本發(fā)明涉及植物提取方法及植物提取物
技術領域：
，具體涉及一種椴樹花提取物的提取方法及該提取物的應用。
背景技術：
：我國地大物博，植物種類繁多，所含有效成分的組成也各有特點，為功效性植物添加劑的開發(fā)提供了豐富的資源。可通過不同方式方法對植物有效成分進行提取分離，探索植物有效成分在不同領域的應用，以便提升其經(jīng)濟價值。椴樹為椴樹科，椴樹屬，是一個特征非常明顯的類群，因其花序或果序上獨特的大型葉狀苞片和通?；科钡娜~片而易于區(qū)別于其它類群。葛仁、唐亞等將全世界椴樹劃分為25種，其中北美2種、歐洲5種、東亞18種，我國共天然分布有椴樹屬樹木14種，特有種10種，而南京椴就是特有種之一。據(jù)文獻報道，椴樹花有益氣補胃、止疼解毒，有醫(yī)治和減輕高血壓、心臟病、便秘、失眠等多種疾病的功效。我國目前還沒有直接研究椴樹花中所含化學成分的報道。歐美樹種的研究報道略多，且以黃酮類化合物的研究為主。國外研究發(fā)現(xiàn)椴樹花浸提物多年來被用作抗焦慮藥，還可用于感冒、發(fā)寒、支氣管炎等，是由于類黃酮物質能與高親和力苯二氮類物質結合，苯二氮通過與各自的受體作用發(fā)揮免疫作用。椴樹花水提物在濃度為0.5-20μg/ml時對淋巴細胞的增殖有刺激作用。目前有文獻報道椴樹花提取物在防曬化妝品中的應用。中國發(fā)明專利CN201110385359.1發(fā)明一種含有椴樹花提取物的防曬組合物，其中制備方法針對多種組合物的簡單提取和混合，未涉椴樹花成分分離純化工藝；中國發(fā)明申請專利（CN201410315746.1）公開了含有椴樹花提取液的防曬化妝品組合物配方，但未涉及椴樹花提取液的制備方法。綜合現(xiàn)有文獻資料，未發(fā)現(xiàn)有針對椴樹花提取物的提取方法的研究及其在其他領域的應用報道。技術實現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術中存在的缺點和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種椴樹花提取物的提取方法，通過從椴樹花中直接提取得到活性物質。本發(fā)明的目的在于提供一種椴樹花提取物A及一種椴樹花提取物A的應用，其能有效提高卷煙吸食品質，具有增加清甜香，提高煙氣量、降低刺激性及改善口感作用。本發(fā)明的目的在于提供一種椴樹花提取物B及一種椴樹花提取物B的應用，樹花提取物B具有抑制彈性蛋白酶及皮膚保濕作用，故該椴樹花提取物B可制成具有提高皮膚彈性、減少皺紋以及滋潤保濕等功能的化妝品。本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)：一種椴樹花提取物的提取方法，包括以下步驟：步驟一：將a重量份的椴樹花粉碎，加入極性溶劑進行超聲提取1-2次，每次加入極性溶劑為10a-16a重量份，將濾液減壓濃縮得到a重量份椴樹花粗提液；步驟二：將步驟一得到的a重量份椴樹花粗提液離心，得到的離心液進行大孔樹脂吸附處理，依次采用去離子水、質量分數(shù)為60%-70%的乙醇水溶液洗脫，再用質量分數(shù)為85%乙醇的洗脫，收集質量分數(shù)為60%-75%的乙醇洗脫液，減壓濃縮至0.5a重量份的椴樹花提取物A。進一步的，還包括步驟三：將步驟二中的質量分數(shù)為85%的乙醇洗脫液減壓濃縮至0.5a重量份，與步驟二最終得到的0.5a重量份的椴樹花提取物A混合后進行柱層析，依次用去離子水、質量分數(shù)為70%的乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，經(jīng)減壓濃縮、冷凍干燥后得到椴樹花提取物B。a重量份中的a可以為任意數(shù)值。其中，所述步驟一中所述極性溶劑是飽和石灰水與乙醇的混合溶液，其中乙醇在混合溶液中的質量分數(shù)為30-60%。其中，所述步驟一種超聲提取采用的是循環(huán)雙頻超聲提取，超聲頻率為20KHz及49KHz，超聲頻率為600-800W，時間為30-50min，溫度為50-60℃。其中，所述步驟三中，柱層析的填料為粒度為20-40目大小的聚酰胺樹脂。其中，所述步驟二中的大孔樹脂為弱極性大孔吸附樹脂。