本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，將臭氧化油用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防、治療和與治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物的聯(lián)合用藥。具體涉及臭氧化油通過(guò)口服途徑預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥、老年癡呆癥、帕金森病。
背景技術(shù)：
Velio Bocci在《臭氧治療學(xué)》一書(shū)中概述了使用低劑量的臭氧氣體能夠發(fā)揮許多有益功能，且無(wú)副作用，即臭氧療法（見(jiàn)Velio Bocci撰寫(xiě)的《Oxygen-Ozone Therapy》，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2004）。臭氧療法可以通過(guò)多種給藥途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，并針對(duì)不同疾病產(chǎn)生不同的功效。臭氧化油外用作為抗菌劑、除臭劑用于褥瘡和潰瘍等皮膚病的治療藥物。因此，現(xiàn)已知臭氧具有氧化和抗菌作用。將臭氧化油直接灌胃用于幽門(mén)螺旋桿菌引起的胃炎的治療。肌肉或皮下注射臭氧氣體來(lái)治療慢性病毒肝炎和血管性疾病。陰道直接通入臭氧氣體能夠治愈炎癥和細(xì)菌感染。將臭氧氣體直接與一定體積的血液在體外混合，再回輸給患者被稱(chēng)為自體血療法，能夠調(diào)理人體內(nèi)環(huán)境，降低機(jī)體的敏感性和增強(qiáng)機(jī)體免疫力。直腸直接吹臭氧氣體能夠改善帕金森病的癥狀（見(jiàn)Lamberto Re， Mohamed N. Mawsouf， Silvia Menendez， Olga S. Leon， Gregorio M. Sanchez， and Frank Hernandez 撰寫(xiě)的《Ozone Therapy: Clinical and Basic Evidence of Its Therapeutic Potential》，Archives of Medical Research，2008， 39: 17-26）。腹腔給臭氧氣體能夠保護(hù)心臟免受急性心肌梗塞的損傷（Clara Di Filippo， Margherita Luongo， Raffaele Marfella， Franca Ferraraccio， Biagio Lettieri， Annalisa Capuano， Francesco Rossi， Michele D'Amico撰寫(xiě)的《Oxygen/ozone protects the heart from acute myocardial infarction through local increase of eNOS activity and endothelial progenitor cells recruitment》，Naunyn-Schmied Arch Pharmacol，2010， 382:287–291）。從結(jié)構(gòu)上看，盡管臭氧化油和臭氧氣體（:O-O-O）并不是同一物質(zhì)，但臭氧化油是通過(guò)對(duì)油的加成臭氧得到，故在其分子中具有臭氧化物結(jié)構(gòu)，與臭氧氣體的功能相似。以上各種給藥途徑均表明臭氧能夠以氣體的方式直接被機(jī)體吸收并發(fā)揮功能。臭氧氣體的功能可能通過(guò)以下三個(gè)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)：（1）、臭氧在體內(nèi)通過(guò)生物化學(xué)反應(yīng)，生成類(lèi)似活性氧的物質(zhì)（羥基自由基OH-、超氧陰離子O2-等），廣泛影響著機(jī)體氧化還原系統(tǒng)；（2）、臭氧能夠引起內(nèi)皮祖細(xì)胞聚集和促進(jìn)一氧化氮（NO）的生成，起到舒張血管的作用；（3）、臭氧能夠誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞到血管損傷部位，促進(jìn)損傷血管修復(fù)重建，但具體機(jī)制尚不明確。
上述給藥途徑存在諸多缺陷：沿途與太多物質(zhì)接觸，難以保證氣體進(jìn)入機(jī)體的有效濃度。若給予過(guò)量極易誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生不適反應(yīng)，且操作過(guò)程繁瑣，再加上療程較長(zhǎng)，患者難以接受。尤其是自體血療法，每周2～3次，連續(xù)10周為一療程。本發(fā)明以油與臭氧加成的方式，得到臭氧化油，再將此油以腸溶膠囊包裹，能夠克服直接使用臭氧氣體的諸多缺點(diǎn)。既保證臭氧化油不與外界任何物質(zhì)接觸，在常態(tài)下亦可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存；還能定量控制臭氧化油進(jìn)入機(jī)體，從而避免通過(guò)其它給藥方式給藥，人為造成藥量不當(dāng)。臭氧化油腸溶膠囊的給藥途徑為直接口服，對(duì)機(jī)體傷害最小，操作簡(jiǎn)單易行，方便攜帶，為其推廣奠定了良好的基礎(chǔ)。
在臭氧化油產(chǎn)品中，臭氧化橄欖油、葵花油、大豆油作為抗菌劑、除臭劑用于褥瘡和潰瘍等皮膚病的治療的外用藥品已經(jīng)上市。但將臭氧化油制成腸溶膠囊的形式通過(guò)直接口服的方式進(jìn)入機(jī)體而產(chǎn)生功效，目前尚無(wú)報(bào)道。在本發(fā)明中，通過(guò)直接口服臭氧化油腸溶膠囊，腹腔注射、灌腸、灌胃、靜脈注射、皮下注射、肌肉注射和栓劑的方式，能夠產(chǎn)生藥物作用。
