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一種類(lèi)人膠原蛋白肛腸黏膜修復(fù)凝膠的制作方法

文檔序號(hào):12092111閱讀:361來(lái)源:國(guó)知局
本發(fā)明涉及類(lèi)人膠原蛋白敷料,具體涉及特別適用于肛腸粘膜修復(fù)的包含類(lèi)人膠原蛋白的凝膠,屬于保健/醫(yī)療器械領(lǐng)域。
背景技術(shù)
:類(lèi)人膠原蛋白是由中國(guó)西北大學(xué)的范代娣教授發(fā)明的(參見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書(shū)CN1371919A),因此又稱(chēng)作范氏重組膠原蛋白或范氏類(lèi)人膠原蛋白(Fan’sHuman-likeCollagen,F(xiàn)HLC)。類(lèi)人膠原蛋白是一種高生物相容性的重組膠原蛋白,目前廣泛應(yīng)用于醫(yī)療或美容領(lǐng)域。另一方面,膠原蛋白敷料產(chǎn)品用于例如鼻腔、肛腸、婦科部位粘膜的滋潤(rùn)及保護(hù)的情況下,膠原蛋白敷料產(chǎn)品的使用往往需要在室內(nèi)進(jìn)行(例如醫(yī)院的耳鼻科、肛腸科及婦科等),作為產(chǎn)品使用者希望能夠在短時(shí)間內(nèi)即完成使用(使用者可以接受的醫(yī)療的時(shí)間通常為30分鐘左右),而作用時(shí)間的延長(zhǎng)使得醫(yī)療占用了產(chǎn)品使用者的大量時(shí)間,這減小了膠原蛋白敷料產(chǎn)品的適用范圍及市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。從這個(gè)角度來(lái)講,亟需透皮吸收速度快的膠原蛋白敷料產(chǎn)品。但遺憾的是,相關(guān)研究更關(guān)注膠原蛋白的透皮吸收率,而未關(guān)注膠原蛋白的透皮吸收速度。對(duì)此,本發(fā)明人發(fā)明了一種類(lèi)人膠原蛋白粘膜修復(fù)凝膠,其可能通過(guò)構(gòu)成適宜的微環(huán)境,使得類(lèi)人膠原蛋白的透皮吸收速度加快,詳見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)CN105709267A。該專(zhuān)利文獻(xiàn)中還公開(kāi)了所述類(lèi)人膠原蛋白粘膜修復(fù)凝膠可用于例如鼻粘膜、肛腸粘膜或婦科部位粘膜的修復(fù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:然而,本發(fā)明人經(jīng)過(guò)更為深入的研究發(fā)現(xiàn),在上述類(lèi)人膠原蛋白粘膜修復(fù)凝膠的研制過(guò)程中,僅是以體膚作為類(lèi)人膠原蛋白透皮吸收速度的考察場(chǎng)所,并未重點(diǎn)考慮該類(lèi)人膠原蛋白粘膜修復(fù)凝膠的實(shí)際應(yīng)用部位的局部微環(huán)境,造成了類(lèi)人膠原蛋白透皮吸收速度雖有所提高,但尚未盡善盡美。鑒于現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題,本發(fā)明的目的是提供一種特別適用于肛腸粘膜修復(fù)的、能夠促進(jìn)類(lèi)人膠原蛋白快速透皮吸收的凝膠。即,本發(fā)明如下。1.一種類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠,其包括:2.項(xiàng)1所述的類(lèi)人膠原蛋白凝膠在制備用于肛腸粘膜修復(fù)的醫(yī)療用敷料中的用途。3.一種制備項(xiàng)1所述的類(lèi)人膠原蛋白凝膠的方法,該方法包括:步驟A:準(zhǔn)備A相,所述A相由0.75~0.85重量%的卡波姆、5~10重量%的甘油、0.001~0.01重量%的透明質(zhì)酸鈉以及余量的水組成;步驟B:準(zhǔn)備B相,所述B相是由0.12~0.2重量%的氫氧化鈉和1~3重量%的水組成的氫氧化鈉水溶液;步驟C:準(zhǔn)備C相,所述C相是0.1~0.5重量%的羥苯乙酯與20~10重量%的甘油的混合物;步驟D:準(zhǔn)備D相,所述D相是0.2~1重量%的殼聚糖;步驟E:準(zhǔn)備E相,所述E相是類(lèi)人膠原蛋白液,其包含使得所述的類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠中類(lèi)人膠原蛋白的含量為0.1~1重量%的類(lèi)人膠原蛋白,介質(zhì)為水,且所述類(lèi)人膠原蛋白與所述水的重量比為1:1~20;以及步驟F:將所述D相加入所述A相中并攪拌均勻,然后加入所述B相并攪拌均勻,再加入所述C相和所述E相并攪拌均勻,于80~85℃保溫60~120分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,冷卻至室溫;以所述類(lèi)人膠原蛋白凝膠的總重量作為100重量%。