本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，尤其涉及一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是危害人類健康的主要疾病之一，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，納米藥物輸送體系在腫瘤治療中逐漸嶄露頭角。常見的藥物輸送體系包括脂質(zhì)體，聚合物膠束，白蛋白納米顆粒等在納米轉(zhuǎn)換醫(yī)學(xué)中已進(jìn)入臨床研究。然而，由于藥物負(fù)載量的限制，大部分的傳統(tǒng)納米藥物輸送體系常常伴隨著載體材料的大量使用，進(jìn)而不可避免的提高代謝壓力并引起對(duì)生理組織的毒副作用，例如常用的聚酯類藥物輸送體系在體內(nèi)代謝產(chǎn)生的酸性降解產(chǎn)物可引起局部的炎癥反應(yīng)，而白蛋白輸送體系則會(huì)引起機(jī)體免疫反應(yīng)而產(chǎn)生不良后果等，從而極大地限制了納米藥物在臨床轉(zhuǎn)換方面的應(yīng)用。

光動(dòng)力療法(photodynamic therapy，PDT)是一種新興的腫瘤治療方法，與傳統(tǒng)的化療、放療以及外科手術(shù)治療相比，光動(dòng)力療法具有更安全、并發(fā)癥少、對(duì)生物體損傷小的優(yōu)點(diǎn)，因而受到越來越多的關(guān)注。光動(dòng)力治療通過特定波長的光激發(fā)在腫瘤部位富集的光敏分子，產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性的活性氧，通過損壞腫瘤細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)引起腫瘤受損和死亡，達(dá)到治療目的。

近年來，通過最低限度的使用惰性材料構(gòu)建新型無載體策略的納米藥物輸送體系逐漸引起了研究興趣。采用無載體納米藥物輸送體系可以有效避免由載體材料帶來的系統(tǒng)毒性對(duì)患者造成的額外負(fù)擔(dān)。

共價(jià)有機(jī)聚合物(covalent organic polymer，COP)是近年來廣泛關(guān)注的新型的聚合物材料，通過將各種有機(jī)單元以共價(jià)鍵鏈接的形式構(gòu)筑的有機(jī)材料。其具有比表面積大、熱穩(wěn)定性好、結(jié)構(gòu)可控及多功能性的優(yōu)點(diǎn)，并且其框架結(jié)構(gòu)中特有的納米孔洞可被用來負(fù)載其他功能性客體分子，從而具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。但是，目前利用COP材料作為無載體納米藥物輸送體系尚不多見，而將共價(jià)有機(jī)聚合物作為藥物輸送載體應(yīng)用于癌癥的光動(dòng)力與化療聯(lián)合治療更是未曾見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供共價(jià)有機(jī)聚合物及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供的共價(jià)有機(jī)聚合物可以作為光動(dòng)力治療與化療聯(lián)合治療的藥物，且具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。

本發(fā)明還提供了一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物，由羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到；

其中，R₁、R₂、R₃和R₄獨(dú)立的選自氨基或羥基。

優(yōu)選的，所述式(I)結(jié)構(gòu)的化合物與所述順鉑前藥的摩爾比為(1～1.5)∶1。

優(yōu)選的，所述式(I)結(jié)構(gòu)的化合物與所述順鉑前藥的摩爾比為(1.1～1.3)∶1。

優(yōu)選的，所述羧基封端的聚乙二醇與所述順鉑前藥的摩爾比為(1.5～2)∶1。

優(yōu)選的，所述羧基封端的聚乙二醇的分子量為1KDa～10KDa。

優(yōu)選的，所述順鉑前藥為式(Pt-1)或式(Pt-2)

優(yōu)選的，所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物的粒徑為50～200納米。

本發(fā)明還提供了一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物的制備方法，包括：將羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物；

