本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體指N15多肽在制備金黃色葡萄球菌抑制劑中的用途。

背景技術(shù)：

金黃色葡萄球菌致病力最強(qiáng)，主要產(chǎn)生溶血素、殺白細(xì)胞素和血漿凝固酶等，造成許多種感染，如癤、癰、膿腫和傷口感染等。金黃色葡萄球菌感染的特點(diǎn)是局限性組織壞死，膿液稠厚、黃色、不臭。也能引起全身性感染，影響人體健康,威脅人類生命安全。為了抑制和消滅病原真菌,人們一直致力于尋找有效的抗病原細(xì)菌藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種多肽，該多肽能夠抑制金黃色葡萄球菌的生長，具有在制備病原細(xì)菌抑制劑中的用途，它已被現(xiàn)有技術(shù)公開，名為N15多肽。

N15多肽是一個(gè)具有15個(gè)氨基酸的短肽，其序列為甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-絲氨酸-蘇氨酸-谷氨酸-亮氨酸-異亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天門冬氨酸-脯氨酸，它具有多種生物學(xué)功能，包括調(diào)節(jié)NF-κB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合目的基因的能力，影響NF-κB目的基因產(chǎn)物蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)；阻斷PCNA結(jié)合DNA聚合酶，從而阻止細(xì)胞DNA合成抑制細(xì)胞增殖；抑制上皮細(xì)胞增生，調(diào)節(jié)表皮增生及分化，使皮膚角化過程正?；?。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在研究中發(fā)現(xiàn)N15多肽能夠?qū)Ω鞣N病原細(xì)菌的生長產(chǎn)生抑制作用。

前期研究表明，在金黃色葡萄球菌中加入N15會(huì)起到抑制金黃色葡萄球菌增殖的效果。通過檢測(cè)金黃色葡萄球菌內(nèi)DNA含量發(fā)現(xiàn)，N15會(huì)引起金黃色葡萄球菌內(nèi)的DNA含量的減少，因此N15抑制金黃色葡萄球菌的增殖可能是通過抑制基因組DNA復(fù)制而實(shí)現(xiàn)的。此外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明N15可以抑制沙門氏菌的生長。

本發(fā)明還提供了一種N15多肽制備的抗真菌藥物，為N15多肽的水溶液，濃度大于等于500μg/mL。

本發(fā)明的有益效果：N15多肽是一種結(jié)構(gòu)清晰，易于工業(yè)化生產(chǎn)的多肽，它可以抑制多種病原細(xì)菌的增殖，效果好且無毒副作用。

附圖說明

圖1為流式細(xì)胞儀檢測(cè)N15對(duì)金黃色葡萄球菌DNA含量的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的論證說明，以下實(shí)驗(yàn)例僅是對(duì)本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實(shí)驗(yàn)例。

實(shí)驗(yàn)例1：N15對(duì)金黃色葡萄球菌的生長具有抑制作用

實(shí)驗(yàn)方法：

取金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上，37℃下活化培養(yǎng)，用接種環(huán)從斜面上挑菌到無菌水中制成菌懸液，接種培養(yǎng)無菌操作下，用取液器吸取100μL體積的菌液到滅菌小離心管中，充分混勻后，迅速注入到滅菌平皿中，在平板中加入N15多肽，以同體積的無菌水的混合液注入作空白，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，觀察菌落生長情況，并對(duì)菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果見表1。

表1.N15對(duì)金黃色葡萄球菌生長抑制結(jié)果對(duì)照表

結(jié)果顯示，和對(duì)照相比，加入N15多肽的平板上金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)明顯減少，N15對(duì)金黃色葡萄球菌的生長具有抑制效應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)例2：N15對(duì)金黃色葡萄球菌的DNA復(fù)制具有抑制效應(yīng)

實(shí)驗(yàn)方法：

制備YEPD液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，并加入N15到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，同時(shí)設(shè)置不加N15多肽的金黃色葡萄球菌作為對(duì)照(control)，加入N15多肽(終濃度500μg/mL)，在處理2小時(shí)分別取樣2mL金黃色葡萄球菌菌體，加入Sytox-Green染料對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)胞DNA染色后，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行金黃色葡萄球菌的DNA相對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖1。

如實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示，橫坐標(biāo)表示單個(gè)金黃色葡萄球菌細(xì)胞內(nèi)DNA的含量，縱坐標(biāo)表示酵母細(xì)胞數(shù)量。在N15處理2小時(shí)內(nèi)，N15處理細(xì)胞內(nèi)的DNA含量和對(duì)照細(xì)胞相比沒有顯著性差異，而隨著時(shí)間的增加，在N15處理15小時(shí)以后，N15處理細(xì)胞內(nèi)的DNA含量和對(duì)照細(xì)胞相比明顯減少。該結(jié)果表明N15會(huì)引起金黃色葡萄球菌細(xì)胞DNA含量的減少。