本發(fā)明屬于止血材料
技術領域：
，更具體地，涉及一種功能性自組裝納米多肽水凝膠材料及其在制備止血材料中的應用。
背景技術：
：日常生活中的突發(fā)性事故的急救治療、在醫(yī)院對病人的手術過程中的創(chuàng)傷止血、特別是戰(zhàn)爭中受傷戰(zhàn)士的救護，病患者局部有效的快速止血非常重要，因為未受控制的出血是導致突發(fā)事故，醫(yī)療手術中大出血或戰(zhàn)場死亡的主要原因。盡早的控制出血成為降低患者死亡的最佳策略。在伊拉克戰(zhàn)役中，戰(zhàn)場上有50%陣亡人員是由于出血過多所致。即使當傷員能夠支撐到有醫(yī)療設備處進行治療，但未受控出血仍然是威脅傷員生命的主導因素。此外，口腔、耳、鼻、肝、脾、腎等組織器官的損傷和手術都需要止血，以肝臟手術止血為例，其止血種類和方法雖層出不窮，但死亡率仍達2%-8%，其中出血為最常見的原因。臨床常用的止血材料如止血紗布、止血纖維、止血繃帶在使用中都有局限性：止血時間較長，易與傷口粘連而不易換藥，對傷口的感染和化膿無能為力?？焖僦寡凸δ苄灾寡獙⑹俏磥碇寡幬锇l(fā)展的方向。同時，優(yōu)異的止血材料除了具有快速止血的作用，還應該具有生物相容性，使用方便，生物可降解性和價格便宜，以及快速愈合能力。自組裝短肽rada16-i是4個重復的精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸序列，即（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4，當其水溶液調(diào)節(jié)至ph=7時會形成由納米纖維網(wǎng)絡構成的水凝膠。將rada16-i水溶液當覆于傷口時，在傷口表面形成屏障，阻止血液從血管中流出，起到止血效果。但是一個顯著的缺點是該材料水溶液具有明顯的酸性(ph=3～4)，將會對止血部位的組織產(chǎn)生潛在的危害。因此，急需一種快速止血，且不會破壞止血部位的組織的自組裝短肽材料以克服上述缺陷。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術中的不足，提供了一種功能性自組裝納米多肽水凝膠材料及其在制備止血材料中的應用。本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現(xiàn)：本發(fā)明提供了一種短肽，所述短肽為在rada16-i序列上分別連接若干個酸性氨基酸和若干個堿性氨基酸，所述短肽序列為：（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-精氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸、（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-賴氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸或（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-組氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸。本發(fā)明同時提供一種功能性自組裝納米多肽水凝膠材料，包括所述短肽。優(yōu)選地，將所述短肽溶于水，調(diào)整ph至中性后獲得。優(yōu)選地，將短肽配置成短肽水溶液，先與堿液混合，調(diào)節(jié)ph得到中性短肽溶液，然后再與緩沖液混合，自組裝形成所述水凝膠材料；所述堿液為naoh溶液或trsi-base溶液；所述緩沖液為pbs溶液或dmem溶液。優(yōu)選地，所述短肽水溶液的濃度為5~15mg/ml。優(yōu)選地，所述堿液的濃度為0.1~1mol/ml，所述ph為7~7.4。優(yōu)選地，所述短肽水溶液與緩沖液混合體積比為（1~5）：1。更優(yōu)選地，所述短肽水溶液與緩沖液混合體積比為2：1。本發(fā)明還同時保護所述的短肽在制備止血材料中的應用。本發(fā)明還另外保護所述的功能性自組裝納米多肽水凝膠材料在制備止血材料中的應用。本發(fā)明提供的水凝膠材料制備成止血材料后，可直接使用在微創(chuàng)手術中或者局部注射條件下，操作簡單，同時快速止血，不會對組織產(chǎn)生損害。本發(fā)明短肽序列的合成是采用了現(xiàn)有的接枝方向獲得，由于目前未有成型的理論支持何種改性（即接枝序列和接枝位置）能夠獲得真正在中性條件下合成的自組裝多肽水凝膠，不同的序列排列方式不同，電荷分布也不同，同時結構內(nèi)部自組裝方式均會影響最終的接枝效果，因此，上述接枝物的具體接枝位點和接枝序列排布，對最終效果影響非常大。本發(fā)明是以低分子量自組裝短肽為基礎的水凝膠，具有剪切變稀特點，通過注射器注射至出血點瞬間形成水凝膠，可用于快速止血，尤其是出血點環(huán)境復雜，需要微創(chuàng)止血的情況。