本申請是分案申請，其同發(fā)明名稱的母案的中國申請?zhí)柺?01180023303.x，國際申請?zhí)柺莗ct/ep2011/057388。
本發(fā)明涉及一種用于產生包含胰島素和鋅的藥物制劑的方法、由該方法獲得的藥物制劑和該制劑用于治療糖尿病的用途。
背景技術：
胰島素是在胰腺的胰島中產生的51個氨基酸肽激素。其作為單體起作用，主要功能是通過結合并激活跨膜受體來促進葡萄糖分子穿過脂肪和肌肉組織的細胞膜的運輸。
通常在酸性條件下通過將胰島素溶解在小體積的水中來制備胰島素的制劑。然后向制劑中加入鋅，中和并加入防腐劑，例如苯酚和間甲酚。
wo2005/012347公開了具有帶負電側鏈的胰島素衍生物。
wo2007/074133公開了包含?；葝u素和每6分子的酰化胰島素超過4個鋅原子的可溶性藥物制劑。
本發(fā)明克服現(xiàn)有技術的問題。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明涉及一種用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法，其中所述方法包括將胰島素衍生物溶解在任選包含藥學上可接受的賦形劑的水中以形成胰島素衍生物溶液，調節(jié)溶液的ph至ph超過7.2，在持續(xù)攪拌的同時加入鋅溶液，并調節(jié)ph至制劑的靶ph，且其中所述胰島素衍生物包含具有側鏈的胰島素分子，所述側鏈連接在母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，所述側鏈具有通式：-w-x-y-z。
本發(fā)明另外涉及一種由該方法獲得的產品和由該方法獲得的產品的用途。
定義
本文使用的術語“藥物制劑”意指，包含活性化合物或其鹽連同藥物賦形劑(例如緩沖劑、防腐劑和張度調節(jié)劑)的產品，通過將所述藥物制劑給予人，所述藥物制劑可用于治療、預防疾病或病癥或者降低疾病或病癥的嚴重性。因此藥物制劑在本領域中亦被稱為藥物組合物。
“制劑的靶ph”意指，終藥物制劑中所需ph值。
本文使用的術語“藥學上可接受的”意指，適用于正規(guī)藥物應用，即在患者中不會引起不良事件等。
本文使用的術語“胰島素衍生物”意指，化學修飾的母胰島素或其類似物，其中修飾是以連接酰胺、碳水化合物、烷基、?；?、酯、peg化等的形式。一個實例是lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素。
本文使用的術語“人胰島素”意指，結構和性質公知的人胰島素激素。人胰島素具有兩條多肽鏈，命名為a鏈和b鏈。a鏈是21個氨基酸肽和b鏈是30個氨基酸肽，兩條鏈通過二硫橋連接：第一個橋在a鏈位置7上的半胱氨酸與b鏈位置7上的半胱氨酸之間，和第二個橋在a鏈位置20上的半胱氨酸與b鏈位置19上的半胱氨酸之間。第三個橋存在于a鏈位置6與11上的半胱氨酸之間。
在人體中，該激素被合成為單鏈前體胰島素原(前胰島素原)，其由以下結構的24個氨基酸的前肽與其后的包含86個氨基酸的胰島素原組成：前肽-b-argarg-c-lysarg-a，其中c是31個氨基酸的連接肽。arg-arg和lys-arg是用于從a鏈和b鏈切割連接肽的切割位點。
本文使用的術語“胰島素肽”意指，具有胰島素活性的人胰島素或者其類似物或衍生物。
本文使用的術語“母胰島素”旨在意指，對其氨基酸序列應用任何修飾之前的胰島素。
本文使用的術語“胰島素類似物”意指，其中胰島素的一個或多個氨基酸殘基已被其他氨基酸殘基取代和/或其中一個或多個氨基酸殘基已從胰島素上缺失和/或其中一個或多個氨基酸殘基已添加和/或插入到胰島素中的修飾胰島素。
在一個實施方案中，胰島素類似物相對于母胰島素包含少于8個修飾(取代、缺失、添加(包括插入)及其任何組合)，備選地相對于母胰島素少于7個修飾，備選地相對于母胰島素少于6個修飾，備選地相對于母胰島素少于5個修飾，備選地相對于母胰島素少于4個修飾，備選地相對于母胰島素少于3個修飾，備選地相對于母胰島素少于2個修飾。胰島素類似物的一個實例是aspb28人胰島素。
指示胰島素分子中的修飾，說明鏈(a或b)、位置和取代天然氨基酸殘基的氨基酸殘基的單字母或三字母密碼。
“desb30”或“b(1-29)”意指，缺失b30氨基酸的天然胰島素b鏈或其類似物，和“a(1-21)”意指天然胰島素a鏈。因此，例如a21gly、b28asp、desb30人胰島素是以下的人胰島素類似物，其中a鏈位置21上的氨基酸被甘氨酸取代、b鏈位置28上的氨基酸被天冬氨酸取代和b鏈位置30上的氨基酸缺失。
本文術語像“a1”、“a2”和“a3”等分別表示胰島素a鏈位置1、2和3等上的氨基酸(從n末端計數)。類似地，術語像b1、b2和b3等分別表示胰島素b鏈位置1、2和3等上的氨基酸(從n末端計數)。使用氨基酸的單字母密碼，術語像a21a、a21g和a21q分別指定a21位置上的氨基酸是a、g和q。使用氨基酸的三字母密碼，相應的表示分別是a21ala、a21gly和a21gln。
本文術語“a(0)”或“b(0)”分別表示a1或b1n端的氨基酸位置。術語a(-1)或b(-1)分別表示a(0)或b(0)n端的第一個氨基酸位置。因此a(-2)和b(-2)分別表示a(-1)和b(-1)n端的氨基酸位置，a(-3)和b(-3)分別表示a(-2)和b(-2)n端的氨基酸位置，諸如此類。
本文術語a(0)或b(0)分別表示a1或b1n端的氨基酸位置。術語a(-1)或b(-1)分別表示a(0)或b(0)n端的第一個氨基酸位置。因此a(-2)和b(-2)分別表示a(-1)和b(-1)n端的氨基酸位置，a(-3)和b(-3)分別表示a(-2)和b(-2)n端的氨基酸位置，諸如此類。術語a22或b31分別表示a21或b30c端的氨基酸位置。術語a23或b32分別表示a22或b31c端的第一個氨基酸位置。因此，a24和b33分別表示a23和b32c端的氨基酸位置，諸如此類。
