本發(fā)明屬于醫(yī)藥品，特別涉及制備防治高尿酸血癥和痛風(fēng)方面的醫(yī)藥品。

背景技術(shù)：

痛風(fēng)是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的代謝性疾病，疾病高發(fā)年齡為中老年男性和絕經(jīng)后女性，被列為21世紀(jì)的20大頑疾之一。尿酸(Uric acid，UA)是人體嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，分解該代謝物成可溶性的尿囊素排出體外，是降低和控制血尿酸水平是治療和預(yù)防痛風(fēng)的重要措施。但人體缺乏尿酸分解酶，積蓄的結(jié)果使人極易形成高尿酸血癥。作為治療痛風(fēng)的指標(biāo)，歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟和美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)建議血尿酸指標(biāo)不得高于6 mg/dl。

黃嘌呤氧化酶( Xanthine Oxidase, XO)是尿酸生成的關(guān)鍵酶，直接調(diào)控體內(nèi)尿酸水平，其活性異常增高導(dǎo)致高尿酸血癥，抑制該酶活性可以減少尿酸的生成，是抗高尿酸血癥藥物的良好靶點(diǎn)。作為抑制XO抗痛風(fēng)藥物有別嘌醇和非布索坦。別嘌醇是嘌呤類(lèi)似物，是競(jìng)爭(zhēng)性的XO抑制劑，但別嘌醇易引起黃嘌呤腎病和結(jié)石（朱深銀、周遠(yuǎn)大、杜冠華.防治痛風(fēng)藥物的研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2006,25:(8):803-806.）以及出現(xiàn)超敏反應(yīng)，而超敏反應(yīng)死亡率極高，特別是HLA-B58陽(yáng)性的患者服用別嘌呤醇后易出現(xiàn)Stevens-Johnson綜合征和中毒性表皮溶解壞死癥（Perez-Ruiz F, Liote F. Lowering serum uric acid levels: what is the optimal target for improving clinical outcomes in gout [J]. Arthritis Rheum 2007, 57:1324-132.），且禁用于重度肝損害、冠心病和心力衰竭患者。非布索坦（Febuxtat）是2009年美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的一種非嘌呤類(lèi)黃嘌呤氧化酶抑制劑，屬于混合型的XO抑制劑，其結(jié)構(gòu)不同于別嘌醇。與別嘌呤醇相比，非布索坦可以快速降低血尿酸水平，尤其適用輕中度腎功能不全的患者，其不良反應(yīng)報(bào)道較少，遠(yuǎn)期效果與毒副作用仍需進(jìn)一步觀(guān)察。尋找新型高效低毒的降尿酸藥物依然是藥學(xué)研究的熱點(diǎn)。

奧柳氮鈉由一個(gè)偶氮鍵連接2分子的5-氨基水楊酸構(gòu)成，目前臨床上用于輕、中度急、慢性潰瘍性結(jié)腸炎，成人口服治療劑量是1500 mg/d（25 mg/kg），必要時(shí)日劑量可增加至3000 mg（50 mg/kg）；兒童日劑量20 ~ 40 mg/kg，且無(wú)明顯嚴(yán)重的不良反應(yīng)（Hanauer SB． The long-term management of ulcerative colitis[J]. Aliment Pharmacol Ther2004,20(upp14): 97- 101．）。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種具有較高降尿酸活性的化合物奧柳氮鈉，用于制備防治高尿酸血癥和痛風(fēng)的藥物和保健品的新用途。

首先是，以?shī)W柳氮鈉作為制備防治高尿酸血癥和痛風(fēng)的藥物和保健品的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述的應(yīng)用是：奧柳氮鈉明顯抑制黃嘌呤氧化酶活性，其IC₅₀為9.8 μmol/L，系混合型的黃嘌呤氧化酶抑制劑。

進(jìn)一步地，所述的應(yīng)用是：奧柳氮鈉以5.0 mg/kg劑量即能顯著降低氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，并能顯著抑制肝臟黃嘌呤氧化酶和黃嘌呤脫氫酶的活性。

經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)奧柳氮鈉明顯抑制黃嘌呤氧化酶的活性，其IC₅₀為9.8 μmol/L，系黃嘌呤氧化酶的混合型抑制劑。體內(nèi)研究表明該化合物具有較強(qiáng)的抗痛風(fēng)作用，5.0 mg/kg劑量即可以明顯降低氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，可以用于制備抗痛風(fēng)的藥物和保健品。

本發(fā)明有益效果及其進(jìn)步在于：

本發(fā)明使用計(jì)算機(jī)輔助藥物研發(fā)快速地蛋白-配體分子對(duì)接軟件idock，輔以準(zhǔn)確的結(jié)合親和力打分算法RF-Score-3以及方便的可視化工具iview進(jìn)行虛擬篩選，從已批準(zhǔn)的藥物數(shù)據(jù)庫(kù)的約3000種藥物中篩選了XO篩選了40多個(gè)XO候選抑制劑，極大節(jié)省了藥物的研發(fā)成本，縮短了藥物的研發(fā)時(shí)間，其中，發(fā)現(xiàn)奧柳氮鈉體外顯著抑制XO的活性，其IC₅₀為9.8 μmol/L，具有高效低毒的降尿酸和抗痛風(fēng)用途。

