本申請是原案申請日為2011年1月21日、原案申請?zhí)枮?01180006745.3(國際申請?zhí)枮閜ct/ep2011/050854)、發(fā)明名稱為“用于治療過度增生性疾病、自身免疫性疾病和心臟病的包含3-奎寧環(huán)酮衍生物的水溶液”的專利申請的分案申請。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種奎寧環(huán)酮(quinuclidinone)衍生物的制劑和制備該制劑的方法，以及該制劑的應(yīng)用。

發(fā)明背景

wo05/090341中描述了用于治療不同病癥例如過度增生性疾病(hyperproliferativedisease)、自身免疫性疾病和心臟病的3-奎寧環(huán)酮衍生物。類似地，wo04/084893、wo02/024692和wo03/070250中披露了特別用于治療腫瘤疾病的3-奎寧環(huán)酮衍生物。

在wo05/090341中提到了其中所披露的奎寧環(huán)酮的組合物可以被制備用于任何給藥途徑，例如口服、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮或皮下、經(jīng)鼻、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)，且載體或其它物質(zhì)的確切性質(zhì)依賴于給藥途徑。亦提到，對于胃腸外給藥，采用胃腸外可接受的水溶液，該水溶液不含致熱源且具有需要的ph、等滲性和穩(wěn)定性。

然而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在液體水溶液中，例如用于胃腸外給藥的液體水溶液(即通常ph為6.5-7.5)或相應(yīng)的用于制備可胃腸外給藥溶液的貯備液中，本發(fā)明化合物具有不可接受的低穩(wěn)定性，在溶解后僅數(shù)小時(shí)內(nèi)就產(chǎn)生降解產(chǎn)物。這種在液體溶液中缺乏化學(xué)穩(wěn)定性對于上面提到的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中所描述的化合物來說是完全未預(yù)料到的。

發(fā)明概述

本發(fā)明的一個目的是提供一種如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物的制劑，該制劑具有改進(jìn)的保存期，特別是與現(xiàn)有技術(shù)的制劑相比。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種含有如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物的、保存期得以改進(jìn)的制劑，該制劑可用于治療，例如用于治療選自過度增生性疾病(例如癌癥)、自身免疫性疾病和心臟病的病癥，所述制劑具有改進(jìn)的保存期，特別是與現(xiàn)有技術(shù)的制劑相比。

又一個目的是提供一種含有如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物的液體制劑，其中所述3-奎寧環(huán)酮衍生物具有降低的降解速率。

本發(fā)明的再一個目的是提供一種用于治療過度增生性疾病、自身免疫性疾病和心臟病的藥物制劑，所述制劑含有如本文下文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物并且具有改進(jìn)的保存期，特別是與現(xiàn)有技術(shù)的制劑相比。

本發(fā)明的又一個目的是提供一種允許延長保存如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物的制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于制備本發(fā)明制劑的方法。

在一個具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種制劑，其為下式(i)的3-奎寧環(huán)酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種ph調(diào)節(jié)劑的水溶液：

i

其中，

r¹選自h、-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴；

r²選自-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴；

r³和r⁴相同或不同并且獨(dú)立地選自h，取代或非取代的、無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基或1-10個碳的烷基，取代或非取代的苯甲基，取代或非取代的單環(huán)或雙環(huán)芳基，取代或非取代的含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基或非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基，或者在-ch2-nr³r⁴中的r³和r⁴鍵合在一起并與它們所鍵合的氮原子一起形成取代或非取代的非芳族的2-10個碳的單環(huán)或雙環(huán)的雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的額外雜原子并且任選含有一個或數(shù)個環(huán)酮基；

其中被取代基團(tuán)的取代基獨(dú)立地選自無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基或1-10個碳的烷基，鹵素，鹵素取代的1-10個碳的烷基、單環(huán)或雙環(huán)芳基，含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基或非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基，1-10個碳的烷氧基，氨基，和1-10個碳的烷基氨基；

所述調(diào)節(jié)劑的量為例如提供約3.0至約5.0的水溶液ph的量。

在一個實(shí)施方式中，所述制劑為藥物制劑。因此，提供一種用于治療的如本文所定義的液體制劑。

在一個實(shí)施方式中，所述制劑為貯備液，該貯備液允許長期儲存溶解其中的式(i)的3-奎寧環(huán)酮衍生物。

在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明制劑中所包含的式(i)的3-奎寧環(huán)酮衍生物可用于治療選自過度增生性疾病(例如癌癥)、自身免疫性疾病和心臟病的病癥中，特別地可用于治療癌癥。

在又一個實(shí)施方式中，提供了如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物的液體制劑，其用于預(yù)防和/或治療病理生理學(xué)病況(例如過度增生性疾病(例如癌癥)、自身免疫性疾病或心臟病)的方法。

另一個實(shí)施方式涉及如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮的液體制劑在制備用于預(yù)防和/或治療病理生理學(xué)病況(例如過度增生性疾病(例如癌癥)、自身免疫性疾病和心臟病)的藥物中的用途。