老年癡呆癥(又稱(chēng)阿爾茲海默癥)的發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚。目前市場(chǎng)上的藥物主要增加膽堿能功能的藥物，如膽堿酯酶抑制劑加蘭他敏、多奈哌齊(安理申)，M受體激動(dòng)藥占諾美林等，這些藥物僅能延緩發(fā)病過(guò)程，但不能治愈老年癡呆癥，并且伴有心血管和胃腸道副作用。而其他常用的藥物如抗抑郁劑、抗焦慮、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗精神病藥等藥物對(duì)老年癡呆癥的癥狀改善有限，且有神經(jīng)系統(tǒng)的副反應(yīng)。鑒于此，需要一種更高效和安全的能治療老年癡呆癥的藥劑。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀，提供能夠有效緩解老年癡呆癥癥狀，減緩老年癡呆癥的記憶功能減退，減緩老年癡呆癥的認(rèn)知功能障礙，防止老年癡呆癥導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷的一種用于治療老年癡呆癥的藥劑。
帕金森病(PD)又名震顫麻痹，是最常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病之一。臨床上的主要病理改變是中腦黑質(zhì)致密部多巴胺(DA)能神經(jīng)元選擇性的死亡、缺失，導(dǎo)致紋狀體DA不足，從而導(dǎo)致基底節(jié)神經(jīng)調(diào)節(jié)功能的紊亂，其發(fā)病的病因，截至目前尚未清楚。然而研究已經(jīng)證實(shí)，該病與氧化應(yīng)激和線(xiàn)粒體功能異常等具有密切關(guān)系，因此，減輕氧化應(yīng)激損傷可以作為藥物作用靶點(diǎn)來(lái)治療帕金森病。此外，最新的研究顯示，臭氧可改善帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的臨床癥狀，顯示出明確的抗氧化保護(hù)作用，并且在神經(jīng)保護(hù)方面有一定的效果。帕金森病患者的黑質(zhì)致密區(qū)細(xì)胞凋亡，是該病的重要病理基礎(chǔ)，抑制此種凋亡，對(duì)該病的治療也會(huì)起到積極的作用。臭氧由于它廣泛地存在于常見(jiàn)的大氣中，具有多種生物活性，如：心血管保護(hù)作用、抗氧化作用、抗紫外及抗輻射作用、抗誘變及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫調(diào)節(jié)作用等。在醫(yī)藥化工和食品等領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是利用臭氧化油制劑和給藥途徑來(lái)預(yù)防和治療抑郁癥、焦慮癥、老年癡呆癥、帕金森病，制備簡(jiǎn)便、成本低廉。經(jīng)臨床應(yīng)用驗(yàn)證，本發(fā)明具有療效顯著，口服劑量低，無(wú)毒副作用，有效率高等優(yōu)點(diǎn)。
在本發(fā)明中，之所以選擇權(quán)利要求1、2所述的各種油中的一種、兩種和兩種以上，是因?yàn)檫@些油不飽和脂肪酸含量較高，其中核桃油的不飽和脂肪酸高達(dá)92%以上，在不飽和脂肪酸結(jié)構(gòu)中至少有一個(gè)烯烴類(lèi)雙鍵。若將權(quán)利要求1、2中的一種、兩種和兩種以上含不飽和脂肪酸高的油與權(quán)利要求3～7中的一種、兩種和兩種以上的表面活性劑混合，亦能與臭氧發(fā)生加成反應(yīng)。可見(jiàn)只要加成物的結(jié)構(gòu)中存在烯烴不飽和鍵即可與臭氧發(fā)生加成反應(yīng)，不飽和鍵數(shù)目越多，反應(yīng)越容易發(fā)生，且與臭氧加成的量越多，加成物能夠攜帶臭氧分子的數(shù)目也越多。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案將結(jié)合下面的制作流程和實(shí)施方式進(jìn)行簡(jiǎn)單的說(shuō)明。
1、制備臭氧氣體。
2、制備臭氧化油。
3、制備臭氧化油腸溶膠囊。
4、制備含表面活性劑的臭氧化油。
5、制備含表面活性劑的臭氧化油腸溶膠囊。
6、臭氧化橄欖油膠囊對(duì)老年癡呆癥的防治實(shí)驗(yàn)。
7、臭氧化橄欖油膠囊對(duì)抑郁癥的防治作用。
8、臭氧化橄欖油膠囊對(duì)焦慮癥的防治作用。
9、臭氧化橄欖油膠囊對(duì)帕金森癥的防治作用。
具體實(shí)施方式
下列非限制性實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過(guò)臭氧發(fā)生器來(lái)制備臭氧氣體。
選自西安德潤(rùn)生物技術(shù)有限責(zé)任公司設(shè)計(jì)生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機(jī)（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個(gè)過(guò)程須要在20～25℃進(jìn)行，確保臭氧化油不會(huì)發(fā)生熱解反應(yīng)。
3、橄欖油3kg置入反應(yīng)釜中；臭氧以150m3/h流速加入，總反應(yīng)時(shí)間為20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個(gè)月。
5、制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱(chēng)取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時(shí)溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達(dá)60℃的時(shí)候開(kāi)始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺(jué)，開(kāi)始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時(shí)間為2小時(shí)，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時(shí)。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時(shí)，出籠，干燥即得臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實(shí)施例2臭氧化橄欖油、大豆油和花生油混合油的腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過(guò)臭氧發(fā)生器來(lái)制備臭氧氣體。
