本發(fā)明涉及中藥制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及補(bǔ)骨脂種皮提取物及其提取方法。
背景技術(shù)：
：補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂的果實(shí)，是我國傳統(tǒng)中藥，臨床應(yīng)用廣泛。補(bǔ)骨脂具有溫腎助陽、納氣平喘、溫脾止瀉的功效，內(nèi)用治療腰膝冷痛、滑精、遺尿、虛寒咳嗽，外用治療白癜風(fēng)。現(xiàn)代藥理研究表明，補(bǔ)骨脂具有增加心肌收縮力、增強(qiáng)免疫、擴(kuò)張血管、抗菌、抗腫瘤、雌激素樣作用。文獻(xiàn)報(bào)道補(bǔ)骨脂中含有100多種化合物，主要包括香豆素、黃酮、單萜酚類化合物。香豆素類化合物主要包括補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂定等；黃酮類化合物主要有補(bǔ)骨脂甲素、補(bǔ)骨脂乙素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂寧、CorylifolA、CorylifolC等；單萜酚類化合物主要為補(bǔ)骨脂酚。雖然補(bǔ)骨脂具有多種功效，但是研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂同時(shí)也具有一定的肝臟毒性。研究表明，補(bǔ)骨脂中具有肝臟毒性的化合物主要為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素；當(dāng)補(bǔ)骨脂素或異補(bǔ)骨脂素的濃度較高時(shí)，長期服用易導(dǎo)致肝損傷。研究還發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷在人體腸道菌群作用下會(huì)轉(zhuǎn)化為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，使得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在人體中被大量吸收，從而導(dǎo)致肝損傷。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明人經(jīng)過廣泛的研究，出人意料的發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂中的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷主要存在于補(bǔ)骨脂的種仁中，而黃酮類化合物和單萜酚類化合物主要存在于補(bǔ)骨脂的種皮中，將補(bǔ)骨脂中的種仁除去，留下種皮，可去除大量的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷，保留黃酮類化合物和單萜酚類化合物，從而降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。基于此，本發(fā)明實(shí)施例的第一目的在于提供一種補(bǔ)骨脂種皮提取物，以降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。具體技術(shù)方案如下：一種補(bǔ)骨脂種皮提取物，所述補(bǔ)骨脂種皮提取物含有補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素；且所述補(bǔ)骨脂苷和所述異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.38％，所述補(bǔ)骨脂素和所述異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為3.9％～7.8％。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述補(bǔ)骨脂素和所述異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為5％～7％。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選實(shí)施方式中，所述補(bǔ)骨脂種皮提取物還含有質(zhì)量百分比含量為0.10％～0.93％的補(bǔ)骨脂香豆雌烷B，質(zhì)量百分比含量為0.25％～2.21％的CorylifolC，質(zhì)量百分比含量為0.11％～1.02％的巴庫查爾酮，質(zhì)量百分比含量為0.34％～3.09％的補(bǔ)骨脂甲素，質(zhì)量百分比含量為0.77％～6.92％的新補(bǔ)骨脂異黃酮，質(zhì)量百分比含量為0.82％～7.40％的補(bǔ)骨脂乙素，質(zhì)量百分比含量為0.48％～4.33％的CorylifolA，質(zhì)量百分比含量為0.17％～1.55％的補(bǔ)骨脂查爾酮，質(zhì)量百分比含量為11.14％～80％的補(bǔ)骨脂酚。本發(fā)明實(shí)施例的第二目的在于提供一種補(bǔ)骨脂種皮提取物的提取方法，包括以下步驟：將補(bǔ)骨脂的種皮和種仁分離，取種皮，將種皮研磨成粉末，用醇進(jìn)行提取，然后固液分離，將分離后的液體進(jìn)行溶劑回收，獲得所述補(bǔ)骨脂種皮提取物；其中，補(bǔ)骨脂種皮與所述醇的質(zhì)量體積比為0.01g/mL～0.1g/mL。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，將補(bǔ)骨脂加水浸泡12小時(shí)后，剝?nèi)》N皮，并將種皮晾干，然后將晾干的種皮研磨成粉末。