本發(fā)明涉及一種七葉皂苷鈉組合物及其制備方法，屬于化藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：婆羅子為七葉樹科植物七葉樹AesculuschinensisBge.、浙江七葉樹AesculuschinensisBge.var.chekiangensisFang或天師栗AesculuswilsoniiRehd.的干燥成熟種子。具有理氣寬中，和胃止痛的功效，用于治療胸悶脹痛，胃脘疼痛。七葉皂苷是中藥娑羅子(Aesculi)提取物的主要活性成分,它具有消炎、抗?jié)B出、恢復(fù)毛細(xì)血管通透性,提高靜脈張力,改善血液循環(huán),促進(jìn)腦細(xì)胞恢復(fù)等作用.廣泛用于治療流行性乙型腦炎、腦血管疾病、周圍神經(jīng)疾病、Hunt’s綜合癥,有激素的抗炎及改善循環(huán)的功能,但無激素的副作用及禁忌癥。目前多以總七葉皂苷(Totalescin)鈉應(yīng)用于臨床，主要含有4種主要成分。我國國家標(biāo)準(zhǔn)按液相色譜出峰先后，依次命名為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D。七葉皂苷A和B是-型七葉皂苷，其結(jié)構(gòu)基本相同，但與C21-羥基成酯的有機(jī)酸不同，是互為正反異構(gòu)體的巴豆油酸或當(dāng)歸酸。七葉皂苷C和D分別是七葉皂苷A和B的C28-羥基上乙酸酯轉(zhuǎn)位至C28-羥基的異構(gòu)體；七葉皂苷C和D也互為異構(gòu)體，是Crypto-型(異型)七葉皂苷，又稱異七葉皂苷或異型七葉皂苷。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的之一是提供一種七葉皂苷鈉組合物，其包含七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D的鈉鹽；四者在組合物中所占重量百分比高于95％。在一個實施方案中，所述組合物中七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D的鈉鹽的重量比為：10-50：10-50：10-50：10-50。在進(jìn)一步地實施方案中，所述組合物中七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D的鈉鹽的重量比為：10-20：15-30：30-50：20-40。在一個具體實施方案中，所述組合物中七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D的鈉鹽的重量比為：12-15：16-20：41-44：25-28。本發(fā)明目的之二是提供一種包含上述七葉皂苷鈉組合物的藥物制劑，所述藥物制劑為注射劑，其由上述七葉皂苷鈉組合物和藥學(xué)上可接受的輔料制成凍干粉針或注射液。在一個實施方案中，所述藥物制劑為凍干粉針，所述輔料選自鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、氫氧化銨、枸櫞酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、明膠、海藻酸鈉、甘氨酸、谷氨酸、氯化鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、硫脲、維生素C和依地酸鈣鈉的中一種或幾種。在進(jìn)一步地實施方案中，所述輔料由海藻糖、維生素C和明膠組成。更具體地講，凍干粉針的具體組成為10重量份的七葉皂苷鈉組合物、1-5重量份的海藻糖、0.5-2重量份的維生素C和1-5重量份的明膠；優(yōu)選為10重量份的七葉皂苷鈉組合物、4重量份的海藻糖、1重量份的維生素C和2重量份的明膠。