一種椴樹花提取物A，上述步驟一、步驟二的制備方法制備得到。一種椴樹花提取物A的應用，將所述椴樹花提取物A添加到卷煙中，所述椴樹花提取物A的添加量為煙絲重量的0.01-0.5%。一種椴樹花提取物B，由上述步驟步驟一、步驟二、步驟三所述的制備方法制備得到。一種含有椴樹花提取物B的應用，將所述椴樹花提取物B添加到化妝品或護膚品中，具有保濕和抗衰老的作用，所述椴樹花提取物B的添加重量百分比為0.01-0.2%。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明公開一種椴樹花提取物的制備方法，通過步驟一和步驟二提取得到提取物A，其能夠應用到香煙中，其能有效提高卷煙吸食品質，具有增加清甜香，提高煙氣量、降低刺激性及改善口感作用。再經(jīng)過步驟三進一步可以得到椴樹花提取物B，具有抑制彈性蛋白酶及皮膚保濕作用，故該椴樹花提取物B可制成具有提高皮膚彈性、減少皺紋以及滋潤保濕等功能的化妝品。本發(fā)明的步驟一中極性溶劑為含有飽和石灰水的乙醇溶液，加上循環(huán)雙頻超聲提取，能更高效的提高活性成分提取率，提取溫度相對較低，能保護椴樹花活性成分的穩(wěn)定性。經(jīng)過步驟二中的大孔樹脂吸附后，有效除去色素、淀粉，保留椴樹花活性提取成分。步驟三中進一步的聚酰胺樹脂純化，能有效提高椴樹花的活性成分純度，降低雜質含量。整個制備過程相對簡單，設備易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。具體實施方式為了便于本領域技術人員的理解，下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，實施方式提及的內(nèi)容并非對本發(fā)明的限定。本發(fā)明采用的是新鮮椴樹花作為原料，相對干燥后的椴樹花，新鮮椴樹花完全保留了有效成分，使其能夠充分發(fā)揮出功效，因此本發(fā)明采用新鮮椴樹花為原料進行研究，實際應用也可以選擇干燥后的椴樹花為原料。以下的乙醇濃度都為質量分數(shù)。實施例1稱取100g的椴樹花粉碎，加入1kg飽和石灰水與60%的乙醇的混合溶液進行循環(huán)雙頻超聲2次，超聲頻率為20KHz及49KHz，超聲頻率為800W，時間為30min，溫度為60℃；合并濾液，減壓濃縮得到100g椴樹花粗提液；粗提液經(jīng)過離心后進行AB-8樹脂吸附，依次采用去離子水、60%乙醇水溶液洗脫，85%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮至50g，得椴樹花提取物A；將85%乙醇洗脫液減壓濃縮至50g重量份，與50g椴樹花提取物A混合后進行粒度為20目的聚酰胺樹脂純化，依次用去離子水、70%乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，經(jīng)減壓濃縮、冷凍干燥后得到15.2g椴樹花提取物B。實施例2稱取100g的椴樹花粉碎，加入1.5kg飽和石灰水與50%的乙醇的混合溶液進行循環(huán)雙頻超聲1次，超聲頻率為20KHz及49KHz，超聲頻率為600W，時間為48min，溫度為55℃；合并濾液，減壓濃縮得到100g椴樹花粗提液；粗體液經(jīng)過離心后進行XAD-2樹脂吸附，依次采用去離子水、70%乙醇水溶液洗脫，85%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮至50g，得椴樹花活提取物A；將85%乙醇洗脫液減壓濃縮至50g重量份，與50g椴樹花提取物A混合后進行粒度為30目的聚酰胺樹脂純化，依次用去離子水、70%乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，經(jīng)減壓濃縮、冷凍干燥后得到13g椴樹花提取物B。