本發(fā)明取得了以下技術(shù)效果:在將本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠施用于粘膜破損的肛腸表皮時(shí),能更顯著地加快類(lèi)人膠原蛋白的透皮吸收速度。從而,本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠能夠提供更好的滋養(yǎng)、刺激粘膜細(xì)胞再生,促進(jìn)受損肛腸粘膜的修復(fù)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。本發(fā)明提供一種類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠(本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠),其包括:在本說(shuō)明書(shū)中,類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠是指包含類(lèi)人膠原蛋白作為有效成分的、適用于肛腸粘膜修復(fù)的凝膠。在本說(shuō)明書(shū)中,類(lèi)人膠原蛋白是指中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)CN1371919A的權(quán)利要求1所述的重組膠原蛋白,可以采用例如該中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)CN1371919A中公開(kāi)的基因工程表達(dá)方法來(lái)制備。類(lèi)人膠原蛋白是由中國(guó)西北大學(xué)的范代娣教授發(fā)明的,因此又稱(chēng)作范氏重組膠原蛋白或范氏類(lèi)人膠原蛋白(Fan’sHuman-likeCollagen,F(xiàn)HLC)。卡波姆是合成的丙烯酸與烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇醚的高分子聚合物。對(duì)于所述卡波姆沒(méi)有特殊限制,可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常在化妝品或醫(yī)用敷料中使用的那些卡波姆,例如可以使用廣州康喬漢普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的卡波姆,CASNo:9003-01-4。對(duì)于所述甘油沒(méi)有特殊限制,可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常在化妝品或醫(yī)用敷料中使用的那些甘油,例如可以使用湖南爾康制藥股份有限公司生產(chǎn)的甘油,CASNo:56-81-5。對(duì)于所述透明質(zhì)酸鈉沒(méi)有特殊限制,可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常在化妝品或醫(yī)用敷料中使用的那些透明質(zhì)酸鈉,例如可以使用華熙福瑞達(dá)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的透明質(zhì)酸鈉,產(chǎn)品代碼:HA-T。對(duì)于所述殼聚糖沒(méi)有特殊限制,可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常在化妝品或醫(yī)用敷料中使用的那些殼聚糖,例如可以使用浙江金殼藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的殼聚糖,CASNo:9012-76-4。對(duì)于所述羥苯乙酯沒(méi)有特殊限制,可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常在化妝品或醫(yī)用敷料中使用的那些羥苯乙酯,例如可以使用湖南爾康制藥股份有限公司生產(chǎn)的羥苯乙酯,CASNo:120-47-8。在將本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠施用于肛腸受損部位時(shí),使得類(lèi)人膠原蛋白的透皮吸收速度加快,類(lèi)人膠原蛋白30分鐘透皮吸收率在現(xiàn)有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上進(jìn)一步顯著提高(甚至超過(guò)50%),其原因可能是由于構(gòu)成了更為適宜的微環(huán)境。