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選實(shí)施方式中，所述醇為乙醇。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選實(shí)施方式中，所述提取為加熱回流提取。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選實(shí)施方式中，用醇加熱回流提取1小時(shí)～3小時(shí)后，放置至室溫，固液分離，分離得到的液體為第一提取液；將分離得到的固體用醇再加熱回流提取1小時(shí)～3小時(shí)后，放置至室溫，固液分離，分離得到的液體為第二提取液；將所述第一提取液和所述第二提取液混合后進(jìn)行溶劑回收，獲得所述補(bǔ)骨脂種皮提取物。在本發(fā)明的一種更為優(yōu)選實(shí)施方式中，采用減壓回收溶劑法對分離后的液體進(jìn)行溶劑回收。本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物，其中補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.38％，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為3.9％～7.8％，由此可見，具有潛在肝臟毒性物質(zhì)的含量是較低的，因此本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物可降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發(fā)明實(shí)施例中第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的超高效液相色譜圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中樣品1的種皮供試品溶液的超高效液相色譜圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中樣品1的種仁供試品溶液的超高效液相色譜圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例2中補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液的超高效液相色譜圖；圖5為本發(fā)明實(shí)施例中第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的超高效液相色譜圖；圖6為本發(fā)明實(shí)施例3中補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液的超高效液相色譜圖。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。本發(fā)明實(shí)施例提供了一種補(bǔ)骨脂種皮提取物，其含有補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素；且基于該補(bǔ)骨脂種皮提取物的總質(zhì)量，補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.38％，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為3.9％～7.8％，優(yōu)選為5％～7％。優(yōu)選的，上述補(bǔ)骨脂種皮提取物還含有質(zhì)量百分比含量為0.10％～0.93％的補(bǔ)骨脂香豆雌烷B，質(zhì)量百分比含量為0.25％～2.21％的CorylifolC，質(zhì)量百分比含量為0.11％～1.02％的巴庫查爾酮，質(zhì)量百分比含量為0.34％～3.09％的補(bǔ)骨脂甲素，質(zhì)量百分比含量為0.77％～6.92％的新補(bǔ)骨脂異黃酮，質(zhì)量百分比含量為0.82％～7.40％的補(bǔ)骨脂乙素，質(zhì)量百分比含量為0.48％～4.33％的CorylifolA，質(zhì)量百分比含量為0.17％～1.55％的補(bǔ)骨脂查爾酮，質(zhì)量百分比含量為11.14％～80％的補(bǔ)骨脂酚。需要說明的是，CorylifolC的結(jié)構(gòu)式如下所示：CorylifolA的結(jié)構(gòu)式如下所示：本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物，其中補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.38％，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為3.9％～7.8％，由此可見，具有潛在肝臟毒性物質(zhì)的含量是較低的，因此本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物可降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明實(shí)施例還提供了一種補(bǔ)骨脂種皮提取物的提取方法，包括以下步驟：將補(bǔ)骨脂的種皮和種仁分離，取種皮，將種皮研磨成粉末，用醇進(jìn)行提取，然后固液分離，將分離后的液體進(jìn)行溶劑回收，獲得所述補(bǔ)骨脂種皮提取物。其中，補(bǔ)骨脂種皮與所述醇的質(zhì)量體積比為0.01g/mL～0.1g/mL。在操作過程中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用刀片等工具將補(bǔ)骨脂的種皮和種仁分離，也可以先將補(bǔ)骨脂進(jìn)行浸泡，然后采用鑷子等工具將種皮和種仁分離，具體采用何種方法將補(bǔ)骨脂的種皮和種仁分離，本發(fā)明實(shí)施例在此不進(jìn)行限定。