在又一個實(shí)施方式中，提供了用于預(yù)防和/或治療病理生理學(xué)病況的方法，其包括將有效量的本發(fā)明的組合物給予(優(yōu)選胃腸外給藥)有需要的哺乳動物。

在又一個實(shí)施方式中，提供了用于預(yù)防和/或治療病理生理學(xué)病況的方法，其包括將有效量的通過使用按照本發(fā)明的液體制劑制備的組合物給予(優(yōu)選胃腸外給藥)有需要的哺乳動物。

此外，提供了用于預(yù)防和/或治療由異常細(xì)胞生長所介導(dǎo)的病理生理學(xué)病況的方法，其包括將有效量的本發(fā)明的組合物或通過使用按照本發(fā)明的液體制劑制備的組合物給予(胃腸外或口服給藥)哺乳動物。

在一個具體的實(shí)施方式中，提供了用于預(yù)防和/或治療由異常細(xì)胞生長所介導(dǎo)的病理生理學(xué)病況的方法，其包括將有效量的本發(fā)明的組合物給予(胃腸外或口服給藥)需要治療性干預(yù)的哺乳動物，以控制該病理生理學(xué)病況，其中異常的細(xì)胞生長得以控制。

還提供了制備本發(fā)明液體制劑的方法，包括向含水相中加入式(i)的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽、任選至少一種其它治療活性劑以及使得提供3.0-5.0的組合物ph的量的ph調(diào)節(jié)劑。

本發(fā)明的其它實(shí)施方式如下文所述以及如權(quán)利要求所限定。

附圖簡述

圖1顯示了scid小鼠中p53突變型異種移植物腫瘤的體積，scid小鼠用2-(羥甲基)-2-(甲氧基甲基)奎寧環(huán)-3-酮(apr-246)或pbs(溶媒，對照)以100mg/kg的劑量、一天兩次、每周3-4天靜脈內(nèi)治療。由圖可見，在治療期最后，對照動物的平均腫瘤體積為用apr-246治療的動物的三倍還多。用mann-whitney檢驗(yàn)分析腫瘤體積的差異。發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的抗癌效果。

圖2顯示了中空纖維體內(nèi)模型中apr-246對amlmv-4-11細(xì)胞的作用。數(shù)據(jù)以平均值±sem(n=7-8)表示。

發(fā)明詳述

除非另有限定，本文所用的全部技術(shù)及科學(xué)術(shù)語均具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所通常理解的含義相同的含義。

因此，除非另有說明，“貯備液”通常是指對于實(shí)際應(yīng)用將被稀釋至某個較低濃度的濃縮液。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的是，貯備液用于例如節(jié)省制備時(shí)間、保存物質(zhì)、減少儲存空間以及改進(jìn)制備工作溶液的準(zhǔn)確性。

“保存期”意指產(chǎn)品在沒有變得不適于使用或消費(fèi)的情況下可以儲存的時(shí)間長度。

按照本發(fā)明，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)在ph至多約5.0的水溶液中，上文所提及的3-奎寧環(huán)酮的化學(xué)穩(wěn)定性顯著地提高。事實(shí)上，發(fā)現(xiàn)在一些情形中，降解速率降低至不到相應(yīng)的較高ph的溶液的1/10³。

因此，本發(fā)明提供了一種含有如本文所定義的3-奎寧環(huán)酮衍生物水溶液的組合物，其中該水溶液的ph為從約ph3.0到約ph5.0，優(yōu)選到約4.7，或到約4.5，或到約4.2，例如到約4.0。舉例來說，該ph可在下限為ph3.0或ph3.5和上限為ph5或ph4.5之間的范圍內(nèi)，優(yōu)選地可在ph3.8和ph4.2之間的范圍內(nèi)，例如接近4.0。舉例來說，本發(fā)明水溶液的ph可具有選自ph約3.0或約3.2例如約3.4、例如約3.6或約3.8的下限，以及約5.0或約4.7或約4.5或約4.2例如約4.0的上限。

在本發(fā)明的ph下，與現(xiàn)有技術(shù)的水溶液中的化合物的穩(wěn)定性相比，溶解于本發(fā)明水溶液的式(i)的3-奎寧環(huán)酮衍生物的針對降解的化學(xué)穩(wěn)定性顯著地得到提高。事實(shí)上，本發(fā)明的3-奎寧環(huán)酮衍生物的水溶液可在2-8℃下具有24個月或甚至更長的保存期。

本發(fā)明制劑中存在的3-奎寧環(huán)酮衍生物為下式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

i

其中，

r¹選自h、-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴；

r²選自-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴；

r³和r⁴相同或不同并且獨(dú)立地選自h，取代或非取代的、無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基或1-10個碳的烷基，取代或非取代的苯甲基，取代或非取代的單環(huán)或雙環(huán)芳基，取代或非取代的含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基或非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基，或者在-ch2-nr³r⁴中的r³和r⁴鍵合在一起并與它們所鍵合的氮原子一起形成取代或非取代的非芳族的2-10個碳的單環(huán)或雙環(huán)的雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的額外雜原子并且任選含有一個或數(shù)個環(huán)酮基；