選自西安德潤(rùn)生物技術(shù)有限責(zé)任公司設(shè)計(jì)生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機(jī)（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個(gè)過(guò)程須要在20～25℃進(jìn)行，確保臭氧化油不會(huì)發(fā)生熱解反應(yīng)。
3、橄欖油1kg，大豆油1kg和花生油1kg置入反應(yīng)釜中；臭氧以150m3/h流速加入，總反應(yīng)時(shí)間為20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化混合油濃度為40mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個(gè)月。
5、制備臭氧化混合油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱(chēng)取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時(shí)溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達(dá)60℃的時(shí)候開(kāi)始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺(jué)，開(kāi)始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時(shí)間為2小時(shí)，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時(shí)。
（2）、采用壓制法制備臭氧化混合油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時(shí)，出籠，干燥即得臭氧化混合油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實(shí)施例3含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過(guò)臭氧發(fā)生器來(lái)制備臭氧氣體。
選自西安德潤(rùn)生物技術(shù)有限責(zé)任公司設(shè)計(jì)生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機(jī)（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個(gè)過(guò)程須要在20～25℃進(jìn)行，確保臭氧化油不會(huì)發(fā)生熱解反應(yīng)。
3、橄欖油3kg置入反應(yīng)釜中，緩慢加入失水山梨醇單油酸酯聚氧乙烯醚（吐溫80）20mL，混勻，臭氧以150m3/h流速加入，總反應(yīng)時(shí)間為20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個(gè)月。
5、制備含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱(chēng)取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時(shí)溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達(dá)60℃的時(shí)候開(kāi)始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺(jué)，開(kāi)始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時(shí)間為2小時(shí)，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時(shí)。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時(shí)，出籠，干燥即得含表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實(shí)施例4含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊制備
1、制備臭氧氣體。本發(fā)明采用醫(yī)用氧氣通過(guò)臭氧發(fā)生器來(lái)制備臭氧氣體。
選自西安德潤(rùn)生物技術(shù)有限責(zé)任公司設(shè)計(jì)生產(chǎn)的DRO3-A型臭氧機(jī)（功率≦55W）。
2、制備臭氧化油和臭氧化油腸溶膠囊整個(gè)過(guò)程須要在20～25℃進(jìn)行，確保臭氧化油不會(huì)發(fā)生熱解反應(yīng)。
3、橄欖油3kg置入反應(yīng)釜中，緩慢加入失水山梨醇單油酸酯聚氧乙烯醚（吐溫80）20mL和純乙醇20mL，混勻，臭氧以150m3/h流速加入，總反應(yīng)時(shí)間為20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，余氣滅活。
4、得到臭氧化橄欖油濃度為40 mg/L，25℃可穩(wěn)定保存十個(gè)月。
5、制備含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊。
