本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
背景技術：
引起肝損傷的原因有多個：1、病毒感染：由多種肝炎病毒引起，具有傳染性強，傳播途徑復雜，流行面廣泛，發(fā)病率高等特點。2、藥物或化學毒物：許多藥物和化學毒物都可引起肝臟損傷，發(fā)生藥物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精對肝臟的損害是很嚴重的，損害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代謝產(chǎn)物乙醛的毒性對肝細胞直接損害造成的。4、其他原因：原發(fā)和繼發(fā)的肝臟腫瘤、心功能不全導致肝臟淤血、某些先天性肝臟疾病、靜脈高價營養(yǎng)等，都可以造成不同程度的肝損害，這些肝損害的早期表現(xiàn)往往是ALT(轉(zhuǎn)氨酶)或膽紅素的升高，不祛除病因，肝臟的損害會進一步加重。目前在我國由于上述原因每年發(fā)生肝損傷的人數(shù)眾多，形勢不容樂觀。急需研發(fā)高效低毒的防治肝臟損傷藥物。
肝臟損傷的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物具有重要價值。
本發(fā)明涉及的化合物I是一個2009年發(fā)表(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗肝臟損傷活性進行了評價，其具有抗肝臟損傷活性。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為20％和80％。
本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗肝臟損傷作用。本發(fā)明的藥學上可接受的鹽具有同樣的藥效。
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
具體實施方式
實施例1 化合物Harrisotone A的制備
化合物Harrisotone A(I)的制備方法參照Sheng Yin等人發(fā)表的文獻(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的方法。
實施例2 Harrisotone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成
將化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏度攪拌3h。3h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌2次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(602mg，76％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C34H50Br3O6:793.1137；found 793.1134.
實施例3 Harrisotone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(III)的合成
1、Harrisotone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成
將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于22mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(252mg，1.5mmol)和二乙醇胺(1051mg，10mmol)，混合物加熱回流3h。反應結束后將反應液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集淡棕色集中洗脫帶即得到Harrisotone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的棕色固體(324.4mg,75％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.17(s,2H),4.27(s,2H),3.56(d,J＝2.7Hz,4H),3.38(d,J＝83.1Hz,14H),3.08(s,2H),3.04(s,4H),2.76–2.66(m,5H),2.61(s,12H),2.57(s,2H),2.40(s,3H),2.05(s,1H),1.93(s,1H),1.91–1.81(m,8H),1.76(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.28(s,2H),1.18(d,J＝12.0Hz,7H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.23(s),195.44(s),190.26(s),135.27(s),120.08(s),115.02(s),84.44(s),76.58(s),66.89(s),62.74(s),60.37(s),60.13(s),59.31(s),56.85(s),53.89(s),53.08(s),50.95(s),45.22(s),39.68(s),36.61(s),30.80(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.29(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.76(s),18.20(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C46H80N3O12:866.5742；found:866.5737。
Harrisotone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物
2、Harrisotone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(III)的合成
合成足夠多的Harrisotone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，將Harrisotone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(0.433g，0.5mmol)溶于4mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(2.38g，20mmol)，反應物加熱回流2h。將反應物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.3，v/v)，得到化合物III的淡黃色固體(302.3mg，62％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.14(s,2H),4.22(s,2H),3.68(d,J＝5.8Hz,12H),3.54(d,J＝5.3Hz,4H),3.06(s,2H),3.05(s,2H),3.03–2.68(m,18H),2.54–2.29(m,4H),2.24–2.05(m,1H),1.94(s,1H),1.90(s,1H),1.81(d,J＝5.0Hz,7H),1.71(d,J＝15.5Hz,7H),1.65(s,1H),1.56(s,1H),1.48(s,1H),1.15(d,J＝12.5Hz,7H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.12(s),197.88(s),195.10(s),189.91(s),134.93(s),119.73(s),114.68(s),84.09(s),76.24(s),66.54(s),62.40(s),60.02(s),59.79(s),55.91(s),53.54(s),52.74(s),50.60(s),44.88(s),39.33(d,J＝0.9Hz),36.27(s),30.45(d,J＝8.9Hz),28.43(s),24.94(s),23.75(d,J＝19.2Hz),22.41(s),17.86(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C46H74Cl6N3O6:976.3679；found:976.3675。
實施例4 Harrisotone A的O-(二(2-甲硫基乙基))乙基衍生物的合成
制備足夠多的化合物III，將化合物III(0.488g，0.5mmol)溶于15mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鈉(2.1g，30mmol)，反應物加熱回流1h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進行純化(石油醚/丙酮100:0.4，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.350g，67％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.15(s,2H),4.23(s,2H),3.54(d,J＝11.2Hz,4H),3.41(s,2H),3.06(s,2H),3.01–2.51(m,29H),2.37(s,3H),2.26–1.99(m,21H),1.90(s,1H),1.85–1.72(m,8H),1.70(s,6H),1.65(s,1H),1.55(d,J＝13.0Hz,2H),1.48(s,1H),1.41(s,1H),1.14(s,6H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.26(s),198.02(s),195.24(s),190.05(s),135.07(s),119.87(s),114.82(s),84.23(s),76.38(s),66.68(s),62.54(s),60.16(s),59.93(s),53.68(s),52.88(s),52.39(s),50.74(s),45.02(s),39.47(s),36.41(s),32.12(s),30.59(d,J＝8.9Hz),28.57(s),25.08(s),23.89(d,J＝19.2Hz),22.55(s),18.00(s),14.74(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C52H92N3O6S6:1046.5310；found:1046.5303。
實施例5 組合物防治肝損傷的作用
(一)組合物對D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)誘導的小鼠急性肝損傷的防護作用
組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的20mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的80mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。
小鼠分5組。對照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射生理鹽水(0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。D-GalN組、組合物3.0mg·kg-1組、化合物III組和化合物IV組分別以生理鹽水、組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射D-GalN(800mg·kg-1，0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。
表1組合物對D-GalN誘導的急性肝損傷的防護作用
注：1)p<0.01vs對照組，2)p<0.01vs D-GalN組
由表1可知，組合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升。化合物III和化合物IV無此作用。
(二)組合物對CCl4誘導的小鼠急性肝損傷的防護作用
小鼠分5組，對照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d-1)，連續(xù)5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g-1；CCl4組及組合物、化合物III和化合物IV給藥組(3.0mg·kg-1)分別以生理鹽水及組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d-1)，連續(xù)5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl4 0.1mL·10g-1。24h后處死動物，取血清測AST及ALT活力。
表2組合物對CCl4誘導的急性肝損傷的防護作用
注：1)p<0.01vs對照組，2)p<0.01vs CCl4組
由表2可知，組合物能抑制CCl4引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升?；衔颕II和化合物IV無此作用。
結論：組合物能有效保護D-GalN引起的小鼠肝損傷，組合物能有效保護CCl4引起的小鼠肝損傷，可以用來制備抗肝損傷藥物?；衔颕II和化合物IV不能有效保護D-GalN引起的小鼠肝損傷，不能有效保護CCl4引起的小鼠肝損傷，不可以用來制備抗肝損傷藥物。
實施例6 本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
實施例7 本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。