本文使用的術語“不鈍化”意指，當在一個制劑中配制時，速效胰島素和?；葝u素都具有與以分開的制劑給予速效胰島素和?；葝u素時的作用特征相同或實質上相同的作用特征。
本文術語“氨基酸殘基”是羧基從形式上被移除羥基和/或氨基從形式上被移除氫原子的氨基酸。
hglu是高谷氨酸。
α-asp是l形式的-hnch(co-)ch2cooh。
β-asp是l形式的-hnch(cooh)ch2co-。
α-glu是l形式的-hnch(co-)ch2ch2cooh。
γ-glu是l形式的-hnch(cooh)ch2ch2co-。
α-hglu是l形式的-hnch(co-)ch2ch2ch2cooh。
δ-hglu是l形式的-hnch(cooh)ch2ch2ch2co-。
β-ala是-nh-ch2-ch2-cooh。
sar是肌氨酸(n-甲基甘氨酸)。
措辭“側鏈中具有羧酸基的氨基酸殘基”指像asp、glu和hglu等的氨基酸殘基。氨基酸可為l或d構型。如果無具體說明，那么應理解成氨基酸殘基為l構型。
本文使用的術語“治療疾病”意指，管理和護理已發(fā)展疾病、病況或病癥的患者。治療的目的是為了與疾病、病況或病癥戰(zhàn)斗。治療包括給予活性化合物以消除或控制疾病、病況或病癥以及減輕與疾病、病況或病癥相關的癥狀或并發(fā)癥。
本文使用的術語“推注胰島素(bolusinsulin)”、“用餐相關胰島素(meal-relatedinsulin)”或“速效胰島素”意指，立刻發(fā)生作用并適用于涵蓋用餐期間和餐后胰島素需求的胰島素肽。
術語“糖尿病”包括1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病(妊娠期間)和其他引起高血糖癥的病情。該術語用于其中胰腺產生不足量的胰島素或其中身體的細胞未能對胰島素合適反應從而防礙細胞吸收葡萄糖的代謝障礙。因此，葡萄糖在血液中積累。
1型糖尿病亦稱為胰島素依賴型糖尿病(iddm)和青少年型糖尿病，由b細胞破壞引起，通常導致絕對的胰島素缺乏。
2型糖尿病亦被稱為非胰島素依賴型糖尿病(niddm)和成人型糖尿病，與占主導的胰島素抵抗有關，并因此與相對的胰島素缺乏和/或占主導的胰島素分泌缺陷伴隨胰島素抵抗有關。
本文使用的術語“緩沖劑”指藥物組合物中這樣的化合物，其降低組合物的ph隨著時間變化的趨勢，否則，由于化學反應將發(fā)生ph隨時間的變化。緩沖劑包括化學品，例如磷酸鈉、tris、甘氨酰甘氨酸、乙酸鈉和檸檬酸鈉。
本文使用的術語“防腐劑”指，加入藥物制劑中以防止或延緩微生物活性(生長和代謝)的化合物。藥學上可接受的防腐劑的實例是苯酚、間甲酚以及苯酚和間甲酚的混合物。
使用的術語“等滲劑”指，用于調節(jié)藥物制劑的滲透壓使得滲透壓變得與人血漿的滲透壓更接近的藥物制劑中的化合物。等滲劑包括氯化鈉、甘油、甘露糖醇、丙二醇等。
本文使用的術語“穩(wěn)定劑”指，加入包含肽的藥物制劑中以便使肽穩(wěn)定(即增加這種制劑的保質期和/或使用中的時間)的化學品。藥物制劑中使用的穩(wěn)定劑的實例是l-甘氨酸、l-組氨酸、精氨酸、聚乙二醇和羧基甲基纖維素。另外，苯酚、鋅離子和氯化鈉可作為穩(wěn)定劑起作用。
本文使用的術語“表面活性劑”指，用于調節(jié)空氣和疏水表面的界面，其調節(jié)方式使得移動或部分移動胰島素、胰島素類似物和胰島素衍生物離開界面的藥物制劑中的化合物?？墒褂枚喾N常規(guī)的表面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇以及聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯。一個實例是聚山梨醇酯20。
發(fā)明描述
本發(fā)明涉及一種用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法，其中所述方法包括將胰島素衍生物溶解在任選包含藥學上可接受的賦形劑的水中以形成胰島素衍生物溶液，調節(jié)溶液的ph至ph超過7.2，在持續(xù)攪拌的同時加入鋅溶液，并調節(jié)ph至制劑的靶ph，且其中所述胰島素衍生物包含具有側鏈的胰島素分子，所述側鏈連接在母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，所述側鏈具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
在側鏈上具有羧酸基的α-氨基酸殘基，該殘基利用其羧酸基之一與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基一起形成酰胺基；
由2、3或4個α-氨基酸殘基經由酰胺羰基鍵連接在一起構成的鏈，該鏈經由酰胺鍵連接至母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，w的氨基酸殘基選自：具有中性側鏈的氨基酸殘基和在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基，使得w具有至少一個在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基；或
x與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基之間的共價鍵；
x是：
-co-；
-ch(cooh)co-；
-co-n(ch2cooh)ch2co-；
-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