（1）、囊材的制備:按重量比3：3：1：1的比例稱(chēng)取水、明膠、甘油和糯米粉或淀粉倒入膠罐中，溶膠時(shí)溫度先設(shè)置成75℃，在溫度到達(dá)60℃的時(shí)候開(kāi)始加水，加水10分鐘，用手觸有微燙的感覺(jué)，開(kāi)始加入甘油，攪拌2分鐘，從膠罐底部取2次，倒回膠罐中，迅速加明膠，攪拌時(shí)間為2小時(shí)，攪拌后溫度設(shè)定為60℃，靜置脫氣泡8小時(shí)。
（2）、采用壓制法制備臭氧化橄欖油腸溶膠囊，容量0.25mL。
室溫22℃制膠囊，膠皮厚度為0.7mm，容量為0.25mL，制得的軟膠囊在轉(zhuǎn)籠里冷卻8小時(shí)，出籠，干燥即得含表面活性劑和助表面活性劑的臭氧化橄欖油腸溶膠囊，于4℃避光冷藏備用。
實(shí)施例5臭氧化橄欖油膠囊對(duì)老年癡呆癥的防治實(shí)驗(yàn)
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案
1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:
實(shí)驗(yàn)采用雄性ICR小鼠，體重22-28g。分為4個(gè)組，正常對(duì)照組，Aβ淀粉樣蛋白(Aβ)組，臭氧化橄欖油給藥組2.5mg/只/d空腹灌胃，Aβ和臭氧化橄欖油膠囊給藥組，每組8只。每天的試驗(yàn)時(shí)間固定于9:00AM-4:30PM。實(shí)驗(yàn)操作遵循NIH實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用指南(NIH publications No.80-23，1996)。
2、老年癡呆癥動(dòng)物模型的建立:
給小鼠注射水合氯醛，劑量10mg/kg，將其麻醉，固定在立體定位儀上，剪掉頭部毛發(fā)，暴露皮膚，以?xún)裳圻B線(xiàn)的中點(diǎn)為起點(diǎn)，兩耳后緣連線(xiàn)的中點(diǎn)為終點(diǎn)剪開(kāi)一道切口，暴露前鹵，以前鹵為坐標(biāo)原點(diǎn)，后退1.5 mm，左右旁開(kāi)1.2mm，這兩個(gè)點(diǎn)即為海馬CAl區(qū)的坐標(biāo)，鉆孔，進(jìn)針1.5mm，注射Aβlμg，對(duì)照組和臭氧化橄欖油給藥組注射生理鹽水，縫合皮膚，消毒，放回籠子里飼養(yǎng)。
3、給藥:
模型建立完成之后，對(duì)照組注射生理鹽水，臭氧化橄欖油給藥采取灌胃2.5mg/只/d，每天空腹給藥一次，持續(xù)給藥14天，之后進(jìn)行行為學(xué)檢驗(yàn)。
4、學(xué)習(xí)和記憶能力的行為學(xué)檢驗(yàn)(水迷宮實(shí)驗(yàn)):
水迷宮裝置是一個(gè)圓形的黑色水池，直徑110cm，高50cm，里面注滿(mǎn)水，水深24cm，水溫22-24℃，水面下1cm處有一直徑8cm的平臺(tái)，水池周?chē)泻谏哪徊颊趽?，四周掛有可?jiàn)的標(biāo)記物以便小鼠記憶位置方向，水迷宮人為分成4個(gè)象限，小鼠每次訓(xùn)練都從不同的象限入水，4個(gè)象限結(jié)束為一個(gè)訓(xùn)練周期，小鼠在水中自由游泳，直到找到平臺(tái)，如果小鼠90秒內(nèi)無(wú)法找到平臺(tái)，則人為引導(dǎo)小鼠到平臺(tái)，讓其在平臺(tái)上停留15秒。每只小鼠每天訓(xùn)練8次(2個(gè)周期)，連續(xù)訓(xùn)練4天。第5天，撤掉水下平臺(tái)，從原有平臺(tái)對(duì)面象限放入小鼠，讓其在水迷宮裝置中自由游泳60秒。采用視頻監(jiān)控系統(tǒng)跟蹤錄像。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，軟件分析小鼠運(yùn)動(dòng)軌跡。
5、認(rèn)知能力的檢驗(yàn)(新物體識(shí)別):
新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)在一個(gè)自制的白色塑料行為箱中進(jìn)行，行為箱的長(zhǎng)寬高分別為50*50*30cm，整個(gè)實(shí)驗(yàn)分3個(gè)階段3天完成。第一階段，第1天適應(yīng)期，將小鼠放入行為箱中讓其自由探索5分鐘，在這一階段，沒(méi)有數(shù)據(jù)收集。第二階段，第2天訓(xùn)練期，兩個(gè)相同的物體被放入行為箱中，物體距離行為箱大約5cm，兩個(gè)物體相距20cm，放入小鼠讓其自由探索5分鐘。我們對(duì)探索行為進(jìn)行了定義:小鼠的鼻子距離物體小于2cm或者用鼻子觸碰物體。在物體周?chē)邉?dòng)或者趴在物體附近不能作為探索行為。在這一階段，記錄小鼠探索，每個(gè)物體的時(shí)間，結(jié)束后，小鼠立刻放回原來(lái)的籠子。第三階段，第3天測(cè)試期，小鼠被放回原來(lái)行為箱自由探索5分鐘，其中一個(gè)物體換成一個(gè)新的物體。采用分辨指數(shù)衡量小鼠的認(rèn)知功能，分辨指數(shù)=探索新物體的時(shí)間/(探索新物體的時(shí)間+探索舊物體的時(shí)間)。
6、統(tǒng)計(jì)分析處理
本部分的數(shù)據(jù)均用mean±SD(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)的格式表示。數(shù)據(jù)用方差分析(one-way ANOVA)。P<0.05定為顯著性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
(1)臭氧化橄欖油處理改善老年癡呆癥模型小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶(如表1所示)：