還需要說(shuō)明的是,本發(fā)明人發(fā)現(xiàn),本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠中不能包含聚山梨醇酯類(lèi),例如聚山梨醇酯80等。所述聚山梨醇酯類(lèi)會(huì)顯著降低本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠的透皮吸收效果。本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠特別適合在醫(yī)療/保健領(lǐng)域用于肛腸粘膜修復(fù)。在用于醫(yī)療/保健領(lǐng)域的肛腸粘膜修復(fù)用途時(shí),本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠本身可以作為敷料使用,也可以再與其他載體或輔料組合制成其他類(lèi)型的敷料或者其他劑型(例如栓劑等)。對(duì)于本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠的制備方法沒(méi)有特殊限制,其制備方法可以包括:步驟A:準(zhǔn)備A相,所述A相由0.75~0.85重量%的卡波姆、5~10重量%的甘油、0.001~0.01重量%的透明質(zhì)酸鈉以及余量的水組成;步驟B:準(zhǔn)備B相,所述B相是由0.12~0.2重量%的氫氧化鈉和1~3重量%的水組成的氫氧化鈉水溶液;步驟C:準(zhǔn)備C相,所述C相是0.1~0.5重量%的羥苯乙酯與20~10重量%的甘油的混合物;步驟D:準(zhǔn)備D相,所述D相是0.2~1重量%的殼聚糖;步驟E:準(zhǔn)備E相,所述E相是類(lèi)人膠原蛋白液,其包含使得所述的類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠中類(lèi)人膠原蛋白的含量為0.1~1重量%的類(lèi)人膠原蛋白,介質(zhì)為水,且所述類(lèi)人膠原蛋白與所述水的重量比為1:1~20;以及步驟F:將所述D相加入所述A相中并攪拌均勻,然后加入所述B相并攪拌均勻,再加入所述C相和所述E相并攪拌均勻,于80~85℃保溫60~120分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,冷卻至室溫;以所述類(lèi)人膠原蛋白凝膠的總重量作為100重量%。這里,類(lèi)人膠原蛋白液包括類(lèi)人膠原蛋白的水溶液和類(lèi)人膠原蛋白的水分散液。這里,對(duì)所述步驟A、B、C、D、E的順序沒(méi)有特殊限制,可以以任意順序先后進(jìn)行或同時(shí)進(jìn)行。優(yōu)選地,所述A相是通過(guò)用甘油將卡波姆和透明質(zhì)酸分散后加入水中,并攪拌至完全溶解而制備的。這里,對(duì)于攪拌的方式?jīng)]有特殊限制,只要能夠攪拌均勻即可。本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白凝膠可以置于包裝容器中。對(duì)構(gòu)成包裝容器的材料沒(méi)有特殊限制,其包括但不限于陶瓷、玻璃、金屬、塑料等。包裝容器可以密閉也可以不密閉,但優(yōu)選密閉。實(shí)施例以下,通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更具體的說(shuō)明,但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。下述實(shí)施例和對(duì)比例中使用的類(lèi)人膠原蛋白是按中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)CN1371919A所述方法制備的范氏類(lèi)人膠原蛋白(由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列組成),確認(rèn)其分子量為90kDa。為了能夠觀(guān)察類(lèi)人膠原蛋白的透皮吸收行為,采用常規(guī)方法用FITC(fluoresceinisothiocyanate,異硫氰酸熒光素)對(duì)其進(jìn)行了熒光標(biāo)記。如無(wú)特別說(shuō)明,下述內(nèi)容中的“%”是指“重量%”。實(shí)施例1.本發(fā)明的類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠的制備成分:卡波姆0.8%,甘油22%,透明質(zhì)酸鈉0.005%,氫氧化鈉0.15%,羥苯乙酯0.2%,殼聚糖0.5%,類(lèi)人膠原蛋白0.5%,水余量。