當w是氨基酸殘基或氨基酸殘基的鏈時，經由下劃線的碳的鍵與w中的氨基形成酰胺鍵；或
當w是共價鍵時，經由下劃線的羰基碳的鍵與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基形成酰胺鍵；
y是：
-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整數；
二價烴鏈，其包含1、2或3個-ch=ch-基和足以使該鏈中的碳原子的總數介于10-32的多個-ch2-基；和
z是：
-cooh；
-co-asp；
-co-glu；
-co-gly；
-co-sar；
-ch(cooh)2；
-n(ch2cooh)2；
-so3h；或
-po3h；
和包含其任何zn2+復合物，條件是當w是共價鍵且x是-co-時，那么z不為-cooh。
本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，通過提高包含胰島素衍生物的溶液的ph至ph值超過7.2，當加入鋅溶液時，將實質上無胰島素衍生物的沉淀，意指無沉淀形成或者如果形成沉淀，那么它就立刻再次溶解。
溶液中胰島素衍生物的沉淀可通過目測溶液來觀察。如果胰島素衍生物在溶液中沉淀，沉淀就使得溶液不清澈。當溶液是清澈和透明時，不存在或實質上不存在胰島素衍生物的沉淀。
在本發(fā)明的一個方面，當胰島素衍生物溶解在水中時，其中溶解有胰島素衍生物的水包含一種或多種藥學上可接受的賦形劑。可向水中加入多種藥學上可接受的賦形劑，例如苯酚、間甲酚、甘油、氯化鈉和任選tris或磷酸鹽緩沖液，以獲得賦形劑的水性溶液，并將胰島素衍生物溶解在該水性溶液中。
在本發(fā)明的一個方面，在調節(jié)溶液的ph至靶ph之前向胰島素衍生物的水性溶液中加入一種或多種藥學上可接受的賦形劑。在本發(fā)明的一個方面，在調節(jié)靶ph之后向制劑中加入藥學上可接受的賦形劑。
在一個方面，藥學上可接受的賦形劑選自苯酚、間甲酚、甘油和氯化鈉。
在本發(fā)明的一個方面，靶ph低于向其加入鋅溶液的水性溶液的ph。在本發(fā)明的一個方面，當加入鋅溶液時，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.4。在本發(fā)明的一個方面，當加入鋅溶液時，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.6。在本發(fā)明的一個方面，當加入鋅溶液時，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.8。在本發(fā)明的一個方面，當加入鋅溶液時，調節(jié)該水性溶液的ph至超過8.0。
在本發(fā)明的一個方面，靶ph的范圍是7.0-7.8。在一個方面，靶ph的范圍是7.2-7.8。在一個方面，靶ph的范圍是7.4-7.6。
在本發(fā)明的一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.4，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.0-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.6，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.0-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.8，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.0-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過8.0，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.0-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.2，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.2-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.4，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.2-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.6，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.2-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.8，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.2-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過8.0，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.2-7.8的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.2，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.4-7.6的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.4，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.4-7.6的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.6，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.4-7.6的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過7.8，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.4-7.6的靶ph。