在訓(xùn)練期第4天，測(cè)量小鼠從水中逃離到平臺(tái)的時(shí)間，注射Aβ后小鼠找到平臺(tái)花費(fèi)更長(zhǎng)的時(shí)間。臭氧化橄欖油灌胃后(2.5mg/只/d)，小鼠找到平臺(tái)的時(shí)間明顯縮短(P<0.05)。在第5天探索期，我們將第二象限的平臺(tái)撤掉，來(lái)檢測(cè)小鼠的記憶能力。結(jié)果顯示，Aβ小鼠在第二象限的路程明顯少于正常對(duì)照組(p<0.0l)，Aβ注射后臭氧化橄欖油灌胃組比Aβ注射組花更多的時(shí)間在第二象限(p<0.0l)。對(duì)小鼠穿越原有平臺(tái)位置的次數(shù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，立體定位注射Aβ后，小鼠穿越原有平臺(tái)位置的次數(shù)明顯少于正常組(p<0.0l)，臭氧化橄欖油灌胃后，小鼠穿越原有平臺(tái)位置的次數(shù)明顯增加(p<0.0l)。
表1臭氧化橄欖油對(duì)老年癡呆癥模型小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的影響
與模型組比較，** p<0.0l
(2)臭氧化橄欖油處理改善老年癡呆癥模型小鼠認(rèn)知功能(如表2所示):
通過(guò)新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠探索新舊物體的時(shí)間比例。分辨指數(shù)=識(shí)別物體1的時(shí)間/(識(shí)別物體1時(shí)間+識(shí)別物體2時(shí)間)，表2中發(fā)現(xiàn)小鼠探索兩個(gè)相同物體的分辨指數(shù)和總探索時(shí)間基本相等，各組之間比較無(wú)顯著性差異。表2中顯示測(cè)試期小鼠對(duì)新物體(物體1換成一個(gè)之前未接觸過(guò)的新物體，物體2不變)的分辨指數(shù)。在測(cè)試期，Aβ小鼠的分辨指數(shù)較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 臭氧化橄欖油處理小鼠的分辨指數(shù)較Aβ小鼠顯著升高。各組和Aβ定位組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Aβ定位組灌胃臭氧化橄欖油后，分辨指數(shù)較Aβ對(duì)照組提高。
表2臭氧化橄欖油對(duì)老年癡呆癥模型小鼠認(rèn)知功能的影響
與模型組比較，* p<0.05
結(jié)論: 臭氧化橄欖油能夠有效改善老年癡呆癥的記憶功能減退和認(rèn)知功能損傷。因此，本發(fā)明的用于治療老年性癡呆癥的藥劑具有顯著的臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。
本發(fā)明的最佳實(shí)施例已闡明，由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員做出的各種變化或改型都不會(huì)脫離本發(fā)明的范圍。
有關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)資料如下:
1、臨床資料
1.1資料選取自2013年2月至2015年12月患者50例，以1:l的比例隨機(jī)分為治療組與對(duì)照組各25例。其中治療組男20例，女5例;年齡60-80(67.2±5.4)歲;病程1-12 (4.4±1.3)年;癥狀計(jì)分10-28 (16.1±1.6)分。對(duì)照組男18例，女7例;年齡62-85（68.9±4.5）歲；病程1-10 (4.2±1.4)年;癥狀計(jì)分11-28 (17.2±1.7)分。兩組患者在性別、年齡、病程、病情等一般資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。
2、診斷標(biāo)準(zhǔn)
美國(guó)神經(jīng)病學(xué)會(huì)第四版《精神病的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(DSM-IV)》中老年性癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
（1） 發(fā)生多方面認(rèn)知缺陷、變?yōu)橐韵聝烧撸?/p>
A.記憶缺損(學(xué)習(xí)新信息的能力受損或不能回憶以前的所學(xué)到的信息)；
B.至少有下列認(rèn)知障礙之一:(1)失語(yǔ)(2)失認(rèn)(3)失用(4)執(zhí)行管理能力的障礙；
（2）上述表現(xiàn)導(dǎo)致社交或職業(yè)功能的缺損，并可發(fā)現(xiàn)這些功能明顯不如以前;
（3）病程的起病特點(diǎn)是逐漸起病，持續(xù)衰退；
（4）上述認(rèn)知缺陷并非由下列原因引起；
A.其他導(dǎo)致記憶或認(rèn)知進(jìn)行性缺陷的中樞神經(jīng)系統(tǒng)情況，如:腦血管病等
B.原因已明的導(dǎo)致癡呆的全身疾病；
（5）并非由于譫妄所致；
（6）并非由于重癥抑郁和精神分裂所致；
3、納入標(biāo)準(zhǔn):
（1）符合美國(guó)精神障礙對(duì)癡呆臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，MMSE評(píng)分均在10-24分之間，文化程度均在初中以上，屬于輕中度老年癡呆，將伴有嚴(yán)重性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者，嚴(yán)重性心肺，肝腎疾病均排除;(2)均伴有記憶障礙，失用及判斷力障礙等癥狀;(3)年齡在60-85歲;(4)同意參加實(shí)驗(yàn)，簽署知情同意書(shū)。
排除標(biāo)準(zhǔn):①年齡在60周歲以下或85周歲以上者;②合并有心血管、肺、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者;③精神病患者;④凡未按規(guī)定用藥或資料不全等影響療效判斷者。
4、治療方案
4.1對(duì)照組患者均予鹽酸多奈哌齊(天津力生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，每片5mg) 5mg，睡前10min口服。
