本發(fā)明涉及益生菌，尤其是涉及一種具有顯著治療陰道炎且無任何毒副作用的治療陰道炎的乳酸菌組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：陰道炎即陰道炎癥。正常健康婦女陰道由于解剖組織的特點(diǎn)對病原體的侵入有自然防御功能。如陰道口的閉合，陰道前后壁緊貼，陰道上皮細(xì)胞在雌激素的影響下的增生和表層細(xì)胞角化，陰道酸堿度保持平衡，使適應(yīng)堿性的病原體的繁殖受到抑制，而頸管黏液呈堿性，當(dāng)陰道的自然防御功能受到破壞時(shí)，病原體易于侵入，會(huì)導(dǎo)致陰道炎癥。陰道炎的發(fā)生存在多種原因，但主要原因是菌群失調(diào)引起的。正常寄生于健康婦女陰道菌群中，乳桿菌占優(yōu)勢，陰道乳桿菌對維持陰道正常菌群起著關(guān)鍵作用。陰道上皮的糖原經(jīng)乳桿菌的作用分解為乳酸，使陰道局部呈弱酸環(huán)境。下列情況有可能影響陰道生態(tài)系統(tǒng)的平衡：①性激素：如月經(jīng)期前后雌激素水平降低，導(dǎo)致陰道內(nèi)pH上升有利于厭氧菌的生長。②某些殺精子的避孕藥膏對乳桿菌有毒性作用。③藥物：許多種藥物如廣譜抗生素可殺滅或抑制乳桿菌而影響陰道內(nèi)的環(huán)境。④感染；如婦女性亂，感染了STD等，可干擾陰道內(nèi)原有菌群而導(dǎo)致失調(diào)。目前，醫(yī)院多采用西醫(yī)抗生素治療，但效果不是很滿意，容易復(fù)發(fā)，給患者帶來很大的痛苦。因此，開發(fā)一種療效好、不易復(fù)發(fā)并且毒副作用低的治療方法是現(xiàn)有技術(shù)亟待解決的技術(shù)問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明目的在于提供一種具有顯著治療陰道炎且無任何毒副作用的治療陰道炎的乳酸菌組合物及其制備方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)的，一種治療陰道炎的乳酸菌組合物，包括乳酸菌組合核，所述乳酸菌組合核外包裹有包被層；所述包被層包括重量份數(shù)的成份：低聚異麥芽糖30～50、蛋白物質(zhì)30～50、蔓越莓果粉5～10、硝酸纖維素5～10；所述乳酸菌組合核由如下重量份數(shù)的菌株組成：唾液乳桿菌30～40、羅伊氏乳桿菌20～30、鼠李糖乳桿菌10～20、嗜酸乳酸菌10～20。作為一種優(yōu)選方式，所述乳酸菌組合物中唾液乳桿菌的含量為107～109cuf/g、羅伊氏乳桿菌的含量為106～108cuf/g、鼠李糖乳桿菌的含量為106～107cuf/g、嗜酸乳酸菌的含量為106～107cuf/g。作為一種優(yōu)選方式，所述乳酸菌組合核中唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳酸菌分別經(jīng)過耐豬膽鹽、耐酸篩選的，能耐0.3％的豬膽鹽及pH為2.5的酸性環(huán)境。作為一種優(yōu)選方式，所述羅伊氏乳桿菌為GL-104菌株，所述唾液乳桿菌為AP-32菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011127；所述羅伊氏乳桿菌為TE-33菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011126；所述鼠李糖乳桿菌為CT-53菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011129；所述嗜酸乳桿菌為F-1菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011124。作為一種優(yōu)選方式，所述蛋白物質(zhì)為酪蛋白和乳鐵蛋白層，其中酪蛋白和乳鐵蛋白的重量比為1-5：1-5。本發(fā)明還一種治療陰道炎的乳酸菌組合物的制備方法，包括如下步驟：(1)將唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳酸菌分別以1ml/100ml的接種量接種至培養(yǎng)基中，在35℃～45℃下，培養(yǎng)12～24h，得到活化的乳桿菌菌種；(2)將活化的四種菌種以重量份數(shù)：唾液乳桿菌30～40、羅伊氏乳桿菌20～30、鼠李糖乳桿菌10～20、嗜酸乳酸菌10～20混合后，再將混合菌種以1ml/100ml的接種量接種至培養(yǎng)液中，在35℃～45℃下，培養(yǎng)10～12h后，離心取沉淀，在4℃～10℃下保溫6～10h后，均質(zhì)，得到組合菌；(3)將重量份數(shù)的：低聚異麥芽糖30～50、蛋白物質(zhì)30～50、蔓越莓果粉5～10、硝酸纖維素5～10加水充分混合成包被液，將組合菌加入包被液混和均勻；(4)將混和均勻的液體滴加到氯化鈣溶液中固化，過濾后真空凍干12h得到乳酸菌組合物。作為一種優(yōu)選方式，所述乳酸菌組合物中唾液乳桿菌的含量為107～109cuf/g、羅伊氏乳桿菌的含量為106～108cuf/g、鼠李糖乳桿菌的含量為106～107cuf/g、嗜酸乳酸菌的含量為106～107cuf/g。作為一種優(yōu)選方式，所述唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳酸菌在活化前分別經(jīng)過耐豬膽鹽、耐酸篩選的，能耐0.3％的豬膽鹽及pH為2.5的酸性環(huán)境。