在一個方面，調節(jié)該水性溶液的ph至超過8.0，加入胰島素溶液，然后調節(jié)ph至范圍是7.4-7.6的靶ph。
多種酸和堿可用于調節(jié)該水性溶液的ph或達到靶ph。合適酸的實例是鹽酸、乙酸、硫酸和磷酸。合適堿的實例是氫氧化鈉、tris、碳酸鹽和磷酸鹽。在一個實施方案中，tris、碳酸鹽和磷酸鹽亦作為緩沖劑起作用。
在本發(fā)明的一個方面，在超過1分鐘期間向該水性溶液加入鋅溶液。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過2分鐘。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過3分鐘。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過4分鐘。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過5分鐘。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過6分鐘。在本發(fā)明的一個方面，該期間是超過7分鐘。
在本發(fā)明的一個方面，鋅溶液包含醋酸鋅。在一個方面，鋅溶液選自醋酸鋅、氯化鋅、硫酸鋅和葡萄糖酸鋅。在本發(fā)明的一個方面，鋅溶液是醋酸鋅。
在本發(fā)明的一個方面，鋅溶液和可溶性胰島素衍生物的比例是每6分子的胰島素衍生物4.3個鋅原子至每6分子的胰島素衍生物12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物4.5-12個鋅原子。
在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物4.7-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物4.9-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物5.1-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物5.3-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物5.5-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物5.7-12個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物5.9-11.5個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物6.1-11.0個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物6.3-10.5個鋅原子。在本發(fā)明的一個方面，該比例是每6分子的胰島素衍生物6.5-10.0個鋅原子。
在本發(fā)明的一個方面，胰島素衍生物是lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素。
在本發(fā)明的一個方面，向制劑中加入速效胰島素。速效胰島素可選自aspb28人胰島素、lysb3glub29人胰島素和/或lysb28prob29人胰島素。在本發(fā)明的一個方面，速效胰島素是aspb28人胰島素(門冬胰島素)。
本發(fā)明另外涉及由用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法所獲得的產品。由本發(fā)明的方法獲得的產品可包含速效胰島素(例如門冬胰島素)且不發(fā)生鈍化。
在本發(fā)明的一個方面，提供由用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法所獲得的產品用于治療糖尿病的用途。
在本發(fā)明的再一方面，制劑另外包含藥學上可接受的防腐劑，其可選自苯酚、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、對羥基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苯甲醇、氯丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、氯己啶(chlorohexidine)、去氫醋酸鈉、氯甲酚、對羥基苯甲酸乙酯、芐索氯銨、氯苯甘醚(3-對氯苯氧丙烷-1,2-二醇)或其混合物。在本發(fā)明的再一方面，防腐劑以0.1mg/ml-20mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，防腐劑以0.1mg/ml-5mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，防腐劑以5mg/ml-10mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，防腐劑以10mg/ml-20mg/ml的濃度存在。這些具體防腐劑的每一個組成本發(fā)明的備選方面。在藥物組合物中使用防腐劑是技術人員公知的。為了方便，參考remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第19版,1995。
