本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

氧是人類(lèi)及許多生物賴(lài)以生存的重要條件。低氧(Hypoxia)是指機(jī)體生命活動(dòng)所需的氧不能得到充足的供給。氧和低氧是生命活動(dòng)最重要的關(guān)鍵因素，是生命科學(xué)基本理論的重要課題。低氧的形成可分為三類(lèi)：第一類(lèi)是外界環(huán)境氧含量降低，使正常生理活動(dòng)過(guò)程不能攝取足夠氧，如高原和航空缺氧；第二類(lèi)是指因疾病等導(dǎo)致外界正常氧量不能充分到達(dá)機(jī)體內(nèi)，造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等的缺氧；第三類(lèi)是機(jī)體活動(dòng)所需氧消耗量，超過(guò)了生理動(dòng)員能力，造成相對(duì)氧供給不足，常見(jiàn)于劇烈運(yùn)動(dòng)和超限量勞動(dòng)。長(zhǎng)期低氧是危害人體健康的重要隱患，嚴(yán)重者可危及生命。因此，低氧造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等損傷已成為21世紀(jì)醫(yī)學(xué)界急待解決的主要問(wèn)題之一。

從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2009年發(fā)表(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物的抗缺氧活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗缺氧活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為35％和65％。

本發(fā)明公開(kāi)的化合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗缺氧作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Atropurpuran的制備

化合物Atropurpuran(I)的制備方法參照Pei Tang等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的方法。

實(shí)施例2 Atropurpuran的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(312mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌6h。6h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(309mg，74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),5.23(s,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H),4.39(s,1H),4.00(s,2H),3.91(s,1H),3.58(s,2H),3.01(s,1H),2.27(s,1H),2.15(d,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.00(m,5H),1.78(dd,J＝35.2,19.2Hz,2H),1.71–1.65(m,1H),1.41(s,2H),0.99(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.55(s),203.16(s),150.94(s),125.16(s),111.66(s),78.63(s),71.39(s),57.77(s),47.73(s),40.79(s),34.58(s),33.01(s),32.69(s),29.25(s),29.34(s),26.52(s),24.23(s),22.30(s),20.64(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₂₂H₂₈BrO₃:419.1222；found 419.1226.

實(shí)施例3 Atropurpuran的O-(二乙胺基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于10mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙胺(2920mg，40mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的棕色固體(152mg,74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),5.12(s,1H),4.77(s,1H),4.72(s,1H),4.43(s,1H),3.74(s,1H),3.47(s,2H),2.91(s,1H),2.82(s,4H),2.57(s,2H),2.16(s,1H),2.04(s,1H),1.98–1.84(m,5H),1.74–1.68(m,4H),1.24(s,2H),1.07(s,6H),0.88(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.41(s),203.13(s),150.80(s),125.13(s),111.52(s),78.60(s),66.92(s),57.74(s),52.16(s),47.59(s),47.36(s),40.76(s),34.44(s),32.55(s),29.22(s),28.98(s),26.38(s),24.20(s),22.16(s),20.61(s),11.96(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₈N₁O₃:412.2852；found:412.2849。

實(shí)施例4 Atropurpuran的O-(二(2-甲硫基乙基))乙基衍生物的合成

1、Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙醇胺(1051mg，10mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集淺棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的黃色固體(159.5mg,72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),5.13(s,1H),4.61(d,J＝10.5Hz,2H),4.25(s,1H),3.75(s,1H),3.54(s,2H),3.36(s,4H),2.89(s,1H),2.62(s,2H),2.51(s,4H),2.32(s,2H),2.17(s,1H),2.05(s,1H),1.95(dd,J＝13.4,11.6Hz,4H),1.78(s,1H),1.76–1.69(m,4H),1.44(s,2H),0.89(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.46(s),203.18(s),150.85(s),125.18(s),111.57(s),78.65(s),67.01(s),58.86(s),57.79(s),56.41(s),53.21(s),47.64(s),40.81(s),34.49(s),32.60(s),29.27(s),29.03(s),26.43(s),24.25(s),22.21(s),20.66(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₈N₁O₅:444.2750；found:444.2744。

Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物

2、Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

合成足夠多的Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，將Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(0.222g，0.5mmol)溶于6mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(2.38g，20mmol)，反應(yīng)物加熱回流3h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過(guò)量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.5，v/v)，得到化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的淡黃色固體(143.7mg，60％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),5.11(s,1H),4.76(s,1H),4.71(s,1H),4.59(s,1H),3.84(s,1H),3.66(s,4H),3.53(s,2H),2.93(s,1H),2.76(s,2H),2.68(s,2H),2.61(s,2H),2.16(s,1H),2.04(s,1H),1.95(dd,J＝21.9,12.0Hz,4H),1.77(s,1H),1.71(d,J＝5.4Hz,2H),1.46(d,J＝17.9Hz,4H),0.89(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.41(s),203.13(s),150.80(s),125.13(s),111.52(s),78.60(s),66.96(s),57.74(s),55.76(s),53.16(s),47.59(s),40.76(s),39.18(s),34.44(s),32.55(s),29.22(s),28.98(s),26.38(s),24.20(s),22.16(s),20.61(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₆Cl₂N₁O₃:480.2072；found:480.2069。

Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

3、Atropurpuran的O-(二(2-甲硫基乙基))乙基衍生物的合成

制備足夠多的化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物，將化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(0.240g，0.5mmol)溶于12mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鈉(2.1g，30mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進(jìn)行純化(石油醚/丙酮100:0.5，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.153g，61％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),5.13(s,1H),4.68–4.58(m,3H),3.84(s,1H),3.54(s,2H),2.94(s,1H),2.64(s,2H),2.58(d,J＝9.4Hz,8H),2.18(s,1H),2.08–1.91(m,11H),1.89–1.62(m,3H),1.48(d,J＝18.3Hz,4H),0.91(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.56(s),203.28(s),150.85(s),125.28(s),111.67(s),78.75(s),67.11(s),57.89(s),53.31(s),52.25(s),47.74(s),40.91(s),34.59(s),32.70(s),31.98(s),29.37(s),29.13(s),26.53(s),24.35(s),22.31(s),20.76(s),14.60(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₈H₄₂N₁O₃S₂:504.2606；found:504.2600。

實(shí)施例5小鼠特異性心肌缺氧實(shí)驗(yàn)

1、方法：

組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的35mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的65mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

50只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機(jī)分為5組，灌胃給藥。前2組給予0.3％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分貝給予化合物III、化合物IV和組合物，50min后，除第1組外，均腹腔注射異丙腎上腺素(ISO)15mg·Kg^-1，15min后，將小鼠放入常壓缺氧裝置中，記錄小鼠死亡時(shí)間及耗氧量。

結(jié)果：

異丙腎上腺素可通過(guò)興奮心臟β受體，使心肌耗氧量增加。本實(shí)驗(yàn)顯示，與溶媒對(duì)照組相比，組合物0.010g·Kg^-1能顯著對(duì)抗異丙腎上腺素(ISO)導(dǎo)致的心肌耗氧量增加(P<0.01)，同時(shí)延長(zhǎng)小鼠缺氧密閉狀態(tài)下的存活時(shí)間(P<0.01)，結(jié)果見(jiàn)表1。而化合物III和化合物IV均不具備此作用。

表1待試物對(duì)異丙腎上腺素致特異性缺氧小鼠的影響(x，n＝10)

注：¹⁾P<0.01，與對(duì)照組比較，²⁾P<0.01，與異丙腎上腺素組比較。

實(shí)施例6小鼠常壓窒息性缺氧實(shí)驗(yàn)

1、方法：

40只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機(jī)分為4組，灌胃給藥。第1組給予0.3％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分別給予含組合物、化合物III和化合物IV的CMC-Na溶液，濃度為0.010g·Kg^-1。給藥50min后，置于廣口瓶中并蓋緊瓶塞(瓶?jī)?nèi)放置5g鈉石灰)。以呼吸停止為標(biāo)志，記錄小鼠存活時(shí)間。

2、結(jié)果：

與溶媒對(duì)照組相比，組合物的0.010g·Kg^-1使小鼠在常壓密閉條件下的存活時(shí)間延長(zhǎng)了45.16％，差異具有顯著性(P<0.01)，而化合物III和化合物IV均未能使小鼠在常壓密閉條件下的存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)。

實(shí)施例7小鼠減壓缺氧實(shí)驗(yàn)

1、方法：

40只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機(jī)分為4組，灌胃給藥。給藥組分別給予組合物、化合物III和化合物IV，濃度為0.010g·Kg^-1，對(duì)照組給予0.3％CMC-Na溶液，灌胃體積均為2ml·Kg^-1。50min后，各給藥組和對(duì)照組各取5只，放入減壓裝置中，在26.7Kpa(相當(dāng)于海拔約10000m)時(shí)停止減壓，保持此壓力不變，待對(duì)照組動(dòng)物死亡80％時(shí)，立即停止減壓，緩緩放入空氣，取出動(dòng)物，記錄各組死亡及存活數(shù)目，重復(fù)操作至實(shí)驗(yàn)完成。

2、結(jié)果：

組合物0.010g·Kg^-1使小鼠在減壓缺氧條件下的存活率由對(duì)照組的20％提高至50％，差異具有顯著性(P<0.05)；而化合物III和化合物IV對(duì)小鼠在減壓缺氧條件下的存活率為20％，均未有提高。

結(jié)論：組合物可顯著提高異丙腎上腺素致特異性缺氧的存活時(shí)間，窒息性缺氧和急性減壓缺氧小鼠的存活率，提供了組合物在制備抗缺氧藥物中的用途。而化合物III和化合物IV均不具有上述活性。

實(shí)施例8本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例9本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。