作為一種優(yōu)選方式，所述唾液乳桿菌為AP-32菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011127；所述羅伊氏乳桿菌為TE-33菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011126；所述鼠李糖乳桿菌為CT-53菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011129；所述嗜酸乳桿菌為F-1菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011124。作為一種優(yōu)選方式，所述蛋白物質(zhì)為酪蛋白和乳鐵蛋白層，其中酪蛋白和乳鐵蛋白的重量比為1-5：1-5。本發(fā)明具有顯著治療陰道炎的效果，且因?yàn)槭且嫔惍a(chǎn)品，對人體沒有任何毒副作用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)菌種活化篩選出耐0.3％豬膽鹽、耐PH為2.5的酸性環(huán)境的唾液乳桿菌AP-32菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011127；羅伊氏乳桿菌TE-33菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011126；鼠李糖乳桿菌CT-53菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011129；嗜酸乳桿菌F-1菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011124。將篩選出的四種菌分別以1ml/100ml的接種量接種至MRS培養(yǎng)基中，在45℃下，培養(yǎng)12h，得到活化的乳桿菌菌種；其中，MRS培養(yǎng)基的配方為：在1000mL蒸餾水中加入10g蛋白胨、8g牛肉浸粉、20g葡萄糖、4g酵母浸膏、0.05g四水硫酸錳、1mL吐溫80、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、0.2g硫酸鎂、2g檸檬酸二銨；(2)制備組合菌將活化的四種菌種以重量份數(shù)：唾液乳桿菌30g、羅伊氏乳桿菌20g、鼠李糖乳桿菌10g、嗜酸乳酸菌10g混合后，再將混合菌種以1ml/100ml的接種量接種至培養(yǎng)液中，在45℃下，培養(yǎng)10h后，以6000r/min，在5℃下，離心15min，取沉淀物，在4℃下保溫6h后，均質(zhì)，得到組合菌；(3)制備包被組合菌將以下重量的：低聚異麥芽糖30g、酪蛋白15g、乳鐵蛋白15g、硝酸纖維素5g加水1000ml充分混合成包被液，將組合菌加入包被液混和均勻；(4)制備乳酸菌組合物將混和均勻的液體滴加到氯化鈣溶液中固化，過濾后真空凍干12h得到乳酸菌組合物。在乳酸菌組合物中唾液乳桿菌的含量為107～109cuf/g、羅伊氏乳桿菌的含量為106～108cuf/g、鼠李糖乳桿菌的含量為106～107cuf/g、嗜酸乳酸菌的含量為106～107cuf/g。實(shí)施例2篩選出耐0.3％豬膽鹽、耐PH為2.5的酸性環(huán)境的唾液乳桿菌AP-32菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011127；羅伊氏乳桿菌TE-33菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011126；鼠李糖乳桿菌CT-53菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011129；嗜酸乳桿菌F-1菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011124。將篩選出的四種菌分別以1ml/100ml的接種量接種至MRS培養(yǎng)基中，在35℃下，培養(yǎng)24h，得到活化的乳桿菌菌種；其中，MRS培養(yǎng)基的配方為：在1000mL蒸餾水中加入10g蛋白胨、8g牛肉浸粉、20g葡萄糖、5g酵母浸膏、0.06g四水硫酸錳、1mL吐溫80、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、0.2g硫酸鎂、2g檸檬酸二銨；(2)制備組合菌將活化的四種菌種以重量份數(shù)：唾液乳桿菌40g、羅伊氏乳桿菌30g、鼠李糖乳桿菌20g、嗜酸乳酸菌20g混合后，再將混合菌種以1ml/100ml的接種量接種至培養(yǎng)液中，在35℃下，培養(yǎng)12h后，以4500r/min，在10℃下，離心20min，取沉淀物，在10℃下保溫10h后，均質(zhì)，得到組合菌；(3)制備包被組合菌將以下重量的：低聚異麥芽糖50g、酪蛋白35g、乳鐵蛋白35g、硝酸纖維素10g加水1000ml充分混合成包被液，將組合菌加入包被液混和均勻；(4)制備乳酸菌組合物將混和均勻的液體滴加到氯化鈣溶液中固化，過濾后真空凍干12h得到乳酸菌組合物。