本發(fā)明涉及保健酒技術領域，更具體地說是一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法。
背景技術：
走馬風，又名紅鋪地毯，系紫金?？谱辖鹋僦参镄娜~紫金牛的全株，分布于廣西、貴州、廣東、中國臺灣等地。具有祛風除濕，通絡止痛之功效。常用于風濕疼痛，跌打損傷，還可用于治療肺結核，慢性支氣管炎，咳嗽氣喘，月經不調，痛經，產后惡露不盡，產后體弱等。公開號為CN105030884A的發(fā)明提供了一種治療甲1型流感病毒的走馬風提取物及其制備方法。該方法通過乙醇熱回流提取，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，樹脂富集洗脫得到走馬風提取物。該方法使用干燥藥材進行熱提取法，而且提取時間短，無法將走馬風中的有效成分充分提取出來。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。
本發(fā)明還有一個目的是提供一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，其通過將走馬風用乙醇進行三次長時間的冷浸，然后進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，最后冷凍干燥，制得具有抗風濕活性的走馬風提取物，能將馬風中的具有抗風濕活性的有效成分充分提取出來，提高走馬風提取物的產出率。
為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸5～7天，然后攪拌3～4h，再次進行第二次冷浸4～6天，攪拌1～2h，最后進行第三次冷浸3～5天，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后將得到第一走馬風浸膏進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物。
優(yōu)選的是，小段走馬風的長度為2～4cm。
優(yōu)選的是，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下。
優(yōu)選的是，石油醚萃取和乙酸乙酯萃取的具體方法為：用蒸餾水將第一走馬風浸膏完全溶解，充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，完成萃取后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復加入石油醚進行萃取2～3次，得到含抗風濕活性成分的水層；然后將含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取。
優(yōu)選的是，第一走馬風浸膏溶解期間，若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1％～1.5％的無水乙醇進行溶解。
優(yōu)選的是，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置3～5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
優(yōu)選的是，小段走馬風在冷浸前需經過以下處理：將小段走馬風使用質量分數(shù)為0.5％～1.5％的醋酸溶液浸泡3～4min進行酸化處理，然后再使用質量分數(shù)2％～3％的小蘇打溶液浸泡2～3min進行堿化處理，繼續(xù)重復酸化、堿化步驟3～5次后，再用質量分數(shù)5％～8％的食鹽水浸泡5～10min，即可進行下一步冷浸處理，回收使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水。
優(yōu)選的是，使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水的后處理方法為：將三種溶液混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，并在第一走馬風浸膏進行石油醚萃取前與第一走馬風浸膏混合。
優(yōu)選的是，第一次冷浸完成后在攪拌期間，向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達到10～15mg/L時停止通氣。
本發(fā)明的至少包括以下有益效果：
第一、對于干燥的藥材，其可溶性成分固結吸附于組織細胞內，浸出溶劑滲透進入藥材必須克服化學成分之間或化學成分與組織細胞之間的吸附力，才能將其中的有效成分提取出來，而本發(fā)明選用新鮮的走馬風作為藥材，有效減少了浸出溶劑滲透進入藥材的阻力；
第二、通常中藥浸提采用乙醇熱回流提取，熱回流提取法容易導致熱不穩(wěn)定性物質分解而丟失，同時提取時間不夠長，無法將走馬風的抗風濕活性成分充分提取出；本發(fā)明采用乙醇冷浸法，將走馬風第一次冷浸5～7天，然后攪拌3～4h，再次冷浸4～6天，攪拌1～2 h，最后冷浸3～5天，通過長時間的冷浸能將走馬風中的具有抗風濕活性的有效成分充分提取出來；
第三、小段走馬風在冷浸前需經過重復多次的醋酸溶液浸泡酸化，小蘇打溶液浸泡堿化，以及食鹽水浸泡，酸化、堿化能將小段走馬風莖葉的表皮細胞打破，即可方便下一步冷浸處理乙醇擴散進入藥材組織細胞內；食鹽水浸泡使藥材組織細胞外的鈉離子濃度升高，從而向藥材組織細胞內滲透，藥材內高濃度溶液中的溶質不斷地向周圍低濃度方向擴散，增加藥材組織細胞的通透性，然后再進行乙醇冷浸，從而有利于浸出抗風濕活性成分；
第四、使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后進行石油醚萃取和減壓回收，得到混合液浸膏，并于第一走馬風浸膏進行石油醚萃取前與第一走馬風浸膏混合，進一步減少走馬風中抗風濕活性成分的丟失，減少資源的浪費；
第五、第一次冷浸完成后在攪拌期間，向冷浸液中通入SO2，SO2是一種抗氧化劑，能保持走馬風的天然特性，同時適量的SO2有利于冷浸液中雜質的沉降，使冷浸液較快獲得澄清，同時也具有殺菌抑菌的作用。
本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明做詳細說明，以令本領域普通技術人員參閱本說明書后能夠據(jù)以實施。
<實施例1>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，再次進行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進行第三次冷浸3天，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后將得到第一走馬風浸膏進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為6.8％)。
<實施例2>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，再次進行第二次冷6天，攪拌2h，最后進行第三次冷浸5天，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后將得到第一走馬風浸膏進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為7.1％)。
<實施例3>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，再次進行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進行第三次冷浸4天，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后將得到第一走馬風浸膏進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為7.3％)。
