本發(fā)明涉及一種曲貝替定納米乳及其制備方法。
背景技術(shù)：
：曲貝替定(海鞘素743，簡寫ET-743或ET743)是從海生的被囊動物中分離的的四氫異喹啉生物堿，具體結(jié)構(gòu)如下。其抗腫瘤活性主要是通過自身形成亞胺正離子或類似中間體對DNA進(jìn)行烷基化修飾來實現(xiàn)的(Chem.Rev.2002,102,1669)，ET-743對乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、腎癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、黑色素癌、骨肉瘤和前列腺癌等有抑制活性，是一種新穎的能與DNA結(jié)合的抗癌藥物。海鞘素-743由西班牙法馬馬(PharmMar)公司開發(fā)，于2007年在歐盟批準(zhǔn)上市的作為治療軟組織肉瘤的罕見藥，用于治療傳統(tǒng)化療無效的晚期軟組織肉瘤患者。ET-743是一種復(fù)雜的化合物，具有有限的水溶性，將調(diào)節(jié)溶液pH值至4，可以增加ET-743在水中溶解度。但是，ET-743在生物相容的形式和制劑中的穩(wěn)定性，是難以預(yù)測和實現(xiàn)的。因此，制備一種穩(wěn)定、有效的ET-743制劑對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是一種挑戰(zhàn)。曲貝替定中主要的雜質(zhì)為ET-743、ET-745、ET-759B及ET-789A(SynthesisofNaturalEcteinascidins(ET-729,ET-745,ET-759B,ET-736,ET-637,ET-594)fromCyanosafracinB，JournalofOrganicChemistry200368(23)第8859-8866頁)，其中雜質(zhì)ET-701為制劑凍干過程和儲藏中主要雜質(zhì)，為水解產(chǎn)物；雜質(zhì)ET-745為曲貝替定被還原產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)分別如下：WO0069441公開了一種無菌的凍干制劑，含有ET-743、甘露醇和磷酸鹽緩沖劑。該凍干制劑可以重構(gòu)和稀釋用于靜脈注射。然而，該制劑在冰箱和室溫下長期貯存不穩(wěn)定，必須避光保存于-15至-25℃。CN102018714A公開了一種凍干的ET-743組合物，主要含有ET-743及二糖，其中二糖選自乳糖、海藻糖、蔗糖、和它們的混合物。該發(fā)明通過加入二糖來減少凍干過程中雜質(zhì)ET-701的產(chǎn)生從而達(dá)到提供一種ET-743的穩(wěn)定的劑型的目的。但是在實際應(yīng)用過程中有的患者對乳糖耐受，且該發(fā)明并沒有提供新的方法來解決ET-743在水中溶解性差及性質(zhì)不穩(wěn)定的問題。此外，這些制劑在40℃/70％RH的加速條件下儲藏3個月時仍然顯示出大量的活性成分降解，暗示該制劑如果長期儲存，仍然不太穩(wěn)定。需要提供一種的組合物，來解決現(xiàn)有制劑跟制備方法不能達(dá)到或者不能完全解決的問題，包括曲貝替定的穩(wěn)定性及溶解性，曲貝替定制劑的實施方案應(yīng)該優(yōu)選顯示有利的冷凍干燥特性。納米乳又稱微乳，是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑等自發(fā)形成粒徑為1～100nm的透明或半透明均一分散體系。納米乳具有多種其它制劑不可比擬的優(yōu)點：1)納米乳為各向同性的透明液體，屬于熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)；2)納米乳具有脂溶性的內(nèi)核，可以包載疏水性藥物，提高藥物的溶解度，減少藥物在體內(nèi)的酶解，也可以提高藥物在貯存過程中的穩(wěn)定性；3)可以提高胃腸道對藥物的吸收，從而提高藥物的生物利用度。