本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種柿葉提取物在制備防治老年癡呆的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，65歲以上老年人的阿爾茨海默病(alzheimer's disease，AD)的發(fā)病率在1-2％之間，且隨著年齡的增加AD的發(fā)病率也呈現(xiàn)增加的趨勢。AD是一種多病機(jī)異質(zhì)性疾病，具有特征性神經(jīng)病理和神經(jīng)化學(xué)改變，是常見的老年慢性退行性神經(jīng)疾病。臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶減退、認(rèn)知障礙、并可伴有行為和個性的改變，這嚴(yán)重危害了老年人的生活質(zhì)量，也給患者家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。

AD的發(fā)病原因目前仍不清楚，但得到大家公認(rèn)的是AD應(yīng)是多種因素共同作用的結(jié)果，與其相關(guān)的危險因素主要有以下幾個方面：①人口學(xué)因素，②生活方式，③血管因素，④遺傳因素等。AD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，主要有以下幾種假說[Brain research.2009,1280:137-147]：①Aβ級聯(lián)反應(yīng)假說，②神經(jīng)血管假說，③神經(jīng)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，④膽堿能假說，還有基因組假說、高膽固醇假說、雌激素假說、凋亡假說等。但所有的假說均不能單獨完全明確的解釋AD的發(fā)病機(jī)理。

正因為AD的病變還未完全明確，現(xiàn)在關(guān)于AD的治療方法也是多方面的，其中膽堿酯酶抑制藥，如他克林(tacrine)、多奈哌齊(donepezil)、利斯的明(rivastigmine)、加藍(lán)他敏(galantamine)，此外，我國自行研制的天然藥物石杉堿甲(huperzine A)，仍然是臨床上首選的治療方法。但這些藥物只能改善患者的認(rèn)知、記憶功能障礙等癥狀，并且作用靶點單一，并不能從根本上阻斷AD的發(fā)展進(jìn)程，因此尋找新的有效治療AD的藥物仍是廣大醫(yī)藥學(xué)者重要的研究目標(biāo)。

中醫(yī)理論認(rèn)為老年癡呆癥發(fā)病的關(guān)鍵是瘀痰阻竅，傳統(tǒng)中藥治療方法在中國已有幾千年的應(yīng)用歷史，由于其含有多種有效成分，具有的多靶點、多環(huán)節(jié)、協(xié)同作用的特點，因而在治療AD方面成為最具潛力的方法之一。

柿葉藥用歷史悠久，現(xiàn)收載于《中國藥典》2015年版一部、湖南省(1993年版)和廣西省(1990年版)中藥材標(biāo)準(zhǔn)中，柿葉為柿樹科植物柿Diospyros kaki Thunb.的干燥葉子，味苦、酸、澀，性涼；能清肺止咳，涼血止血，活血化瘀，降血壓。用于咳喘，肺脹，各種內(nèi)出血，高血壓，腦動脈硬化癥，冠心病。

現(xiàn)代研究表明，柿葉中主要含有黃酮類、三萜類、酚酸類和脂肪酸等化學(xué)成分，迄今為止，文獻(xiàn)報道從柿葉中一共分離得到90余個化合物。其中，包括從柿葉中分離得到24個黃酮類化合物，分別以槲皮素(quercetin)、山柰酚(kampferol)、楊梅素(myricetin)、牡荊素(vitexin)中的一種為苷元；33個三萜化合物，分別以烏索烷(ursane)、齊墩果烷(oleanane)、羽扇豆烷(lupane)中的一種為苷元[Journal of Ethnopharmacology,2015,163,229-240]。

Chen等研究表明：柿葉中分離得到的三葉豆苷、黃芪苷等5種黃酮化合物以及α-香樹脂醇、烏蘇醇等5種三萜化合物對人體嗜中性粒細(xì)胞中由N-甲?；?甲二磺酰基-亮氨酸基-苯基丙氨酸(fMLP)誘導(dǎo)的過氧化物產(chǎn)生及蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基的磷酸化有抑制作用[Clinica Chimica Acat.2002,362(1-2):169-175；Clinica Chimica Acat.2002,320(1-2):11-16]。Sun等報道：柿葉總黃酮對腦缺血再灌注損傷、興奮性神經(jīng)毒損傷具有較好的神經(jīng)保護(hù)作用，并且此作用主要與調(diào)節(jié)氧化還原反應(yīng)平衡及抗細(xì)胞凋亡有關(guān)[Food and Chemical Toxicology.2011,49:2689-2696]。Bei等研究表明：柿葉總黃酮對谷胺酸和缺氧誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元損傷具有明顯的保護(hù)作用，并且此效果與其抗氧化作用有關(guān)[Journal of Ethnopharmacology.2009,126:132-142]。表明柿葉中的黃酮、三萜化合物在氧化應(yīng)激反應(yīng)、神經(jīng)保護(hù)方面具有潛在的藥用價值。