其中被取代基團(tuán)的取代基獨(dú)立地選自無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基或1-10個碳的烷基，鹵素，鹵素取代的1-10個碳的烷基、單環(huán)或雙環(huán)芳基，含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基或非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基，1-10個碳的烷氧基，氨基，和1-10個碳的烷基氨基。

式(i)的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，例如可以是無機(jī)礦物酸或有機(jī)酸的酸加成鹽。

在式(i)的化合物中，r¹選自h、-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴。在一些實(shí)施方式中，r¹選自h、-ch2-o-r³和-ch2-s-r³。在一些實(shí)施方式中，r¹選自h和-ch2-o-r³。還在其它的實(shí)施方式中，r¹選自-ch2-o-r³和-ch2-s-r³。在一些實(shí)施方式中，r¹為h。

式(i)中的r²選自-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴。在一些實(shí)施方式中，r²選自-ch2-o-r³和-ch2-s-r³。在其它的實(shí)施方式中，r²為-ch2-o-r³。

在一個實(shí)施方式中，r¹選自h、-ch2-o-r³和-ch2-s-r³；且r²選自-ch2-o-r³和-ch2-s-r³。

在一個實(shí)施方式中，r¹為h；且r²選自-ch2-o-r³、-ch2-s-r³和-ch2-nr³r⁴；例如選自-ch2-o-r³和-ch2-s-r³，特別地為-ch2-o-r³。

在一個實(shí)施方式中，r¹選自h和-ch2-o-r³；且r²為-ch2-o-r³。

在一個實(shí)施方式中，r¹和r²均為-ch2-o-r³。

在一個實(shí)施方式中，每一個r³獨(dú)立地選自h，取代或非取代的、無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基和1-10個碳的烷基，和苯甲基。例如，每一個r³可獨(dú)立地選自h和1-10個碳的烷基，例如選自h和1-6個碳的烷基，選自h和1-4個碳的烷基，或選自h和1-3個碳的烷基，特別地，選自h和甲基。

在一個實(shí)施方式中，r¹選自h和-ch2-o-r³，r²為-ch2-o-r³，且每一個r³獨(dú)立地選自h，取代或非取代的、無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基和1-10個碳的烷基，和苯甲基，特別地，選自h和1-10個碳的烷基，例如選自h和1-6個碳的烷基，選自h和1-4個碳的烷基，或選自h和1-3個碳的烷基，特別地，選自h和甲基。

在一個實(shí)施方式中，r¹和r²均為-ch2-o-r³，且每一個r³獨(dú)立地選自h，取代或非取代的、無支鏈或有支鏈的、飽和或不飽和的3-12個碳的環(huán)烷基和1-10個碳的烷基，特別地選自h和1-10個碳的烷基，例如選自h和1-6個碳的烷基，選自h和1-4個碳的烷基，或選自h和1-3個碳的烷基，特別地，選自h和甲基。

在如上文所定義的式(i)的化合物中，任何1-10個碳的烷基例如可以是1-6個碳的烷基，或1-4個碳的烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基。任何3-12個碳的環(huán)烷基可以是例如3-8個碳原子的環(huán)烷基，或3-6個碳原子的環(huán)烷基。任何單環(huán)或雙環(huán)芳基可以是例如單環(huán)芳基，例如苯基。任何單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基可以是例如單環(huán)或雙環(huán)的2-5個碳的雜芳基，例如5元或6元的單環(huán)的2-5個碳的雜芳基或9元的雙環(huán)的2-5個碳的雜芳基。任何單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基可以是例如單環(huán)或雙環(huán)的2-5個碳的雜環(huán)基，例如5元或6元的單環(huán)的2-5個碳的雜環(huán)基或者9元或10元的雙環(huán)的2-5個碳的雜環(huán)基。任何鹵素可以選自f、cl、br和i，優(yōu)選選自f和cl。任何含有一個或數(shù)個獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子的雜環(huán)(芳族或非芳族的)，例如可以含有1-5個雜原子，其例如獨(dú)立地選自n和o。

在一個實(shí)施方式中，在如上文所定義的式(i)的化合物中，任何取代或非取代的3-12個碳的環(huán)烷基或1-10個碳的烷基是非取代的。

在一個實(shí)施方式中，任何取代或非取代的苯甲基是非取代的。

在一個實(shí)施方式中，任何取代或非取代的單環(huán)或雙環(huán)芳基是非取代的。

在一個實(shí)施方式中，任何取代或非取代的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的2-10個碳的雜芳基或非芳族的2-10個碳的雜環(huán)基是非取代的。

在一個實(shí)施方式中，當(dāng)任何上述基團(tuán)被取代時(shí)，每一個取代基選自1-10個碳的烷基，例如1-6個碳的烷基、1-4個碳的烷基、或1-3個碳的烷基，例如甲基；鹵素，例如cl；鹵素取代的1-10個碳的烷基，例如三氟甲基；單環(huán)的2-5個碳的雜芳基，例如吡啶基；1-10個碳的烷氧基，例如1-6個碳的烷氧基、1-4個碳的烷氧基，或1-3個碳的烷氧基，例如甲氧基；以及氨基。