工藝操作:①先將卡波姆、透明質(zhì)酸鈉、甘油(8重量%)加入水中,然后緩慢加入殼聚糖后不斷攪拌至完全分散開(kāi)。②在上述溶液中隨后加入氫氧化鈉水溶液,攪拌均勻后,緩緩加入羥苯乙酯和甘油的混合液、以及類(lèi)人膠原蛋白液,攪拌均勻后,于82℃保溫90分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,冷卻至室溫。對(duì)比例1.其他類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠的制備成分:卡波姆1.5%,甘油22%,透明質(zhì)酸鈉0.005%,氫氧化鈉0.15%,羥苯乙酯0.2%,殼聚糖2%,類(lèi)人膠原蛋白0.5%,水余量。工藝操作:①先將卡波姆、透明質(zhì)酸鈉、甘油(8重量%)加入水中,然后緩慢加入殼聚糖后不斷攪拌至完全分散開(kāi)。②在上述溶液中隨后加入氫氧化鈉水溶液,攪拌均勻后,緩緩加入羥苯乙酯和甘油的混合液、以及類(lèi)人膠原蛋白液,攪拌均勻后,于82℃保溫90分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,冷卻至室溫。對(duì)比例2.其他類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠的制備成分:卡波姆0.8%,甘油22%,透明質(zhì)酸鈉0.005%,氫氧化鈉0.15%,羥苯乙酯0.2%,殼聚糖0.5%,類(lèi)人膠原蛋白0.5%,吐溫-800.5%,水余量。工藝操作:①先將卡波姆、透明質(zhì)酸鈉、甘油(8重量%)加入水中,然后緩慢加入殼聚糖后不斷攪拌至完全分散開(kāi)。②在上述溶液中隨后加入氫氧化鈉水溶液,攪拌均勻后,緩緩加入羥苯乙酯和甘油的混合液、以及類(lèi)人膠原蛋白液,攪拌均勻后,于82℃保溫90分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,加入聚山梨醇酯80,攪拌均勻后,冷卻至室溫。對(duì)比例3.其他類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠的制備成分:卡波姆1%,甘油22%,透明質(zhì)酸鈉0.005%,氫氧化鈉0.09%,羥苯乙酯0.2%,殼聚糖0.5%,類(lèi)人膠原蛋白0.5%,水余量。工藝操作:①先將卡波姆、透明質(zhì)酸鈉、甘油(8重量%)加入水中,然后緩慢加入殼聚糖后不斷攪拌至完全分散開(kāi)。②在上述溶液中隨后加入氫氧化鈉水溶液,攪拌均勻后,緩緩加入羥苯乙酯和甘油的混合液、以及類(lèi)人膠原蛋白液,攪拌均勻后,于82℃保溫90分鐘,保溫結(jié)束后攪拌均勻,冷卻至室溫。膠原蛋白30分鐘透皮吸收率的測(cè)定將已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境的大鼠禁食1天,將大鼠麻醉,以4%的乙酸棉簽經(jīng)大鼠肛門(mén)置入直腸1分鐘,置入深度為3厘米,制備模型組大鼠急性直腸粘膜損傷模型(參考樓彩霞等,乙酸誘導(dǎo)建立大鼠急性直腸粘膜損傷模型的形態(tài)學(xué)觀(guān)察,2015年4月第23卷第2期)。將上述實(shí)施例和對(duì)比例的類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠以相同量推注入大鼠直腸,置入完成后正常飼養(yǎng),于0.5h時(shí)將各組大鼠5只處死,切除試驗(yàn)組織部位并清洗干凈,采用熒光酶標(biāo)儀對(duì)清洗液中的膠原蛋白進(jìn)行定量分析,其就是未能透皮的膠原蛋白。其中,透皮率這樣計(jì)算:透皮率=(注入的膠原蛋白總量-未能透皮的膠原蛋白量)/注入的膠原蛋白總量。對(duì)于各實(shí)施例和對(duì)比例的類(lèi)人膠原蛋白肛腸粘膜修復(fù)凝膠,將上述透皮率測(cè)試結(jié)果的平均值示于下述表1中。表1各膠原蛋白凝膠的透皮吸收率No膠原蛋白30分鐘透皮吸收率實(shí)施例165%對(duì)比例143%對(duì)比例239%對(duì)比例331%工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明,能夠提供一種特別適用于肛腸粘膜修復(fù)的類(lèi)人膠原蛋白凝膠。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 
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