4.2治療組服用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個(gè)療程，一個(gè)療程后統(tǒng)計(jì)兩組療效。
4.3療效判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《老年癡呆病的診斷、辨證分型及療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》:
顯效:主要癥狀基本恢復(fù)，神志清楚，定位準(zhǔn)確，回答問(wèn)題正確，反應(yīng)靈敏，生活自理，能進(jìn)行一般社會(huì)活動(dòng);
有效:主要精神癥狀有所減輕或部分消失，生活基本自理，回答問(wèn)題基本正確，但反應(yīng)遲鈍，智力、人格仍有障礙;控制:主要精神狀態(tài)無(wú)加重，生活自理情況變化不明顯，反應(yīng)遲鈍，智力、人格仍有障礙但無(wú)加重;
無(wú)效:主要癥狀無(wú)改變，病情有發(fā)展生活不能自理，回答問(wèn)題不正確，神志癡呆。
治療總有效=(顯效+有效)/總?cè)藬?shù)。
5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
5.1療效評(píng)定:采用智能綜合評(píng)分法，(1)記憶力(6分);(2)定向力(4分);(3)思維能力(4分);(4)計(jì)算力(4分);(5)情感活動(dòng)(3分);(6)二便功能(3分)(7)日常生活能力(4分)。
5.2療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)患者治療前治療后MMSE評(píng)分增減情況進(jìn)行療效評(píng)定。療效指數(shù):(治療后積分-治療前積分)/治療前積分X 100%。
顯效治療指數(shù)≥20%
有效治療指數(shù)≥12%
無(wú)效治療指數(shù)<12%
惡化治療指數(shù)<-12%
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)
顯效 積分增加>8分或達(dá)28分;
有效 積分增加4-7分;
無(wú)效 積分增加<3分。
全部病例經(jīng)本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療一個(gè)療程，按上述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行治療前后的對(duì)照比較，以判定療效。見(jiàn)表1。
表1兩組臨床療效比較例(%)
注:與對(duì)照組比較，*P<0.05
6、結(jié)論
本發(fā)明原料豐富，價(jià)格低廉，有效用于治療老年癡呆癥，療效好，用藥安全，具有臨床意義。
實(shí)施例6臭氧化橄欖油膠囊對(duì)抑郁癥的防治作用
現(xiàn)階段抑郁癥發(fā)病率很高，以腦力勞動(dòng)者多見(jiàn)。越是抱負(fù)遠(yuǎn)大，身負(fù)重任的社會(huì)精英，越是易患此癥，IT行業(yè)更為多見(jiàn)。青少年也大量加入其中。電子產(chǎn)品普及，無(wú)節(jié)制使用，對(duì)此病起了推波助瀾作用。此病隱匿，醫(yī)學(xué)上檢測(cè)手段缺乏，患者疲憊不堪，只想求死，不想求醫(yī)，身邊人又難以察覺(jué)，疏于防范。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，抑郁癥目前已經(jīng)成為世界第四大疾病。預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于心臟病的人類(lèi)第二大疾病。有醫(yī)學(xué)專(zhuān)家稱(chēng)，抑郁癥如果不治療，或治不得法，30%能夠挨過(guò)首次發(fā)作，但過(guò)一段時(shí)間又會(huì)再次發(fā)作;30%拖成慢性，拖延終身;30%自殺身亡。這時(shí)找心理咨詢(xún)師開(kāi)導(dǎo)或是讓患者適當(dāng)休息，已經(jīng)不是解決問(wèn)題的主要方法。當(dāng)務(wù)之急是要對(duì)患者進(jìn)行正確的扶正調(diào)理治療，改善身體內(nèi)部環(huán)境，顯得極為重要。本實(shí)施例的目的在于提供一種特效治療抑郁癥的臭氧化油。
一、臨床療效
1、一般資料
治療病例50例。
2、治療效果
自覺(jué)癥狀療效:治愈40例，顯效8例、無(wú)效2例，總有效率96 %。
以下為使用臭氧化橄欖油膠囊的幾個(gè)典型病案，每日空腹1次1粒，3個(gè)月1個(gè)療程。
病案1:
何某某，女，46歲，教師，1989年初診?；颊咴缒陱氖陆處煿ぷ?，腦力勞動(dòng)強(qiáng)度很大，大腦長(zhǎng)期處于極度疲勞狀態(tài)，使得患者在三十多歲時(shí)患上抑郁癥，歷時(shí)十幾年，期間2次自殺未遂。后用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個(gè)療程。在3個(gè)月服用后，飲食睡眠很快恢復(fù)正常。疲勞、抑郁、悲觀厭世的感覺(jué)未再出現(xiàn)。與之熟悉的人均有同感，其人變得開(kāi)朗健談。食欲、睡眠、精神狀態(tài)始終良好。
病案2:
謝某某，男，51歲，公務(wù)員，2004年初診?；颊叱Ｊ褂秒娔X，長(zhǎng)期睡眠食欲差，經(jīng)常感覺(jué)疲勞。服用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個(gè)療程。在3個(gè)月服用后，病愈。
病案3:
霍某某，女，四十多歲，職員，2006年初診。患者2003年剖腹產(chǎn)，平時(shí)電腦前工作任務(wù)繁重，2005年患上抑郁癥。后用本臭氧化橄欖油膠囊治療，空腹，每次1粒，每天1次，90天為一個(gè)療程。在3個(gè)月服用后，病愈。落發(fā)癥狀和臉上色斑也同時(shí)消失。
實(shí)施例7臭氧化橄欖油膠囊對(duì)焦慮癥的防治作用