在一個實(shí)施方式中，當(dāng)任何上述基團(tuán)被取代時(shí)，在每一個被取代的基團(tuán)上的取代基的數(shù)目為1、2或3。

在另一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的3-奎寧環(huán)酮衍生物選自上文所提及的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)例如wo05/090341、wo04/084893、wo02/024692和wo03/070250中所例示的那些衍生物，例如，如表1所示的那些衍生物：

在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的3-奎寧環(huán)酮衍生物，即式(i)的化合物，選自2-(羥甲基)-2-(甲氧基甲基)奎寧環(huán)-3-酮和2,2-雙(羥甲基)奎寧環(huán)-3-酮，以及這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個實(shí)施方式中，式(i)的化合物為2-(羥甲基)-2-(甲氧基甲基)奎寧環(huán)-3-酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個實(shí)施方式中，式(i)的化合物為2,2-雙(羥甲基)奎寧環(huán)-3-酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個實(shí)施方式中，所述制劑為貯備液且優(yōu)選為濃縮的貯備液形式的藥物制劑。所述制劑優(yōu)選為無菌的，這可通過已知的滅菌方法(例如過濾)來實(shí)現(xiàn)，這就允許在基本沒有本發(fā)明化合物的任何變質(zhì)(例如通過化學(xué)降解反應(yīng))和基本沒有降解產(chǎn)物形成的情況下長期儲存。

按照本發(fā)明的制劑可用于例如通過直接注射給予有需要的患者或優(yōu)先用合適的可注射的溶液稀釋用于靜脈輸注。

按照本發(fā)明的制劑還可照原樣或稀釋地應(yīng)用于例如對其中所含的3-奎寧環(huán)酮衍生物的進(jìn)一步研究，例如通過體外或體內(nèi)測試，例如通過給予實(shí)驗(yàn)室動物，例如小鼠、大鼠、兔或狗。

在一個實(shí)施方式中，按照本發(fā)明的制劑是如本文所定義的式(i)的3-奎寧環(huán)酮衍生物的水溶液，其中所述衍生物在制劑中存在的濃度在約10mg/ml至約250mg/ml的范圍內(nèi)，特別地在約50mg/ml至約200mg/ml的范圍內(nèi)，尤其是在約75mg/ml至約150mg/ml的范圍內(nèi)。

本發(fā)明的制劑可在使用(例如給予患者)前被稀釋。稀釋因子依賴于制劑中3-奎寧環(huán)酮衍生物的濃度以及所需化合物的需要量，例如以滿足治療有效劑量。在胃腸外給藥的情況下，最終的經(jīng)稀釋產(chǎn)品的ph優(yōu)選應(yīng)該在約ph4至約ph6的范圍內(nèi)，更優(yōu)選用于胃腸外給藥的最終的經(jīng)稀釋產(chǎn)品的ph應(yīng)該在約ph4.2至約ph5.5的范圍內(nèi)。

所述液體制劑可含有濃度在0%和3%重量/制劑體積之間，特別是濃度在0.5%和1.5%重量/制劑體積之間，而尤其是濃度在0.8%和1%重量/制劑體積之間的氯化鈉。

在本發(fā)明的一個實(shí)施方式中，3-奎寧環(huán)酮以與一種或數(shù)種不同的藥學(xué)上可接受酸的酸加成鹽的形式存在于液體制劑中。所述藥學(xué)上可接受的酸可以是礦物酸，例如選自鹽酸、溴化氫、碘化氫、硫酸、硝酸、磷酸等。作為備選，所述藥學(xué)上可接受的酸可以是有機(jī)酸，例如磺酸或羧酸，特別是烷基磺酸或芳基磺酸或烷基羧酸或芳基羧酸，例如選自甲磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、乙酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、苯甲酸、水楊酸、抗壞血酸等。

為了處于所需的ph，本發(fā)明的組合物含有ph調(diào)節(jié)劑。本文使用的術(shù)語“ph調(diào)節(jié)劑”意指至少一種藥學(xué)上可接受的有機(jī)酸或無機(jī)(礦物)酸，或者至少一種藥學(xué)上可接受的酸性緩沖液或任意這些物質(zhì)的混合物。因此，該ph調(diào)節(jié)劑可以是任意這樣的酸或緩沖液，或者酸的混合物或緩沖液的混合物，或者酸和緩沖液的混合物。有用的酸和緩沖液的實(shí)例如本文所示。

舉例來說，按照本發(fā)明的組合物可以含有至少一種藥學(xué)上可接受的酸。所述酸可以是無機(jī)礦物酸，例如選自鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或者有機(jī)酸，例如選自乙酸、琥珀酸、酒石酸、馬來酸、抗壞血酸、檸檬酸、谷氨酸、苯甲酸、抗壞血酸、甲磺酸、乙磺酸等。預(yù)期的是，所述組合物可以含有一種或數(shù)種選自無機(jī)酸和有機(jī)酸的酸。在一個實(shí)施方式中，制劑的所需ph通過加入鹽酸來達(dá)到。