近年來，國內(nèi)開展了一些針對柿葉在清除自由基、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、抑制血栓形成、抗動脈粥樣硬化等方面[Journal of Ethnopharmacology.2015,163,229-240]與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的中藥藥理研究，取得了階段性的成果，顯示柿葉特有的優(yōu)勢，為擴(kuò)大柿葉臨床應(yīng)用范圍提供了寶貴的經(jīng)驗。目前我國柿葉產(chǎn)品有腦心清片、膠囊等，皆為用于防治腦缺血中風(fēng)等心腦血管的藥物，而對于抗AD作用的藥物開發(fā)研究并未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于背景技術(shù)存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出了一種柿葉提取物在制備防治老年癡呆的藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明發(fā)掘了柿葉提取物新的用途，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍。所述柿葉提取物可作為預(yù)防和治療老年癡呆的藥物；可和適當(dāng)?shù)乃幱幂o料制成各種劑型，適宜開發(fā)成中藥新藥。

本發(fā)明提出了一種柿葉提取物在制備防治老年癡呆的藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述老年癡呆包括阿爾茨海默病、血管性癡呆和混合型癡呆。

優(yōu)選地，所述老年癡呆為阿爾茨海默病。

優(yōu)選地，所述藥物的劑型為片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、微丸劑、顆粒劑、凍干粉針、注射劑和/或輸液劑。

優(yōu)選地，所述柿葉提取物的制備方法為：取干燥柿葉，用乙醇水溶液浸泡，然后加入乙醇水溶液回流，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取，取水相，再加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相，濃縮，干燥得到柿葉提取物。

優(yōu)選地，所述柿葉提取物的制備方法為：取干燥柿葉，用以柿葉重量為基準(zhǔn)1-1.5倍的乙醇水溶液浸泡2-5h，然后加入以柿葉重量為基準(zhǔn)8-12倍的乙醇水溶液回流2-3次，每次回流2-3h，合并回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取2-5次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取2-5次，合并乙酸乙酯相，濃縮，干燥得到柿葉提取物。

優(yōu)選地，乙醇水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60-90wt％。

優(yōu)選地，石油醚的沸程為60-90℃。

優(yōu)選地，干燥為減壓干燥，干燥溫度為40-60℃。

優(yōu)選地，所述柿葉提取物中總黃酮的含量為30-50wt％，總?cè)频暮繛?0-50wt％。

上述柿葉提取物為淺黃色粉末，微溶于水，易溶于乙酸乙酯、乙醇、甲醇，氣微味苦。

上述柿葉提取物的制備方法的收率為3-5wt％。

上述柿葉提取物的制備方法中，水、石油醚、乙酸乙酯的作用是萃取，不規(guī)定他們的用量。

上述乙醇、石油醚、乙酸乙酯均可回收再利用。

本發(fā)明人將所制得的柿葉提取物進(jìn)行細(xì)胞實驗和動物實驗，細(xì)胞實驗結(jié)果如下：MTT法檢測結(jié)果顯示柿葉提取物明顯減輕Aβ_25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡；hoechest33258染色和細(xì)胞流式實驗也驗證了上述結(jié)果；用Western-blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示柿葉提取物能顯著降低凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達(dá)水平、升高抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平，和模型組有顯著性差異；細(xì)胞實驗表明柿葉提取物具有保護(hù)PC12細(xì)胞拮抗Aβ_25-35損傷的作用，可以用于腦神經(jīng)的保護(hù)，柿葉提取物對于老年癡呆疾病具有一定的延緩作用。