以下結(jié)合非限制性實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明。
臭氧化橄欖油膠囊治療焦慮癥臨床研究
1一般性資料:臭氧化橄欖油膠囊應(yīng)用于臨床觀察焦慮癥病例100例，其中男55例，女45例，年齡23-62歲。病程最短者半年，最長(zhǎng)者達(dá)3年，平均1.5年。
2診斷標(biāo)準(zhǔn):臨床表現(xiàn)（1）心理障礙:主觀疑慮、焦躁不安、敏感激惹、注意力不集中、驚恐萬(wàn)分、瀕死感。（2）軀體癥狀:口干、胸悶、心動(dòng)過(guò)速、尿頻、腹瀉、便秘、發(fā)抖出汗、心悸、呼吸困難。（3）運(yùn)動(dòng)癥狀:手抖、肌肉緊張、不安地來(lái)回走動(dòng)。（4）分型:廣泛性焦慮和驚恐發(fā)作臨床可有急性及慢性?xún)深?lèi)。診斷依據(jù): (1)廣泛性焦慮①過(guò)分的焦慮持續(xù)時(shí)間在半年以上; ②伴植物神經(jīng)功能亢進(jìn)、運(yùn)動(dòng)性不安和過(guò)分警惕; ③不符合強(qiáng)迫癥、恐怖癥、抑郁性神經(jīng)癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且焦慮并非器質(zhì)性疾病引起的。（2）驚恐發(fā)作①無(wú)明顯原因突然發(fā)生的強(qiáng)烈驚恐，伴瀕死感或失控感; ②發(fā)作時(shí)伴有嚴(yán)重的植物神經(jīng)癥狀; ③每次發(fā)作短暫(一般不超過(guò)2小時(shí))，發(fā)作明顯影響日常工作; ④1個(gè)月至少發(fā)作3次; ⑤特別要注意排除甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)及腎上腺嗜絡(luò)細(xì)胞瘤、心血管病、自發(fā)性低血糖、內(nèi)分泌病、藥物戒斷反應(yīng)和顳葉癲癇所致的類(lèi)似發(fā)作。⑥不符合癔癥和恐怖癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。⑦腦電圖示X活動(dòng)減少，B活動(dòng)增加。
3試驗(yàn)方法:臭氧化橄欖油膠囊臨床樣品，規(guī)格為粒0.25ml，三個(gè)月為一療程，一天一次，早空腹服用。治療2個(gè)療程。
4療效標(biāo)準(zhǔn):(1)痊愈:臨床癥狀消失，能參加正常勞動(dòng)和工作。(2)好轉(zhuǎn):臨床癥狀減輕。(3)無(wú)效:癥狀無(wú)改善。
5治療效果:見(jiàn)表1
表1兩組療效比較
可見(jiàn)，本發(fā)明制得的藥物能夠安全有效治療焦慮癥，且無(wú)毒副作用。
實(shí)施例8臭氧化橄欖油膠囊對(duì)帕金森癥的防治作用
下列非限制性實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臭氧化橄欖油對(duì)帕金森模型小鼠的治療
1.實(shí)驗(yàn)材料
1.1實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
魚(yú)藤酮(SIGMA)，二甲基亞颯(DMSO，SIGMA)，玉米油(山東魯花集團(tuán)有限公司)，丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶試劑盒(南京建成生物工程有限公司)。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)市售分析純。
1.2動(dòng)物造模及分組
本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射魚(yú)藤酮的方法構(gòu)建帕金森病的小鼠模型。購(gòu)買(mǎi)成年雄性C57BL/6小鼠30只，體重25-28g，由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。小鼠按體重隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組(NC組，n=10)、魚(yú)藤酮(PD模型組，n=10)、臭氧化橄欖油治療組(n=10)。實(shí)驗(yàn)中，將魚(yú)藤酮先溶于極低體積的DMSO，然后溶于玉米油(配成2mg/ml油溶液)。魚(yú)藤酮組(PD模型組)每日于頸背部皮下注射魚(yú)藤酮油溶液(3mg/kg小鼠體重)，正常對(duì)照組(NC組)于頸背部皮下注射等體積的玉米油(含相應(yīng)體積的DMSO)，臭氧化橄欖油治療組每日于頸背部皮下注射魚(yú)藤酮，同時(shí)按劑量2.5mg/只/d空腹灌胃臭氧化橄欖油。實(shí)驗(yàn)期間所有小鼠自由飲食和飲水，溫度25±2 ℃，相對(duì)濕度(65±15)%。每日觀察動(dòng)物一般狀態(tài)表現(xiàn)并記錄動(dòng)物行為變化，持續(xù)5周。
2.實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)
2.1 WMT-200水迷路
WMT-200水迷路視頻分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)采用計(jì)算機(jī)視覺(jué)相關(guān)算法，實(shí)時(shí)跟蹤動(dòng)物的行為狀態(tài)，并分析和記錄動(dòng)物入水后搜索目標(biāo)所需的時(shí)間:實(shí)驗(yàn)前將小鼠置于站臺(tái)上適應(yīng)20s，隨后將小鼠隨機(jī)從不同象限面壁置入池內(nèi)，小鼠登上站臺(tái)5s后終止記錄，最長(zhǎng)記錄時(shí)間為30s(若30s內(nèi)不能上臺(tái)，引導(dǎo)小鼠登上站臺(tái)適應(yīng)10s，最后將小鼠擦干放人鼠籠)。如此將小鼠置入游泳池，5次為1組，分別測(cè)量四組小鼠平均逃逸時(shí)間，以評(píng)價(jià)其空間學(xué)習(xí)能力。在實(shí)驗(yàn)處理后第2，3，4和5周按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2.2氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)
