、降低絕5-HT2AR蛋白表達水平的功效，從而具有改善乳腺癌內(nèi)分泌治療后引起的不良反應的效果。

實施方式二：本發(fā)明中藥組合物的臨床療效觀察

1.一般資料：

45例乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)潮熱盜汗、腰膝酸軟及煩躁易怒等類絕經(jīng)期綜合征的患者，年齡34～78歲，平均48.6歲；乳腺癌病程最短13月，最長121月，平均56.6月；發(fā)生不良反應最短時間為內(nèi)分泌治療后6月，最長時間為內(nèi)分泌治療后15月，平均8.2月；乳腺癌根治術,后13例，復發(fā)轉(zhuǎn)移32例；絕經(jīng)前18例，絕經(jīng)后27例；8例接受非藥物內(nèi)分泌治療。予以本發(fā)明中藥組合物滋腎清肝、滋陰降火治療。

2.治療方法

取本發(fā)明中藥組合物生地黃15g，山茱萸7.5g，山藥7.5g，澤瀉5.5g，牡丹皮5.5g，茯苓5.5g，柴胡3.5g，白芍7.5g，梔子5.5g，酸棗仁7.5g，當歸5.5g水煎服，日1劑，水煎2次，早晚分服。

3.療效評價標準

參照《中醫(yī)病證診斷療效標準》，治愈：癥狀消失，停藥半年后隨訪無復發(fā)；好轉(zhuǎn)：癥狀減輕，或部分癥狀消失，或停藥半年后隨訪偶有復發(fā)；無效：癥狀均無改善，或停藥半年后諸癥又復發(fā)。

4.治療結果

治愈l5例(癥狀消失，占33.3％)；好轉(zhuǎn)26例(癥狀減輕，占57.8％)；無效4例(癥狀無減輕，占8.9％)，總有效率為91.1％。以上臨床療效觀察結果顯示，本發(fā)明中藥組合物確實存在提高5-HT1AR蛋白表達水平、降低絕5-HT2AR蛋白表達水平的功效，從而得以用來治療由于乳腺癌內(nèi)分泌治療引起的不良反應如類絕經(jīng)期綜合征。