動物實驗結(jié)果如下：大鼠海馬區(qū)注射2μL的Aβ_1-42(5μg/μL，0.2μL/min)建立老年癡呆模型，水迷宮實驗結(jié)果顯示，與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯降低大鼠的潛伏期，增加通過目標(biāo)象限的次數(shù)及延長在目標(biāo)象限所待的時間。跳臺實驗中，與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯延長大鼠潛伏期，減少受到電擊的次數(shù)。動物實驗表明柿葉提取物對Aβ_1-42誘導(dǎo)的老年癡呆大鼠記憶功能損傷具有明顯的保護(hù)作用。

上述試驗結(jié)果表明：柿葉提取物可用于制備抗老年癡呆的藥物，以預(yù)防和治療老年癡呆。這種作用與柿葉提取物中的黃酮類和三萜類成分起協(xié)同作用有關(guān)。柿葉資源豐富，其有效部位總黃酮和總?cè)坪恐痛笥?0wt％，其具有確切的抗老年癡呆藥理作用，適宜將柿葉提取物開發(fā)為中藥新藥。

本發(fā)明發(fā)掘了柿葉提取物新的用途，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍。所述柿葉提取物可作為預(yù)防和治療老年癡呆的藥物；可和適當(dāng)?shù)乃幱幂o料制成各種劑型，適宜開發(fā)成中藥新藥。

附圖說明

圖1為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響的hochest染色法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。

圖2為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響的細(xì)胞流式法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。

圖3為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞蛋白表達(dá)水平的影響的蛋白免疫印跡法檢測圖，其中，a為Bax蛋白、b為Caspase-3蛋白、c為Bcl-2蛋白。

具體實施方式

下面，通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。

實施例1

柿葉提取物的制備：取干燥柿葉，用以柿葉重量為基準(zhǔn)1.3倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70wt％乙醇水溶液浸泡4h，然后加入以柿葉重量為基準(zhǔn)10倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70wt％乙醇水溶液回流2次，每次回流2h，合并回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取3次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，濃縮，調(diào)節(jié)溫度為50℃，減壓干燥得到柿葉提取物，收率為3.2％。

柿葉提取物的定性鑒別：

以環(huán)己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸體積比為8：3.5：4.5：0.2的混合溶液為展開劑，用原位預(yù)處理-薄層色譜法對柿葉提取物中的齊墩果酸、熊果酸定性鑒別；以甲苯、甲酸乙酯、甲酸體積比為7：6：1.5的混合溶液為展開劑，用薄層色譜法對柿葉提取物中的蘆丁、金絲桃苷、槲皮素和山柰酚進(jìn)行定性鑒別。

柿葉提取物中的總黃酮、總?cè)频暮繙y定：

以0.1mol/L AlCl₃·6H₂O1.0mL為顯色系統(tǒng)，以蘆丁為對照品，用紫外分光光度法測定柿葉提取物中總黃酮含量為38.5wt％；以0.5mL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5wt％香草醛冰醋酸溶液和1mL高氯酸為顯色系統(tǒng)，以熊果酸為對照品，用紫外分光光度法測定柿葉提取物中總?cè)坪繛?5.5wt％。

實施例2

柿葉提取物的制備：取干燥柿葉，用以柿葉重量為基準(zhǔn)1.5倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60wt％乙醇水溶液浸泡5h，然后加入以柿葉重量為基準(zhǔn)12倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60wt％乙醇水溶液回流3次，每次回流3h，合并回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取4次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相，濃縮，調(diào)節(jié)溫度為60℃，減壓干燥得到柿葉提取物，收率為3.7％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為35.5wt％，總?cè)坪繛?1.2wt％。

實施例3

柿葉提取物的制備：取干燥柿葉，用以柿葉重量為基準(zhǔn)1.1倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80wt％乙醇水溶液浸泡3h，然后加入以柿葉重量為基準(zhǔn)8倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80wt％乙醇水溶液回流2次，每次回流2h，合并回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取5次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯相，濃縮，調(diào)節(jié)溫度為40℃，減壓干燥得到柿葉提取物，收率為3.0％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為32.4wt％，總?cè)坪繛?3.1wt％。

實施例4

柿葉提取物的制備：取干燥柿葉，用以柿葉重量為基準(zhǔn)1倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90wt％乙醇水溶液浸泡2h，然后加入以柿葉重量為基準(zhǔn)9倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90wt％乙醇水溶液回流3次，每次回流2.5h，合并回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取2次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相，濃縮，調(diào)節(jié)溫度為45℃，減壓干燥得到柿葉提取物，收率為2.9％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為32.8wt％，總?cè)坪繛?1.3wt％。

實施例5

取實施例1制得的柿葉提取物，進(jìn)行柿葉提取物的細(xì)胞實驗。

柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的AD模型的保護(hù)作用實驗如下：

1實驗材料：

實施例1制得的柿葉提取物；PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤)株購于北京協(xié)和細(xì)胞資源中心；Aβ25-35(β樣淀粉蛋白25-35，大連美侖生物技術(shù)有限公司)；Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒[貝博(上海)公司]；BCA蛋白濃度測定試劑盒、PBS緩沖液、RIPA裂解液(弱)、SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液、青霉素-鏈霉素溶液、胰蛋白酶(Trypsin)(江蘇碧云天生物技術(shù)研究所)；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)(美國Gibco公司)；二甲基亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、Hochest33258(美國Sigma公司)；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)(美國Milliproe公司)；超敏感底物發(fā)光試劑盒(Thermo公司)；磷酸鹽緩沖液(PBS)、鼠抗β-actin抗體、山羊抗兔IgG/HRP和山羊抗鼠IgG/HRP(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；兔抗Bax抗體、兔抗Bcl-2抗體、兔抗Caspase-3抗體(北京Bioss公司)。

2分組及處理：

將PC12細(xì)胞分為5組，分別為對照組、模型組、柿葉提取物低劑量組(5μg/mL)、柿葉提取物中劑量組(10μg/mL)和柿葉提取物高劑量組(20μg/mL)，每組設(shè)3個副孔。細(xì)胞種板隔夜后，換液，各劑量組分別加入含有相應(yīng)濃度柿葉提取物的培養(yǎng)基，對照組和模型組加等量的培養(yǎng)基，均孵育2h，各劑量組和模型組中均加入終濃度為30μM的Aβ_25-35繼續(xù)培養(yǎng)24h。

3檢測與結(jié)果：

3.1采用MTT法測定不同濃度的柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，結(jié)果見表1。

表1柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用結(jié)果(n＝3)

上述^##P<0.01,與對照組比較；^*P<0.05,**P<0.01，均與模型組比較。

由表1可以看出，與對照組相比，經(jīng)Aβ_25-35刺激后PC12細(xì)胞的活力明顯降低；與模型組比較，柿葉提取物中劑量組和高劑量組的細(xì)胞活力明顯增加；柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。

3.2采用hochest33258染色法，觀察低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ_25-35(30μM)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果參照圖1，圖1為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響的hochest染色法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。

由圖1可以看出，與對照組相比，經(jīng)Aβ_25-35處理后細(xì)胞凋亡明顯增多；與模型組相比，不同劑量的柿葉提取物處理后，細(xì)胞核形態(tài)異常的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且降低的程度與柿葉提取物的劑量呈現(xiàn)了明顯的正相關(guān)。由此表明柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。

3.3采用流式細(xì)胞儀檢測低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ_25-35(30μM)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果參照圖2，圖2為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響的細(xì)胞流式法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。

由圖2可以看出，Aβ_25-35處理細(xì)胞24h后，與對照組相比，細(xì)胞凋亡率達(dá)到50±7.85％，細(xì)胞明顯發(fā)生凋亡(P<0.01)；與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組的細(xì)胞凋亡率分別為35±3.10％，27±4.25％，20±2.35％。

3.4采用蛋白免疫印跡法(western-blot法)，檢測低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ_25-35(30μM)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的Bax蛋白、Caspase-3蛋白和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平的影響。結(jié)果參照圖3，圖3為柿葉提取物對Aβ_25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞蛋白表達(dá)水平的影響的蛋白免疫印跡法檢測圖，其中，a為Bax蛋白、b為Caspase-3蛋白、c為Bcl-2蛋白。

上述Bax蛋白和Caspase-3蛋白是促進(jìn)凋亡蛋白，Bcl-2蛋白是抗凋亡蛋白。

由圖3可以看出，與對照組比較，經(jīng)Aβ_25-35處理后PC12細(xì)胞的Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達(dá)明顯升高，Bcl-2蛋白表達(dá)明顯下降；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組中PC12細(xì)胞的Caspase-3蛋白和Bax蛋白表達(dá)均明顯減少，Bcl-2蛋白的表達(dá)均明顯增加，且與劑量呈現(xiàn)了一定的正相關(guān)。

4細(xì)胞實驗結(jié)論

上述Aβ_25-35損傷PC12細(xì)胞是經(jīng)典的體外模擬AD的方法，由上述細(xì)胞實驗結(jié)果可以看出，柿葉提取物具有保護(hù)PC12細(xì)胞拮抗Aβ_25-35損傷的作用，可以用于腦神經(jīng)的保護(hù)，柿葉提取物對于老年癡呆疾病具有一定的延緩作用。

實施例6

取實施例1制得的柿葉提取物，進(jìn)行柿葉提取物的動物實驗。

柿葉提取物對老年癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響實驗如下：

1實驗動物與材料

1.1實驗動物：SD大鼠，250-300g，雄性；購買于安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，飼養(yǎng)條件：溫度＝22±4℃，濕度＝40-70％；動物合格證號：No.34000200000606。

1.2實驗材料：實施例1制得的柿葉提取物；多奈哌齊(天津力生制藥股份有限公司，批號：20150528)；Aβ_1-42(β樣淀粉蛋白1-42，Sigma公司)。

2分組與處理

大鼠海馬區(qū)注射2μL的Aβ_1-42(5μg/μL，0.2μL/min)建立老年癡呆模型。

實驗共分為6組，分別為假手術(shù)組，模型組，陽性對照組，柿葉提取物低、中、高劑量組。假手術(shù)組不造模；模型組造模后灌胃給生理鹽水，每日一次，連續(xù)30天；陽性對照組造模后灌胃給多奈哌齊1.5mg/kg，每日一次，連續(xù)30天；柿葉提取物低、中、高劑量組造模后分別灌胃給柿葉提取物100、200、400mg/kg，每日一次，連續(xù)30天。

給藥30天后，各組動物進(jìn)行水迷宮、跳臺實驗，觀察各組大鼠認(rèn)知功能。

3實驗結(jié)果

3.1柿葉提取物對水迷宮實驗中大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的影響，結(jié)果見表2和表3。

表2水迷宮實驗中柿葉提取物對Aβ_1-42誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知損傷的影響(n＝10)

上述^**p<0.01與假手術(shù)組比較；^##p<0.01與模型組比較。

表3水迷宮實驗中柿葉提取物對Aβ_1-42誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知損傷的影響(n＝10)

上述^**p<0.01與假手術(shù)組比較；^##p<0.01與模型組比較。

由表2、3可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠在5天實驗中，找到平臺的所需時間(潛伏期)明顯增加，穿過目標(biāo)象限次數(shù)及在目標(biāo)象限所待的時間明顯下降；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯降低大鼠的潛伏期，增加穿過目標(biāo)象限的次數(shù)，延長在目標(biāo)象限所待的時間，差異有顯著性(P＜0.01)，柿葉提取物中、高劑量組的效果與陽性對照組相似。

3.2柿葉提取物對跳臺實驗中大鼠記憶能力的影響，結(jié)果見表4。

表4跳臺實驗中柿葉提取物對Aβ_1-42誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知損傷的影響(n＝10)

上述^**p<0.01與假手術(shù)組比較；^#p<0.05，^##p<0.01與模型組比較。

由表4可以看出，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠從平臺跳下的潛伏期明顯縮短，受到電擊次數(shù)明顯增加；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯延長大鼠潛伏期，減少受到電擊的次數(shù)，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。柿葉提取物高劑量組效果與多奈哌齊組相似。

4動物實驗結(jié)論：由上述動物實驗結(jié)果可以看出，柿葉提取物對Aβ_1-42誘導(dǎo)的老年癡呆大鼠記憶功能損傷具有明顯的保護(hù)作用。

實施例7

取上述實施例1制備的柿葉提取物制成抗老年癡呆藥物，根據(jù)臨床需要，柿葉提取物加入相應(yīng)的藥用輔料，制成片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、微丸劑、顆粒劑、凍干粉針、注射劑和/或輸液劑。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。