5周行為檢測(cè)后，采用脫頸法迅速斷頭取腦，在冰面上迅速分離出中腦黑質(zhì)和紋狀體，玻璃勻漿器制成10%組織勻漿，-80℃冰箱保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)用BCA法定量蛋白，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)，采用化學(xué)比色法檢測(cè)腦組織中SOD，GSH-Px，CAT活性及MDA含量。
2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1各組小鼠的行為狀態(tài)及體重
PD模型組小鼠從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第11天出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)緩慢，毛發(fā)松散而無(wú)光澤，食欲明顯減退，第17天開(kāi)始相繼出現(xiàn)身體屈曲，運(yùn)動(dòng)減少，時(shí)而伴有強(qiáng)直、震顫表現(xiàn)，顯示帕金森的典型行為特征，表明帕金森病小鼠造模成功。其余2組小鼠未出現(xiàn)身體屈曲，運(yùn)動(dòng)減少，強(qiáng)直、震顫表現(xiàn)。對(duì)各組小鼠每日體重測(cè)量發(fā)現(xiàn)，PD模型組小鼠體重增長(zhǎng)較其它各組緩慢，但組間比較均無(wú)顯著性差異。
3.2各組小鼠腦黑質(zhì)氧化應(yīng)激指標(biāo)
對(duì)各組小鼠的黑質(zhì)氧化應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果顯示，PD模型組的小鼠，其被測(cè)定的各項(xiàng)生化指標(biāo)均偏離NC組的小鼠所測(cè)定的值。臭氧化橄欖油治療組的小鼠各項(xiàng)氧化應(yīng)激指標(biāo)均得到了較大程度的恢復(fù)。所測(cè)定的結(jié)果如表1所示:
表1小鼠中腦黑質(zhì)氧化應(yīng)激指標(biāo)(X±SD，n =10)
與模型組比較*p<0.05
臭氧化橄欖油治療組的各組數(shù)據(jù)與PD模型組之間比較均有顯著性差異(P<0. 05)。
(1)小鼠水迷路神經(jīng)行為分析
實(shí)驗(yàn)處理后第2，3，4和5周末，分別測(cè)量小鼠平均逃逸時(shí)間，結(jié)果顯示，PD模型組小鼠在第3周末平均逃逸時(shí)間顯著高于NC組(P<0.05)，第4和5周末差異極顯著(P<0.01)。而臭氧化橄欖油治療組小鼠在第3周末平均逃逸時(shí)間顯著低于PD模型組(P<0.05)，第4和5周末差異極顯著(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)具體結(jié)果如表2所示:
表2小鼠在實(shí)驗(yàn)處理后各周末平均逃逸時(shí)間(x±SD，n=5)
與模型組比較*p<0.05，**p<0.01；## p<0.01，與NC組比較。
綜上所述，臭氧化橄欖油可有效改善魚(yú)藤酮制作的帕金森小鼠模型的病理癥狀，降低黑質(zhì)神經(jīng)元的毒性，對(duì)帕金森病具有預(yù)防和治療的作用。
下面是患者使用本發(fā)明藥物的臨床統(tǒng)計(jì)資料:
一、一般資料
收治患者100例，其中男性62人，女性38人，年齡50-80歲，平均年齡68歲，病程2-8年不等。
二、治療方法
按照本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊，每日空腹1次1粒，3個(gè)月為一個(gè)療程。
三、療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):
1、治愈:臨床癥狀消失，四肢震顫、肌肉僵直、動(dòng)作遲緩的現(xiàn)象消失，感覺(jué)和吞咽功能均正常，生活能夠自理;
2、好轉(zhuǎn):臨床癥狀得到控制，各項(xiàng)生理指標(biāo)均有所好轉(zhuǎn);
3、未愈:患者臨床癥狀無(wú)任何改善甚至加重。
四、治療結(jié)果統(tǒng)計(jì)
從上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療帕金森病具有良好的臨床效果，能有效提高治療的治愈率，值得在臨床應(yīng)用上推廣。
典型病例:
病例一、朱某，男，49歲，患者半年前出現(xiàn)四肢不自主的顫動(dòng)，變換位置后震顫減輕或消失，并有輕微的活動(dòng)障礙，患者確診為帕金森病，采用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊治療，每日空腹1次1粒，3個(gè)月為一個(gè)療程。服用兩個(gè)療程后，患者四肢震顫的現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，肌肉僵直的現(xiàn)象完全消失，后又繼續(xù)服用一個(gè)療程，患者行走活動(dòng)比之前明顯靈活，生活能夠自理。
病例二、顧某，女，62歲，患者家人敘述患有帕金森病一年左右，走路步態(tài)蹣跚僵硬，有明顯的慌張步態(tài)，患者采用本發(fā)明臭氧化橄欖油膠囊制劑治療，每日空腹1次1粒，3個(gè)月為一個(gè)療程。服用兩個(gè)療程后，患者行動(dòng)和語(yǔ)言能力都得到提升，能夠正常的交流，肢體顫動(dòng)現(xiàn)象得到好轉(zhuǎn)，繼續(xù)使用兩個(gè)療程，患者行走和活動(dòng)都很靈活，可以做一些簡(jiǎn)單的家務(wù)，生活能夠自理。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。