因此，納米乳作為一種新型的藥物載體而受到了廣泛的研究。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為提供一種曲貝替定的納米乳及該納米乳的制備方法。本發(fā)明同時提供了含有曲貝替定納米乳的組合物，該組合物可以為乳劑形式也可以為凍干制劑形式。采用納米乳技術(shù)提高了曲貝替定的溶解性，同時由于脂溶性的內(nèi)核包裹藥物，減少了曲貝替定與水跟空氣的接觸，提高了其在制劑過程及成藥后貯存的穩(wěn)定性。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供了一種曲貝替定的納米乳，包含增溶劑和乳化劑。本發(fā)明提供的曲貝替定的納米乳中增溶劑選自天然油脂、合成油脂的一種或幾種。本發(fā)明提供的曲貝替定的納米乳中乳化劑可以選自15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯、吐溫80，泊洛沙姆188，卵磷脂，油酸鈉，司盤20，吐溫20，聚氧乙烯單硬脂酸酯，聚氧乙烯硬脂酸酯，聚氧乙烯40硬脂酸酯，聚氧乙烯400單月桂酸酯，聚氧乙烯400單硬脂酸酯，聚氧乙烯400單油酸酯，聚氧乙烯月桂醇醚，聚氧乙烯十六醇醚，聚氧乙烯氫化蓖麻油，聚氧乙烯烷基酚，聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯壬烷基酚醚，聚氧乙烯辛基苯基醚，聚氧乙烯月桂醇醚，優(yōu)選15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯、卵磷脂、泊洛沙姆188、吐溫20和吐溫80，更優(yōu)選15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯和卵磷脂。本發(fā)明提供的曲貝替定的納米乳中，曲貝替定與增溶劑的質(zhì)量比1:10000～1:1，優(yōu)選1:1000～1:10，更優(yōu)選1:500～1:100。本發(fā)明提供的曲貝替定的納米乳中，增溶劑與乳化劑的質(zhì)量比選自1:0.02～1:100，優(yōu)選1:0.1～1:20，更優(yōu)選1:1～1:10。本發(fā)明的曲貝替定的納米乳中使用天然油脂時，所述天然油脂可選自用大豆油、霍霍巴油、橄欖油、甜杏仁油、椰子油、蓖麻油、葵花籽油、魚油，優(yōu)選選自大豆油、椰子油、橄欖油和魚油。當(dāng)使用合成油脂時，所述合成油脂可選自中鏈甘油酸酯、棕櫚酸異辛酯、棕櫚酸異辛酯、棕櫚酸異丙酯，優(yōu)選中鏈甘油酸酯。本發(fā)明提供的曲貝替定的納米乳中的增溶劑優(yōu)選天然油脂和合成油脂組合，例如注射用大豆油/中鏈甘油酸酯、橄欖油/中鏈甘油酸酯，椰子油/中鏈甘油酸酯，魚油/中鏈甘油酸酯等。在優(yōu)選的實施方案中，所述天然油脂與合成油脂的比例為1:100～1:0.02，優(yōu)選1:20～1:0.2，更優(yōu)選1:10～1:1。本發(fā)明的曲貝替定的納米乳中增溶劑與乳化劑可以選自如下組合：大豆油/中鏈甘油酸酯/15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯,橄欖油/中鏈甘油酸酯/卵磷脂E80，椰子油/中鏈甘油酸酯/泊洛沙姆188，魚油/中鏈甘油酸酯/吐溫80。本發(fā)明的曲貝替定的納米乳的粒徑為10～100nm，優(yōu)選10～50nm，更優(yōu)選20～50nm，最優(yōu)選20～40nm。本發(fā)明的納米乳可由以下方法制備得到：1)取乳化劑和增溶劑，成油相；2)將水和油相混合，形成膠束；3)向膠束中加入曲貝替定，得到初乳；4)向初乳中加入適量水。本發(fā)明公開的曲貝替定的納米乳可以形成組合物，該組合物還包含緩沖劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑及另外一種賦形劑。