在乳酸菌組合物中唾液乳桿菌的含量為107～109cuf/g、羅伊氏乳桿菌的含量為106～108cuf/g、鼠李糖乳桿菌的含量為106～107cuf/g、嗜酸乳酸菌的含量為106～107cuf/g。實(shí)施例3篩選出耐0.3％豬膽鹽、耐PH為2.5的酸性環(huán)境的唾液乳桿菌AP-32菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011127；羅伊氏乳桿菌TE-33菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011126；鼠李糖乳桿菌CT-53菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011129；嗜酸乳桿菌F-1菌株，保藏編號(hào)CCTCCNO：M2011124。將篩選出的四種菌分別以1ml/100ml的接種量接種至MRS培養(yǎng)基中，在42℃下，培養(yǎng)13h，得到活化的乳桿菌菌種；其中，MRS培養(yǎng)基的配方為：在1000mL蒸餾水中加入10g蛋白胨、8g牛肉浸粉、20g葡萄糖、4g酵母浸膏、0.05g四水硫酸錳、1mL吐溫80、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、0.2g硫酸鎂、2g檸檬酸二銨；(2)制備組合菌將活化的四種菌種以重量份數(shù)：唾液乳桿菌35g、羅伊氏乳桿菌23g、鼠李糖乳桿菌15g、嗜酸乳酸菌15g混合后，再將混合菌種以1ml/100ml的接種量接種至培養(yǎng)液中，在42℃下，培養(yǎng)11h后，以7000r/min，在5℃下，離心10min，取沉淀物，在4℃下保溫10h后，均質(zhì)，得到組合菌；(3)制備包被組合菌將重量份數(shù)的：低聚異麥芽糖35g、酪蛋白20g、乳鐵蛋白20g、硝酸纖維素6g加水1000ml充分混合成包被液，將組合菌加入包被液混和均勻；(4)制備乳酸菌組合物凍干粉將混和均勻的液體滴加到氯化鈣溶液中固化，過濾后真空凍干12h得到乳酸菌組合物凍干粉。在乳酸菌組合物凍干粉中唾液乳桿菌的含量為107～109cuf/g、羅伊氏乳桿菌的含量為106～108cuf/g、鼠李糖乳桿菌的含量為106～107cuf/g、嗜酸乳酸菌的含量為106～107cuf/g。下面通過臨床試驗(yàn)用于進(jìn)一步說明本發(fā)明。1、臨床觀察利用本發(fā)明乳酸菌組合物凍干粉(按照實(shí)施例1方法制備)治療患者共240例，均經(jīng)婦科檢查確診，其年齡20～48歲，平均33歲。隨機(jī)分為兩組，對照組120例，治療組120例。2、藥物選擇對照組采用口服康婦炎膠囊(神州制藥)，0.4g/粒，一次3粒，一日2次，連續(xù)服用30天；治療組選本發(fā)明乳酸菌組合物凍干粉(按照實(shí)施例1方法制備)，一個(gè)療程(30天一療程)，1.5g/袋，一日二次，每次2袋，開水沖服。3、診斷標(biāo)準(zhǔn)陰道分泌物增多，外陰瘙癢、灼痛，可伴有尿頻、尿痛及性交痛；婦科檢查發(fā)現(xiàn)陰道分泌物增多，陰道粘膜充血或可見散在出血斑點(diǎn)，陰道后穹隆有多量白帶，呈灰黃色或黃綠色膿性分泌物，有時(shí)呈泡沫狀或白色稠厚凝乳或豆渣樣，外陰可見水腫、抓痕、地圖樣紅斑；陰道分泌物化驗(yàn)檢查發(fā)現(xiàn)滴蟲或假絲酵母菌的芽孢及菌絲。4、療效評定標(biāo)準(zhǔn)治愈：治療結(jié)束后，臨床癥狀完全消失；有效：治療結(jié)束后，臨床癥狀部分消失，病情基本緩解；無效：治療結(jié)束后，臨床癥狀基本沒有改觀，病情緩解不明顯。具體治療結(jié)果見下表：組別治療人數(shù)治愈有效無效總有效率對照組12032394959.2％治療組1207542397.5％結(jié)論：治療組的治愈率為45％，有效率為90％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組。典型病例病例1：李某某，50歲。主訴：外陰瘙癢已1年多，伴有尿頻、尿痛及性交痛，服用西藥半年多，復(fù)發(fā)兩次。檢查發(fā)現(xiàn)，陰道分泌物增多，陰道后穹隆有多量白帶，陰道分泌物化驗(yàn)檢查發(fā)現(xiàn)滴蟲。服用本發(fā)明乳酸菌組合物凍干粉(按照實(shí)施例1方法制備)，一個(gè)療程，一日二次，每次2袋，開水沖服，連續(xù)10天后，癥狀消失，繼續(xù)使用20天鞏固穩(wěn)定治療效果；隨訪一年未見復(fù)發(fā)。病例2：王某，22歲，主訴：外陰瘙癢、灼痛，陰道分泌物增多，婦科檢查發(fā)現(xiàn)陰道后穹隆有大量稠厚凝乳樣白帶，陰道分泌物檢查可見假絲酵母菌的菌絲，確診為診霉菌性陰道炎。服用本發(fā)明乳酸菌組合物凍干粉(按照實(shí)施例1方法制備)，一個(gè)療程，一日二次，每次2袋，開水沖服，連續(xù)15天后，癥狀消失，繼續(xù)使用15天鞏固穩(wěn)定治療效果；隨訪半年未見復(fù)發(fā)。以上是對本發(fā)明治療陰道炎的乳酸菌組合物及其制備方法進(jìn)行了闡述，用于幫助理解本發(fā)明，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，任何未背離本發(fā)明原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3