本發(fā)明的組合物也可以含有至少一種藥學(xué)上可接受的緩沖液，特別地選自檸檬酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液等(單獨(dú)或作為其混合物)，以及與如本文所定義的任意藥學(xué)上可接受的酸(例如鹽酸)的組合。

本發(fā)明的液體組合物是水性的，這意味著其含有水。然而，預(yù)期的是，用于制備本發(fā)明組合物的水溶液和含水相也可以含有其它藥學(xué)上可接受的液體作為溶劑相，例如聚乙二醇(peg)和醇類，如乙醇。但優(yōu)選所述含水相主要含有水作為溶劑。舉例來說，溶劑相含有50%至100%的水，更優(yōu)選至少80%的水，或至少90%的水，至少95%的水，至少98%的水或100%的水。

在一個實(shí)施方式中，將如本文所述的本發(fā)明組合物提供為穩(wěn)定的貯備液，特別地提供為濃縮的貯備液，用于在2-8℃的溫度范圍下長期儲存于容器內(nèi)，特別是密封且無菌的容器內(nèi)。舉例來說，所述組合物可以含有任選地作為酸加成鹽、特別地為鹽酸加成鹽的本發(fā)明化合物和一定量的ph調(diào)節(jié)劑的穩(wěn)定的水性wfi(注射用水)溶液，本發(fā)明化合物的濃度為約10mg/ml至約250mg/ml，特別地在約50mg/ml至約200mg/ml的范圍內(nèi)，而尤其地在約75mg/ml至約150mg/ml的范圍內(nèi)，所述ph調(diào)節(jié)劑的量使得提供在ph3.0至ph5.0之間的范圍，特別地在ph3.2至ph4.7之間的范圍(例如在ph3.5至ph4.5之間，尤其在ph3.8至ph4.2之間的范圍，例如接近4.0)的溶液ph。舉例來說，所述貯備液的ph可以具有選自ph為約3.0或約3.2例如約3.4如約3.6或約3.8的下限，和約5.0或約4.7或約4.5或約4.2例如約4.0的上限。

本發(fā)明還提供一種制備按照本發(fā)明的化合物的制劑的方法。通常，所述方法包括將式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和ph調(diào)節(jié)劑與含水相混合。在該方法中，將所述含水相的ph通過在加入式(i)的化合物之前或之后加入如本文所定義的ph調(diào)節(jié)劑來調(diào)節(jié)到所需的范圍。舉例來說，在加入式(i)的化合物之前，將所述含水相的ph調(diào)節(jié)到低于ph6.0，例如低于ph5或低于ph4.5的ph，然后加入式(i)的化合物。然后可再次調(diào)節(jié)ph，以確保組合物處于按照本發(fā)明的所需值。然而，即使較不優(yōu)選，但式(i)的化合物也可以在加入任何ph調(diào)節(jié)劑之前加入到含水相中，然后通過加入ph調(diào)節(jié)劑來調(diào)節(jié)液體制劑的ph到所需的范圍。

優(yōu)選地，在制備過程的主要部分期間，更優(yōu)選地在制備的整個過程期間，液相的ph維持在低于6，例如低于5.0或低于4.5，例如在3.0至6.0的范圍內(nèi)。

在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的液體制劑的制備方法包括制備ph低于ph6.0的含水相，和隨著加入遞增部分的ph調(diào)節(jié)劑(如果必要的話)呈遞增部分混合式(i)化合物，以優(yōu)選地在制備的整個過程期間維持液體制劑的ph低于ph6.0，例如低于ph5或低于ph4.5。

水性制劑的ph在制備過程中可以被連續(xù)地或間斷地測量。

其它成分也可加入至或存在于含水相中，例如藥學(xué)上可接受的無機(jī)鹽(例如氯化鈉)、防腐劑或其它藥學(xué)上可接受的化合物，例如其它治療活性成分，例如細(xì)胞生長抑制劑，特別地是順鉑、柔紅霉素、cerubidine、阿糖胞苷和氟達(dá)拉濱。

在一個實(shí)施方式中，將氯化鈉以一定量加入到含水相中，以提供如上文所定義的最終的液體組合物，其含有濃度在0%和3%重量/制劑體積之間，特別地濃度在0.5%和1.5%重量/制劑體積之間，而尤其是濃度在0.8%和1%重量/制劑體積之間的氯化鈉。

在一個實(shí)施方式中，按照本發(fā)明的組合物為無菌制劑。在該情形中，按照本發(fā)明的組合物的滅菌可通過使制劑(例如配制的貯備液)通過標(biāo)稱孔徑為0.2μm的無菌過濾器進(jìn)入凈化且無菌的容器中來實(shí)現(xiàn)。