我們的研究發(fā)現(xiàn)奧柳氮鈉不僅體外能明顯抑制XO的活性，體內(nèi)研究也表明奧柳氮鈉能抑制肝臟XO及XDH活性。尤其是，與奧柳氮鈉目前臨床上治療潰瘍性結(jié)腸炎的成人口服劑量1500 mg/d（25 mg/kg）～3000 mg（50 mg/kg）相比，在尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀所致的高尿酸血癥小鼠模型上，僅5.0 mg/kg劑量即可以明顯降低小鼠的血清尿酸水平，其降尿酸作用所需劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于臨床上治療潰瘍性結(jié)腸炎的劑量，降低了不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)，具有顯著的降尿酸作用，顯示出高效低毒的特點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用價(jià)值及市場(chǎng)前景。

附圖說(shuō)明

圖1為奧柳氮鈉的結(jié)構(gòu)式。

圖2為奧柳氮鈉對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用的坐標(biāo)曲線(xiàn)圖，其IC₅₀為9.8微摩爾/L。

圖3為別嘌醇對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用的坐標(biāo)曲線(xiàn)圖。

圖4為和非布索坦對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用的坐標(biāo)曲線(xiàn)圖。

圖5 為L(zhǎng)ineweaver-Burk氏作圖法求奧柳氮鈉對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型，奧柳氮鈉為混合型抑制。

圖6 為L(zhǎng)ineweaver-Burk氏作圖法求別嘌醇對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型，別嘌醇為競(jìng)爭(zhēng)型抑制。

圖7 為L(zhǎng)ineweaver-Burk氏作圖法求非布索坦對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型，非布索坦為混合型抑制。

圖8為正常對(duì)照組、模型組及奧柳氮鈉10.0、20.0mg/kg、陽(yáng)性藥非布索坦1.0mg/kg腹腔給藥對(duì)氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠肝臟XO的影響對(duì)比圖。

圖9為正常對(duì)照組、模型組及奧柳氮鈉5.0、10.0、20.0 mg/kg、陽(yáng)性藥非布索坦1.0 mg/kg腹腔給藥對(duì)氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠肝臟XDH的影響對(duì)比圖。

以下具體實(shí)施方式在于以實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)的定性或定量數(shù)據(jù)及制劑方法說(shuō)明發(fā)明化合物的醫(yī)藥用途和藥理作用，這些定性或定量數(shù)據(jù)及制劑方法包括但不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

具體實(shí)施方式

1．發(fā)明化合物對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用

黃嘌呤氧化酶(EC 1.1.3.22)為Sigma公司產(chǎn)品，用焦磷酸鈉緩沖液配制成適宜濃度備用。奧柳氮鈉用焦磷酸鈉緩沖液配制成系列濃度備用。系列濃度的奧柳氮鈉溶液與黃嘌呤氧化酶在25℃孵育15 min后，參照文獻(xiàn)方法[Kong LD, Zhang Y, Pan X, Tan RX, and Cheng CHK (2000) Inhibition of xanthine oxidase by liquiritigenin and isoliquiritigenin isolated from Sinofranchetia chinensis. Cell Mol Life Sci 57:500–505]測(cè)定黃嘌呤氧化酶的活性，結(jié)果表明奧柳氮鈉對(duì)黃嘌呤氧化酶的活性有很強(qiáng)的抑制作用，其IC₅₀為9.8 微摩爾/L(圖2～4)，抑制類(lèi)型為混合型抑制（圖5～7）。

2. 發(fā)明化合物對(duì)氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠血尿酸及肝臟黃嘌呤氧化酶和脫氫酶的影響

健康雄性昆明種小鼠（體重18-22 g），由北京華阜康生物科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2014-0004。動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高尿酸血癥模型組、發(fā)明化合物5.0、10.0、20.0 mg/kg組和陽(yáng)性對(duì)照非布索坦1.0 mg/kg組，每組均10只。受試化合物用水配制成適宜濃度，腹腔注射給藥，每天2次，共5個(gè)劑量。采用尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀為化學(xué)性誘導(dǎo)劑，腹腔注射氧嗪酸鉀500 mg/kg，造成高尿酸血癥小鼠，正常對(duì)照組則注射等體積溶媒，注射后1h腹腔給予末次劑量的供試化合物，2 h 后拔眼采血，3000 rpm離心10 min，取血清，采用磷鎢酸比色法(南京建成生物工程研究所試劑盒)測(cè)定血清尿酸水平。留取肝臟凍存于-80℃待測(cè)奧柳氮鈉對(duì)黃嘌呤氧化酶和黃嘌呤脫氫酶的影響。

結(jié)果表明，腹腔注射氧嗪酸鉀后動(dòng)物血清尿酸水平顯著升高，與正常對(duì)照組相比，有顯著性差異，提示模型成功。給予發(fā)明化合物后，血清尿酸水平明顯低于模型對(duì)照組，且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，與模型對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示發(fā)明化合物有很好的降尿酸作用 (表1)。

表1 發(fā)明化合物腹腔給藥對(duì)氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠尿酸的影響

x ± s, n = 10, ^#P﹤0.05, ^##P﹤0.01, 與正常對(duì)照組相比; ^*P﹤0.05, ^**P﹤0.01, 與模型組相比(t-test).

與正常對(duì)照組相比，模型組的肝臟XO活力沒(méi)有顯著性差異。給予發(fā)明化合物10.0、20.0mg/kg及陽(yáng)性藥非布索坦1.0mg/kg后，肝臟XO活力明顯低于模型對(duì)照組，且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，與模型對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖8)。

與正常對(duì)照組相比，模型組的肝臟XDH活力水平顯著升高，與正常對(duì)照組相比，有顯著性差異。給予發(fā)明化合物5.0、10.0、20.0 mg/kg及陽(yáng)性藥非布索坦1.0 mg/kg后，肝臟XOD活力明顯低于模型對(duì)照組，且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，與模型對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖9)。