優(yōu)選的，將補(bǔ)骨脂加水浸泡12小時(shí)后，剝?nèi)》N皮，并將種皮晾干，然后將晾干的種皮研磨成粉末。提取所用的醇可以為甲醇、乙醇等，從安全無毒考慮，優(yōu)選為乙醇。提取方法可以采用加熱回流提取，也可以采用超聲提?。粌?yōu)選的，采用加熱回流提?。桓鼉?yōu)選的，可以采用以下方式進(jìn)行提?。河么技訜峄亓魈崛?小時(shí)～3小時(shí)后，放置至室溫，固液分離，分離得到的液體為第一提取液，將分離得到的固體用醇再加熱回流提取1小時(shí)～3小時(shí)后，放置至室溫，固液分離，分離得到的液體為第二提取液，將上述第一提取液和上述第二提取液混合后進(jìn)行溶劑回收，獲得補(bǔ)骨脂種皮提取物。上述提取過程中，優(yōu)選采用減壓回收溶劑法對分離后的液體進(jìn)行溶劑回收。下面將通過具體實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物及其提取方法進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例中所用的試劑均市售可得。實(shí)施例1～3中的各供試品溶液以及本發(fā)明實(shí)施例中的第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，均采用超高效液相色譜進(jìn)行測定，且所采用的色譜條件均相同，色譜條件具體如下：儀器：WatersACQUITYUPLCTMsystem超高效液相色譜儀；色譜柱：ACQUITYUPLCBEHC18(其中色譜柱中的填料粒徑為1.7μm，色譜柱內(nèi)徑為2.1mm，柱長為50mm)；柱溫：60℃，流速：0.3mL/分鐘，檢測波長：246nm，進(jìn)樣量：2μL流動(dòng)相：0.1％甲酸水溶液-甲醇，梯度洗脫，洗脫程序見表1。表1超高效液相色譜的梯度洗脫程序第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制及測定(a)第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制取補(bǔ)骨脂苷1.02mg，異補(bǔ)骨脂苷1.03mg，補(bǔ)骨脂素1.06mg，異補(bǔ)骨脂素1.04mg，補(bǔ)骨脂香豆雌烷B0.98mg，CorylifolC1.12mg，巴庫查爾酮1.03mg，補(bǔ)骨脂甲素1.01mg，新補(bǔ)骨脂異黃酮0.99mg，補(bǔ)骨脂寧1.21mg，補(bǔ)骨脂乙素1.13mg，補(bǔ)骨脂定1.08mg，4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定1.04mg，CorylifolA1.06mg，補(bǔ)骨脂查爾酮1.01mg，補(bǔ)骨脂酚1.00mg，精密稱定，分別置于1mL容量瓶中，用甲醇(體積百分比濃度為100％的甲醇)溶解并定容至刻度，分別獲得濃度為1.02mg/mL的補(bǔ)骨脂苷儲(chǔ)備液、1.03mg/mL的異補(bǔ)骨脂苷儲(chǔ)備液、1.06mg/mL的第一補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液、1.04mg/mL的第一異補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液、0.98mg/mL的第一補(bǔ)骨脂香豆雌烷B的儲(chǔ)備液、1.12mg/mL第一CorylifolC的儲(chǔ)備液、1.03mg/mL的第一巴庫查爾酮儲(chǔ)備液、1.01mg/mL的第一補(bǔ)骨脂甲素儲(chǔ)備液、0.99mg/mL的第一新補(bǔ)骨脂異黃酮儲(chǔ)備液、1.21mg/mL的補(bǔ)骨脂寧儲(chǔ)備液、1.13mg/mL的第一補(bǔ)骨脂乙素儲(chǔ)備液、1.08mg/mL的第一補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液、1.04mg/mL的第一4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液、1.06mg/mL的第一CorylifolA儲(chǔ)備液、1.01mg/mL的第一補(bǔ)骨脂查爾酮儲(chǔ)備液、1.00mg/mL的第一補(bǔ)骨脂酚儲(chǔ)備液，備用。分別取補(bǔ)骨脂苷儲(chǔ)備液400μL、異補(bǔ)骨脂苷儲(chǔ)備液400μL、第一補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液1000μL、第一異補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液1000μL，置于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得混合儲(chǔ)備液，備用。