本發(fā)明目的之三是提供所述七葉皂苷鈉組合物的制備方法，具體步驟如下：(1)將藥材粉碎過篩制成20-40目的粗粉，置于超臨界萃取儀的萃取釜中進(jìn)行萃??；(2)將萃取物用55％乙醇溶解，上陽離子樹脂柱，用85％乙醇用量洗脫，收集洗脫液；用NaOH調(diào)洗脫液pH值至5.2-5.5，濃縮洗脫液；(3)向濃縮洗脫液中加入無水乙醇至含醇度95％左右，靜置12小時，抽濾收集沉淀即得。在一個實施方案中，步驟1中的超臨界萃取條件為用超臨界二氧化碳作為溶劑，添加藥材重量5％的夾帶劑，在壓力為20-35MPa，溫度為40-60℃條件下萃取，超臨界二氧化碳萃取時間為3-6小時。在一個具體地實施方案中，所述夾帶劑由水、乙醇和氨水組成，三者的體積百分比為40％：50％：10％。本發(fā)明經(jīng)過對七葉皂苷鈉組合物的多年研究，意外獲得了一種活性極佳的七葉皂苷鈉組合物，并且毒性較低。具體實施方式還可進(jìn)一步通過實施例來理解本發(fā)明，其中所述實施例說明了一些制備或使用方法。然而，要理解的是，這些實施例不限制本發(fā)明?，F(xiàn)在已知的或進(jìn)一步開發(fā)的本發(fā)明的變化被認(rèn)為落入本文中描述的和以下要求保護(hù)的本發(fā)明范圍之內(nèi)。實施例1七葉皂苷鈉組合物的制備(1)將10kg娑羅子粉碎過篩制成20目的粗粉，置于超臨界萃取儀的萃取釜中進(jìn)行萃??；用超臨界二氧化碳作為溶劑，添加0.5kg的夾帶劑，在壓力為30MPa，溫度為55℃條件下萃取，超臨界二氧化碳萃取時間為4小時。(2)將萃取物用55％乙醇溶解，上陽離子樹脂柱，用5倍柱體積的85％乙醇洗脫，收集洗脫液；用NaOH調(diào)洗脫液pH值至5.3，濃縮洗脫液；(3)向濃縮洗脫液中加入無水乙醇至含醇度95％左右，靜置12小時，抽濾收集沉淀即得。經(jīng)HPLC測定，制備的七葉皂苷鈉組合物的具體重量百分比組成為七葉皂苷A為13.9％，七葉皂苷B為17.4％，七葉皂苷C為42.1％，七葉皂苷D為25.9％。另外，在多批次制備過程中，所獲得的組合物中七葉皂苷鈉的總量均高于99％，七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D的鈉鹽在組合物中的具體重量百分比為：七葉皂苷A為12-15％，七葉皂苷B為16-20％，七葉皂苷C為41-44％，七葉皂苷D為25-28％。實施例2七葉皂苷鈉組合物的抗炎作用研究取昆明種小鼠，隨機(jī)分組，在尾靜脈注射不同劑量七葉皂苷組合物或生理鹽水(模型組)30分鐘后，每鼠右耳涂抹二甲苯0.1ml，2小時后依次處死小鼠，用9mm直徑打孔器打下雙耳圓片，稱重，計算每只小鼠的腫脹度(右耳與左耳重差)及抑制率(抑制率＝(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100％))，具體結(jié)果如下：分組劑量腫脹度(mg)抑制率(％)模型組-18.1±2.7-實施例10.25mg/kg9.4±1.9**^^48.10.5mg/kg6.2±1.6**^^65.7對比例10.25mg/kg14.3±2.2*20.90.5mg/kg11.8±2.4**34.8對比例20.25mg/kg13.7±2.5*24.30.5mg/kg10.2±2.7**43.6對比例30.25mg/kg15.6±3.113.80.5mg/kg12.3±2.9**32.0*和**代表經(jīng)Oneway-ANOVA檢驗，與模型組相比P<0.05和0.01；^^代表與各對比例組相比P<0.01對比例1采用的七葉皂苷鈉組合物通過專利CN201510229253說明書實施例1公開的方法進(jìn)行制備，經(jīng)HPLC檢測其重量百分比組成為七葉皂苷A為44.8％，七葉皂苷B為29.1％，七葉皂苷C為16.3％，七葉皂苷D為7.4％。