本發(fā)明公開的組合物中的另外一種賦形劑可以選自甘露醇、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、果糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖、右旋糖酐、羥乙基淀粉、羥丙基-β環(huán)糊精等，優(yōu)選甘露醇和蔗糖。賦形劑的含量選自0.01％～50％(w/v)，優(yōu)選0.1％～20％(w/v)，更優(yōu)選1％～10％(w/v)。本發(fā)明公開的組合物中的緩沖劑可以選自磷酸鹽緩沖劑、碳酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、醋酸鹽緩沖劑、甘氨酸/鹽酸緩沖劑、鄰苯二甲酸鹽緩沖劑、硼酸鹽緩沖劑、乳酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、酒石酸鹽緩沖劑，優(yōu)選磷酸鹽緩沖劑。緩沖鹽的含量選自0.01％～2％(w/v)，優(yōu)選0.05％～1％(w/v)，更優(yōu)選0.1％～0.5％(w/v)。本發(fā)明公開的組合物中曲貝替定的濃度選自0.001mg/mL～10mg/mL，優(yōu)選0.01mg/mL～0.61mg/mL，更優(yōu)選0.1mg/mL～0.4mg/mL。本發(fā)明公開的曲貝替定的組合物中增溶劑的含量選自0.1％～50％(w/v)，優(yōu)選0.2％～20％(w/v)，更優(yōu)選0.5％～5％(w/v)。本發(fā)明公開的曲貝替定的組合物中乳化劑的含量選自0.01％～50％(w/v)，優(yōu)選0.1％～20％(w/v)，更優(yōu)選1％～10％(w/v)。本發(fā)明公開的組合物中的滲透壓調(diào)節(jié)劑可以選自氯化鈉、葡萄糖、山梨醇、甘油、PEG、丙二醇，優(yōu)選氯化鈉。滲透壓調(diào)節(jié)劑的含量選自0.2％～2％(w/v)，優(yōu)選0.4％～1％(w/v)，更優(yōu)選0.5％～0.8％(w/v)。本發(fā)明公開的組合物中的pH范圍選自6～9，優(yōu)選6～8，更優(yōu)選7～8。本發(fā)明公開的曲貝替定的組合物可以制成凍干制劑，該凍干制劑具有較好的復(fù)溶性，復(fù)溶后的納米乳的粒徑范圍為10～100nm，優(yōu)選10～50nm，更優(yōu)選20～50nm，最優(yōu)選20～40nm。本發(fā)明公開了上述曲貝替定納米凍干物的制備方法，其步驟如下：1)取乳化劑和增溶劑，加熱至50℃～60℃，攪拌混合均勻,取注射用水冷卻至40～45℃?zhèn)溆茫?)取約總體積15％的40～45℃注射用水，加入到油相中，攪拌至膠束形成；3)取一定量的曲貝替定，用少量水潤濕后加入到膠束溶液中，40～45℃條件下攪拌20min～60min形成初乳；4)向上述溶液中加入注射用水至總重的90％，同時加入滲透壓調(diào)節(jié)劑和緩沖劑，攪拌使之溶解，并混合均勻。調(diào)節(jié)溶液pH值為7～8。5)采用0.22μmPVDF微孔濾膜過濾除菌。6)灌裝半加塞，冷凍干燥。本發(fā)明公開了曲貝替定納米乳凍干制劑的凍干工藝，包括預(yù)凍、一次干燥、二次升華三個階段。預(yù)凍溫度為-25～-50℃，一次干燥溫度-10～-40℃，二次干燥溫度15～30℃，一次干燥和二次干燥過程中，真空度為0.1-0.5mbar。整個冷凍干燥過程中充入氮氣，優(yōu)選在冷凍干燥結(jié)束前5-10分鐘充入氮氣。本發(fā)明公開的曲貝替定納米乳凍干制劑為白色餅狀，具有良好的穩(wěn)定性，且復(fù)溶性較好，解決了曲貝替定水溶性和穩(wěn)定性差的缺陷，有利于其在臨床治療中的應(yīng)用。本發(fā)明中的曲貝替定及其雜質(zhì)可以是半合成的或合成的來源，包括這些來源的組合，參考文獻(xiàn)如WO0069862和WO0187895；另一方面，曲貝替定的雜質(zhì)也可以外購獲得對照品或根據(jù)高效液相方法定位曲貝替定雜質(zhì)的種類。