<實施例4>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成2cm小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，再次進行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進行第三次冷浸3天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟2次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為7.6％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置3h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<實施例5>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成4cm小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，再次進行第二次冷浸6天，攪拌2h，最后進行第三次冷浸5天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1.5％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟3次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為7.8％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<實施例6>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成2～4cm小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，再次進行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進行第三次冷浸4天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；然后用蒸餾水將第一走馬風浸膏完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1.2％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟2次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為8％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置4h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<實施例7>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成2cm小段走馬風，將小段走馬風使用質量分數(shù)為0.5％的醋酸溶液浸泡3min進行酸化處理，然后再使用質量分數(shù)2％～3％的小蘇打溶液浸泡2～3min進行堿化處理，繼續(xù)重復酸化、堿化步驟3次后，再用質量分數(shù)5％的食鹽水浸泡5min；然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸5天，然后攪拌3h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達到10mg/L時停止通氣；再次進行第二次冷浸4天，攪拌1h，最后進行第三次冷浸3天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；將使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟2次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為8.5％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置3h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<實施例8>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成4cm小段走馬風，將小段走馬風使用質量分數(shù)為1.5％的醋酸溶液浸泡4min進行酸化處理，然后再使用質量分數(shù)3％的小蘇打溶液浸泡3min進行堿化處理，繼續(xù)重復酸化、堿化步驟5次后，再用質量分數(shù)8％的食鹽水浸泡10min；然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸7天，然后攪拌4h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達到15mg/L時停止通氣；再次進行第二次冷浸6天，攪拌2h，最后進行第三次冷浸5天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；將使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1.5％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟3次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為8.5％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置5h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<實施例9>
一種具有抗風濕活性的走馬風提取物的制備方法，包括：將新鮮走馬風全株切成3cm小段走馬風，將小段走馬風使用質量分數(shù)為1％的醋酸溶液浸泡3.5min進行酸化處理，然后再使用質量分數(shù)2.5％的小蘇打溶液浸泡2.5min進行堿化處理，繼續(xù)重復酸化、堿化步驟4次后，再用質量分數(shù)6％的食鹽水浸泡8min；然后用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液作為冷浸液，進行第一次冷浸6天，然后攪拌3.5h，攪拌期間向冷浸液中通入SO2，待冷浸液中SO2濃度達到12mg/L時停止通氣；再次進行第二次冷浸5天，攪拌1.5h，最后進行第三次冷浸4天，冷浸過程中需確保小段走馬風全部位于冷浸液的液面以下，冷浸完畢后，過濾除去小段走馬風，將乙醇減壓回收，得到第一走馬風浸膏；將使用過的醋酸溶液、小蘇打溶液和食鹽水混合制得混合液，然后將混合液與與水飽和的乙酸乙酯按等體積混合進行乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層減壓回收，得到混合液浸膏，然后與第一走馬風浸膏混合，再用蒸餾水將其完全溶解，溶解期間若出現(xiàn)難溶物，加入占蒸餾水質量1.2％的無水乙醇進行溶解，然后充分攪拌，然后加入與蒸餾水等體積的石油醚進行萃取，充分攪拌，萃取完成后將石油醚層減壓回收，繼續(xù)重復萃取步驟2次，得到含抗風濕活性成分的水層；再將得到的含抗風濕活性成分的水層用兩倍體積的水飽和的乙酸乙酯進行萃取，萃取完成后，將乙酸乙酯層減壓回收，得到第二走馬風浸膏；然后進行冷凍干燥并粉碎，即制得具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為8.9％)；
其中，石油醚進行萃取的具體方法為：加入石油醚前，需靜置待蒸餾水液面平穩(wěn)后標記液面刻度線，加入石油醚充分攪拌后靜置4h，先用移液管和洗耳球吸取液面刻度線上方和下方的液體置于分液漏斗中，觀察液體是否分層，若分層明顯，則表示液面分層完成，然后將上層液面的石油醚層全部移取出來，將下層液面的水層繼續(xù)進行重復萃取。
<對比例1>
將新鮮走馬風全株切成小段走馬風，然后用體積分數(shù)為80％的乙醇在60℃溫度下熱回流提取3h，重復3次，將回流液濃縮得到濃縮液，然后進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，萃取完后再次濃縮，冷凍干燥并粉碎，得到具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為4.8％)。
<對比例2>
將新鮮走馬風全株曬干得到干燥走馬風藥材，然后粉碎，再用體積分數(shù)為80％的乙醇在60℃溫度下熱回流提取3h，重復3次，將回流液濃縮至無醇味得到濃縮液，然后進行石油醚萃取和乙酸乙酯萃取，萃取完后再次濃縮，冷凍干燥并粉碎，得到具有抗風濕活性的走馬風提取物(走馬風提取物產出率為4.6％)。
通過將實施例1～9與對比例1～2的方法得到的具有抗風濕活性的走馬風提取物的產出率進行對比，對比例1～2的走馬風提取物產出率為4.6％～4.8％，而實施例1～3的走馬風提取物產出率為6.8％～7.3％，實施例4～6的走馬風提取物產出率為7.6％～8％，實施例7～9的走馬風提取物產出率為8.5％～8.9％；由此可見通過選用新鮮走馬風藥材經過長時間的冷浸，能有效提高具有抗風濕活性的走馬風提取物的產出率；酸化、堿化能使小段走馬風莖葉的表皮細胞打破方便乙醇擴散進入藥材組織細胞內；食鹽水浸泡使藥材組織細胞外的鈉離子濃度升高，從而向藥材組織細胞內滲透，藥材內高濃度溶液中的溶質不斷地向周圍低濃度方向擴散，增加藥材組織細胞的通透性，從而有利于浸出抗風濕活性成分；冷浸過程中通入SO2能保持走馬風的天然特性，同時適量的SO2有利于冷浸液中雜質的沉降，通過這一系列的步驟進一步提高具有抗風濕活性的走馬風提取物的產出率。
本發(fā)明的具有抗風濕活性的走馬風提取物可通過口服或外用的形式施用于風濕病患者；用于口服時可將其制成片劑、緩釋片、控釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；外用時可制成膏藥使用。
盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。