對比例2采用的七葉皂苷鈉組合物通過專利CN200710137514說明書實施例1公開的方法進(jìn)行制備，經(jīng)HPLC檢測其重量百分比組成為七葉皂苷A為31.7％，七葉皂苷B為22.6％，七葉皂苷C為25.4％，七葉皂苷D為18.9％。對比例3采用的七葉皂苷鈉組合物重量百分比組成為七葉皂苷A為37.9％，七葉皂苷B為18.3％，七葉皂苷C為31.2％，七葉皂苷D為12.6％，由上述四種化合物標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)配得到。實施例3七葉皂苷鈉組合物的腦缺血保護(hù)作用研究SD大鼠，禁食過夜，自由飲水。實驗當(dāng)天用異氟烷氣體麻醉并維持。仰臥位固定，沿頸正中線切開皮膚，暴露右側(cè)頸總動脈，小心分離頸總動脈分叉至顱底部的血管周圍的神經(jīng)及筋膜，分離頸外動脈分支枕動脈、甲狀腺上動脈、舌動脈和上顎上頜動脈，結(jié)扎，剪斷。從頸外動脈游離端插入3#絲線(直徑0.260mm)，從頸外動脈遠(yuǎn)心端將尼龍線導(dǎo)入到頸內(nèi)動脈，插至Willis環(huán)大腦中動脈處，以有效阻斷大腦中動脈，插入的尼龍線長度距頸總動脈分叉處18～20mm。然后將頸外動脈游離端連同腔內(nèi)尼龍線一并結(jié)扎，以防出血。逐層縫合皮下筋膜和皮膚，肌肉注射青霉素防止感染。假手術(shù)組動物僅分離出頸內(nèi)動脈。過夜后進(jìn)行神經(jīng)缺陷評分，有明顯神經(jīng)功能缺陷者(>8分)為造型成功。分組及給藥具體分為假手術(shù)組、模型組及給藥組。采用尾靜脈輸注給藥的方式給藥，給藥體積以最大給藥體積計算，即均定容成2.25ml/100g(大鼠體重)，輸注時間120min，每天一次，連續(xù)3天，各給藥組劑量相當(dāng)于3.5mg/kg。假手術(shù)組和模型組給予生理鹽水。腦梗死范圍測定實驗結(jié)束后取腦，沿冠狀面切成2mm厚的切片，間隔取上述一半腦片放入2％TTC染液中，避光37℃溫孵10min進(jìn)行染色，采用COOLPIX955數(shù)碼相機(jī)成像系統(tǒng)將數(shù)字影象存儲于計算機(jī)中，并用圖象分析系統(tǒng)v4.0軟件測量梗死區(qū)和全腦面積，計算腦梗死范圍(梗死區(qū)面積占全腦面積百分比),具體結(jié)果如下：實施例4七葉皂苷鈉組合物半數(shù)致死量測定(LD50)健康小鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分組，每組10只。分別給小鼠尾靜脈注射七葉皂苷鈉組合物，給藥體積0.5mL/20g，按Bliss統(tǒng)計法計算各組組合物的LD50，具體結(jié)果如下：實施例5七葉皂苷鈉組合物注射粉針制備稱取10g的實施例1制備的七葉皂苷鈉組合物、4g的海藻糖、1g的維生素C和2g的明膠，加入注射用水混合攪拌得澄明溶液，用氫氧化鈉調(diào)pH值至6.7；濾膜過濾除菌，分裝入玻璃瓶中，經(jīng)凍干即得。經(jīng)高溫(45℃)高濕(75％)保存9個月，凍干粉針中七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D與標(biāo)示量相比，差別小于1％。并且在傳統(tǒng)血管刺激性測試中無明顯刺激反應(yīng)。本
發(fā)明內(nèi)容僅僅舉例說明了要求保護(hù)的一些具體實施方案，其中一個或更多個技術(shù)方案中所記載的技術(shù)特征可以與任意的一個或多個技術(shù)方案相組合，這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案也在本申請保護(hù)范圍內(nèi)，就像這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案已經(jīng)在本發(fā)明公開內(nèi)容中具體記載一樣。當(dāng)前第1頁1 2 3