本發(fā)明涉及美容領(lǐng)域，具體涉及一種抗衰老面部填充劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

玻尿酸是一種透明的膠狀物質(zhì)，它存在于人體的結(jié)締組織及真皮層中，有強(qiáng)大的保濕鎖水能力(1公克的玻尿酸可以吸收500C.C的水分)。人體皮膚表層(角質(zhì)層)水分含量約占15～30％，低于或高于此值均使人不適，具有燥感或膩感，長(zhǎng)期如此，會(huì)使皮膚干裂或水腫，從而使皮膚失去彈性、粗糙老化。而玻尿酸作用于皮膚內(nèi)部調(diào)理后，可在不同環(huán)境中自動(dòng)調(diào)節(jié)，始終維持皮膚水分在25－30％，保持皮膚的濕潤(rùn)、清爽，使皮膚更富有彈性，起到抗皺防皺、延緩人全皮膚衰老、美容養(yǎng)顏的作用。玻尿酸還能改善皮膚生長(zhǎng)條件，為真皮膠原蛋白和彈性纖維的合成提供優(yōu)越的外部環(huán)境，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供給，起到護(hù)膚養(yǎng)顏的效果。研究表明，玻尿酸可以阻止細(xì)胞中一些酶的產(chǎn)生，減少自由基的形成，在防止自由基破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化和引起肌體衰老等方面起著重要作用；低分子量玻尿酸具有抗炎、抑制病菌產(chǎn)生、保持皮膚光潔的作用；為細(xì)胞增殖與分化提供合適的場(chǎng)所，直接促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、重建與修復(fù)等。

現(xiàn)今玻尿酸是微整形行業(yè)最受歡迎的注射材料之一，便捷有效，通過(guò)注射透明質(zhì)酸可以有效地解決多種皺紋，達(dá)到去皺抗衰老的作用。

注射波尿酸后，玻尿酸會(huì)被慢慢代謝消失，總的來(lái)說(shuō)其作用大概只能維持4-6個(gè)月，而且具體吸收代謝的速度每個(gè)人都不同，一般而言，體質(zhì)偏瘦的注射后吸收的速度要比體質(zhì)偏胖的人快，另外由于隨著年齡越大皮膚中本身所含的玻尿酸就低，注射后代謝相對(duì)年輕的皮膚就較快，保持時(shí)間也會(huì)更短些。

因此，研發(fā)一種作用更好且長(zhǎng)效的美容抗衰老填充劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員需要解決的技術(shù)問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明公開(kāi)了一種抗衰老面部填充劑及其制備方法。相比于現(xiàn)有技術(shù)，所述抗衰老面部填充劑具有更好且更長(zhǎng)效的作用效果。

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗衰抗衰老面部填充劑，包括：玻尿酸、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和富血小板血漿；

所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的含量為1×10⁶～3×10⁶個(gè)/ml；

玻尿酸與富含血小板血漿體積比為1:1，所述玻尿酸和所述富血小板血漿的體積分?jǐn)?shù)均為50％。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述抗衰抗衰老面部填充劑的制備方法，包括以下步驟：

1)制備所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；

2)制備所述富血小板血漿

3)將玻尿酸與步驟1)制備的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和步驟2)制備的富血小板血漿等體積混勻，制得產(chǎn)品。

優(yōu)選地，所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法包括以下步驟：

將吸脂來(lái)源的自體脂肪組織用生理鹽水沖洗，去除殘留的血細(xì)胞和組織碎片；向所述脂肪組織中加入等體積的0.1％Ⅰ型膠原酶，放入37℃氣浴振蕩器中消化30min；然后以1500r/min離心10min后棄掉上層脂肪組織及下層懸液得到所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；使用無(wú)血清培養(yǎng)基將所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行重懸，密度調(diào)整到1×10⁵/mL，然后接種在培養(yǎng)面積為25cm²的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)；當(dāng)所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的融合度達(dá)80％左右，收集細(xì)胞使用或凍存。

優(yōu)選地，所述富血小板血漿的制備方法包括以下步驟：

靜脈抽取全血，第一次離心以1600r/min離心10min，丟棄紅細(xì)胞層；第二次離心以5000r/min離心5min，離心后吸棄部分血漿，用余下的1ml左右血漿重懸沉淀，制得所述富血小板血漿。

優(yōu)選地，所述填充劑的使用方式為在面部需進(jìn)行填充部位的真皮內(nèi)進(jìn)行注射。

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是近年來(lái)從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)ADSCs細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，同時(shí)它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞，適宜大規(guī)模培養(yǎng)，對(duì)機(jī)體損傷小等優(yōu)點(diǎn)，而且其來(lái)源廣泛，體內(nèi)儲(chǔ)備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來(lái)新的研究熱點(diǎn)之一。同時(shí)在ADSCs生長(zhǎng)增殖過(guò)程中能分泌多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，有促進(jìn)細(xì)胞更新、促進(jìn)受損細(xì)胞組織愈合、增加細(xì)胞活力和肌膚免疫力、美容抗衰老等作用。