具體實施方式實施例1以注射用大豆油和中鏈甘油酸酯為增溶劑，以15-羥基硬脂酸-聚乙二醇酯為乳化劑，磷酸氫二鈉為pH緩沖劑，氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié)劑制備曲貝替定納米乳，并以甘露醇為另外的賦形劑，制備其凍干制劑，處方組成及用量如下：制備方法：1、將15-羥基硬脂酸-聚乙二醇酯，中鏈甘油脂和大豆油加入7mL西林瓶中，加熱至60±5℃，以一定的攪拌速度攪拌直至混合均勻。2、取10mL注射用水置于燒杯2，冷卻至45℃?zhèn)溆谩?、取約2.4mL(15％)的冷卻的注射用水傾入到西林瓶1中，在400rpm的速度下攪拌10min直至膠束形成，維持45℃。4、取2mg曲貝替定粉末，置于7mL西林瓶中，加入160μL45℃注射用水潤濕API，并加入到燒杯1中，再加160μL注射用水至上述西林瓶1中，蕩洗燒杯2次，攪拌15min。5、取12mL室溫的注射用水，加入到燒杯1中，混合均勻，加入氯化鈉和無水磷酸氫二鈉至完全溶解。采用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.5±0.5。6、取0.8g甘露醇加入到上述納米乳中。7、采用0.22μmPVDF膜過濾上述納米乳溶液，灌裝半加塞后冷凍干燥?？疾烨愄娑{米乳的粒徑及其凍干制劑的外觀、水分、復(fù)溶后粒徑、pH值(如表1所示)，并檢測凍干后雜質(zhì)含量變化及在25℃加速條件下的放置穩(wěn)定性(如表2所示)。表1納米乳及其凍干制劑的性質(zhì)外觀水分pH值凍干前粒徑復(fù)溶后粒徑白色餅狀0.624％7.4129.07nm29.06nm表2雜質(zhì)含量檢測及放置穩(wěn)定性結(jié)論：曲貝替定納米乳凍干制劑，外觀、水分合格，pH值和復(fù)溶性后粒徑變化不大，凍干制劑雜質(zhì)檢測結(jié)果符合限度要求；曲貝替定納米乳凍干制劑放置穩(wěn)定性良好，說明納米乳可以提高曲貝替定在凍干過程及長期放置過程中的穩(wěn)定性。實施例2以注射用橄欖油和中鏈甘油酸酯為增溶劑，以卵磷脂為乳化劑，磷酸氫二鈉為緩沖劑，氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié)劑制備曲貝替定納米乳，并以蔗糖為凍干保護(hù)劑，制備其凍干制劑，處方組成及用量如下：制備方法：1、將卵磷脂E80，中鏈甘油脂和橄欖油加入7mL西林瓶中，加熱至60±5℃，以一定的攪拌速度攪拌直至混合均勻。2、取10mL注射用水置于燒杯2，冷卻至45℃?zhèn)溆谩?、取約2.4mL(15％)的冷卻的注射用水傾入到西林瓶1中，在400rpm的速度下攪拌10min直至膠束形成，維持45℃。4、取2mg曲貝替定粉末，置于7mL西林瓶中，加入160μL45℃注射用水潤濕API，并加入到燒杯1中，再加160μL注射用水至上述西林瓶1中，蕩洗燒杯2次，攪拌15min。5、取12mL室溫的注射用水，加入到燒杯1中，混合均勻，加入氯化鈉和無水磷酸氫二鈉至完全溶解。采用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.5±0.5。6、取0.8g蔗糖加入到上述納米乳中。7、采用0.22μmPVDF膜過濾上述納米乳，灌裝半加塞后冷凍干燥?？疾烨愄娑{米乳的粒徑及其凍干制劑的外觀、水分、復(fù)溶后粒徑、pH值(如表3所示)，并檢測凍干后雜質(zhì)含量變化及在25℃加速條件下的放置穩(wěn)定性(如表4所示)。表3納米乳及其凍干制劑的性質(zhì)外觀水分pH值凍干前粒徑復(fù)溶后粒徑白色餅狀1.146％7.4028.82nm28.86nm表4雜質(zhì)含量檢測及放置穩(wěn)定性結(jié)論：以卵磷脂為乳化劑制備得到的曲貝替定納米乳凍干制劑，外觀、水分合格，pH值和復(fù)溶性后粒徑變化不大，凍干制制劑雜質(zhì)檢測結(jié)果符合限度要求；曲貝替定納米乳凍干制劑放置穩(wěn)定性良好，說明納米乳可以提高曲貝替定在凍干過程及長期放置過程中的穩(wěn)定性。