取第一補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、第一CorylifolC、第一巴庫查爾酮、第一補(bǔ)骨脂甲素、第一新補(bǔ)骨脂異黃酮儲(chǔ)備液、補(bǔ)骨脂寧、第一補(bǔ)骨脂乙素、第一補(bǔ)骨脂定、第一4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定、第一CorylifolA、第一補(bǔ)骨脂查爾酮、第一補(bǔ)骨脂酚儲(chǔ)備液各100μL，與上述混合儲(chǔ)備液1200μL，混勻，即得第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度分別為補(bǔ)骨脂苷40.8μg/mL、異補(bǔ)骨脂苷41.2μg/mL、補(bǔ)骨脂素106.00μg/mL、異補(bǔ)骨脂素104.00μg/mL、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B40.83μg/mL、CorylifolC46.67μg/mL、巴庫查爾酮42.92μg/mL、補(bǔ)骨脂甲素42.08μg/mL、新補(bǔ)骨脂異黃酮41.25μg/mL、補(bǔ)骨脂寧50.42μg/mL、補(bǔ)骨脂乙素47.08μg/mL、補(bǔ)骨脂定45.00μg/mL、4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定43.33μg/mL、CorylifolA44.17μg/mL、補(bǔ)骨脂查爾酮42.08μg/mL、補(bǔ)骨脂酚41.67μg/mL。(b)第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定采用超高效液相色譜對上述第一混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測定，得到的超高效液相色譜圖如圖1所示。對圖1中的各種化合物的色譜峰進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記為1～16的色譜峰依次為補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、CorylifolC、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂甲素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂寧、補(bǔ)骨脂乙素、補(bǔ)骨脂定、4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定、CorylifolA、補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂酚的色譜峰。其中，補(bǔ)骨脂定和4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定的峰在本發(fā)明實(shí)施例的色譜條件下難以分離，因此色譜圖中表現(xiàn)為同一個(gè)峰。實(shí)施例1用刀片分離補(bǔ)骨脂的種皮和種仁后，測定種皮和種仁中的化合物(a)分離種皮和種仁取4種補(bǔ)骨脂樣品，用刀片將補(bǔ)骨脂的種皮和種仁分離，然后分別稱重，結(jié)果見表2。表24種補(bǔ)骨脂樣品的種仁和種皮的質(zhì)量樣品號1234產(chǎn)地廣西河北河北河南種仁質(zhì)量(g)1.382.212.271.71種皮質(zhì)量(g)0.691.631.911.44總質(zhì)量(g)2.073.844.183.15種皮占總質(zhì)量的百分比(％)33.2942.4745.6945.77(b)分別制備種皮和種仁的供試品溶液取上述樣品1的種皮，用研缽研碎，得樣品1的種皮粉末；取上述樣品1的種皮粉末0.3g，精密稱定，置于100mL的容量瓶中，加適量甲醇，超聲提取0.5小時(shí)，放置至室溫，定容至刻度，搖勻，14000rpm離心10分鐘，取上清液1mL，然后加入1mL體積百分比濃度為30％的甲醇水溶液，混勻，即得樣品1的種皮供試品溶液。取上述樣品1的種仁，用研缽研碎，得樣品1的種仁粉末；取上述樣品1的種仁粉末0.25g，精密稱定，置于100mL的容量瓶中，加適量甲醇，超聲提取0.5小時(shí)，放置至室溫，定容至刻度，搖勻，14000rpm離心10分鐘，取上清液1mL，然后加入1mL體積百分比濃度為30％的甲醇水溶液，混勻，即得樣品1的種仁供試品溶液。按照上述步驟分別制備樣品2～4的種皮供試品溶液和種仁供試品溶液。(c)對各樣品的種皮和種仁供試品溶液進(jìn)行測定分別采用超高效液相色譜對上述樣品1～4的種皮供試品溶液和種仁供試品溶液進(jìn)行測定，共得到8張超高效液相色譜圖。圖2為樣品1的種皮供試品溶液的超高效液相色譜圖，圖3為樣品1的種仁供試品溶液的超高效液相色譜圖。圖2和圖3中的小圖為圖中虛線所示區(qū)域的放大圖。通過與圖1進(jìn)行對比，對圖2和圖3中的色譜峰進(jìn)行標(biāo)記，圖2和圖3中標(biāo)記為1～16的色譜峰依次為補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、CorylifolC、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂甲素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂寧、補(bǔ)骨脂乙素、補(bǔ)骨脂定、4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定、CorylifolA、補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂酚的色譜峰。分別從圖2和圖3中讀取各化合物的峰面積，按照下式計(jì)算樣品1中各化合物的Pi(％)和Pi＇(％)：Pi'＝1-Pi其中，i代表某種化合物，Pi為化合物i在種皮中的質(zhì)量占該化合物總量的百分比；Pi＇為化合物i在種仁中的質(zhì)量占該化合物總量的百分比，M為樣品1的種皮質(zhì)量；M＇為樣品1的種仁質(zhì)量；A為圖2中化合物i的峰面積；A＇為圖3中化合物i的峰面積；m為制備種皮供試品溶液時(shí)精密稱定的種皮的質(zhì)量；m＇為制備種仁供試品溶液時(shí)精密稱定的種仁的質(zhì)量。按照上述步驟計(jì)算獲得樣品2～4中各化合物的Pi和Pi＇。計(jì)算結(jié)果具體見表3。