實施例3稱取100g的椴樹花粉碎，加入1.2kg飽和石灰水與35%乙醇的混合溶液進行循環(huán)雙頻超聲1次，超聲頻率為20KHz及49KHz，超聲頻率為700W，時間為40min，溫度為50min；合并濾液，減壓濃縮得到100g椴樹花粗提液；粗體液經(jīng)過離心后進行ADS-7樹脂吸附，依次采用去離子水、60%乙醇水溶液洗脫，85%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮至50g，得椴樹花提取物A；將85%乙醇洗脫液減壓濃縮至50g重量份，與50g椴樹花活性部位A3混合后進行粒度為40目的聚酰胺樹脂純化，依次用去離子水、70%乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，經(jīng)減壓濃縮、冷凍干燥后得到16.3g椴樹花提取物B。實施例4：下述對上述具體實施例的制備方法制備得到的椴樹花提取物A的卷煙加香加料測試。椴樹花提取物A的揮發(fā)性成分分析對本發(fā)明的方法生產(chǎn)的椴樹花提取物A進行了檢測，通過氣相色譜-質譜對制備的椴樹花椴樹花提取物A的揮發(fā)性和半揮發(fā)性成分進行檢測，其結果見表1。表1椴樹花提取物A的化學成分序號化學名時間/min相對質量分數(shù)/%1甲酸乙酯2.4590.0192異丁醛2.7880.13乙酸3.1890.10643-甲基呋喃3.290.0295乙酸乙酯3.4350.0696異戊醛4.1160.18772-甲基丁醛4.3050.4148戊醛5.0870.01792-乙基呋喃5.160.057102,5-二甲基呋喃5.3330.00711乙醛二乙醇縮醛6.010.00512己醛8.6950.043132-乙?；秽?.70.04514葉醇11.7870.01515苯甲醛18.4280.045162,3-辛二酮19.6450.01317甲基庚烯酮19.9590.02618β-月桂烯20.0750.051192-戊基呋喃20.1720.29420己酸乙酯20.6940.006212-戊烯基呋喃20.9010.02922α-松油烯21.9540.00823對孟烯22.5970.01524檸檬烯22.8430.10525順式羅勒烯23.4080.02926苯甲醇23.9350.008271,2-壬二烯23.9930.11128β-羅勒烯24.1670.05329苯乙醛24.2730.10330γ-松油烯25.0070.0131苯乙酮25.9920.01332芳樟醇氧化物26.1370.12433α-異松油烯27.1810.03234芳樟醇28.0940.22535壬醛28.2580.06436苯乙醇29.5430.07372-癸酮34.610.04938α-松油醇34.8370.06339藏花醛35.4640.10640癸醛35.5130.021411-對孟烯-9-醛36.6620.075424-亞甲基-3,5,5-三甲基-2-環(huán)己烯酮36.9230.07943苯乙酸乙酯38.5510.01744壬酸40.5750.04945壬酸乙酯41.6710.04946對乙烯基愈創(chuàng)木酚43.5740.0847癸酸46.970.021482-癸烯醛47.7910.02749β-突厥烯酮47.9410.02150癸酸乙酯48.2260.02512-羥基-4-甲氧基苯乙酮51.9550.19652α-姜黃烯53.7710.05553α-慕羅烯54.7660.01254α-香檸檬烯54.8820.02755β-金合歡烯55.0460.01256δ-杜松烯55.8820.06357二氫獼猴桃內(nèi)酯56.6110.15358十二酸57.7420.20259十二酸乙酯58.6010.12160甲氧基丁香酚59.4950.05761α-柏木腦59.6450.06662二芐醚61.2920.06363β-姜黃酮61.6880.03664十四酸64.760.06865十四酸乙酯65.4550.4666六氫法尼酮67.022.8267十五酸乙酯68.2910.1568十六酸甲酯69.181.67769十六酸70.4847.78470十六酸乙酯70.9388.15171十七酸乙酯73.3720.15372亞油酸甲酯73.5070.41673油酸甲酯73.6140.12274亞麻酸甲酯73.6910.16175植醇73.9521.0976十八酸甲酯74.1450.06377亞油酸乙酯75.0431.78278油酸乙酯75.1350.90579亞麻酸乙酯75.2321.14580亞油酸75.3771.51581十八酸乙酯75.6520.461共鑒定出81種揮發(fā)性成分，其中含有豐富的單萜烯類及脂肪酸酯，這些成分有助于改善卷煙口感。