在本發(fā)明的再一方面，制劑另外包含等滲劑，其可選自鹽(例如氯化鈉)、糖或糖醇、氨基酸(例如甘氨酸、l-組氨酸、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸)、糖醇(例如甘油(丙三醇)、1,2-丙二醇(丙二醇)、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如peg400)或其混合物。可使用任何糖，例如單糖、二糖或多糖，或者水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、支鏈淀粉、糊精、環(huán)糊精、可溶性淀粉、羥乙基淀粉和羧甲基纖維素鈉。在一個方面，糖添加劑是蔗糖。糖醇定義為具有至少一個-oh基的c4-c8烴并包括例如甘露糖醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、衛(wèi)矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。在一個方面，糖醇添加劑是甘露糖醇。上述糖或糖醇可單獨或組合使用。使用量無固定限制，只要糖或糖醇在液體制備物中可溶并且不不利地影響使用本發(fā)明的方法所實現(xiàn)的穩(wěn)定效果即可。在一個方面，糖或糖醇濃度是約1mg/ml-約150mg/ml。在本發(fā)明的再一方面，等滲劑以1mg/ml-50mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，等滲劑以1mg/ml-7mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，等滲劑以8mg/ml-24mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的再一方面，等滲劑以25mg/ml-50mg/ml的濃度存在。這些具體等滲劑的每一個組成本發(fā)明的備選方面。在藥物組合物中使用等滲劑是技術人員公知的。為了方便，參考remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第19版,1995。
典型的等滲劑是氯化鈉、甘露糖醇、二甲基砜和甘油，典型的防腐劑是苯酚、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯和苯甲醇。
合適緩沖劑的實例是乙酸鈉、甘氨酰甘氨酸、hepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)和磷酸鈉。
本發(fā)明的制劑可用于治療對胰島素敏感的病情。因此，它們可用于治療1型糖尿病、2型糖尿病和例如有時在嚴重損傷的人和經歷過大手術的人中看到的高血糖癥。任何患者的最優(yōu)劑量水平將取決于多種因素，因素包括使用的具體胰島素衍生物的功效、患者的年齡、體重、身體活動和飲食、與其他藥物的可能組合和待治療的病情的嚴重性。建議由本領域技術人員以對已知胰島素制劑相似的方式來確定本發(fā)明的制劑對每個單獨患者的每日劑量。
合宜時，本發(fā)明的胰島素衍生物可與其他類型的胰島素(例如更快速開始作用的胰島素類似物)混合使用。這種胰島素類似物的實例描述于例如具有以下公開號的歐洲專利申請中：ep214826(novonordiska/s)、ep375437(novonordiska/s)和ep383472(elililly&co.)。
通過下述實施例進一步闡明本發(fā)明，然而這不應視為限制保護的范圍。
本發(fā)明將在下述段落中概述：
1.一種用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法，其中所述方法包括將胰島素衍生物溶解在水中，調節(jié)溶液的ph至ph超過7.2，在持續(xù)攪拌的同時加入鋅溶液，并調節(jié)ph至制劑的靶ph。
2.根據段落1的方法，其中所述水包含一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
3.根據段落1的方法，其中在調節(jié)靶ph后向制劑中加入一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
4.根據段落1-3的方法，其中所述藥學上可接受的賦形劑選自苯酚、間甲酚、甘油和氯化鈉。
5.根據段落1-4的方法，其中所述靶ph低于水的ph。
6.根據段落1-5的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.4。
7.根據段落1-6的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.6。
8.根據段落1-7的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.8。
9.根據段落1-8的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過8.0。
10.根據段落1-9的方法，其中在超過1分鐘期間加入鋅溶液。
11.根據段落1-10的方法，其中所述期間是超過2分鐘、超過3分鐘、超過4分鐘、超過5分鐘、超過6分鐘或超過7分鐘。
12.根據段落1-11的方法，其中所述靶ph范圍是7.0-7.8。
13.根據段落1-12的方法，其中所述靶ph范圍是7.2-7.8。