表3樣品1～4中各化合物的Pi和Pi＇由表3可以發(fā)現(xiàn)，用刀片分離補(bǔ)骨脂的種皮和種仁后，獲得的種仁中含有大部分的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷，部分補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂定和4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定，以及少量的黃酮和單萜酚類化合物；而大部分的黃酮和單萜酚類化合物存在于種皮中。由實(shí)施例1可見，補(bǔ)骨脂中的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷主要存在于補(bǔ)骨脂的種仁中，而黃酮類化合物和單萜酚類化合物主要存在于補(bǔ)骨脂的種皮中，因此將補(bǔ)骨脂中的種仁除去，留下種皮，可去除大量的補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷，保留黃酮類化合物和單萜酚類化合物，從而降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)施例2補(bǔ)骨脂種皮提取物的提取及測定(a)提取補(bǔ)骨脂種皮提取物取補(bǔ)骨脂，加水浸泡12小時(shí)，剝?nèi)》N皮，晾干，得補(bǔ)骨脂種皮36.2595g(種仁40.0672g)。將上述補(bǔ)骨脂種皮用研缽研碎，獲得補(bǔ)骨脂種皮粉末。取上述補(bǔ)骨脂種皮粉末15.0298g，置于250mL的圓底燒瓶中，加入150mL的乙醇，加熱回流提取1小時(shí)，放置至室溫，過濾，該濾液為第一提取液；將過濾得到的固體再置于250mL的圓底燒瓶中，加入150mL的乙醇，加熱回流提取1小時(shí)，放置至室溫，過濾，該濾液為第二提取液。將第一提取液和第二提取液混合，得到混合液，對上述混合液采用減壓回收溶劑法進(jìn)行溶劑回收后獲得浸膏狀的補(bǔ)骨脂種皮提取物5.8071g。(b)對補(bǔ)骨脂種皮提取物進(jìn)行測定取上述補(bǔ)骨脂種皮提取物0.2g，精密稱定，置于25mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。然后取該溶液1mL，置于25mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液。對上述補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液，采用超高效液相色譜進(jìn)行測定，得到的超高效液相色譜圖如圖4所示。通過與圖1對比，發(fā)現(xiàn)未檢測到補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的峰，這說明補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的含量低于該超高效液相色譜的檢測限，該超高效液相色譜對于補(bǔ)骨脂苷的檢測限為0.09μg/mL，對于異補(bǔ)骨脂苷的檢測限為0.10μg/mL，由此可以得知上述補(bǔ)骨脂種皮提取物中補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.059％。此外，通過與圖1對比，對圖4中的色譜峰進(jìn)行標(biāo)記，圖4中標(biāo)記為3～9、11、14～16的色譜峰依次為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、CorylifolC、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂甲素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂乙素、CorylifolA、補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂酚的色譜峰。為了對上述補(bǔ)骨脂種皮提取物中各種化合物的含量進(jìn)行精確測定，發(fā)明人配制了第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并對其進(jìn)行了測定。(c)第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制取補(bǔ)骨脂素1.06mg，異補(bǔ)骨脂素1.04mg，補(bǔ)骨脂香豆雌烷B1.00mg，CorylifolC1.00mg，巴庫查爾酮1.01mg，補(bǔ)骨脂甲素1.03mg，新補(bǔ)骨脂異黃酮0.99mg，補(bǔ)骨脂乙素1.00mg，補(bǔ)骨脂定1.04mg，4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定1.03mg，CorylifolA1.00mg，補(bǔ)骨脂查爾酮1.01mg，補(bǔ)骨脂酚8.87mg，精密稱定，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分別獲得濃度為0.106mg/mL的第二補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液、0.104mg/mL的第二異補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液、0.100mg/mL的第二補(bǔ)骨脂香豆雌烷B的儲(chǔ)備液、0.100mg/mL第二CorylifolC的儲(chǔ)備液、0.101mg/mL的第二巴庫查爾酮儲(chǔ)備液、0.103mg/mL的第二補(bǔ)骨脂甲素儲(chǔ)備液、0.099mg/mL的第二新補(bǔ)骨脂異黃酮儲(chǔ)備液、0.100mg/mL的第二補(bǔ)骨脂乙素儲(chǔ)備液、0.104mg/mL的第二補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液、0.103mg/mL的第二4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液、0.100mg/mL的第二CorylifolA儲(chǔ)備液、0.101mg/mL的第二補(bǔ)骨脂查爾酮儲(chǔ)備液、0.887mg/mL的第二補(bǔ)骨脂酚儲(chǔ)備液，備用。