本發(fā)明涉及一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

黃酮類化合物廣泛存在于自然界中，屬于植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的一些次級代謝產(chǎn)物。黃酮類化合物可以分為10多個類別：黃酮、黃烷醇、異黃酮、雙氫黃酮、雙氫黃酮醇、噢弄、黃烷酮、花色素、查耳酮、色原酮等，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)約4000余種黃酮類化合物，主要存在于植物的葉、果實、根、皮中。黃酮類化合物具有：抗氧化、清除氧自由基；調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)；抗癌、防癌作用；抗炎、免疫及抗衰老作用；對內(nèi)分泌系統(tǒng)作用；生物類黃酮還具有吸收紫外輻射、止咳、祛痰、瀉下、解痙、提高記憶力、抗過敏、活血化瘀、利膽及肝臟保護作用等。

黃酮類化合物的提取純化方法很多，常用的提取方法有水提取法、有機溶劑萃取法、微波萃取法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法等。常用的分離純化黃酮類化合物的方法有硅膠柱層析法、聚酰胺柱層析法、葡聚糖凝膠柱層析、紙層析法、薄層層析法、鉛鹽沉淀、大孔樹脂吸附分離法等。其中大孔樹脂吸附分離法在工業(yè)上用來制備富含黃酮類化合物提取物的應(yīng)用最為廣泛。

大孔吸附樹脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的有機高聚物吸附劑。大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料，它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果，篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。有機化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開，這使得有機化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡化。大孔吸附樹脂具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、吸附選擇性強、不受無機物存在的影響、再生簡便、解吸條件溫和，使用周期長、節(jié)省費用等優(yōu)點，避免了用有機溶劑提取分離而造成的有機溶劑回收難、損耗大、成本高、易燃易爆、對環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點。大孔吸附樹脂已在環(huán)保、食品、醫(yī)藥領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，大孔吸附樹脂在中草藥有效成分精制純化中的應(yīng)用也逐年增加，在中草藥化學(xué)成分的分離、富集中的應(yīng)用也越來越受到人們的重視。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，操作方便，提取效果好。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，

1）大孔樹脂的預(yù)處理：將大孔樹脂用無水乙醇浸泡40-60 h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；

2）總黃酮的提取：將牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂柱，用蒸餾水洗去柱中殘留的溶液，再用洗脫劑溶液以0.20-0.40 ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮。

作為改進，所述步驟1）洗出液中蒸餾水的加入量為洗出液體積的4-6倍。

作為改進，所述步驟1）中采用HZ802、HZ801大孔樹脂中任一種或其混合。

作為改進，所述步驟2）中采用的洗脫劑溶液為50%-70%體積濃度的乙醇溶液。

作為進一步改進，所述步驟2）中，采用濃度為60%的乙醇溶液以0.29mL/s的流速流過樹脂柱。

本發(fā)明中牡丹籽皮提取液的制備可采用常用提取技術(shù)獲得如可采用超聲波提取方法，以60%乙醇為提取劑，按牡丹籽皮原料與提取劑的料液質(zhì)量比1:20，提取1.5h后過濾即得牡丹籽皮提取液。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用HZ802、HZ801系列大孔樹脂進行吸附提取，該系列大孔吸附樹脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體，加入乙烯苯為交聯(lián)劑，甲苯、二甲苯為致孔劑，它們相互交聯(lián)聚合形成了多孔骨架結(jié)構(gòu)。大孔吸附樹脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德華力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果。在牡丹籽皮黃酮類物質(zhì)的制備上，大孔吸附樹脂具有兩個獨特優(yōu)點：一是，大孔吸附樹脂流速較快，生產(chǎn)效率高；二是，大孔吸附樹脂價格便宜，生產(chǎn)成本低。本發(fā)明操作簡單，成本低，易于工業(yè)化，得到的總黃酮含量較高，分離流速快，分離效率高。

具體實施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明了，下面通過實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。但是應(yīng)該理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明的范圍。除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同，本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術(shù)語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。

實施例一

一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，

1）大孔樹脂的預(yù)處理：采用HZ802大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用無水乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液無水乙醇中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；

2）總黃酮的提?。簩舛葹?.14 mg/mL的牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為70.4%。

實施例二

一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，

1）大孔樹脂的預(yù)處理：采用HZ801大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48 h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；

2）總黃酮的提取：將濃度為1.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為60%的乙醇溶液以0.29ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為69.8%。

比較例1

一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，

1）大孔樹脂的預(yù)處理：采用DA201大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；

2）總黃酮的提?。簩舛葹?.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用體積濃度為60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為59.4%。

比較例2

一種牡丹籽皮中總黃酮的提取工藝，具體包括以下步驟，

1）大孔樹脂的預(yù)處理：采用AB-8大孔樹脂，用無水乙醇浸泡48h，使其充分溶脹，裝入層析柱中，再用乙醇沖洗層析柱，洗至洗出液中加入適量的蒸餾水(v/v，1:5)無白色渾濁為止，然后用蒸餾水洗至無醇味，濾取備用；

2）總黃酮的提?。簩舛葹?.14 mg/mL牡丹籽皮提取液緩慢通過由步驟1）中大孔樹脂組成的樹脂床，用1000mL的水洗去柱中殘留的溶液，再用體積濃度為60%的乙醇溶液以0.15ml/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即得牡丹籽皮總黃酮，含量為60.3%。

同時，與現(xiàn)有常用的通過聚酰胺吸附的提取工藝相比，本發(fā)明采用大孔樹脂進行吸附，與聚酰胺吸附工藝相比，大孔吸附樹脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體，加入乙烯苯為交聯(lián)劑，甲苯、二甲苯為致孔劑，它們相互交聯(lián)聚合形成了多孔骨架結(jié)構(gòu)。而聚酰胺由酰胺聚合而成的一類高分子物質(zhì)，又叫尼龍、錦綸。其次，原理不同。大孔吸附樹脂利用的是物理吸附原理，吸附性是由于范德華力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果。聚酰胺柱的原理主要是氫鍵和雙重層析兩種。

在牡丹籽皮黃酮類物質(zhì)的制備上，大孔吸附樹脂具有兩個獨特優(yōu)點：一是，大孔吸附樹脂流速較快，生產(chǎn)效率高；二是，大孔吸附樹脂價格便宜，生產(chǎn)成本低。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換或改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。