14.根據段落1-13的方法，其中所述靶ph范圍是7.4-7.6。
15.根據段落1-14的方法，其中所述鋅溶液包含醋酸鋅。
16.根據段落1-15的方法，其中鋅溶液與可溶性胰島素衍生物的比例是每6分子的胰島素衍生物4.3個鋅原子至每6分子的胰島素衍生物12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物4.5-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物4.7-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物4.9-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物5.1-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物5.3-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物5.5-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物5.7-12個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物5.9-11.5個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物6.1-11.0個鋅原子、每6分子的胰島素衍生物6.3-10.5個鋅原子或每6分子的胰島素衍生物6.5-10.0個鋅原子。
17.根據段落1-16的方法，其中所述胰島素衍生物包含具有側鏈的胰島素分子，所述側鏈連接在人胰島素或其類似物的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，所述側鏈具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
?在側鏈上具有羧酸基的α-氨基酸殘基，該殘基利用其羧酸基之一與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基一起形成酰胺基；
?由2、3或4個α-氨基酸殘基經由酰胺羰基鍵連接在一起構成的鏈，該鏈經由酰胺鍵連接至母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，w的氨基酸殘基選自：具有中性側鏈的氨基酸殘基和在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基，使得w具有至少一個在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基；或
?x與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基之間的共價鍵；
x是：
?-co-；
?-ch(cooh)co-；
?-co-n(ch2cooh)ch2co-；
?-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
?-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
?-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
a)當w是氨基酸殘基或氨基酸殘基的鏈時，經由下劃線的碳的鍵與w中的氨基形成酰胺鍵；或
b)當w是共價鍵時，經由下劃線的羰基碳的鍵與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基形成酰胺鍵；
y是：
?-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整數；
?二價烴鏈，其包含1、2或3個-ch=ch-基和足以使該鏈中的碳原子的總數介于10-32的多個-ch2-基；和
z是：
?-cooh；
?-co-asp；
?-co-glu；
?-co-gly；
?-co-sar；
?-ch(cooh)2；
?-n(ch2cooh)2；
?-so3h；或
?-po3h
和包含其任何zn2+復合物，條件是當w是共價鍵且x是-co-時，那么z不為-cooh。
18.根據段落17的方法，其中w選自α-asp、β-asp、α-glu、γ-glu、α-hglu和δ-hglu。
19.根據段落17的方法，其中w選自α-asp-gly、gly-α-asp、β-asp-gly、gly-β-asp、α-glu-gly、gly-α-glu、γ-glu-gly、gly-γ-glu、α-hglu-gly、gly-α-hglu、δ-hglu-gly和gly-δ-hglu、α-asp-α-asp、α-asp-α-glu、α-asp-α-hglu、α-asp-β-asp、α-asp-γ-glu、α-asp-δ-hglu、β-asp-α-asp、β-asp-α-glu、β-asp-α-hglu、β-asp-β-asp、β-asp-γ-glu、β-asp-δ-hglu、α-glu-α-asp、α-glu-α-glu、α-glu-α-hglu、α-glu-β-asp、α-glu-γ-glu、α-glu-δ-hglu、γ-glu-α-asp、γ-glu-α-glu、γ-glu-α-hglu、γ-glu-β-asp、γ-glu-γ-glu、γ-glu-δ-hglu、α-hglu-α-asp、α-hglu-α-glu、α-hglu-α-hglu、α-hglu-β-asp、α-hglu-γ-glu、α-hglu-δ-hglu、δ-hglu-α-asp、δ-hglu-α-glu、δ-hglu-α-hglu、δ-hglu-β-asp、δ-hglu-γ-glu和δ-hglu-δ-hglu。