同時β-突厥烯酮、二氫獼猴桃內(nèi)酯、六氫法尼酮等均為煙草中重要的致香成分。實施例5：將實施例1-3制備得到的椴樹花提取物A在卷煙加香加料測試將上述實施方式1-3中制得的椴樹花提取物A均用50%丙二醇溶液稀釋至100倍，然后噴灑在同一種中檔空白（未加香加料）烤煙煙絲表面。各椴樹花活性部位均設定4種添加量進行試驗（添加量為煙絲的0.01%、0.05%、0.1%、0.5%）。后續(xù)處理按常規(guī)的卷煙工藝進行，即在噴施椴樹花活性部位的稀釋液后，將烤煙煙絲貯存4小時，再經(jīng)過切絲、烘絲、加香、貯絲、卷接和包裝工序制成卷煙成品。由8人組成的評吸小組分別對上述樣品進行評吸對比，得到的總體感官試驗結果如下表所示。其中，將空白樣品的內(nèi)在品質均設定為0，相對于空白樣品內(nèi)在品質有所改進（清甜香增加，煙氣量提高、刺激性降低及口感變好），則相應得正分，分值越高，改進越好；相對于空白樣品內(nèi)在品質有所降低（如清甜香降低，煙氣量減少、刺激性增加及口感變差），則相應得負分，負分越低，改進越差。每項滿分為正負6分。表2卷煙評吸結果從上述表格可知，相對于空白樣品的卷煙，在煙葉上增加的椴樹花提取物A的卷煙香氣均能增加其清甜香，刺激性有所降低，煙氣量提高，口感變好。具體用量需根據(jù)不同烤煙的實際情況進行確定。下述對上述具體實施例的制備方法制備得到的椴樹花提取物B的抑制彈性蛋白酶和保濕性能的效果進行測試。實施例6：將實施例1-3制得的椴樹花提取物B的彈性蛋白酶抑制活性的檢測。分別將實施例1、2、3制備得到的椴樹花提取物B溶于二甲亞砜，配制成質量百分比0.01%、0.1%、1%的溶液，用于測定彈性蛋白酶抑制活性。測定步驟為：在96孔板中加入10uL樣品溶液和130uL含有1.015mM反應底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1MTris-Cl緩沖溶液（pH8.0），在25℃下溫育5min，加入15uL彈性蛋白酶溶液（0.5U/ml），繼續(xù)在25℃下溫育30min，然后用酶標儀測定410nm波長的吸光度A410。用去離子水替換樣品水溶液，作為參比溶液同樣測定吸光度。彈性蛋白酶活性抑制率計算公式為：抑制率（%）=（A0-（A410-B））/A0×100%。其中A0是參比溶液的吸光度，A410是樣品溶液的吸光度，B是樣品水溶液稀釋3倍后的吸光度。最終測得椴樹花提取物的彈性蛋白酶抑制率如表3所示。表3椴樹花活性部位的彈性蛋白酶抑制率從表3中可以看出，從椴樹花中獲得的椴樹花提取物B均能實現(xiàn)對彈性蛋白酶活性的抑制，其中實施例1制得的椴樹花提取物B對彈性蛋白酶活性的抑制作用最強，表明其可以應用于延緩衰老的化妝品中，具有延緩衰老的作用。實施例7：皮膚保濕功效的檢測選取10名健康的受試者，平均年齡31歲。采用德國CK公司的皮膚水分測試儀Corneometer825對涂抹不同濃度的椴樹花活性部位B的受試者進行角質層含水量測定。環(huán)境條件：測試期間環(huán)境的溫度和濕度恒定，溫度為（25±2）℃，相對濕度為40%～60%。涂抹部位：距手臂胳膊肘關節(jié)4、8cm處，受測面積（3×3CM2）；時長60min。讀數(shù)用任意單位(ArbitraryUnit,A.U.)來表示。樣品用20%乙醇稀釋成不同濃度，20%乙醇水溶液做空白對照。結果如下表4。表4保濕能力測試結果從表4中可以看出，從椴樹花中獲得的椴樹花提取物B均能實現(xiàn)對較為優(yōu)越的皮膚保濕能力，其中用量達到0.1%以上時，保濕能力顯著提升。表明椴樹花活性部位B可以應用于保濕化妝品中，具有保濕功能。上述實施例為本發(fā)明較佳的實現(xiàn)方案，除此之外，本發(fā)明還可以其它方式實現(xiàn)，在不脫離本發(fā)明構思的前提下任何顯而易見的替換均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3