實施例3以椰子油和中鏈甘油酸酯為增溶劑，以泊洛沙姆188為乳化劑，磷酸氫二鈉為緩沖劑，氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié)劑制備曲貝替定納米乳，并以蔗糖為另外的賦形劑，制備其凍干制劑，處方組成及用量如下：制備方法：1、將泊洛沙姆188，中鏈甘油脂和椰子油加入7mL西林瓶中，加熱至60±5℃，以一定的攪拌速度攪拌直至混合均勻。2、取10mL注射用水置于燒杯2，冷卻至45℃?zhèn)溆谩?、取約2.4mL(15％)的冷卻的注射用水傾入到西林瓶1中，在400rpm的速度下攪拌10min直至膠束形成，維持45℃。4、取2mg曲貝替定粉末，置于7mL西林瓶中，加入160μL45℃注射用水潤濕API，并加入到燒杯1中，再加160μL注射用水至上述西林瓶1中，蕩洗燒杯2次，攪拌15min。5、取12mL室溫的注射用水，加入到燒杯1中，混合均勻，加入氯化鈉和無水磷酸氫二鈉至完全溶解。采用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.5±0.5。6、取0.8g蔗糖加入到上述納米乳注射液中。7、采用0.22μmPVDF膜過濾上述納米乳溶液，灌裝半加塞后冷凍干燥?？疾烨愄娑{米乳的粒徑及其凍干制劑的外觀、水分、復(fù)溶后粒徑、pH值(如表5所示)，并檢測凍干后雜質(zhì)含量變化及在25℃加速條件下的放置穩(wěn)定性(如表6所示)。表5納米乳及其凍干制劑的性質(zhì)外觀水分pH值凍干前粒徑復(fù)溶后粒徑白色餅狀1.062％7.3928.94nm28.95nm表6雜質(zhì)含量檢測及放置穩(wěn)定性結(jié)論：以泊洛沙姆188為乳化劑制備得到的曲貝替定納米乳凍干制劑，外觀、水分合格，pH值和復(fù)溶性后粒徑變化不大，凍干制劑雜質(zhì)檢測結(jié)果符合限度要求；曲貝替定納米乳凍干制劑放置穩(wěn)定性良好，說明納米乳可以提高曲貝替定在凍干過程及長期放置過程中的穩(wěn)定性。實施例4以注射用魚油和中鏈甘油酸酯為增溶劑，以吐溫80為乳化劑，磷酸氫二鈉為pH緩沖劑，氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié)劑制備曲貝替定納米乳，并以海藻糖為凍干保護(hù)劑，制備其凍干制劑，處方組成及用量如下：制備方法：1、將吐溫80，中鏈甘油脂和魚油加入7mL西林瓶中，加熱至60±5℃，以一定的攪拌速度攪拌直至混合均勻。2、取10mL注射用水置于燒杯2，冷卻至45℃?zhèn)溆谩?、取約2.4mL(15％)的冷卻的注射用水傾入到西林瓶1中，在400rpm的速度下攪拌10min直至膠束形成，維持45℃。4、取4mg曲貝替定粉末，置于7mL西林瓶中，加入160μL45℃注射用水潤濕API，并加入到燒杯1中，再加160μL注射用水至上述西林瓶1中，蕩洗燒杯2次，攪拌15min。5、取12mL室溫的注射用水，加入到燒杯1中，混合均勻，加入氯化鈉和無水磷酸氫二鈉至完全溶解。采用1N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.5±0.5。6、取0.8g海藻糖加入到上述納米乳中。7、采用0.22μmPVDF膜過濾上述納米乳溶液，灌裝半加塞后冷凍干燥?？疾烨愄娑{米乳的粒徑及其凍干制劑的外觀、水分、復(fù)溶后粒徑、pH值(如表7所示)，并檢測凍干后雜質(zhì)含量變化及在25℃加速條件下的放置穩(wěn)定性(如表8所示)。表7納米乳及其凍干制劑的性質(zhì)外觀水分pH值凍干前粒徑復(fù)溶后粒徑白色餅狀0.0742％7.4128.34nm28.37nm表8雜質(zhì)含量檢測及放置穩(wěn)定性結(jié)論：以吐溫80為乳化劑制備得到的曲貝替定納米乳凍干制劑，外觀、水分合格，pH值和復(fù)溶性后粒徑變化不大，凍干制劑雜質(zhì)檢測結(jié)果符合限度要求；曲貝替定納米乳凍干制劑放置穩(wěn)定性良好，說明納米乳可以提高曲貝替定在凍干過程及長期放置過程中的穩(wěn)定性。當(dāng)前第1頁1 2 3