因此，本發(fā)明的方法還可包括對液體制劑進(jìn)行滅菌的步驟以及將所述制劑填充入無菌容器并給容器加蓋的步驟。

按照本發(fā)明的組合物可提供為隨時(shí)可用的注射溶液，其中通過加入一種或多種藥學(xué)上可接受的溶劑使本發(fā)明的液體制劑(例如貯備液)達(dá)到所需的體積，所述藥學(xué)上可接受的溶劑例如選自wfi，葡萄糖溶液，含有氨基酸、脂質(zhì)、維生素和其它礦物質(zhì)的電解質(zhì)溶液，林格氏液，哈特曼液，或氯化鈉溶液，其呈等滲、低滲或高滲溶液的形式。這樣的藥學(xué)上可接受的溶液的一個實(shí)例是baxterviaflo9mg/ml。

在一個實(shí)施方式中，其它生物活性化合物或物質(zhì)可存在于或加入至本發(fā)明的組合物中。舉例來說，在按照本發(fā)明的制劑待作為輸注液給予的情形中，其它治療活性成分可在給予患者之前加入到所述液體中。這種治療活性成分的實(shí)例是常規(guī)的細(xì)胞生長抑制劑，特別是順鉑、柔紅霉素、cerubidine、阿糖胞苷和氟達(dá)拉濱。

本發(fā)明的組合物可用于治療選自過度增生性疾病、自身免疫性疾病和心臟病的病癥中。過度增生性疾病的實(shí)例是癌癥。對于本發(fā)明的目的，自身免疫性疾病的實(shí)例是硬皮病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，心臟病的實(shí)例是心肌梗死。

在pct申請wo05/090341、wo04/084893、wo02/024692和wo03/07025(通過引用結(jié)合于本文)中，已證實(shí)式(i)的化合物的治療活性。

因此，在wo02/024692和wo03/07025中披露了式(i)的化合物在治療例如突變型p53介導(dǎo)的癌癥中的用途。這類癌癥的實(shí)例是骨肉瘤、肺腺癌、伯基特淋巴瘤(burkitt’slymphoma)、卵巢癌和結(jié)腸癌。由于其具有恢復(fù)p53的凋亡誘導(dǎo)功能的能力，式(i)的化合物也被認(rèn)為可用于治療其它的突變型p53介導(dǎo)的疾病，例如自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和斯耶格倫綜合征(sjogren’ssyndrome)(例如：yamanishiy.等，proc.natl.acad.sci.usa99(15):10025-30(2002),inazukam.等，rheumatology,39(3):262-6(2000),firesteing.s.等，proc.natl.acad.sci.usa30;94(20):10895-900(1997),和tapinosn.i.等，arthritisrheum.42(7):1466-72(1999))以及心臟病，例如遺傳性特發(fā)性心肌病(例如：gudkovaa.ya.等，載于identificationofthetp53tumorsuppressormutationsinpatientswithfamilyidiopathiccardiomyopathy(tp53腫瘤抑制基因突變在家族性特發(fā)性心肌病患者中的鑒定).theinternationalcongressoftheeuropeansocietyofpathology的摘要,2002年5月19-21日,baveno,lagomaggiore,italy)。

wo04/084893披露了式(i)的化合物(例如2,2-雙(羥甲基)奎寧環(huán)-3-酮)在治療惡性黑色素瘤以及涉及不需要的血管發(fā)生的病理狀態(tài)中的用途。

在wo05/090341中，式(i)化合物的抗增殖作用和凋亡誘導(dǎo)作用在使用人肺癌細(xì)胞系的體外測定中得到顯示。

化合物2-(羥甲基)-2-(甲氧基甲基)奎寧環(huán)-3-酮(本文也稱為apr-246)在治療不同癌癥中的治療活性已通過體外測定利用不同癌細(xì)胞系得到顯示，參照表2，其中顯示了apr-246在不同類型癌細(xì)胞中的ic50。

表2：apr-246對不同癌細(xì)胞系的細(xì)胞存活力的影響

在表2中，結(jié)果表示為平均值±sd；ic50值計(jì)算為不同試驗(yàn)中的ic50值的平均值。

體內(nèi)研究還表明式(i)化合物具有顯著的抗癌活性。因此，小鼠中的體內(nèi)異種移植物試驗(yàn)顯示了式(i)化合物具有顯著的抗癌效果。事實(shí)上，用突變型p53骨肉瘤細(xì)胞saos-2-his273進(jìn)行的體內(nèi)異種移植物試驗(yàn)(圖1)證明本發(fā)明化合物具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的抗癌效果。

此外，用2-(羥甲基)-2-(甲氧基甲基)奎寧環(huán)-3-酮進(jìn)行的使用中空纖維小鼠模型的體內(nèi)試驗(yàn)表明本發(fā)明化合物具有顯著的抗白血病效果。這些試驗(yàn)使用中空纖維體內(nèi)小鼠模型進(jìn)行(關(guān)于該模型的簡短描述，參見因特網(wǎng)網(wǎng)站http://dtp.nci.nih.gov/timeline/noflash/milestones/m13_hollow_fiber.htm)。