其中，R₁、R₂、R₃和R₄獨(dú)立的選自氨基或羥基。

優(yōu)選的，所述反應(yīng)的催化劑為環(huán)己基碳二亞胺和4-二甲胺基吡啶。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物在制備光動(dòng)力治療與化療聯(lián)合治療的藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物，由羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到；其中，該化合物通過使5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉分別與順鉑前藥和聚乙二醇通過酯鍵相連得到；且該還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物(THPP-Pt-PEG)具有非常好的水溶性和生物相容性，在水和生理?xiàng)l件下都具有很好的分散性；在冷凍干燥后依然具有良好的復(fù)溶能力；得到的納米顆粒在不僅激光照射下可產(chǎn)生單線態(tài)氧，而且在癌癥細(xì)胞高還原性的條件下納米顆粒可發(fā)生解離，釋放出順鉑藥物，在腫瘤的聯(lián)合治療中具有一定的應(yīng)用；而且該化合物還可以作為無載體的藥物輸送體系直接使用，從而有效避免了由于載體的引入從而導(dǎo)致的包括對(duì)正常組織的毒副作用、對(duì)腎臟等器官引起的代謝壓力以及由于載體降解引起的局部炎癥等一系列不良后果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過將還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物THPP-Pt-PEG納米顆粒對(duì)小鼠通過尾靜脈注射，并由熒光成像技術(shù)對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測；發(fā)現(xiàn)納米顆粒能夠在腫瘤的部位具有很高的富集，然后用激光進(jìn)行光動(dòng)力治療，結(jié)合化療效果顯著，并且能改善腫瘤部位的乏氧情況，不會(huì)對(duì)其他的部位造成損失，治愈后不易復(fù)發(fā)；可見，本發(fā)明提供的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物可以作為光動(dòng)力治療與化療聯(lián)合治療的藥物，而且該聚合物還可以作為化療藥物輸送的載體，避免了化療藥物使用額外的載體。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1制備得到的THPP-Pt-PEG的動(dòng)態(tài)激光粒徑分布圖；

圖2為實(shí)施例1制備得到的THPP-Pt-PEG的透射電鏡照片圖；

圖3為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在660nm激光照射下SOSG的相對(duì)熒光強(qiáng)度圖；

圖4為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在含有谷胱甘肽(GSH)的緩沖液中的累積釋放曲線圖；

圖5為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在含有谷胱甘肽(GSH)的緩沖液中的粒徑變化曲線圖；

圖6為實(shí)施例1制備THPP-Pt-PEG和順鉑與小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1細(xì)胞)共培養(yǎng)的細(xì)胞存活率圖；

圖7為在660nm激光照射下實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG和不含順鉑交聯(lián)的THPP-PEG與小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1細(xì)胞)共培養(yǎng)的細(xì)胞存活率圖；

圖8為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG改善腫瘤部位乏氧情況的熒光照片；

圖9是實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG改善腫瘤部位乏氧情況的熒光統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)；

圖10為實(shí)施例1提供的THPP-Pt-PEG在主要器官中分布的熒光照片；

圖11為實(shí)施例1提供的THPP-Pt-PEG在主要器官中分布的數(shù)據(jù)；

圖12為腫瘤體積的變化圖；

圖13為小鼠體重變化圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物，由羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到；

其中，R₁、R₂、R₃和R₄獨(dú)立的選自氨基或羥基。

按照本發(fā)明，所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物中，所述羧基封端的聚乙二醇為單羧基封端的聚乙二醇，即所述羧基封端的聚乙二醇的分子量優(yōu)選為1KDa～10KDa，更優(yōu)選為3KDa～8KDa。

按照本發(fā)明，所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物中，所述羧基化順鉑前藥優(yōu)選具有式(Pt-1)或式(Pt-2)

按照本發(fā)明，所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物中，所述式(I)結(jié)構(gòu)的化合物與所述順鉑前藥的摩爾比優(yōu)選為(1～1.5)∶1，更優(yōu)選為1.1～1.3)∶1；所述羧基封端的聚乙二醇與所述順鉑前藥的摩爾比優(yōu)選為(1.5～2)∶1，更優(yōu)選為(1.6～1.8)∶1；所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物的粒徑為50～200納米，更優(yōu)選為60～150nm，最優(yōu)選為80～120nm；此外，所述還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物中，所述5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉分別與順鉑前藥和聚乙二醇通過酯鍵連接。

本發(fā)明還提供了一種還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物的制備方法，包括：將羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物；

其中，R₁、R₂、R₃和R₄獨(dú)立的選自氨基或羥基。

按照本發(fā)明，本發(fā)明將羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物；其中，所述羧基封端的聚乙二醇為單羧基封端的聚乙二醇，即所述羧基封端的聚乙二醇的分子量優(yōu)選為1KDa～10KDa，更優(yōu)選為3KDa～8Kda；所述羧基化順鉑前藥的優(yōu)選具有式(Pt-1)或式(Pt-2)

