本發(fā)明屬于獸用生物制品領(lǐng)域，具體涉及一種豬支原體肺炎疫苗效力檢驗(yàn)方法。

背景技術(shù)：

豬支原體肺炎(Mycoplasma pneumia of swine)是由豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneu-mae)引起的一種慢性呼吸道傳染病，又稱豬氣喘病和豬地方流行性肺炎(Enzooticpneumia of pigs)，廣泛流行于世界各養(yǎng)豬國(guó)家和地區(qū)，是一種頑固性慢性傳染病，藥物治療效果不夠理想，停藥后容易復(fù)發(fā)，該病一旦在豬場(chǎng)流行,就很難根除。因此，預(yù)防、控制和凈化豬氣喘病須采取早期診斷、及時(shí)隔離、抗生素治療或淘汰病豬、疫苗預(yù)防、全進(jìn)全出、嚴(yán)格消毒等綜合性措施，其中疫苗預(yù)防起著關(guān)鍵性作用。當(dāng)前世界上研究應(yīng)用的豬肺炎支原體疫苗以滅活苗為主，也有少數(shù)弱毒苗和基因工程苗。

目前用于豬支原體肺炎滅活疫苗的效力檢驗(yàn)方法用豬進(jìn)行免疫攻毒保護(hù)進(jìn)行檢驗(yàn)，部分滅活疫苗采用水佐劑，效力檢驗(yàn)方法可采用測(cè)定相對(duì)抗原含量的方法替代用豬進(jìn)行免疫攻毒保護(hù)，而對(duì)于油佐劑的滅活疫苗，該替代方法不適用。需要建立一種用于滅活疫苗的效力檢驗(yàn)方法，從而縮短檢測(cè)周期，節(jié)約檢測(cè)成本，提高生物安全。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種豬支原體肺炎疫苗效力檢驗(yàn)方法，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有豬支原體肺炎滅活疫苗效力檢驗(yàn)的空白。

本發(fā)明的豬支原體肺炎滅活疫苗效力檢驗(yàn)方法，包括以下步驟：

1)取體重200-350g的健康易感的豚鼠；

其中所述健康易感豚鼠為豬肺炎支原體ELISA抗體檢測(cè)為陰性的豚鼠；

2)將健康易感的豚鼠隨機(jī)分為免疫組和對(duì)照組；

3)其中免疫組的豚鼠注射要檢測(cè)的豬支原體肺炎疫苗，而對(duì)照組的豚鼠不注射免疫

4)在免疫后14日，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的豚鼠進(jìn)行心臟采血，進(jìn)行離心后，吸取上清檢測(cè)豬肺炎支原體ELSIA抗體；判定待檢測(cè)的豬支原體肺炎疫苗是否符合標(biāo)準(zhǔn)；

所述的離心條件，是7000r/min離心10分鐘；

所述的判定標(biāo)準(zhǔn)，是對(duì)照組的豚鼠的ELISA抗體為陰性，免疫組的豚鼠的ELSIA抗體檢測(cè)陽(yáng)性率不低于80％。

所述的要檢測(cè)的豬支原體肺炎疫苗包括豬支原體肺炎滅活疫苗或豬支原體基因工程亞單位疫苗。

本發(fā)明的豬支原體肺炎滅活疫苗效力檢驗(yàn)方法可替代用豬進(jìn)行免疫攻毒的效力檢驗(yàn)，由于檢驗(yàn)動(dòng)物豚鼠易獲得，易于飼養(yǎng)，占用場(chǎng)地小，大大地節(jié)約檢驗(yàn)成本，檢驗(yàn)周期短，不涉及用強(qiáng)毒攻擊，生物安全性高。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明采用健康易感豚鼠免疫豬支原體肺炎滅活疫苗，免后一定時(shí)間采血檢測(cè)豬肺炎支原體ELISA抗體，通過抗體陰陽(yáng)性判定疫苗的免疫效果。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

一、豬支原體肺炎滅活疫苗對(duì)豚鼠最小免疫劑量試驗(yàn)

取體重200～350g健康易感(豬肺炎支原體ELISA抗體均為陰性)豚鼠25只，隨機(jī)分成5組，每組5只，1～4組各腿部肌肉注射0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.5ml豬支原體肺炎疫苗，第5組為對(duì)照組，免后14日，所有豚鼠心臟采血，7000r/min離心10分鐘，吸取上清檢測(cè)豬肺炎支原體ELSIA抗體?？贵w檢測(cè)結(jié)果表明對(duì)照組ELSIA抗體5/5陰性，0.05ml/只免疫組ELSIA抗體4/5陽(yáng)性，0.1ml/只、0.2ml/只、0.5ml/只免疫組ELSIA抗體均5/5陽(yáng)性綜合以上的數(shù)據(jù)，確定豬支原體肺炎滅活疫苗對(duì)豚鼠的最小免疫劑量為0.05ml/只?？紤]到實(shí)際應(yīng)用時(shí)的檢測(cè)效果，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將豬支原體肺炎滅活疫苗用豚鼠檢驗(yàn)的接種劑量定為0.1ml/只。

表1：抗體檢測(cè)結(jié)果

注：S/N值≥1.8判為抗體陽(yáng)性，S/N值＜1.8判為抗體陰性。

二、檢驗(yàn)方法應(yīng)用及與靶動(dòng)物檢驗(yàn)對(duì)比

取健康易感(豬肺炎支原體ELISA抗體均為陰性)豚鼠20只，隨機(jī)分成4組，每組5只，1～3組各肌肉注射201501、201502、201503批豬支原體肺炎滅活疫苗0.1ml/只，第4組為對(duì)照組，免后14日，所有豚鼠心臟采血，7000r/min離心10分鐘，吸取上清檢測(cè)豬肺炎支原體ELSIA抗體，結(jié)果表明對(duì)照組ELSIA抗體5/5陰性，免疫組ELSIA抗體均5/5陽(yáng)性。

取健康易感(豬肺炎支原體PCR檢測(cè)陰性，ELISA抗體為陰性)豬20頭，隨機(jī)分成4組，每組5頭，1～3組各頸部肌肉注射2.0ml豬支原體肺炎滅活疫苗，第4組為對(duì)照組，免后35日，所有豬注射豬肺炎支原體YBF02株5ml(含0.2g病變肺組織)。攻毒結(jié)果表明，對(duì)照組5/5不保護(hù)，免疫組均5/5保護(hù)。

表2：3批豬支原體肺炎滅活疫苗用豚鼠和豬檢驗(yàn)結(jié)果

注：表中分子表示攻毒后被保護(hù)仔豬或抗體檢測(cè)豚鼠數(shù)，分母表示攻毒仔豬或抗體檢測(cè)豚鼠總數(shù)。

上述的結(jié)果證明用豚鼠進(jìn)行抗體檢測(cè)和用豬進(jìn)行免疫攻毒結(jié)果是一致的，3批豬支原體肺炎滅活疫苗效力是合格的。