20.根據段落17-19的方法，其中x是-co-或-ch(cooh)co-。
21.根據段落17-20的方法，其中y是-(ch2)m-，其中m是介于6-32、8-20、12-20或12-16的整數。
22.根據段落17-21的方法，其中z是-cooh。
23.根據段落17、18、20、21和22的方法，其中所述胰島素衍生物是lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素。
24.根據段落1-23的方法，其中向制劑中加入速效胰島素。
25.根據段落1-24的方法，其中所述速效胰島素選自aspb28人胰島素、lysb3glub29人胰島素和/或lysb28prob29人胰島素。
26.根據段落25的方法，其中所述速效胰島素是aspb28人胰島素。
27.一種產品，其由段落1-27的方法獲得。
28.由段落1-27的方法獲得的產品用于治療糖尿病的用途。
在一個方面，本發(fā)明在下述段落中概述：
1)一種用于制備包含胰島素衍生物的藥物制劑的方法，其中所述方法包括將胰島素衍生物溶解在水中，調節(jié)溶液的ph至ph超過7.2，在持續(xù)攪拌的同時加入鋅溶液，并調節(jié)ph至制劑的靶ph。
2)根據段落1的方法，其中所述水包含一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
3)根據段落1的方法，其中在調節(jié)靶ph后向制劑中加入一種或多種藥學上可接受的賦形劑。
4)根據段落1-3的方法，其中所述藥學上可接受的賦形劑選自苯酚、間甲酚、甘油和氯化鈉。
5)根據段落1-4的方法，其中所述靶ph低于水的ph。
6)根據段落1-5的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.4。
7)根據段落1-6的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.6。
8)根據段落1-7的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過7.8。
9)根據段落1-8的方法，其中當加入鋅溶液時，調節(jié)水性溶液的ph至超過8.0。
10)根據段落1-9的方法，其中在超過1分鐘期間加入鋅溶液。
11)根據段落1-10的方法，其中所述期間是超過2分鐘、超過3分鐘、超過4分鐘、超過5分鐘、超過6分鐘或超過7分鐘。
12)根據段落1-11的方法，其中所述靶ph范圍是7.0-7.8。
13)根據段落1-12的方法，其中所述靶ph范圍是7.2-7.8。
14)根據段落1-13的方法，其中所述靶ph范圍是7.4-7.6。
15)根據段落1-14的方法，其中所述鋅溶液包含醋酸鋅。
16)根據段落1-15的方法，其中鋅溶液與可溶性胰島素衍生物的比例是每6分子的胰島素衍生物4.3個鋅原子至每6分子的胰島素衍生物12個鋅原子。
17)根據段落1-16的方法，其中所述胰島素衍生物包含具有側鏈的胰島素分子，所述側鏈連接在人胰島素或其類似物的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，所述側鏈具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
?在側鏈上具有羧酸基的α-氨基酸殘基，該殘基利用其羧酸基之一與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基一起形成酰胺基；
?由2、3或4個α-氨基酸殘基經由酰胺羰基鍵連接在一起構成的鏈，該鏈經由酰胺鍵連接至母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基上，w的氨基酸殘基選自：具有中性側鏈的氨基酸殘基和在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基，使得w具有至少一個在側鏈上具有羧酸基的氨基酸殘基；或
?x與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基之間的共價鍵；
x是：
?-co-；
?-ch(cooh)co-；
?-co-n(ch2cooh)ch2co-；
?-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
?-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
?-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
?-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
a)當w是氨基酸殘基或氨基酸殘基的鏈時，經由下劃線的碳的鍵與w中的氨基形成酰胺鍵；或
b)當w是共價鍵時，經由下劃線的羰基碳的鍵與母胰島素的b鏈上所存在的lys殘基的ε-氨基形成酰胺鍵；
y是：
?-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整數；
?二價烴鏈，其包含1、2或3個-ch=ch-基和足以使該鏈中的碳原子的總數介于10-32的多個-ch2-基；和
z是：
?-cooh；
?-co-asp；
?-co-glu；
?-co-gly；
?-co-sar；
?-ch(cooh)2；
?-n(ch2cooh)2；
?-so3h；或
?-po3h
和包含其任何zn2+復合物，條件是當w是共價鍵且x是-co-時，那么z不為-cooh。