富血小板血漿(PRP)是指利用自身的血液，提取出的富含高濃度血小板和各種自身生長(zhǎng)因子的血漿。PRP在促創(chuàng)面愈合、激活組織原位干細(xì)胞活性起到積極的效果，經(jīng)PRP預(yù)處理的MSCs移植到機(jī)體后存活率提高，且其促血管新生等生物作用增強(qiáng)。

所述填充劑的使用方法為將制備好的填充劑在面部需要進(jìn)行填充部位的真皮內(nèi)進(jìn)行多點(diǎn)微注射。

相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：

1、抽脂手術(shù)操作簡(jiǎn)單，痛楚少，只需抽取少量脂肪組織就能培養(yǎng)出大量的脂肪干細(xì)胞，且只抽取一次脂肪，就可以分多次制備制劑；

2、制劑內(nèi)ADSCs含量和純度高，誘導(dǎo)生成填充性的脂肪組織所需的時(shí)間較短，持續(xù)作用長(zhǎng)；

3、制劑使用后效果更優(yōu)，填充部位自然豐滿，效果維持時(shí)間長(zhǎng)。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。

圖1為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的顯微鏡圖；

圖2為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的流式鑒定圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗衰老面部填充劑及其制備方法。

下面將結(jié)合本發(fā)明具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例只是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行修改或者對(duì)部分技術(shù)特征進(jìn)行同等替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明保護(hù)的范圍中。

實(shí)施例中使用的試劑和組分均為市售或自制來(lái)源。

實(shí)施例1制備脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

將吸脂來(lái)源的自體脂肪組織用生理鹽水沖洗，去除殘留的血細(xì)胞和組織碎片；向所述脂肪組織中加入等體積的0.1％Ⅰ型膠原酶，放入37℃氣浴振蕩器中消化30min；然后以1500r/min離心10min后棄掉上層脂肪組織及下層懸液得到所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；使用無(wú)血清培養(yǎng)基將所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行重懸，密度調(diào)整到1×10⁵/mL，然后接種在培養(yǎng)面積為25cm²的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)；當(dāng)所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的融合度達(dá)80％左右，收集細(xì)胞使用或凍存。培養(yǎng)至第2代(P2)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞40倍和100倍的顯微鏡圖如圖1所示。

對(duì)分離培養(yǎng)至第2代的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式鑒定，流式結(jié)果如圖2所示，結(jié)果顯示CD59+HLA-DR-表達(dá)量為97.6％，CD90+CD45-表達(dá)量為99.4％，其中CD59和CD90呈陽(yáng)性表達(dá)，HLA-DR和CD45呈陰性表達(dá)，符合干細(xì)胞的特性。

實(shí)施例2制備富血小板血漿

對(duì)皮膚進(jìn)行清潔消毒后從靜脈抽取全血10～20ml，第一次離心以1600r/min離心10min，血液將被分層血漿和紅細(xì)胞2層，丟棄紅細(xì)胞層；第二次離心以5000r/min離心5min，離心后吸棄部分血漿，用余下的1ml左右血漿重懸沉淀，制得所述富血小板血漿。

實(shí)施例3制備抗衰老面部填充劑

取實(shí)施例2制備的富血小板血漿1ml重懸2×10⁶個(gè)實(shí)施例1制備的自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，吹打均勻后，加入1ml玻尿酸溶液混合均勻，制備得到填充劑。

實(shí)施例4制備抗衰老面部填充劑

取實(shí)施例2制備的富血小板血漿1ml重懸1×10⁶個(gè)實(shí)施例1制備的自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，吹打均勻后，加入1ml玻尿酸溶液混合均勻，制備得到填充劑。

實(shí)施例5制備抗衰老面部填充劑

取實(shí)施例2制備的富血小板血漿1ml重懸3×10⁶個(gè)實(shí)施例1制備的自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，吹打均勻后，加入1ml玻尿酸溶液混合均勻，制備得到填充劑。

實(shí)施例6效果驗(yàn)證

參與試驗(yàn)的人數(shù)為20人。

試驗(yàn)組為實(shí)施例3制備的制劑，注射方法為多點(diǎn)微注射，每次的注射量為50μl，注射的總劑量為2ml。

對(duì)照組為2ml玻尿酸溶液，注射方法同試驗(yàn)組。

試驗(yàn)者在需填充的臉部部位左側(cè)注射試驗(yàn)組制劑，右側(cè)注射對(duì)照組制劑。試驗(yàn)者注射1周后，兩側(cè)面部皮膚均比使用前皮膚飽滿細(xì)膩，細(xì)紋消失。三個(gè)月后觀察，試驗(yàn)者左側(cè)注射試驗(yàn)組制劑部位效果均維持良好，肌膚自然飽滿細(xì)膩，滋潤(rùn)有光澤；右側(cè)注射對(duì)照組制劑部位出現(xiàn)細(xì)紋，皮膚較左側(cè)暗啞。說(shuō)明實(shí)施例3制備的制劑相比于對(duì)照組制劑使用后效果更優(yōu)，填充部位自然豐滿，效果維持時(shí)間更久。

用實(shí)施例4和5制備的制劑重復(fù)上述試驗(yàn)，得到同樣的結(jié)論。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。