如圖2所示，在試驗(yàn)的最后，僅用溶媒治療的小鼠(對照)中白血病細(xì)胞(amlmv-4-11細(xì)胞)的凈增長約為25%(按數(shù)量計(jì))。另一方面，到試驗(yàn)?zāi)橹?，用本發(fā)明化合物治療的小鼠中白血病細(xì)胞的凈增長約為-25%，即白血病細(xì)胞的數(shù)量有效地降低了。

鑒于以上數(shù)據(jù)，預(yù)期的是，本發(fā)明的組合物在治療上文提到的不同病癥中具有用途，所述病癥為例如骨肉瘤、肺腺癌、伯基特淋巴瘤、卵巢癌、結(jié)腸癌、惡性黑色素瘤、骨肉瘤、乳腺導(dǎo)管癌、前列腺腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸腺癌、非小細(xì)胞肺癌、白血病、急性髓細(xì)胞單核性細(xì)胞白血病、自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和斯耶格倫綜合征，以及心臟病，例如遺傳性特發(fā)性心肌病。

實(shí)施例

下文將更詳細(xì)地說明本發(fā)明的具體實(shí)施例并且按照本發(fā)明提供具體的實(shí)施例，所述實(shí)施例僅用于闡明本發(fā)明，而不應(yīng)認(rèn)為是以任何方式對本發(fā)明范圍進(jìn)行限制。

實(shí)施例1

不同ph下apr-246在含水系統(tǒng)中的穩(wěn)定性研究

將數(shù)種apr-246的含水制劑和apr-246的鹽酸加成鹽的含水制劑制備并測試其穩(wěn)定性。apr-246易溶于水溶液，apr-246的pka產(chǎn)生ph接近9至9.5的堿性水溶液。

觀察到，與濃度概況無關(guān)，apr-246在水溶液中不但在室溫下而且在更低的溫度下都會降解。

在制劑形成期間，發(fā)現(xiàn)溶液中apr-246的穩(wěn)定性依賴于ph和溫度。隨著ph下降，穩(wěn)定性提高。為了針對穩(wěn)定性確立apr-246的合適ph，進(jìn)行在不同ph下于不同溶液中的藥物的研究。

表3中提供了概括的結(jié)果。在這些模型系統(tǒng)下，ph高于6的制劑顯示了穩(wěn)定性問題。hplc分析進(jìn)一步揭示了代表apr-246的降解產(chǎn)物的新的峰。

表3：在48小時(shí)后在不同ph下溶液中的apr-246含量[%]

。

實(shí)施例2

apr-246在緩沖系統(tǒng)中的穩(wěn)定性研究

為了進(jìn)一步地闡明在水溶液中的穩(wěn)定性以及評價(jià)對溶液進(jìn)行緩沖的需要，對apr-246在含有和不含檸檬酸鹽緩沖液的鹽水進(jìn)行了研究。概括的結(jié)果在表4中提供。結(jié)果顯示了降解隨著ph和溫度而增加。還顯示了并不需要對溶液進(jìn)行緩沖；在沒有緩沖液的情況下，ph足夠穩(wěn)定。

表4：apr-246在含有和不含緩沖液的溶液中的穩(wěn)定性

基于這些研究的合并結(jié)果，推論出鹽水濃度在0.5%和1.0%之間和ph范圍為ph3.5-ph4.5(例如ph4)的apr-246的水性wfi貯備液對臨床制劑有利。

從所述模型系統(tǒng)中進(jìn)一步推論出，該標(biāo)準(zhǔn)制劑對于正常熱滅菌是敏感的。作為代替，通過使終產(chǎn)物制劑經(jīng)由標(biāo)稱孔徑為0.2μm的無菌過濾器過濾進(jìn)入凈化且無菌的容器中來進(jìn)行滅菌。隨后可將經(jīng)如此滅菌的溶液分配到合適大小的清潔無菌的去致熱源的玻璃小瓶中，然后給小瓶加蓋。制備符合現(xiàn)行的生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的規(guī)定。

實(shí)施例3

apr-246在含水系統(tǒng)中的長期穩(wěn)定性研究

以約150mg/ml的濃度、ph3.9制備apr-246貯備液。將由21.5至22.0ml藥品組成的成品無菌地裝填入預(yù)先滅菌的50ml玻璃小瓶中。制備符合生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范。兩個批次的概括結(jié)果提供于表5中。

表5：apr-246(150mg/ml)在ph3.9-4.0的含水系統(tǒng)中的穩(wěn)定性測試

按照本文所述配制用于臨床應(yīng)用的apr-246的長期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示在本發(fā)明制劑中apr-246是穩(wěn)定的，預(yù)期當(dāng)產(chǎn)品被儲存于2-8℃下時(shí)，在兩年時(shí)間內(nèi)不存在明顯的降解。