本發(fā)明中，所述式(I)結(jié)構(gòu)的化合物與所述順鉑前藥的摩爾比優(yōu)選為(1～1.5)∶1，更優(yōu)選為1.1～1.3)∶1；所述羧基封端的聚乙二醇與所述順鉑前藥的摩爾比優(yōu)選為(1.5～2)∶1，更優(yōu)選為(1.6～1.8)∶1；本發(fā)明對(duì)所述反應(yīng)的催化劑沒有特殊要求，本領(lǐng)域公知的可以用于酯化的催化劑均可，優(yōu)選為環(huán)己基碳二亞胺和4-二甲胺基吡啶；其中，所述順鉑前藥與所述環(huán)己基碳二亞胺的摩爾比優(yōu)選為1∶(3～5)，更優(yōu)選為1∶4；所述順鉑前藥與所述4-二甲胺基吡啶的摩爾比優(yōu)選為1∶(3～5)，更優(yōu)選為1∶4。

本發(fā)明中，所述反應(yīng)優(yōu)選在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行；所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為30～45℃，更優(yōu)選為35～40℃；所述反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為24～72小時(shí)，更優(yōu)選為48～60小時(shí)；本發(fā)明中，為了使反應(yīng)能夠更加順利的進(jìn)行，本發(fā)明優(yōu)選首先將式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)24～26h后，再加入羧基封端的聚乙二醇反應(yīng)，得到還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物。

本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物在制備光動(dòng)力治療與化療聯(lián)合治療的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物，由羧基封端的聚乙二醇、式(I)結(jié)構(gòu)的化合物和羧基化順鉑前藥混合反應(yīng)得到；其中，該化合物通過使5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉分別與順鉑前藥和聚乙二醇通過酯鍵相連得到；且該還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物(THPP-Pt-PEG)具有非常好的水溶性和生物相容性，在水和生理?xiàng)l件下都具有很好的分散性；在冷凍干燥后依然具有良好的復(fù)溶能力；得到的納米顆粒在不僅激光照射下可產(chǎn)生單線態(tài)氧，而且在癌癥細(xì)胞高還原性的條件下納米顆?？砂l(fā)生解離，釋放出順鉑藥物，在腫瘤的聯(lián)合治療中具有一定的應(yīng)用；而且該化合物還可以作為無載體的藥物輸送體系直接使用，從而有效避免了由于載體的引入從而導(dǎo)致的包括對(duì)正常組織的毒副作用、對(duì)腎臟等器官引起的代謝壓力以及由于載體降解引起的局部炎癥等一系列不良后果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過將還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物THPP-Pt-PEG納米顆粒對(duì)小鼠通過尾靜脈注射，并由熒光成像技術(shù)對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測；發(fā)現(xiàn)納米顆粒能夠在腫瘤的部位具有很高的富集，然后用激光進(jìn)行光動(dòng)力治療，結(jié)合化療效果顯著，并且能改善腫瘤部位的乏氧情況，不會(huì)對(duì)其他的部位造成損失，治愈后不易復(fù)發(fā)；可見，本發(fā)明提供的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物可以作為光動(dòng)力治療與化療聯(lián)合治療的藥物，而且該聚合物還可以作為化療藥物輸送的載體，避免了化療藥物使用額外的載體。

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

制備還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物(THPP-Pt-PEG)

以5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉、羧基化順鉑前藥以及聚乙二醇作為反應(yīng)原料，通過酯化反應(yīng)，制備還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物THPP-Pt-PEG。具體包括以下步驟：

將27.2mg的5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉、32.1mg羧基化順鉑前藥、49.4mg的N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺以及29.3mg的4-二甲胺基吡啶溶于干燥過的四氫呋喃中，在35℃氮?dú)夥諊聰嚢璺磻?yīng)24小時(shí)；

然后向體系中加入100mg單末端為羧基的聚乙二醇、12.4mg的N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺以及7.3mg的4-二甲胺基吡啶，繼續(xù)在35℃氮?dú)夥諊聰嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。將所得溶液濃縮后滴加入冰乙醚中得到粗產(chǎn)物進(jìn)一步溶解于2mL甲醇中，在純水中透析48小時(shí)得到還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物。