分別取第二補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液960μL、第二異補(bǔ)骨脂素儲(chǔ)備液836μL、第二補(bǔ)骨脂香豆雌烷B儲(chǔ)備液98μL、第二CorylifolC儲(chǔ)備液225μL、第二巴庫查爾酮儲(chǔ)備液37μL、第二補(bǔ)骨脂甲素儲(chǔ)備液318μL、第二新補(bǔ)骨脂異黃酮儲(chǔ)備液677μL、第二補(bǔ)骨脂乙素儲(chǔ)備液546μL、第二補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液280μL、第二4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定儲(chǔ)備液320μL、第二CorylifolA儲(chǔ)備液440μL、第二補(bǔ)骨脂查爾酮儲(chǔ)備液44μL、第二補(bǔ)骨脂酚儲(chǔ)備液1000μL，置于同一10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度分別為補(bǔ)骨脂素10.18μg/mL、異補(bǔ)骨脂素8.69μg/mL、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B0.98μg/mL、CorylifolC2.25μg/mL、巴庫查爾酮0.37μg/mL、補(bǔ)骨脂甲素3.28μg/mL、新補(bǔ)骨脂異黃酮6.70μg/mL、補(bǔ)骨脂乙素5.46μg/mL、補(bǔ)骨脂定2.91μg/mL、4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定3.30μg/mL、CorylifolA4.40μg/mL、補(bǔ)骨脂查爾酮0.44μg/mL、補(bǔ)骨脂酚88.7μg/mL。(d)第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定采用超高效液相色譜對上述第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測定，得到的超高效液相色譜圖如圖5所示。對圖5中的各種化合物的色譜峰進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記為3～9、11～16的色譜峰依次為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、CorylifolC、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂甲素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂乙素、補(bǔ)骨脂定、4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定、CorylifolA、補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂酚的色譜峰。其中，補(bǔ)骨脂定和4″,5″-去氫異補(bǔ)骨脂定的峰在本發(fā)明實(shí)施例的色譜條件下難以分離，因此色譜圖中表現(xiàn)為同一個(gè)峰。(e)計(jì)算各化合物在補(bǔ)骨脂種皮提取物中的質(zhì)量百分比含量從圖4、圖5中分別讀取各化合物的峰面積，按照下式計(jì)算得到補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液中化合物i的濃度Ci(μg/mL)：Ci＝(C標(biāo)*Ai)/A標(biāo)其中，C標(biāo)為第二混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液中化合物i的濃度(μg/mL)，Ai為圖4中化合物i的峰面積，A標(biāo)為圖5中化合物i的峰面積。然后再按照下式將上述濃度Ci換算成質(zhì)量百分比含量Ci＇(％)：Ci＇＝(Ci*25*25*10-6*100％)/m1其中，m1為在制備補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液時(shí)精密稱定的補(bǔ)骨脂種皮提取物的質(zhì)量。通過上述計(jì)算得到各化合物在補(bǔ)骨脂種皮提取物中的質(zhì)量百分比含量Ci＇具體如下：補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量為3.146％、異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量為3.043％、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B的質(zhì)量百分比含量為0.312％、CorylifolC的質(zhì)量百分比含量為0.715％、巴庫查爾酮的質(zhì)量百分比含量為0.337％、補(bǔ)骨脂甲素的質(zhì)量百分比含量為1.031％、新補(bǔ)骨脂異黃酮的質(zhì)量百分比含量為2.299％、補(bǔ)骨脂乙素的質(zhì)量百分比含量為2.469％、CorylifolA的質(zhì)量百分比含量為1.441％、補(bǔ)骨脂查爾酮的質(zhì)量百分比含量為0.486％、補(bǔ)骨脂酚的質(zhì)量百分比含量為33.464％。