18)根據段落17的方法，其中所述胰島素衍生物是lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素。
19)根據段落1-18的方法，其中向制劑中加入速效胰島素。
20)根據段落1-19的方法，其中速效胰島素選自aspb28人胰島素、lysb3glub29人胰島素和/或lysb28prob29人胰島素。
21)一種產品，其由段落1-20的方法獲得。
22)由段落1-20的方法獲得的產品用于治療糖尿病的用途。
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具體實施方式
實施例1
用于制備包含lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素，600nmol/ml(100u/ml)的制劑的方法：
將0.6mmollysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶解在300ml水中，并與500ml的包含16mmol苯酚、16mmol間甲酚和213mmol甘油的水性溶液混合。調節(jié)ph至7.40，在以中等速度攪拌的同時，通過使用蠕動泵來連續(xù)加入50ml0.01m醋酸鋅。在大約30分鐘內完成加入。加入醋酸鋅后，加入注射用水至950ml，調節(jié)ph至7.60，并最終加水至終體積為1升。
實施例2
用于制備包含lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素，1200nmol/ml(200u/ml)的制劑的方法：
將1.2mmollysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰島素溶解在300ml水中，并與500ml的包含16mmol苯酚、16mmol間甲酚和213mmol甘油的水性溶液混合。調節(jié)ph至7.50，在以中等速度攪拌的同時，通過使用蠕動泵來連續(xù)加入110ml0.01m醋酸鋅。在大約40分鐘內完成加入。加入醋酸鋅后，加入注射用水至950ml，調節(jié)ph至7.60，并最終加水至終體積為1升。
實施例3
用于制備包含lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素和門冬胰島素600nmol/ml(u100/ml)的制劑的方法：
lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰島素溶液：將0.42mmollysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶解在210ml水中，并與350ml的包含11.2mmol苯酚、11.2mmol間甲酚、7mmolnacl和144mmol甘油的水性溶液混合。調節(jié)ph至7.40，在以中等速度攪拌的同時，通過使用蠕動泵來連續(xù)加入32.9ml0.01m醋酸鋅。在大約30分鐘內完成加入。加入醋酸鋅后，加入注射用水至630ml并調節(jié)ph至7.40。
門冬胰島素溶液：將0.18mmol門冬胰島素懸浮在15ml水中，并與包含9ml0.01m醋酸鋅和4.8ml0.2n鹽酸的溶液混合以獲得清澈溶液。通過加入水來調節(jié)體積至35ml。然后加入180ml的包含4.8mmol苯酚、4.8mmol間甲酚、3mmolnacl和62mmol甘油的溶液。最后調節(jié)ph至7.40并通過加入水來調節(jié)體積至270ml。
ε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶液與門冬胰島素溶液的混合：將630ml的lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶液與270ml的門冬胰島素溶液混合。調節(jié)ph至7.40并通過加入水來最終調節(jié)體積至1升。
實施例4
用于制備包含lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素和門冬胰島素1200nmol/ml(200u/ml)的制劑的方法：
lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶液：將0.84mmollysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶解在210ml水中，并與350ml的包含11.2mmol苯酚、11.2mmol間甲酚、7mmolnacl和144mmol甘油的水性溶液混合。調節(jié)ph至7.40，在以中等速度攪拌的同時，通過使用蠕動泵來連續(xù)加入60.1ml0.01m醋酸鋅。在大約30分鐘內完成加入。加入醋酸鋅后，加入注射用水至630ml并調節(jié)ph至7.40。
門冬胰島素溶液：將0.36mmol門冬胰島素懸浮在15ml水中，并與包含18ml0.01m醋酸鋅和4.8ml0.2n鹽酸的溶液混合以獲得清澈溶液。通過加入水來調節(jié)體積至35ml。然后加入180ml的包含4.8mmol苯酚、4.8mmol間甲酚、3mmolnacl和62mmol甘油的溶液。最后調節(jié)ph至7.40并通過加入水來調節(jié)體積至270ml。
ε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶液與門冬胰島素溶液的混合：將630ml的lysb29nε-十六烷二?；?γ-gludesb30人胰島素溶液與270ml的門冬胰島素溶液混合。調節(jié)ph至7.40并通過加入水來最終調節(jié)體積至1升。