采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法配置系列已知5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉以及鉑元素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，通過紫外-可見光譜(UV-vis)以及電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分別測試樣品的5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉含量以及鉑含量，計(jì)算得出其中5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉含量為8.2wt％，順鉑含量為2.1wt％，5，10，15，20-四(4-羥苯基)卟啉分別與順鉑前藥和聚乙二醇的物質(zhì)的量為1.1∶1∶1.8。

通過對(duì)得到的還原響應(yīng)性共價(jià)有機(jī)聚合物進(jìn)行表征(動(dòng)態(tài)光散射、透射電鏡、單線態(tài)氧產(chǎn)生能力)，結(jié)果如下：

圖1為實(shí)施例1制備得到的THPP-Pt-PEG的動(dòng)態(tài)激光粒徑分布圖，從圖中可以看出，THPP-Pt-PEG所形成的納米顆粒直徑約為60nm，并且呈現(xiàn)單分散；圖2為實(shí)施例1制備得到的THPP-Pt-PEG的透射電鏡照片圖，由于透射電鏡測試為干燥情況，PEG部分難以被拍攝到，圖中疏水內(nèi)核部分的粒徑約為45nm，并且粒徑大小均一。通過檢測SOSG的熒光強(qiáng)度來驗(yàn)證經(jīng)660nm激光照射后，THPP-Pt-PEG產(chǎn)生單線態(tài)氧的能力，結(jié)果見圖3，圖3為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在660nm激光照射下SOSG的相對(duì)熒光強(qiáng)度圖；從圖中可以看出，THPP-Pt-PEG具有良好的產(chǎn)生單線態(tài)氧的能力，是一種良好的光動(dòng)力治療試劑。

實(shí)施例2實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在含有GSH的緩沖液中的降解性能測試

由于THPP-Pt-PEG通過順鉑前藥交聯(lián)，在還原性條件下可發(fā)生解離，進(jìn)一步釋放出卟啉分子，腫瘤內(nèi)部含有較高含量的谷胱甘肽(GSH)，呈現(xiàn)出一定的還原性。為了進(jìn)一步研究THPP-Pt-PEG在還原性條件下的降解，我們分別測試了在有無GSH的PBS緩沖液中的卟啉釋放情況和納米顆粒的粒徑變化。

圖4為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在含有谷胱甘肽(GSH)的緩沖液中的累積釋放曲線圖，從圖中可以看出，隨著時(shí)間的延長，在含有GSH的介質(zhì)中，卟啉累積釋放率遠(yuǎn)超于在不含GSH的介質(zhì)中的累積釋放率；

圖5為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在含有谷胱甘肽(GSH)的緩沖液中的粒徑變化曲線圖，從圖中可以看出，隨著時(shí)間的延長，在含有GSH的介質(zhì)中，納米顆粒的粒徑發(fā)生較大變化，表明納米顆粒發(fā)生解離后，疏水部分發(fā)生聚集，如圖中的透射電鏡所示，而在不含有GSH的介質(zhì)中，納米顆粒的粒徑基本保持不變。證明THPP-Pt-PEG納米顆粒具有明顯的還原響應(yīng)性。

實(shí)施例3：實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力實(shí)驗(yàn)

選取順鉑原藥以及不含順鉑的共價(jià)有機(jī)聚合物THPP-PEG作為對(duì)照組，外加條件為660nm激光照射，選取4T1細(xì)胞驗(yàn)證THPP-Pt-PEG對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。

通過MTT測試檢驗(yàn)4T1細(xì)胞與THPP-Pt-PEG以及順鉑在有無660nm激光照射共培養(yǎng)48小時(shí)的累積存活率，結(jié)果見圖6，圖6為實(shí)施例1制備THPP-Pt-PEG和順鉑與小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1細(xì)胞)共培養(yǎng)的細(xì)胞存活率圖，從圖中可以看出，THPP-Pt-PEG與順鉑相比具有更強(qiáng)的殺傷力，并且經(jīng)過激光照射，殺傷力大大增強(qiáng)，證明與單一化療相比，化療與光動(dòng)力療法聯(lián)合具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。