實(shí)施例3補(bǔ)骨脂種皮提取物的提取及測定(a)提取補(bǔ)骨脂種皮提取物取補(bǔ)骨脂，加水浸泡12小時(shí)，剝?nèi)》N皮，晾干，得補(bǔ)骨脂種皮36.2595g(種仁40.0672g)。將上述補(bǔ)骨脂種皮用研缽研碎，獲得補(bǔ)骨脂種皮粉末。取上述補(bǔ)骨脂種皮粉末15.0362g，置于250mL的圓底燒瓶中，加入150mL的乙醇，加熱回流提取1小時(shí)，放置至室溫，過濾，該濾液為第一提取液；將過濾得到的固體再置于250mL的圓底燒瓶中，加入150mL的乙醇，加熱回流提取1小時(shí)，放置至室溫，過濾，該濾液為第二提取液。將第一提取液和第二提取液混合，得到混合液，對上述混合液采用減壓回收溶劑法進(jìn)行溶劑回收后獲得浸膏狀的補(bǔ)骨脂種皮提取物5.5711g。(b)對補(bǔ)骨脂種皮提取物進(jìn)行測定取上述補(bǔ)骨脂種皮提取物0.2g，精密稱定，置于25mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。然后取該溶液1mL，置于25mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液。對上述補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液，采用超高效液相色譜進(jìn)行測定，得到的超高效液相色譜圖如圖6所示。通過與圖1對比，發(fā)現(xiàn)未檢測到補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的峰，這說明補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的含量低于該超高效液相色譜的檢測限，由此可以得知上述補(bǔ)骨脂種皮提取物中補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.059％。此外，通過與圖1對比，對圖6中的色譜峰進(jìn)行標(biāo)記，圖6中標(biāo)記為3～9、11、14～16的色譜峰依次為補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B、CorylifolC、巴庫查爾酮、補(bǔ)骨脂甲素、新補(bǔ)骨脂異黃酮、補(bǔ)骨脂乙素、CorylifolA、補(bǔ)骨脂查爾酮、補(bǔ)骨脂酚的色譜峰。從圖5、圖6中分別讀取各化合物的峰面積，按照上述Ci的計(jì)算公式計(jì)算得到補(bǔ)骨脂種皮提取物的供試品溶液中化合物i的濃度Ci，然后再按照上述Ci＇的計(jì)算公式將Ci換算成質(zhì)量百分比含量Ci＇。計(jì)算得到各化合物在補(bǔ)骨脂種皮提取物中的質(zhì)量百分比含量Ci＇具體如下：補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量為3.129％、異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量為3.037％、補(bǔ)骨脂香豆雌烷B的質(zhì)量百分比含量為0.312％、CorylifolC的質(zhì)量百分比含量為0.759％、巴庫查爾酮的質(zhì)量百分比含量為0.342％、補(bǔ)骨脂甲素的質(zhì)量百分比含量為1.031％、新補(bǔ)骨脂異黃酮的質(zhì)量百分比含量為2.312％、補(bǔ)骨脂乙素的質(zhì)量百分比含量為2.464％、CorylifolA的質(zhì)量百分比含量為1.444％、補(bǔ)骨脂查爾酮的質(zhì)量百分比含量為0.550％、補(bǔ)骨脂酚的質(zhì)量百分比含量為33.365％。由實(shí)施例2和實(shí)施例3可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物中，補(bǔ)骨脂苷和異補(bǔ)骨脂苷的質(zhì)量百分比含量之和小于0.38％，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量百分比含量之和為3.9％～7.8％，也就是說，具有潛在肝臟毒性物質(zhì)的含量是較低的，因此本發(fā)明實(shí)施例提供的一種補(bǔ)骨脂種皮提取物可降低肝臟毒性風(fēng)險(xiǎn)。需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關(guān)系術(shù)語僅僅用來將一個(gè)實(shí)體或者操作與另一個(gè)實(shí)體或操作區(qū)分開來，而不一定要求或者暗示這些實(shí)體或操作之間存在任何這種實(shí)際的關(guān)系或者順序。而且，術(shù)語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設(shè)備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個(gè)……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。本說明書中的各個(gè)實(shí)施例均采用相關(guān)的方式描述，各個(gè)實(shí)施例之間相同相似的部分互相參見即可，每個(gè)實(shí)施例重點(diǎn)說明的都是與其他實(shí)施例的不同之處。尤其，對于系統(tǒng)實(shí)施例而言，由于其基本相似于方法實(shí)施例，所以描述的比較簡單，相關(guān)之處參見方法實(shí)施例的部分說明即可。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3