實(shí)施例4

濃度為150mg/ml、ph為3.9的穩(wěn)定apr-246貯備液的配制

在室溫下攪拌的同時(shí)，將nacl(105g)加入配有用于監(jiān)測ph的ph探測器的25l無菌容器中的水性hcl(1890g,5.03m)和wfi(7960g)的混合物中。當(dāng)nacl完全溶解時(shí)，將apr-246(1747g)分部分加入經(jīng)攪拌的溶液中，得到4.75的ph。以小部分加入水性hcl(11.1ml,5.03m)，導(dǎo)致將ph調(diào)節(jié)到4.0。最后向混合物中加入apr-246(3.0g)，并且通過小心加入水性hcl(3.5ml,5.03m)將所得ph4.4調(diào)節(jié)到ph3.9。最后將wfi(484g)加入混合物中，同時(shí)再攪拌5分鐘。

將貯備液通過opticapxl4過濾器(1.0/0.5μm)過濾至清潔玻璃容器中，然后進(jìn)一步通過kleenpakka1過濾器(0.22μm)過濾至無菌容器(b級區(qū)域)。在無菌條件下(a級區(qū)域)進(jìn)行無菌小瓶的分配和用無菌的塞子/蓋子進(jìn)行的加塞/蓋。檢測過濾器的完整性，將來自制備的樣品(小瓶)拿去用于測定和無菌分析以及穩(wěn)定性測試。使用本文所述方案制備數(shù)個批次，其中測定和無菌分析完全在規(guī)定限值內(nèi)。

實(shí)施例5

分析方法

hplc-層析在agilent1100/1200系列hplc系統(tǒng)上在20℃下使用purospherstarrp-18e,5μm(250x4.6)mm柱進(jìn)行。樣品溫度通過恒溫器設(shè)定在5℃。通過uv/visdad檢測器在210nm下進(jìn)行檢測。流速被設(shè)定在1.0ml/min且注射體積為10μl。使用的流動相為磷酸鹽緩沖液(a)在乙腈(b)中的梯度：0-5分鐘：90%a，5-20分鐘：70%a，20-35分鐘：20%a，35-45分鐘：90%a。使用在分析之前新鮮制備的純apr-246標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得校準(zhǔn)。用電子學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取。該方法已經(jīng)驗(yàn)證。

實(shí)施例6

微生物學(xué)屬性

apr-246藥品是用于輸注溶液的無菌濃縮物。該溶液按照pheur標(biāo)準(zhǔn)方法通過過濾進(jìn)行滅菌，并無菌裝填入小瓶中。

研究了對在最終容器中的溶液進(jìn)行高壓滅菌的可能性，但降解非常明顯以至于無法進(jìn)行該過程。在121℃下滅菌的兩個批次的概括結(jié)果提供在表6中

表6：ph分別為4.0和4.5的apr-246溶液150mg/ml在高壓滅菌(121℃,20min)之前和之后的hplc-uv結(jié)果

。

實(shí)施例7

輸注袋相容性

本實(shí)施例概括了對在6個輸注袋中的apr-246藥品(150mg/ml的貯備液)的相容性研究結(jié)果，以確定所述藥品在氯化鈉溶液中的物理和化學(xué)穩(wěn)定性以及與輸注袋和管類設(shè)備材料的相容性。所述藥品在給予前應(yīng)用輸注用無菌0.9%氯化鈉溶液稀釋至總體積為500ml。

研究的持續(xù)時(shí)間覆蓋了長于最終輸注給患者的時(shí)間。針對最低劑量為0.15mg/ml的最壞情況以及最高劑量為24mg/ml的最壞情況設(shè)計(jì)研究。

藥品與輸注系統(tǒng)的相互作用的重要因素是輸注袋表面與藥品量(mg/cm²)之間的關(guān)系，最低藥品濃度代表相容性研究的最加速的情形。包括高濃度以覆蓋劑量范圍和闡明在該劑量范圍內(nèi)用于輸注的最終溶液的ph。

該研究在室溫下使用baxter輸注袋(viaflo)(批號為08f22e1c)進(jìn)行。預(yù)定的設(shè)計(jì)提供在表7中。

表7:樣品設(shè)計(jì)

對每一個濃度(“高”和“低”)都制備了三個輸注袋。每天研究一個輸注袋，其自冷藏的apr-246貯備液新鮮制備。

低濃度

結(jié)果提供在表8中，在研究范圍內(nèi)顯示令人滿意的穩(wěn)定性。

表8:低濃度的測定

。

高濃度

結(jié)果提供在表9中，在研究范圍內(nèi)顯示令人滿意的穩(wěn)定性。

表9:高濃度的測定和ph

。

總之，這些表表明由150mg/mlapr-246液體制劑制備的低濃度和高濃度的輸注袋溶液在至少22小時(shí)內(nèi)是穩(wěn)定的。

因此，該實(shí)施例表明本發(fā)明的液體制劑可用于制備可胃腸外給予的經(jīng)稀釋溶液，該溶液具有足夠的穩(wěn)定性，允許以實(shí)用且安全的方式對其進(jìn)行操作和給予。

如上文所示，本發(fā)明提供了一種儲存穩(wěn)定的液體組合物，該組合物含有如本文定義的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。