本材料可在常溫中性ph條件下形成納米纖維水凝膠，模仿了天然細胞外基質(zhì)結構，具有良好的理化性能和生物相容性。同時，本發(fā)明提供的短肽在制備成水凝膠材料后呈中性，不會對止血部位的組織產(chǎn)生潛在的危害。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：與現(xiàn)有多肽自組裝水凝膠材料相比，本發(fā)明在生理條件下（ph為7-7.4）為可注射的水溶液，具有剪切變稀特點，易于注射條件下使用。在出血點與血液接觸后瞬間形成三維多孔水凝膠，凝膠網(wǎng)絡結構穩(wěn)定，可快速止血。具有操作簡便的特點，是非常理想的生物材料，可以用于突發(fā)性事故的急救治療、手術過程中的創(chuàng)傷止血，特別是在病患者局部有效地快速注射止血。本發(fā)明所述的中性ph下自組裝成的水凝膠材料，且使用過程都是中性的，不會對宿主組織產(chǎn)生危害。附圖說明圖1為本發(fā)明的短肽中性水溶液剪切變稀流變圖。圖2為本發(fā)明的短肽在出血點與血液接觸后瞬間形成三維多孔水凝膠的原子力顯微鏡圖。圖3為所發(fā)明的短肽中性水溶液注射至大鼠脊髓出血點后快速止血示意圖。具體實施方式以下結合具體實施例和附圖來進一步說明本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設備為本
技術領域：
常規(guī)試劑、方法和設備。除非特別說明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購。實施例1：水凝膠的多肽材料制備將短肽（其序列為：（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-精氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸）溶于超純水后，配置成濃度為5~15ml/ml的溶液，與tris-base溶液混合，trsi-base溶液的濃度為0.1~1mol/ml，調(diào)節(jié)其ph值至7，再與pbs/dmem溶液以體積比2：1混合，靜置后迅速形成凝膠，待性狀穩(wěn)定后，即可投入使用。如圖1所示，應用流變儀檢測上述短肽中性水溶液的剪切變稀性能，其具有剪切變稀特點，非常有利于注射使用，可將其注射至出血點瞬間形成水凝膠控制出血。實施例2：水凝膠的多肽材料制備將短肽（其序列為：（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-賴氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸溶于超純水后，配置成濃度為5~15ml/ml的溶液，與tris-base溶液混合，trsi-base溶液的濃度為0.1~1mol/ml，調(diào)節(jié)其ph值至7，再與pbs/dmem溶液以體積比2：1混合，靜置后迅速形成凝膠，待性狀穩(wěn)定后，即可投入使用。實施例3：水凝膠的多肽材料制備將短肽（其序列為：（精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸）4-組氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-纈氨酸溶于超純水后，配置成濃度為5~15ml/ml的溶液，與tris-base溶液混合，trsi-base溶液的濃度為0.1~1mol/ml，調(diào)節(jié)其ph值至7，再與pbs/dmem溶液以體積比2：1混合，靜置后迅速形成凝膠，待性狀穩(wěn)定后，即可投入使用。實施例4：止血實驗用戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔注射麻醉，于手術顯微鏡下在大鼠胸椎t8~t9的位置背側椎板切除暴露對應段位脊髓，使用眼科手術剪剪斷脊髓上最大血管，之后迅速將1%的短肽溶液20μl注射入創(chuàng)口，用于創(chuàng)口出血控制，記錄完全止血時間?？瞻讓φ战M以生理鹽水、紗布和明膠海綿處理。實驗動物每組6只（n=6）。采用本發(fā)明實施例1~3提供的短肽溶液進行注射，同時分別采用相同的注射方法采用常見的止血材料：明膠海綿、紗布和生理鹽水進行止血效果的對比，具體見表1所示。如圖2所示，本發(fā)明的短肽在出血點與血液接觸后瞬間形成三維多孔水凝膠，顯示由直徑約20nm的納米纖維網(wǎng)絡構成，圖3中經(jīng)過注射可明顯看到其表面形成了一層凝膠。表1止血材料止血時間（秒）明膠海綿50±4紗布110±30生理鹽水>300實施例1水凝膠材料8±3實施例2水凝膠材料10±3實施例3水凝膠材料9±1.5以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁12