本發(fā)明屬于生物醫(yī)用技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種高效止血海綿及其制備方法。

背景技術(shù)：

在突發(fā)性事故的創(chuàng)傷救治與臨床手術(shù)中的止血，特別是在戰(zhàn)爭(zhēng)中受傷人員的現(xiàn)場(chǎng)救護(hù)中，快速而高效的止血可有效降低人員傷亡和減輕后期的并發(fā)癥。傳統(tǒng)的止血材料對(duì)于不規(guī)則形狀、深、窄、動(dòng)脈破裂等創(chuàng)傷的止血效果很不理想。因此需要一種適用于現(xiàn)場(chǎng)和臨床急救用的，快速、安全、高效的止血材料來(lái)代替?zhèn)鹘y(tǒng)止血材。

殼聚糖是甲殼素脫乙酰后產(chǎn)生的一種天然生物多糖，迄今是自然界唯一的堿性多糖，其自然資源十分豐富。由于具有優(yōu)良的生物相容性、廣譜抗菌性、促傷口愈作用，且可生物降解安全無(wú)毒，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、生物工程等領(lǐng)域。海藻酸鹽是存在于褐藻類中的天然高分子多糖，無(wú)亞急性/慢性毒性或致癌性反應(yīng)，具備良好的生物相容性、生物降解性、凝膠性等，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域。殼聚糖和海藻酸鹽都具有一定的止血性能。2002年，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（fda）批準(zhǔn)了一種殼聚糖基外用止血產(chǎn)品hemcon，并將其應(yīng)用在了伊拉克和阿富汗戰(zhàn)場(chǎng)上，止血效果非常理想；美國(guó)celox止血粉2006年通過(guò)了fda的認(rèn)證，用于緊急條件下的皮膚表面局部出血；英國(guó)courtaulds公司在上世紀(jì)80年代就將商品名為sorbsan的海藻酸鹽纖維敷料應(yīng)用于止血領(lǐng)域。這些止血材料在輕度出血?jiǎng)?chuàng)面的應(yīng)用中效果顯著，但對(duì)于嚴(yán)重出血?jiǎng)?chuàng)面的止血效果不穩(wěn)定如止血速度慢、局部炎性反應(yīng)、存在進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)引起末梢血栓的風(fēng)險(xiǎn)等，使用存在爭(zhēng)議。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種高效止血海綿。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述高效止血海綿的制備方法。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供了一種高效止血海綿，由如下按質(zhì)量百分比的原料組成：35%-60%殼聚糖、0.1%-0.5%凝血酶、1%-3%聚谷氨酸、9%氯化鈉、20%-35%海藻酸鈉、5%-15%透明質(zhì)酸鈉、1%-5%氯化鈣；

所述高效止血海綿由表層和里層組成，

表層為抗菌止血層，由殼聚糖、凝血酶、聚谷氨酸和氯化鈉組成；

里層為凝膠層，由海藻酸鈉、透明質(zhì)酸鈉和氯化鈣組成；

所述殼聚糖為水溶性的殼聚糖。

優(yōu)選地，所述殼聚糖的分子量為3~50kda、脫乙酰度為75%~95%。

優(yōu)選地，所述凝血酶為每1mg效價(jià)不少于50單位的凝血酶。

更優(yōu)選地，本發(fā)明凝血酶是從牛血或豬血中提取的凝血酶原，經(jīng)激活而得的無(wú)菌凍干制品。

優(yōu)選地，所述聚谷氨酸分子量700~1000kda。

本發(fā)明還提供所述的高效止血海綿的制備方法，包括如下步驟：

s1.將海藻酸鈉和透明質(zhì)酸鈉分別制成海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，得到混合溶液，向混合液中添加一定質(zhì)量的氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；

s2.用生理鹽水分別溶解一定質(zhì)量的殼聚糖和一定質(zhì)量的聚谷氨酸，配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將一定質(zhì)量的凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻；再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；

s3.將s2中表層溶液傾入s1中經(jīng)過(guò)預(yù)凍成型的里層溶液中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；冷凍干燥、包裝、滅菌，即得所述高效止血海綿。

優(yōu)選地，靜置的時(shí)間為30min，預(yù)凍的溫度為-30℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

本發(fā)明的止血海綿里層與創(chuàng)面直接接觸，吸收血液中水分形成凝膠，封堵創(chuàng)面，初步止血；被濃縮后的血液穿透凝膠層進(jìn)入表層，在凝血酶和殼聚糖共同作用下進(jìn)一步快速凝血；止血海綿中外層固定化的凝血酶增強(qiáng)了穩(wěn)定性，保持著高效止血活性，且不易進(jìn)入血液引起血栓風(fēng)險(xiǎn)；特別適用于創(chuàng)傷深、動(dòng)脈破裂等嚴(yán)重出血的快速止血；此外，本發(fā)明的止血海綿制備工藝簡(jiǎn)單，易于工藝化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明制備的高效止血海綿圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。

除非特別說(shuō)明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購(gòu)。

實(shí)施例1

用100ml純凈水分別溶解3.5g海藻酸鈉和1.5g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.45g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解3.5g殼聚糖（分子量50kda，脫乙酰度95%）和0.1g聚谷氨酸（分子量1000kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.05g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)的模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得成品。

實(shí)施例2

用100ml純凈水分別溶解3.5g海藻酸鈉和1.0g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.5g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解3.8g殼聚糖（分子量20kda，脫乙酰度85%）和0.29g聚谷氨酸（分子量700kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.01g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)的模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得成品。

實(shí)施例3

用100ml純凈水分別溶解2.0g海藻酸鈉和0.86g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.1g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解6.0g殼聚糖（分子量3kda，脫乙酰度75%）和0.1g聚谷氨酸（分子量900kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.04g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)的模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得成品。

實(shí)施例4

用100ml純凈水分別溶解3.0g海藻酸鈉和0.5g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.27g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解5.0g殼聚糖（分子量10kda，脫乙酰度80%）和0.3g聚谷氨酸（分子量800kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.03g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得成品。

實(shí)施例5

用100ml純凈水分別溶解3.2g海藻酸鈉和0.98g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.2g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解4.5g殼聚糖（分子量30kda，脫乙酰度90%）和0.2g聚谷氨酸（分子量850kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.02g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得成品。

對(duì)比例1：

用100ml純凈水分別溶解3.2g海藻酸鈉和0.98g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.2g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解4.5g殼聚糖（分子量30kda，脫乙酰度90%）和0.2g聚谷氨酸（分子量850kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得無(wú)凝血酶的海綿。

對(duì)比例2：

用100ml純凈水分別溶解3.2g海藻酸鈉和0.98g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，向混合液中添加0.2g氯化鈣，混勻，靜置30min，即得里層溶液，將里層溶液裝入模具中，-30℃預(yù)凍成型；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）溶解0.2g聚谷氨酸（分子量850kda），配制聚谷氨酸溶液，將0.02g凝血酶添加到聚谷氨酸溶液中，混勻，靜置30min，即得表層溶液；將表層溶液傾入盛有里層溶液已凍結(jié)模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得無(wú)殼聚糖的海綿。

對(duì)比例3：

用100ml純凈水分別溶解3.2g海藻酸鈉和0.98g透明質(zhì)酸鈉，配制海藻酸鈉溶液和透明質(zhì)酸鈉溶液，混勻，標(biāo)記為a溶液；接著，用100ml生理鹽水（0.9%氯化鈉）分別溶解4.5g殼聚糖（分子量30kda，脫乙酰度90%）和0.2g聚谷氨酸（分子量850kda），配制殼聚糖溶液和聚谷氨酸溶液，將0.02g凝血酶添加到殼聚糖溶液中，混勻，再將聚谷氨酸溶液添加到殼聚糖混合溶液中，混勻，標(biāo)記為b溶液；然后，在攪拌狀態(tài)下，將b溶液傾入到a溶液中，同時(shí)添加0.2g氯化鈣，混勻，靜置30min，裝入模具中，-30℃預(yù)凍過(guò)夜；最后，冷凍干燥、包裝、滅菌，即得不分表里層的共混海綿。

實(shí)施例6：大鼠斷尾止血實(shí)驗(yàn)：

sd成年大鼠分成10組，每組6只，雌雄各半，設(shè)定一組空白對(duì)照組，一組為云南白藥陽(yáng)性對(duì)照組，其余為樣品實(shí)驗(yàn)組（實(shí)施例1~5和對(duì)比例1~3的產(chǎn)品，分別記作樣品1#~8#）。每只鼠腹腔注射3%的戊巴比妥鈉麻醉劑，按照30mg/kg的劑量進(jìn)行麻醉。麻醉成功后將大鼠固定在試驗(yàn)臺(tái)上，在距尾部末端0.5cm處，橫向切斷，立即施以20mg止血材料處理，空白組不給予任何藥物。止血時(shí)間從剪斷尾部開(kāi)始計(jì)時(shí)，記錄每組止血時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)下表。

從大鼠斷尾止血數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的止血海綿樣品1#~5#的止血時(shí)間都少于陽(yáng)性對(duì)照組，說(shuō)明止血效果都優(yōu)于云南白藥陽(yáng)性對(duì)照組；樣品6#和7#是與海綿樣品5#（凝血酶和殼聚糖共存）相比，其止血時(shí)間都大大延長(zhǎng)，同時(shí)，樣品8#中即便添加有殼聚糖和凝血酶的存在，其抗凝血時(shí)間仍然不能達(dá)到本發(fā)明效果，由此說(shuō)明，采用本發(fā)明特定的處理方法，將凝血酶和殼聚糖在海綿中共存，呈現(xiàn)顯著的協(xié)同增效作用。

這些實(shí)例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明具體制備的高效止血海綿如圖1所示。