通過MTT測試檢驗(yàn)4T1細(xì)胞與THPP-Pt-PEG以及THPP-PEG在有無660nm激光照射共培養(yǎng)48小時(shí)的累積存活率，結(jié)果見圖7，圖7為在660nm激光照射下實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG和不含順鉑交聯(lián)的THPP-PEG與小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1細(xì)胞)共培養(yǎng)的細(xì)胞存活率圖，從圖中可以看出，THPP-Pt-PEG與THPP-PEG相比具有更強(qiáng)的殺傷力，并且經(jīng)過激光照射，殺傷力大大增強(qiáng)，證明與單一光動(dòng)力療法相比，化療與光動(dòng)力療法聯(lián)合具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。進(jìn)一步說明，聯(lián)合治療與單一療法相比更具優(yōu)勢。

實(shí)施例4：實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG改善腫瘤部位乏氧情況

將THPP-Pt-PEG通過尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)24小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)小鼠犧牲，通過免疫熒光染色法觀察THPP-Pt-PEG對(duì)腫瘤部位乏氧情況的改善能力。結(jié)果見圖8～圖9；圖8為實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG改善腫瘤部位乏氧情況的熒光照片；圖9是實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG改善腫瘤部位乏氧情況的熒光統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)；從圖8可以看出，與未注射THPP-Pt-PEG的對(duì)照組相比，THPP-Pt-PEG處理組的乏氧區(qū)域的熒光強(qiáng)度明顯減弱，表明其乏氧情況得到了改善。從圖9中對(duì)腫瘤乏氧區(qū)域的熒光的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，可明顯發(fā)現(xiàn)經(jīng)過注射THPP-Pt-PEG的腫瘤區(qū)域的熒光統(tǒng)計(jì)值明顯低于未經(jīng)THPP-Pt-PEG注射的對(duì)照組的熒光統(tǒng)計(jì)值，表明THPP-Pt-PEG可有效改善腫瘤部位的乏氧情況。

實(shí)施例5：實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在生物體內(nèi)的分布實(shí)驗(yàn)

將THPP-Pt-PEG通過尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，24小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)小鼠犧牲，取出重要的器官置于表面皿中，在小動(dòng)物成像系統(tǒng)上拍攝熒光照片，觀察各個(gè)器官及腫瘤部位THPP-Pt-PEG的富集量。

圖10為實(shí)施例1提供的THPP-Pt-PEG在主要器官中分布的熒光照片，結(jié)果表明，24小時(shí)后，腫瘤部位具有較強(qiáng)的熒光，表明THPP-Pt-PEG在腫瘤部位的富集量較高，由于腎中的富集量也很高，說明THPP-Pt-PEG可以從小鼠體內(nèi)代謝出去，

將小鼠各器官剪碎勻漿后萃取后測試THPP-Pt-PEG在各器官中的分布，結(jié)果見圖11，圖11為實(shí)施例1提供的THPP-Pt-PEG在主要器官中分布的數(shù)據(jù)，從圖中可以看出，該結(jié)果與器官的熒光成像結(jié)果相符，進(jìn)一步說明THPP-Pt-PEG在小鼠體內(nèi)的分布。

實(shí)施例六：實(shí)施例1制備的THPP-Pt-PEG在活體水平的化療與光動(dòng)力療法聯(lián)合治療實(shí)驗(yàn)

選取5只背部帶有4T1腫瘤的小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，從尾靜脈注射THPP-Pt-PEG，經(jīng)過24小時(shí)后，THPP-Pt-PEG在腫瘤部位的富集量達(dá)到最大，然后將腫瘤部位暴露在660納米激光下照射45min，激光功率為2W/cm2。另外四組背部帶有腫瘤的小鼠(每組5只)做為對(duì)照組試驗(yàn)，分別是(1)沒有經(jīng)過任何處理的健康小鼠；(2)只有激光照射組；(3)注射同樣順鉑劑量的順鉑原藥溶液；(4)注射同樣卟啉濃度的THPP-PEG外加激光照射。當(dāng)處理完每組小鼠之后，小鼠背部的腫瘤體積每隔二天測量一次。

圖12為腫瘤體積的變化圖，如圖12所示，實(shí)驗(yàn)組小鼠的腫瘤在經(jīng)過聯(lián)合治療后的生長得到明顯抑制，而而其他的對(duì)照組腫瘤在不斷的生長，表明聯(lián)合治療與單一治療相比，具有更加優(yōu)異的抑制腫瘤生長的能力。

圖13為小鼠體重變化圖，如圖13所示，實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重并未發(fā)生明顯下降，表明THPP-Pt-PEG具有良好的生物相容性，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。